專利名稱：：促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞附著于醫(yī)療器材的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞附著于一種血管內(nèi)的裝置的組合物和方法。
背景技術(shù)：
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背景技術(shù)：
：動(dòng)脈粥樣硬化引起動(dòng)脈狹窄和阻塞。支架置入術(shù)和旁路手術(shù)經(jīng)常用于治療小口徑動(dòng)脈(定義為小于6mm)方面的嚴(yán)重疾病。動(dòng)脈的旁路方法受到血管導(dǎo)管，如乳房內(nèi)動(dòng)脈或隱靜脈的有效性限制。令人遺憾地，由聚四氟乙烯(PTFE)或聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯(PET)制成的合成導(dǎo)管由于缺少附著的、靜止的內(nèi)皮而不能承受小口徑移植體內(nèi)高速的血栓生成。因此，在老年人群的心血管介入治療中開發(fā)一種不形成血栓的、小口徑人造血管成為一個(gè)最重要的目標(biāo)。血管內(nèi)的裝置置于身體脈管系統(tǒng)內(nèi)部；一般位于血管或心臟中的阻塞部位，或者替換或者支持血管或心臟的一部分。血管內(nèi)的裝置通常由生物學(xué)上的惰性物質(zhì)，如不銹鋼、鈦、聚合物，或其混合劑制成，其目的在于減少外來物插入脈管系統(tǒng)后引起的并發(fā)癥。但是，與這些裝置相關(guān)的許多問題已經(jīng)被報(bào)道出來，包括血栓形成、新生內(nèi)膜形成和再狹窄。人們已經(jīng)努力減少或消除血管內(nèi)裝置的并發(fā)癥。例如，為了解決血栓形成的問題，體內(nèi)有血管內(nèi)裝置的個(gè)體可以服用抗凝劑和抗血小板的藥物，如抵克立得或阿斯匹林。一個(gè)克服與血管內(nèi)裝置相關(guān)并發(fā)癥的方法是促進(jìn)與脈管系統(tǒng)和/或血液接觸的裝置表面的快速內(nèi)皮化策略。在此方面，美國專利第7,037,332號(hào)記述了一種醫(yī)療器材，其具有一種基質(zhì)覆膜，是由交聯(lián)到基質(zhì)上的對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞抗原具有結(jié)合特異性的抗體制成的，用于促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞附著到醫(yī)療器材上。美國專利第6,897,218號(hào)公開了一種呢嗪衍生物的金屬復(fù)合物，其聲稱可以促進(jìn)再內(nèi)皮化，但是它看來似乎不能直接地結(jié)合到裝置上，并且要依賴大量的血液循環(huán)組合物才有效。美國專利第6,140,127號(hào)記述了一種涂覆支架的方法，它是使用一種聚合物涂層，使用吡啶和三氟代乙烷磺酰氯，和使用一種五個(gè)氨基酸的多肽(甘氨酸-精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸；SEQIDNO:50)將細(xì)胞粘附到支架上。美國專利第5,929,060號(hào)公開了一種類固醇DHEA的衍生物，其被稱作對(duì)于內(nèi)皮化有幫助。美國專利第5,643,712號(hào)公開了一種器官或組織的血管的覆膜，其與部分聚合的衍生自內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)制劑一起移植，可以作為一種促進(jìn)再內(nèi)皮化的表面。裝置可設(shè)計(jì)為經(jīng)過修飾的，以促進(jìn)再內(nèi)皮化的發(fā)生。美國專利第6,436,132號(hào)公開了一種用于治療血管中狹窄的區(qū)域的管腔內(nèi)的假體。據(jù)說支架中的通路容許血管的再內(nèi)皮化。內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞包括內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞。內(nèi)皮細(xì)胞排列在脈管系統(tǒng)的所有部分，起到調(diào)節(jié)凝血、炎癥、血管通透性，以及在血液和間質(zhì)之間進(jìn)行營養(yǎng)交換的作用。在內(nèi)皮病灶性地削蝕的地方，凝血快速地跟著發(fā)生。血管的病灶性凝血可以導(dǎo)致血栓形成以及血管閉塞，或其它的血栓栓塞性事件。內(nèi)皮祖細(xì)胞已經(jīng)表現(xiàn)出在各種模型系統(tǒng)中有助于血管生成以及血管發(fā)生，并且有助于移植到動(dòng)物模型中的血管內(nèi)的內(nèi)皮化。但是，在患者體內(nèi)，血管內(nèi)的移植體的自發(fā)的內(nèi)皮化是罕有的，也許因?yàn)楣こ袒囊浦膊牧峡咕芊肿拥母街湍?，以及?nèi)皮祖細(xì)胞沒有在材料上面粘附，生存以及增殖的能力。因此，仍然需要一種促進(jìn)血管內(nèi)的裝置內(nèi)皮化的方法，例如通過將裝置進(jìn)行處理，以促進(jìn)初期的內(nèi)皮細(xì)胞在處理過的裝置上定殖和/或生長。從外周血液中至少可以分離出兩種類型的內(nèi)皮祖細(xì)胞"早期"內(nèi)皮祖細(xì)胞，它在體外存活2到4周，并分泌有效的血管生成因子；和"晚期"內(nèi)皮祖細(xì)胞，它在3周后長出，可以復(fù)制高達(dá)100代。早期內(nèi)皮祖細(xì)胞是在血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的影響下起源于骨髓成血管細(xì)胞。