專利名稱：雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化中的新用途。
背景技術(shù)：
肝纖維化是慢性肝病患者肝臟最重要的組織學(xué)改變，是最終演變成肝硬變的必經(jīng)之途， 其肝纖維化程度決定了肝病預(yù)后。近年來的研究表明，肝纖維化的病理是可逆的。只要在肝 纖維化階段而非延誤至中晚期肝硬變進(jìn)行合理治療是完全可以達(dá)到逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程，進(jìn)而 緩解乃至治愈肝纖維化的目的。
中西醫(yī)界研究抗肝纖維化藥物如秋水仙堿、IFN、 319方(丹參、桃仁、蟲草菌絲等)等， 多以四氯化碳(CCl4)等造模，然后投以各類抗肝纖維化藥物治療觀察，多取得了減輕肝細(xì)胞 損傷、促進(jìn)肝內(nèi)膠原分解、抑制纖維增生等療效。
西醫(yī)藥治療本病歷史較短，目前西醫(yī)治療肝纖維化所采用的幾種西藥，雖有一定的療效， 但費(fèi)用昂貴，毒副作用較大，病人難以耐受。如采用Y—干擾素治療，不但費(fèi)用昂貴，且副 作用多，主要有流感樣發(fā)熱，脫發(fā)或WBC減少，病人難以耐受，療效也不確切；如秋水仙堿， 此藥問世多年，本用于癌癥及痛風(fēng)，近二十年用于肝纖維化，可干擾耙細(xì)胞微管分泌前膠原 至細(xì)胞外，促進(jìn)膠原酶生成，降解細(xì)胞內(nèi)前膠原并減少炎性介質(zhì)釋放，是抗肝纖維化中臨床 研究最多者，但其抗肝纖維化療效報(bào)道并不一致。且為抗有絲分裂藥，作為抗肝纖維化藥需 長期應(yīng)用對(duì)人體具有較大的毒副作用，主要為胃腸道反應(yīng)及骨髓抑制。
國內(nèi)也有一些治療肝纖維化的中藥制劑，但總體療效尚不理想。如中藥復(fù)方"861 "治 療慢肝肝纖6個(gè)月，治療后纖維化計(jì)分由10±9. 92降至2. 58±2. 07(P<0. 01),可在一定程 度上緩解肝纖維化；復(fù)方銀杏葉沖劑(銀杏葉、黃芪、虎杖、丹參、川芎、鱉甲等)治療CHB 肝纖患者，血PIIIP、 LN值明顯下降，肝活檢證實(shí)肝纖維化程度緩解，阻止了肝間質(zhì)膠原纖維 的增生，有一定效果。但總體療效較低，且質(zhì)量控制和療效判定受到局限。
中醫(yī)認(rèn)為肝纖維化屬"脅痛"，"積聚"，"癥瘕"范疇，病因病機(jī)多屬嗜酒好醴者或情志 抑郁者，素常飲食不潔或常懷憤郁之氣，正氣內(nèi)虛，外感濕熱疫毒之邪，邪毒阻滯肝經(jīng)，肝 脾不和，氣血結(jié)而不暢，終致氣滯氣瘀，臟腑機(jī)能失調(diào)，血脈失養(yǎng)，久而釀成癥積之根。肝 纖維化時(shí)，根據(jù)肝脾之生理病理特性及臨證所見，其病機(jī)可以明確為肝郁(氣滯)血瘀脾虛，
3此為肝纖維化時(shí)機(jī)體基本病理狀態(tài)。根據(jù)患者體質(zhì)與病情，尚有陰虛、濕熱等兼夾證之不同。 肝纖維化乃肝硬變之早期階段，而從肝郁、血瘀、脾虛三者病機(jī)看，應(yīng)以肝郁血瘀為主，部 分可有脾虛存在，肝纖維化階段病情以實(shí)證居多。
雞骨草膠囊是由雞骨草、茵陳、梔子、三七、人工牛黃、豬膽汁、白芍、牛至、枸杞子、
大棗組成。本方是為肝膽濕熱所致的右脅脹滿，脘腹脹滿，口苦，尿黃等癥候者而設(shè)。以疏 肝利膽，清熱解毒為法。方中以雞骨草為君藥；以梔子、茵陳為臣藥；佐以三七、白芍、牛 至、人工牛黃、豬膽汁、枸杞子、大棗；大棗兼為使藥。共成疏肝利膽，清熱解毒之劑。雞 骨草膠囊具有疏肝利膽，清熱解毒的功效，臨床適用于急、慢性肝炎和膽囊炎屬肝膽濕熱證者。 但尚未見有雞骨草膠囊對(duì)肝纖維化改善作用的研究報(bào)道，也未見有用于防治肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研 究報(bào)告及臨床研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用。肝硬變是慢性肝病 晚期的組織學(xué)改變，表現(xiàn)為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞廣泛破壞和再生，纖維結(jié)締組織大量增生造成肝小葉 和血管結(jié)構(gòu)的無序變化，結(jié)果引起肝功能失償、食管靜脈曲張、腹水和肝癌等致死并發(fā)癥。 長期以來，對(duì)肝纖維化和肝硬變?nèi)狈τ行У闹委煼椒?。本發(fā)明人發(fā)明，雞骨草膠囊對(duì)一般肝 病均具有較好的療效，因此，本發(fā)明人推測(cè)，雞骨草膠囊對(duì)例如肝纖維和肝硬變這類較嚴(yán)重 的肝恙也可能具有較好療效。為此，本發(fā)明人深入地開展了雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化 藥物中的應(yīng)用方面研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用雞骨草膠囊本身或者含有雞骨草膠囊的藥物組合物 對(duì)肝纖維和肝硬變疾病具有較好的療效。