早期內(nèi)皮祖細(xì)胞具有表型CD133+A，CD34+，VEGFR-2+，CD31+，vWF-，VE-鈣粘蛋白-，E-選擇素-，eNOS-，以及端粒酶+。晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞具有表型CD133+/-,CD34+，VEGFR-2+，CD31+，vWF+，VE-鈣粘蛋白+，E-選擇素+,eNOS+，以及端粒酶+。分化的內(nèi)皮祖細(xì)胞類似于晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞，除了前者是CD133(-)以及端粒酶(-)。其它的內(nèi)皮祖細(xì)胞亞群，以及它們的表型標(biāo)記記載于本領(lǐng)域中。我們期望有一種方法，能夠使初期的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞層在血管內(nèi)的裝置表面發(fā)生附著、募集、支持，以及分化。例如，我們期望有一種血管內(nèi)的裝置，其有一種覆膜，能夠俘獲內(nèi)皮細(xì)胞譜系的循環(huán)細(xì)胞，使得它們植入血管內(nèi)的裝置表面，并具有我們想要的減少與血管內(nèi)裝置類型相關(guān)的并發(fā)癥，如一個(gè)或多個(gè)血栓形成，新生內(nèi)膜形成，以及再狹窄的發(fā)生的優(yōu)點(diǎn)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明概要本發(fā)明提供生理活性的涂層組分，其包含至少一個(gè)能特異地結(jié)合一種醫(yī)療器材的金屬表面的結(jié)合結(jié)構(gòu)域(為便于引用，該結(jié)合結(jié)構(gòu)域在本發(fā)明中稱作"表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域")，該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接有至少一個(gè)能特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞的結(jié)合結(jié)構(gòu)域(為便于引用，該結(jié)合結(jié)構(gòu)域在本發(fā)明中稱作"內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域")；其中表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域基本上分別由表1和表3所例舉的氨基酸序列組成。表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以直接連接(例如，在合成期間或通過化學(xué)方法)或者通過接頭連結(jié)，以形成本發(fā)明的生理活性涂層組分的單一分子。本發(fā)明還提供基本上由SEQIDNOs:l-8的多肽組成的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域；和編碼該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多核苷酸。本發(fā)明還提供基本由SEQIDNOs:9-46的多肽組成的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；和編碼該內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多核苷酸。利用根據(jù)本發(fā)明的組合物，本發(fā)明還提供在一種醫(yī)療器材的金屬表面覆膜的方法，使得有覆蓋層的表面在與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸時(shí)，能夠粘附內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞(例如，一種或多種內(nèi)皮細(xì)胞，和內(nèi)皮祖細(xì)胞)；促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞粘附在一種醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面的方法；和通過在至少一個(gè)表面覆膜促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞的附著而促進(jìn)一種醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面內(nèi)皮化的方法。這些方法包括使準(zhǔn)備覆膜的醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面與生理活性涂層組分(亦稱作"界面生物材料")接觸，生理活性涂層組分包含至少一個(gè)本發(fā)明的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其連結(jié)有至少一個(gè)本發(fā)明的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。生物活性涂層組分與一種醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面接觸并在醫(yī)療器材上面形成一層覆膜，其中該覆膜內(nèi)至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的數(shù)量對(duì)于粘附內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞是有效的，并且優(yōu)選地促進(jìn)該醫(yī)療器材的至少一個(gè)被包覆的表面內(nèi)皮化。該方法可以進(jìn)一步包括使該被包覆的裝置與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸的步驟，以促進(jìn)附著、粘附、支持生長、支持分化的一種或多種作用。后一步驟可以發(fā)生在體外(例如，在植入該裝置前先使內(nèi)皮細(xì)胞附著)；或可以發(fā)生在體內(nèi)(例如，一旦植入，個(gè)體的內(nèi)皮細(xì)胞從鄰近的完整的內(nèi)皮動(dòng)脈區(qū)域遷移，或者如循環(huán)細(xì)胞那樣，與該被生理活性涂層組分包覆的裝置的表面接觸，并且粘附)。對(duì)于本發(fā)明的方法和組合物，至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以包括一個(gè)單一類型(例如，特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞譜系細(xì)胞的一個(gè)子集；例如，只結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞；或具有較寬的特異性(例如，一般而言，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞))，或可以包括多種類型(例如，一個(gè)類型特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞；另一個(gè)類型特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞)。利用本發(fā)明的組合物，本發(fā)明還涉及一種促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞粘合在一種醫(yī)療器材，更優(yōu)選一種血管內(nèi)的器材上的方法。此外提供一種制造一種醫(yī)療器材的方法。這些方法包括使一種醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面與一種生理活性涂層組分(其特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞)接觸，形成至少一個(gè)包覆的金屬表面；以及使至少一個(gè)被包覆的表面與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸(例如，促迸內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞粘合到至少一個(gè)被包覆的表面)；其中生物活性涂層組合物包含至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域以及至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；并且其中至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域是連接在一起的。內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞與生物活性醫(yī)療器材上的涂層組分接觸可以通過本領(lǐng)域公知的任何方法進(jìn)行，以促進(jìn)親合性分子和其配體之間的相互結(jié)合，例如，在一種包含生物活性涂層組合物的上面使一種包含內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞的溶液進(jìn)行保溫、浸漬、噴霧或刷涂。此外提供一種包含一種覆膜的醫(yī)療器材，它是將有效量的生物活性涂層組合物涂在醫(yī)療器材的金屬表面，使得醫(yī)療器材適于內(nèi)皮細(xì)胞附著，優(yōu)選內(nèi)皮細(xì)胞附著后發(fā)生覆膜表面的內(nèi)皮化?；蛘撸峁┮环N促進(jìn)一種血管裝置內(nèi)皮化的方法，使得對(duì)于該裝置選定的金屬表面，一旦該表面被包覆并且該裝置被移植，可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞附著。該方法包含以下步驟(a)使本發(fā)明所述的一種生物活性涂層組合物與準(zhǔn)備內(nèi)皮化的一種血管裝置的至少一個(gè)金屬表面接觸，使得該生物活性涂層組合物結(jié)合到該至少一個(gè)金屬表面上，在該血管裝置上形成一個(gè)被包覆的金屬表面。其中該生物活性涂層組合物包含至少一個(gè)具有基本上為SEQIDNOs:l-8的氨基酸序列的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，連接至少一個(gè)具有基本上為SEQIDNOs:9-46的氨基酸序列的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；和(b)將該裝置移植到一個(gè)需要該裝置的個(gè)體(人或非人)中；其中內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞(由該個(gè)體生成)接觸，附著和粘附于該裝置的覆膜表面(主要通過細(xì)胞結(jié)合該生物活性涂層組合物的至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域進(jìn)行介導(dǎo))，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞在該裝置的被包覆的金屬表面鋪展，和促進(jìn)該血管裝置的內(nèi)皮化。促進(jìn)該移植裝置的內(nèi)皮化可以進(jìn)一步促進(jìn)靠近該移植裝置的組織或脈管系統(tǒng)愈合，促進(jìn)移植裝置與鄰近的組織結(jié)合(整合)，以及減少與移植裝置有關(guān)的血栓形成。