由于獲得了該研究成果，至此便完成了本發(fā)明。為 此，我們進(jìn)一步拓展雞骨草膠囊在臨床上的新用途，開發(fā)其在防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是這樣的:雞骨草膠囊包括由雞骨草、茵陳、梔子、三七、人工 牛黃、豬膽汁、白芍、牛至、枸杞子、大棗，以雞骨草為君藥，茵陳、梔子為臣藥，佐以三 七、人工牛黃、豬膽汁、白芍、牛至、枸杞子、大棗兼為使藥。特征是雞骨草150 50份、 茵陳30 10份、梔子8 25份、三七4 10份、人工牛黃0.5 1.5份、豬膽汁4 10份、 白芍8 25份、牛至7 20份、枸杞子4 10份、大棗16 36份，雞骨草膠囊對(duì)肝纖維化具 有改善和防治作用。
具有更好防治效果的雞骨草膠囊的特征是雞骨草100份、白芍16.67份、大棗26.67 份、梔子16.67份、茵陳20份、枸杞子6.67份，牛至13. 33份、三七6. 67份、人工牛黃1 份和豬膽汁6.67份。
雞骨草膠囊具有疏肝利膽，清熱解毒的作用。本發(fā)明的有益效果是方中以雞骨草、茵陳、梔子、三七、人工牛黃、豬膽汁、白芍、 牛至、枸杞子、大棗為組方經(jīng)加工制成的雞骨草膠囊，具有疏肝利膽，清熱解毒功效，對(duì)肝 纖維化改善明顯，還可用于急、慢性肝炎、膽囊炎、肝膽濕熱癥，用于防治肝纖維化具有取 料容易制造設(shè)備易取、工藝成熟可行，對(duì)人體健身有作用，有開發(fā)價(jià)值的雞骨草膠囊。


下面結(jié)合病理學(xué)相片對(duì)本發(fā)明作以說明
圖1—圖2為本發(fā)明四氯化碳至大鼠肝纖維化動(dòng)物模型中對(duì)照組的肝細(xì)胞正常，肝小葉 結(jié)構(gòu)相片情況。
圖3—圖4為本發(fā)明四氯化碳至大鼠肝纖維化動(dòng)物模型中向模型對(duì)照組的肝硬化，肝細(xì)
胞中度脂肪變性結(jié)構(gòu)相片。
圖5_圖6為本發(fā)明四氯化碳至大鼠肝纖維化動(dòng)物模型中秋水仙堿性組早期肝纖維化，
少量肝細(xì)胞脂肪變性結(jié)構(gòu)相片。
圖7—圖8為本發(fā)明四氯化碳至大鼠肝纖維化動(dòng)物模型中雞骨草高劑量組早期肝纖維
化結(jié)構(gòu)相片。
圖9一圖IO為本發(fā)明四氯化碳至大鼠肝纖維化動(dòng)物模型中劑量組早期肝纖維化，肝細(xì) 胞水變性結(jié)構(gòu)相片。
圖11—圖12為本發(fā)明四氯化碳至大鼠肝纖維化動(dòng)物模型中雞骨草低劑量組晚期肝纖 維化，肝細(xì)胞脂肪變性結(jié)構(gòu)相片。
圖13—圖14為本發(fā)明豬血清致大鼠纖維化動(dòng)物型正常對(duì)照組中肝細(xì)胞正常、肝小葉結(jié)
構(gòu)相片圖。
圖15_圖16本發(fā)明豬血清致大鼠纖維化動(dòng)物型對(duì)照組中晚期肝纖維化，肝細(xì)胞中度脂 肪變性結(jié)構(gòu)相片圖。
圖17—圖18本發(fā)明豬血清致大鼠纖維化動(dòng)物型中秋水仙堿性組早期肝纖維化，少量
肝細(xì)胞脂肪變性結(jié)構(gòu)相片。
圖19—圖20本發(fā)明豬血清致大鼠纖維化動(dòng)物型中雞骨草高劑量組早期肝纖維化結(jié)構(gòu)相片。
圖21—圖22本發(fā)明豬血清致大鼠纖維化動(dòng)物型劑量組早期肝纖維化，肝細(xì)胞水變性
結(jié)構(gòu)相片。
圖23—圖24本發(fā)明豬血清致大鼠纖維化動(dòng)物型中雞骨草低劑量組晚期肝纖維化，肝
細(xì)胞脂肪變性結(jié)構(gòu)相片。
具體實(shí)施例方式
為了更好地理解本發(fā)明，下面通過使用雞骨草膠囊進(jìn)行的防治大鼠肝纖維化的藥效學(xué)試驗(yàn)來解釋本發(fā)明。本發(fā)明所使用雞骨草膠囊是本發(fā)明人的現(xiàn)有技術(shù)，在這些試驗(yàn)中的有關(guān)條件如下
為更好地理解本發(fā)明的技術(shù)，下面用雞骨草膠囊進(jìn)行關(guān)于防治肝纖維化的藥效學(xué)試驗(yàn)，
說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
雞骨草膠囊對(duì)大鼠肝纖維化的保護(hù)作用研究
1實(shí)驗(yàn)材料
l.l實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，體重180 220g,清潔級(jí)，雌雄兼用。廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYKG桂2003—0005，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXKG桂2003—2003。動(dòng)物室溫度25±2°C，相對(duì)濕度60±2%。動(dòng)物飼以廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心配制的飼料，自由飲水。
1.2藥物及主要試劑
1.2.1主要藥物(l)雞骨草膠囊，由廣西玉林制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)625110，受試物為其膠囊內(nèi)的干藥粉。(2)秋水仙堿，西雙版納股份藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，批號(hào)060717。
1.2.2主要試劑(1)膽固醇上海東風(fēng)生化技術(shù)有限公司，批號(hào)0403; (2)紅星牌56Q二鍋頭白酒北京釀酒總廠生產(chǎn)；(3)四氯化碳中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)20050393; (4)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測(cè)定試劑，四川邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)1106191;
(5)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)測(cè)定試劑，長春匯力科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)2006029; (6)血清總蛋白(TP)測(cè)定試劑，四川邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)1106161; (7)血清白蛋白(ALB)測(cè)定試劑，四川邁克科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)1006141; (8)丙二醛測(cè)定試劑，南京建成生物工程研究所，批號(hào)20070122; (9) SOD測(cè)定試劑，南京建成生物工程研究所，批號(hào)20070327; (10)透明質(zhì)酸(HA)測(cè)定試劑，上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20041028。
1.3實(shí)驗(yàn)儀器(1)上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；漩渦混合器XW- 80A; (2)上海精密科學(xué)儀器有限公司722分光光度計(jì)；(3)上海安亭科學(xué)儀器廠TDL-5離心機(jī)；(4)常州市華利電子公司ZMN-9802全電腦自動(dòng)組織脫水機(jī)；(5)常州市華利電子公司ZMN-7803全自動(dòng)組織包埋機(jī)；(6)常州市華利電子公司ZMN-6802漂烘處理儀；(7)上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠HH Bll 500恒溫培養(yǎng)箱；(8)青島海爾普通冰箱；(9)德國Leica RM 2135石蠟切片機(jī)；(10)日本Olympus公司Olympus攝影顯微鏡；(11)日本Olympus公司Olympus CH-2光學(xué)顯微鏡。
1.4劑量設(shè)置(1)雞骨草膠囊設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。大鼠給藥劑量高劑量組2.0g藥粉加蒸鎦水至10ml，即2g/kg;中劑量組1.0g藥粉加蒸餾水至10ml，即lg/kg;低劑量組0.5g藥粉加蒸餾水至10ml，即0.5g /kg。分別相當(dāng)于臨床擬用劑量的20、 10、 5倍。(2)秋水仙堿片設(shè)一個(gè)劑量組大鼠給藥劑量10mg磨成粉狀加蒸餾水至250ml，即0.4mg/kg。
1.5數(shù)據(jù)處理
計(jì)量資料以^士S表示，采用單因素方差分析，以SPSS13. 0統(tǒng)計(jì)軟件處理。1.6實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果
1.6.1雞骨草膠囊劑對(duì)中毒性肝纖維化模型——四氯化碳復(fù)合因素致大鼠肝纖維化的治療作用
取SD大鼠，隨機(jī)分為(1)正常對(duì)照組、(2)模型對(duì)照組、(3)雞骨草膠囊高劑量、(4)雞骨草膠囊中劑量組，(5)雞骨草膠囊低劑量、(6)秋水仙堿對(duì)照組(0.4mg/kg)。