具體實(shí)施方式發(fā)明詳述本發(fā)明提供一種用于醫(yī)療器材的改進(jìn)的覆膜組合物，利用該組合物包覆醫(yī)療器材的方法，以及一種醫(yī)療器材的一種金屬表面，其表面涂有一種本發(fā)明的生物活性涂層組合物。定義部分:盡管可以認(rèn)為以下術(shù)語能夠被本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員很好地理解，但還是闡述下列定義以便于解釋本發(fā)明。本發(fā)明中用到的術(shù)語"有效量"，在涉及到根據(jù)本發(fā)明的生物活性涂層組合物時(shí)，為達(dá)到說明書和權(quán)利要求的目的，指該生物活性涂層組合物的數(shù)量足夠應(yīng)用于至少待包覆的一個(gè)金屬表面(通過使該至少一個(gè)表面與該生物活性覆膜接觸)以便(a)介導(dǎo)該生物活性涂層組合物與該醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面結(jié)合而形成一層覆膜；以及(b)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞粘附到覆膜表面，優(yōu)選覆膜表面內(nèi)皮化。本發(fā)明中為達(dá)到說明書和權(quán)利要求的目的而使用的術(shù)語"內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞"，指的是任何發(fā)育階段的內(nèi)皮細(xì)胞(例如，從生長初期階段，如內(nèi)皮細(xì)胞干細(xì)胞或祖細(xì)胞，到發(fā)育成熟期例如完全分化的，組織特異性內(nèi)皮細(xì)胞)；并且包括能夠分化為內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞的干細(xì)胞，這種干細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞共有至少一個(gè)相同的表面分子或受體(例如，骨髓成血管細(xì)胞；一種心臟Sca-l+干細(xì)胞(它可以在白血病抑制因子(LIF)存在的情況下分化為內(nèi)皮細(xì)胞，一種脂肪干細(xì)胞);或其組合。因此，內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞包括內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞，和能夠分化為內(nèi)皮細(xì)胞和/或內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞的干細(xì)胞。優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞可以用于根據(jù)本發(fā)明排除除了該優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞外的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞。本發(fā)明中使用的術(shù)語"內(nèi)皮化"，除非另作說明，對(duì)于說明書和權(quán)利要求來說，指的是一個(gè)或多個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞在一種醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面的生長(理想地包括增殖)，和內(nèi)皮細(xì)胞的分化，該醫(yī)療器材被有效量的本發(fā)明的生物活性涂層組合物所包覆。優(yōu)選地，一旦該內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞附著于被有效量的該生物活性涂層組合物包覆的醫(yī)療器材的表面，可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長發(fā)育以提供一個(gè)內(nèi)皮組織層。因此，術(shù)語"內(nèi)皮化"可以指一種由于任何生物學(xué)過程或機(jī)械過程而失去或被剝掉內(nèi)皮的血管移植體的再內(nèi)皮化；或它可以包括生長新的內(nèi)皮細(xì)胞，以覆蓋在一種已移植的或可移植的移植體，或者己移植的或可移植的醫(yī)療器材的金屬表面，其之前沒有被內(nèi)皮細(xì)胞所覆蓋。本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"醫(yī)療器材"，指一種血管內(nèi)裝置，血管裝置，血管移植體，一種(例如，從心臟起搏器或心臟電擊器)到暴露于血管系統(tǒng)的導(dǎo)線或?qū)Ь€頭。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明中"醫(yī)療器材"的范圍和意義是一種包含一個(gè)斯坦特固定模的裝置(本領(lǐng)域公知，斯坦特固定模是一種金屬的和/或聚合物的籠狀或管狀的支撐裝置，通常用于保持導(dǎo)管(例如血管)暢通)。本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中可交換使用的術(shù)語"血管內(nèi)裝置"和"血管裝置"，指一種被引入人或動(dòng)物的脈管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)，以恢復(fù)功能受損的、患病的或被堵塞的組織，包括假肢器官和血管移植體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，本發(fā)明的"血管內(nèi)裝置"和"血管裝置"的范圍和意義是一種包含一個(gè)斯坦特固定模的裝置。