除了正常對(duì)照組外，其余各組大鼠第1次下注射40。/。CCl4植物油溶液0.5ml/100g,以后每隔3天皮下注射40。/。CCU植物油溶液0.3ml/100g。以由79.5%單純玉米粉加20%豬油、0.5%膽固醇混合的飼料和30%乙醇為飲料，飼養(yǎng)動(dòng)物。正常對(duì)照組飼以正常飼料和普通飲用水，不注射CCU植物油溶液。第2周在正常對(duì)照組和模型對(duì)照組中隨機(jī)取5只大鼠作肝病理學(xué)檢測(cè)，判斷肝纖維化模型是否成立。如模型成立則開始給藥治療。每天1次，連續(xù)給藥4周，每周稱體重l次。給藥期間繼續(xù)同樣給予CCl4、飼料和30%乙醇。末次給藥結(jié)束后稱體重，觀察指標(biāo)有
(1) 肝功能方面(血清學(xué)指標(biāo))取血分離血清，測(cè)血清ALT、 AST、 GLB、 MDA、
SOD。
(2) 纖維化指標(biāo)取血分離血清，測(cè)血清透明質(zhì)酸(HA)。
(3) 處死大鼠取肝臟并稱濕重，計(jì)算肝臟指數(shù)；另取部分肝臟作病理組織學(xué)檢査，并進(jìn)行肝臟病理學(xué)級(jí)別評(píng)分肝細(xì)胞正常，肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，評(píng)為1分；肝細(xì)胞水變性，評(píng)為2
分；中度脂肪變性，評(píng)為3分；早期肝纖維化，評(píng)為4分；晚期肝纖維化，評(píng)為5分；肝硬
化，評(píng)為6分。對(duì)各組肝臟病理學(xué)損傷級(jí)別進(jìn)行評(píng)分和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
1.6.2結(jié)果雞骨草膠囊對(duì)四氯化碳復(fù)合因素致大鼠肝纖維化的影響
(1)大鼠皮下注射CC14，飼以由79.5%單純玉米粉加20%豬油、0.5%膽固醇混合的飼料，并以30%乙醇為飲料，2周后，在正常對(duì)照組和模型對(duì)照組中隨機(jī)取5只大鼠作肝病理學(xué)檢測(cè)，結(jié)果表明模型對(duì)照組大鼠肝臟已出現(xiàn)纖維化改變。(2)從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CC14、復(fù)合詞料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠肝臟指數(shù)與正常組大鼠以及秋水仙堿組，雞骨草高中低3個(gè)劑鷥組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表l一l。
(3) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CC14、復(fù)合飼料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠丙二醛水平降低，與正常組大鼠比較有顯著性差異，秋水仙堿組和雞骨草高、中、低劑量組丙二醛水平與模型對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表l一l。
(4) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CC14、復(fù)合詞料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠與正常組大鼠SOD值比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。秋水仙堿組及雞骨草中劑量低劑量組與模型對(duì)照組相比，SOD值升高，有顯著性差異，雞骨草高劑量組和模型對(duì)照組相比SOD值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1 —1。
(5) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CCU、復(fù)合飼料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠血清中的AST明顯升高，雞骨草高劑量中劑量低劑量組和秋水仙堿組可使大鼠血清升高的AST明顯降低。見表l一2。
(6) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CC14、復(fù)合飼料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠血清中的ALT明顯升高，秋水仙堿組可使大鼠血清升高的ALT明顯降低。與模型對(duì)照組相比，雞骨草高中低劑量組ALT有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表l_2。
(7) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CC14、復(fù)合飼料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠血清中的HA明顯升高，秋水仙堿組、雞骨草中劑量組可使大鼠血清升高的HA明顯降低。雞骨草高、低劑量組對(duì)升高的HA影響不大，無顯著性差異，見表1一2。