本發(fā)明中使用的術(shù)語"血管內(nèi)裝置"還包括裝置相連的材料，這些材料連同該裝置一起被引入人體或動(dòng)物體。典型的血管裝置包括，但不限于心臟補(bǔ)片、人工心臟瓣膜、瓣環(huán)成形環(huán)、環(huán)狀圈、機(jī)械輔助醫(yī)療裝置、血管封口裝置、中心靜脈導(dǎo)管、動(dòng)脈插管、起搏器、除顫器、導(dǎo)絲、栓子保護(hù)濾器、栓子裝置(例如，彈簧圈)、植入型輸注泵和血管縫線。血管移植體包括冠狀動(dòng)脈旁路移植體，人工心臟瓣膜，外周血管旁路移植體外，血管移植體，以及人造移植體?？梢允褂酶鶕?jù)本發(fā)明優(yōu)選的醫(yī)療器材，而不使用除了該優(yōu)選的醫(yī)療器材之外的其它醫(yī)療器材。醫(yī)療器材可以由以下材料組成各種材料包括但不限于金屬，金屬氧化物，非金屬氧化物，陶瓷，橡膠，塑料，丙烯酸，有機(jī)硅，聚合物以及它們的組合物，因此醫(yī)療器材也可以具有以上材料組成的一種或多種表面。血管內(nèi)裝置可以用任何生物相容性材料制成；但是，由于在脈管系統(tǒng)中存在生物適合性的困難，該生物相容性材料最好是相對(duì)惰性的。這種裝置由本領(lǐng)域公知的各種材料制成，但最典型的是生物學(xué)惰性聚合物或金屬。用于制造醫(yī)療器材的金屬是本領(lǐng)域中公知的，包括但不限于不銹鋼、鉭、金、鉑、銀、鎢、鈦、鈦合金(例如記憶鈦合金，如鎳鈦合金)、過渡金屬、堿金屬和堿土金屬(周期表分類中，每類在結(jié)構(gòu)和功能上相關(guān)的組成金屬中的后三種)。金屬合金(例如鈷鉻合金)和這些群組中的每種金屬氧化物也個(gè)別地和獨(dú)立地包括在內(nèi)。在本發(fā)明中，本發(fā)明的生物活性涂層組合物結(jié)合的表面材料優(yōu)選是一種金屬，更優(yōu)選地是不銹鋼?？梢允褂酶鶕?jù)本發(fā)明的優(yōu)選的醫(yī)療器材的表面材料，而不使用除了該優(yōu)選的表面材料之外的其它表面材料。當(dāng)術(shù)語"表面"在本文中與醫(yī)療器材一起使用時(shí)，它通常指醫(yī)療器材的一個(gè)或多個(gè)金屬表面，其處于生物學(xué)溶液和/或生物學(xué)組織中，優(yōu)選與血液接觸和/或被引入個(gè)體的脈管系統(tǒng)；因此，這種表面對(duì)任何一個(gè)或多個(gè)血栓，新內(nèi)膜形成，再狹窄是敏感的。"金屬表面"指一種表面材料，由一種或多種金屬、金屬合金、金屬氧化物，以及它們的組合物組成。本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"個(gè)體"，指人或者動(dòng)物。本發(fā)明中使用的術(shù)語"血管生物制劑"，指一種生物學(xué)物質(zhì)，其在以下一個(gè)或多個(gè)方面具有特異的生物學(xué)效用修復(fù)或整合血管系統(tǒng)內(nèi)部的血管裝置，特別是在手術(shù)后或緊接著移植一個(gè)血管內(nèi)裝置后；以及促進(jìn)內(nèi)皮化。一種血管生物制劑可以包括一種生物學(xué)物質(zhì)，其選自由以下物質(zhì)組成的組膠原(例如IV型和/或V型)，vitrogen，層粘連蛋白，巢蛋白，纖連蛋白，聚糖(例如，蛋白多糖，氨基多糖)，支持內(nèi)皮細(xì)胞生長的一種或多種生長因子(例如，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF),表皮生長因子(EGF)，成纖維細(xì)胞生長因子(堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)，酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF))，肝素結(jié)合表皮樣生長因子，血管生成素1(ang-l)，血管生成素2(ang-2)，肝細(xì)胞生長因子(HGF)，血小板衍化內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(PD-ECGF)，LIF)，血管生成素(例如，ang-3，ang-4)以及它們的組合物?？梢砸勒毡景l(fā)明使用一種優(yōu)選的血管生物制劑，而不使用除了該優(yōu)選的血管生物制劑之外的血管生物制劑。本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域"，指一種特異地結(jié)合一種醫(yī)療器材的金屬表面的多肽；尤其是，它具有斯坦特固定模的不銹鋼具有結(jié)合特異性，并且基本上具有選自SEQIDNOs:l-8的氨基酸序列(還可以參見表1)。依據(jù)本發(fā)明，可使用一種優(yōu)選的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域(包括其特異結(jié)合的表面類型)，而不使用除了該優(yōu)選的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域之外的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明的生物活性涂層組合物的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域選擇那些特異地結(jié)合(例如，典型地，通過非共價(jià)鍵、離子鍵或靜電相互作用)到期望被包覆的醫(yī)療器材的至少一個(gè)表面的金屬材料上，通常，當(dāng)醫(yī)療器材植入需要該醫(yī)療器材的個(gè)體中時(shí)，所述至少一個(gè)表面處于脈管系統(tǒng)相關(guān)的生物學(xué)組織和/或生物體液中。術(shù)語"足夠結(jié)合的時(shí)間"泛指一段持續(xù)時(shí)間，它足以滿足本發(fā)明所述的結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合特異性的基質(zhì)的特異性結(jié)合，如本領(lǐng)域公知的那樣。