(8) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CCU、復(fù)合飼料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠TP水平降低，與正常組大鼠比較有顯著性差異，秋水仙堿組和雞骨草高、中、低劑量組TP水平與模型對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1一3。
(9) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CC14、復(fù)合飼料和30%乙醇。給藥結(jié)束后正常組大鼠與模型對(duì)照組大鼠相比血清中的ALB無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與模型對(duì)照組相比，秋水仙堿組、雞骨草中劑量組、低劑量組可使ALB提高。見表1一3。
(10) 從第3周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣給予CCU、復(fù)合飼料和30%乙醇。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠肝臟出現(xiàn)脂肪變性、纖維化甚至肝硬化改變。雞骨草高劑量、中劑量，低劑量組以及秋水仙堿組對(duì)CCU、復(fù)合飼料和30%乙醇引起的肝臟組織病理學(xué)改變有明顯的保護(hù)作用，晚期肝纖維化和肝硬化的例數(shù)降低。見表l-4。肝臟組織病理學(xué)相片見附件。
下面舉出實(shí)施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限定。
8實(shí)施例l。
四氯化碳致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)Dl一圖2中，實(shí)施例2。
四氯化碳致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D3—圖4中，實(shí)施例3。
四氯化碳致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D5—圖6中，實(shí)施例4。
四氯化碳致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D7—圖8中，實(shí)施例5。
四氯化碳致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D9~圖10中，實(shí)施例6。
四氯化碳致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)Dll一圖12中,實(shí)施例7。
豬血清致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D13—圖14中，實(shí)施例8。
豬血清致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D15—圖16中，實(shí)施例9。
豬血清致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D17—圖18中，實(shí)施例10。
豬血清致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D19~圖20中，實(shí)施例11。
豬血清致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D21—圖22中，實(shí)施例12。
豬血清致大鼠肝纖維化動(dòng)物模型的正常對(duì)照組，參照?qǐng)D23—圖24中，
9表l一l雞骨草對(duì)四氯化碳復(fù)合因素性肝纖維化大鼠肝臟指數(shù)和丙二醛及SOD的影響
組別動(dòng)物數(shù)肝臟指數(shù)(g/100g， bw)丙二醛 (腿ol/mg)SOD (mmol/L)
正常對(duì)照組113.42±0.456.28 ±3.64145.64±33.44
模型對(duì)照組113.99 ±0.913.66±1.18**128.77±56.13
秋水仙堿組83.59±0.543.42 ±0.87167.23 ±17.16A
雞骨草高劑量組83.65±0.522.95 ±0.卯141.34±44.86
雞骨草中劑量組104.00 ±0.624.01 ±1.06170.93 ±14.26AA
雞骨草低劑量組113.86±0.623.27 ±0.65170.54 ±12.75AA
與正常對(duì)照組比較**尸<0.01;與模型對(duì)照組比較^<0.05， ^尸<0.01
表l-2雞骨草對(duì)四氯化碳復(fù)合因素性肝纖維化大鼠血清AST、 ALT、 HA的影響
組別動(dòng)物數(shù)AST (U/L)ALT (U/L)HA (ng/ml)
正常對(duì)照組1121.39±11.1748.03 ±20.27285.69± 141.14
模型對(duì)照組11125.62±41.37**181.53± 108.82**373.55 ±47.66*
秋水仙堿組871.51 ±12.06AA115.69±53.17A268.13 土67. 28A
雞骨草高劑量組861.52±9.48AA160.28 ±44.64331.89 ±99.84
雞骨草中劑量組1060.05 ± 10. WAA127.52±43.46272.15±53.29厶
雞骨草低劑量組1165.51 ±12.33AA134.25±71.68361.89±45.12
與正常對(duì)照組比較**P<0.01;與模型對(duì)照組比較AiM).05， AAP<0.01
表1-3雞骨草對(duì)四氯化碳復(fù)合因素性肝纖維化大鼠血清TP、 ALB的影響
組別動(dòng)物數(shù)TP (g/L)ALB (g/L)
正常對(duì)照組1197.48 ±17.7440.81 ±5.17
模型對(duì)照組1181.04 ±24.28**42.91 ±7.43
秋水仙堿組893.03 ±7.9750.97 土6.76厶厶
雞骨草高劑量組881.79 ±8.9243.36± 12.03
雞骨草中劑量組1092.70 ±12.0650.71 ±6.96AA
雞骨草低劑量組1186.79±9.8943.07 ±8.66
與正常對(duì)照組比較**尸<0.01;與模型對(duì)照組比較a尸O.05，^尸O.01
10表1-4雞骨草對(duì)四氯化碳復(fù)合因素性肝纖維化大鼠肝臟組織病理學(xué)的影響
動(dòng)物肝細(xì)胞正常肝細(xì)胞中度早期晚期肝臟病理學(xué)
組別肝硬化
數(shù)肝小葉結(jié)構(gòu)清楚水變性脂肪變性纖維化纖維化級(jí)別評(píng)分
正常對(duì)照組1111 (100%)0 (0)0 (0)0 (0)0 (0)0 (0)1.00 ±0.00
模型對(duì)照組110 (0)0 (0)0 (0)2 (18.2%)5 (45.5%)4 (36.3%)5.18±0.75**
秋水仙堿組80 (0)1 (12.5%)1 (12.5%)5 (62.5%)1 (12.5%)0 (0)3.75±0.89AA
雞骨草高劑量80 (0)1 (12.5%)2 (25%)3 (37.5%)1 (12.5%)1 (12.5%)3.88±1.25A
雞骨草中劑量100 (0)■1 (10%)2 (20%)3 (30%)2 (20%)2 (20%)4.20±1.32A
雞骨草低劑量110 (0)2 (18.2%)2 (18.2%)2 (18.2%)2 (18.2%)3 (27.2%)4.18±1.54A
與正常對(duì)照組比較**代0.01;與模型對(duì)照組比較A/^0. 05， AA^0. 01
1.6.3對(duì)腹腔注射豬血清致大鼠免疫性肝損傷(肝纖維化)的影響
取SD大鼠，隨機(jī)分為(1)正常對(duì)照組、(2)模型對(duì)照組、(3)雞骨草膠囊高劑量、(4) 雞骨草膠囊中劑量組，(5)雞骨草膠囊低劑量、(6)秋水仙堿對(duì)照組(0.4mg/kg)。
除了正常對(duì)照組外，其余各組每只大鼠腹腔注射經(jīng)過濾、除菌處理的新鮮豬血清0.5ml， 每周2次。第4周在正常組和模型組中隨機(jī)取5只大鼠作肝病理學(xué)檢測(cè)，判斷肝纖維化模型 是否成立。如模型成立則開始給藥治療。每天l次，連續(xù)給藥4周，每周稱體重l次，給藥 期間繼續(xù)給予豬血清。末次給藥結(jié)束后稱體重，觀察指標(biāo)有
(1) 肝功能方面(血清學(xué)指標(biāo))取血分離血清，測(cè)血清ALT、 AST、 MDA、 SOD。
(2) 肝纖維化指標(biāo)取血分離血清，測(cè)血清透明質(zhì)酸(HA)。
(3) 處死大鼠剖取肝臟并稱濕重，計(jì)算肝臟指數(shù)；另取部分肝臟作病理組織學(xué)檢查，并 進(jìn)行肝臟病理學(xué)級(jí)別評(píng)分肝細(xì)胞正常，肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，評(píng)為1分；肝細(xì)胞水變性，評(píng)為 2分；中度脂肪變性，評(píng)為3分；早期肝纖維化，評(píng)為4分；晚期肝纖維化，評(píng)為5分；肝 硬化，評(píng)為6分。對(duì)各組肝臟病理學(xué)損傷級(jí)別進(jìn)行評(píng)分和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
1.6.結(jié)果對(duì)腹腔注射豬血清致大鼠免疫性肝損傷(肝纖維化)的影響