本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域"，指一種特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系的一種或多種細(xì)胞的多肽，并且該多肽基本上具有選自SEQIDNOs:9-46的氨基酸序列(也可參見表3)。這樣的內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系的一種特定類型的細(xì)胞(例如，內(nèi)皮細(xì)胞，或內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞，或一種特定的組織來源(例如心臟內(nèi)皮細(xì)胞)的內(nèi)皮細(xì)胞)，或者結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系的超過一種類型的細(xì)胞(例如，共有一種共同的被該內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合的表面分子)?；蛘?，本發(fā)明的該生物活性涂層組合物可以包括超過一種類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如，兩個(gè)或更多不同的多肽，其中每個(gè)特異性結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系的不同細(xì)胞)。因此，在此情況下，一種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞的一種結(jié)合特異性，該結(jié)合特異生不同于該生物活性涂層組合物中存在的其它類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合特異性。"內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域"的定義中排除抗體，尤其是對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞具有結(jié)合特異性的抗體。根據(jù)本發(fā)明，可以使用一種優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域(包括它特異性結(jié)合的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞類型)，而不使用除了該優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域之外的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。因此，優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽基本上具有選自SEQIDNOs:9-46的氨基酸序列，并且排除除了氨基酸序列為SEQIDNOs:9-46之外的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽。本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中的術(shù)語"生物活性涂層組合物"和"界面生物材料"可以交互使用，指一種組合物，它包括至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含基本上具有選自SEQIDNOs:l-8的氨基酸序列，和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含基本上具有SEQIDNOs:9-46的氨基酸序列，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接在一起(例如，通過一種或多種物理的、化學(xué)的、合成的或生物學(xué)的(例如通過重組體表達(dá))方式)，使得每個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域保持它各自的功能，能夠結(jié)合與其具有結(jié)合特異性的各自的分子(如本發(fā)明所述)。這種連結(jié)可以包括一種具有兩個(gè)或更多表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合在一起的多體分子，其中內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域與該多體分子的全部或部分表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接在一起。例如，利用多肽化學(xué)領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)試劑和方法，兩個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以通過側(cè)鏈-側(cè)鏈鍵合(例如，每個(gè)多肽具有一個(gè)側(cè)鏈胺(如賴氨酸的e胺))，側(cè)鏈到-N末端鍵合(例如，一個(gè)多肽的N-末端與另一個(gè)多肽的側(cè)鏈胺)，側(cè)鏈到C-末端鍵合(例如，一個(gè)多肽的C-末端化學(xué)部分與另一個(gè)多肽的側(cè)鏈連接)，N-末端到N-末端鍵合，N-末端到C-末端的鍵合，C-末端到C-末端的鍵合，以及它們的組合。在合成或重組體表達(dá)中，通過合成或者將兩種多肽作為一個(gè)單一多肽表達(dá)，表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽可以直接與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽連接。