(1) 大鼠腹腔注射豬血清，4周后，在正常對(duì)照組和模型對(duì)照組中隨機(jī)取5只大鼠作肝 病理學(xué)檢測(cè)，結(jié)果表明模型對(duì)照組大鼠已出現(xiàn)肝纖維化。
(2) 從第5周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣腹腔注射豬血清。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大 鼠肝臟指數(shù)以及丙二醛水平均無明顯變化，僅雞骨草中劑量組MDA值比模型組高，差異有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2—1。
(3) 從第5周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣腹腔注射豬血清。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大 鼠及雞骨草高中低劑量組SOD水平變化不大，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2—1。
(4) 從第5周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣腹腔注射豬血清。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大 鼠血清中的AST明顯升高，秋水仙堿組組可使大鼠血清升高的AST明顯降低。但雞骨草高中低三個(gè)劑量組AST水平與模型組無顯著性差異見表2—2。
(5) 從第5周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣腹腔注射豬血清。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組及 雞骨草高中低三個(gè)劑量組大鼠血清中的HA水平無明顯變化，見表2—2。
(6) 從第5周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣腹腔注射豬血清。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組及 雞骨草高中低三個(gè)劑量組大鼠血清中的TP、 ALB無明顯變化。見表2—3。
(7) 從第5周開始給藥，給藥期間繼續(xù)同樣腹腔注射豬血清。給藥結(jié)束后模型對(duì)照組大鼠 肝臟出現(xiàn)脂肪變性和纖維化甚至肝硬化改變。雞骨草高中低劑量組對(duì)豬血清引起的肝臟組織病 理學(xué)改變有明顯的保護(hù)作用，見表2—4。肝臟組織病理學(xué)相片見附圖。
表2—1雞骨草對(duì)豬血清性肝纖維化大鼠肝臟指數(shù)丙二酸的影響
組別動(dòng)物數(shù)肝臟指數(shù)(g/100g， bw)丙二醛 (nmol/mg)SOD (mmol/mg)
正常對(duì)照組93.03 ±0.258.25±3.35165.68±17.81
模型對(duì)照組93.40 ±0.298.78 ±2.46170.80±13.78
秋水仙堿組113.58±0.658.73 ±3.95163.77±28.97
雞骨草高劑量組103.24±0.326.97 ±1.39176.73±5.13
雞骨草中劑量組93.13±0.3114.61 ±3.40AA177.23±8.73
雞骨草低劑量組83.01 ±0.469.86 ±2.42175.29±17.92
與正常對(duì)照組比較**戶<0.01;與模型對(duì)照組比較"尸<0.05， AAP<0.01
表2—2雞骨草對(duì)豬血清性肝纖維化大鼠血清AST、 ALT的影響
組別動(dòng)物數(shù)AST (U/L)ALT (U/L)HA (ng/ml)
正常對(duì)照組9132.65±32.2523.13 ±14.46261.47±55.04
模型對(duì)照組9171.88±75.02*47.87 ±43.26231.53±48.85
秋水仙堿組11136.17±21.11A25.30± 10.52378.66±94.01*AA
雞骨草高劑量組10158.97±19.335.02±22.40288.98±43.72
雞骨草中劑量組9178.91 ±18.8793.83 ±80.93AA296.45 ±82.57
雞骨草低劑量組8181.63 ±28.02120.73 ±80.13 AA304.13 ±94.76
與正常對(duì)照組比較*尸<0.05;與模型對(duì)照組比較a尸0.05， AAP<0.01表2-3雞骨草對(duì)豬血清性肝纖維化大鼠血清TP、 ALB的影響
組別動(dòng)物數(shù)TP (g/L)ALB (g/L)
正常對(duì)照組968.77 ±7.6734.46±5.13
模型對(duì)照組9■75.88 ±8.5736.33 ±2.29
秋水仙堿組1175.27 ±8.4133.48±5.31
雞骨草高劑量組1077.40 ±8.0734.66±2.13
雞骨草中劑量組974.88 ±5.7234.73 ±2.13
雞骨草低劑量組870.70 ±6.2634.27 ±1.34
與正常對(duì)照組比較*戶<0.05 ， **戶<0.01:與模型對(duì)照組比較a尸0.05， AAP<0.01
表2—4 雞骨草對(duì)豬血清性肝纖維化大鼠肝臟組織病理學(xué)的影響
組別動(dòng)物 數(shù)/只肝細(xì)胞正常 肝小葉結(jié)構(gòu)清楚肝細(xì)胞 水變性中度 脂肪變性早期 纖維化晚期 纖維化肝硬化肝臟病理 學(xué)級(jí)別評(píng)分
正常對(duì)照組99 (100%)0 (0)0 (0)0 (0)0 (0)0 (0)1.00±0.00
模型對(duì)照組90 (0)1 (11.1%)0 (0)5(55.6%)1 (1U0/。)2 (22.2%)4.33±1.22**
秋水仙堿組113 (27.2%)2 (18.20/0) 2 (18.2%)3 (27.2%)1 (9.1%)0 (0)2.73±1.42A
雞骨草高劑量102 (20%)3 (30%)2 (20%)2 (20%)0 (0)1 (10%)2.80±1.55A
雞骨草中劑量92 (22.2%)3 (33.3%)1 (11.1%)2 (22.2%)0 (0)1 (11.1%)2.78±1.64A
雞骨草低劑量82 (25%)3 (37.5%)0 (0%)2 (25%)0 (0)1 (12.5%)2.75±1.75A
與正常對(duì)照組比較*代0.05 ， **代0.01;與模型對(duì)照組比較A/X0. 05， AA/<0. 01
1.7結(jié)論
通過上述實(shí)驗(yàn)，主要從病理組織學(xué)，血清學(xué)肝功能生化指標(biāo)，肝纖維化指標(biāo)、脂質(zhì)過氧 化指標(biāo)等觀察了雞骨草膠囊對(duì)兩種肝纖維化動(dòng)物模型的影響，結(jié)果證實(shí)-
(1) 雞骨草膠囊對(duì)四氯化碳復(fù)合因素致大鼠肝纖維化有明顯的保護(hù)作用。雞骨草膠囊
可降低其血清AST、 ALT含量，改善肝功能，升高血清SOD水平。對(duì)肝臟組織病理學(xué)改變 有明顯的保護(hù)作用，晚期肝纖維化和肝硬化的例數(shù)降低。
(2) 雞骨草膠囊對(duì)豬血清致大鼠免疫性肝纖維化有明顯的保護(hù)作用對(duì)豬血清引起的肝 臟組織病理學(xué)改變有明顯的保護(hù)作用。晚期肝纖維化和肝硬化的例數(shù)降低。
1權(quán)利要求
1、一種雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用，包括由雞骨草、茵陳、梔子、三七、人工牛黃、豬膽汁、白芍、牛至、枸杞子、大棗，以雞骨草為君藥，茵陳、梔子為臣藥，佐以三七、人工牛黃、豬膽汁、白芍、牛至、枸杞子、大棗兼為使藥。特征是雞骨草150～50份、茵陳30～10份、梔子8～25份、三七4～10份、人工牛黃0.5～1.5份、豬膽汁4～10份、白芍8～25份、牛至7～20份、枸杞子4～10份、大棗16～36份，雞骨草膠囊對(duì)肝纖維化具有改善和防治作用。
2、 按照權(quán)利要求l所述的雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征在于雞 骨草膠囊的雞骨草100份、茵陳20份、梔子16.67份、三七6.67份、人工牛黃1份、豬膽 汁6.67份、白芍16.67份、牛至13.33份、枸杞子6. 67份、大麥26. 67份。
3、 按照權(quán)利要求l所述的雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征在于雞 骨草膠囊具有疏肝利膽，清熱解毒的作用。全文摘要
雞骨草膠囊在制備防治肝纖維化藥物中的應(yīng)用，涉及醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明用中毒性肝纖維化模型—四氯化碳復(fù)合因素致大鼠肝纖維化觀察雞骨草膠囊對(duì)肝纖維化的防治作用；用豬血清致大鼠免疫性肝纖維化模型觀察雞骨草膠囊對(duì)免疫性肝損傷(肝纖維化)的防治作用。結(jié)果證實(shí)雞骨草膠囊對(duì)四氯化碳復(fù)合因素引起的大鼠肝纖維化和豬血清引起的大鼠免疫性肝纖維化有明顯的防治作用，對(duì)兩種肝纖維化病理學(xué)有改善作用。
文檔編號(hào)A61K36/815GK101468106SQ20071030351
公開日2009年7月1日 申請(qǐng)日期2007年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月28日
發(fā)明者葉志文, 彪 歐, 技 鐘, 馬聲宏 申請(qǐng)人:廣西玉林制藥有限責(zé)任公司