表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域也可以通過接頭連接而形成生物活性涂層組合物。本發(fā)明的生物活性涂層組合物或界面生物材料包括(a)至少一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其數(shù)量足以介導(dǎo)該生物活性涂層組合物或界面生物材料與該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合的該醫(yī)療器材的金屬表面材料結(jié)合；和(b)至少一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其數(shù)量足以使得被包覆的醫(yī)療器材能夠附著或粘附內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞，優(yōu)選地，除此之外，還可以促進(jìn)該醫(yī)療器材的覆膜表面的內(nèi)皮化；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接在一起。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，使用接頭把該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接起來。在功能上，當(dāng)該生物活性涂層組合物涂在醫(yī)療器材的金屬表面時(shí)(使生物活性涂層組合物與金屬接觸)，生物活性涂層組合物與金屬表面的結(jié)合主要通過包括根據(jù)本發(fā)明的至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的生物活性涂層組合物的結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)；并且該生物活性涂層組合物的性質(zhì)，或與該生物活性涂層組合物相關(guān)的附著、粘附、內(nèi)皮化，或者它們的組合，主要是通過包括本發(fā)明的至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的生物活性涂層組合物的結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)。因此，當(dāng)醫(yī)療器材表面涂有本發(fā)明的生物活性涂層組合物，并且該被包覆的醫(yī)療器材被引入或應(yīng)用于一個(gè)個(gè)體時(shí)，該生物活性涂層組合物就成為醫(yī)療器材和該個(gè)體的生物學(xué)組織和/或生物體液之間的界面(由此成為"界面生物材料")。據(jù)此，本發(fā)明提供一種促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞附著和粘附到醫(yī)療器材上的方法，該方法包括用一種生物活性涂層組合物或界面生物材料覆蓋在醫(yī)療器材的一個(gè)或多個(gè)金屬表面上，所述的生物活性涂層組合物或界面生物材料包括至少一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域是連接在一起的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種促進(jìn)醫(yī)療器材的金屬表面內(nèi)皮化的方法，該金屬表面適于接觸一種或多種與脈管系統(tǒng)相關(guān)的生物學(xué)組織(例如，一根血管)或生物體液(例如血液)，該方法包括用一種生物活性涂層組合物或界面生物材料覆蓋在醫(yī)療器材的一個(gè)或多個(gè)金屬表面上，所述的生物活性涂層組合物或界面生物材料包括至少一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接在一起，并且該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞結(jié)合。說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"接頭"，指一種化合物或分子的某部分，它可以作為一種分子橋連接至少兩個(gè)不同分子(例如，對(duì)于本發(fā)明，連結(jié)一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或在形成一個(gè)包括兩個(gè)或更多表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多體分子時(shí)連結(jié)兩個(gè)或更多表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或在形成一個(gè)包括兩個(gè)或更多內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多體分子時(shí)連結(jié)兩個(gè)或更多內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域)。因此，舉例來說，接頭的一部分結(jié)合本發(fā)明的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，接頭的另一部分結(jié)合本發(fā)明的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的那樣，利用本領(lǐng)域公知的方法，一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域與接頭的結(jié)合可以是逐步的方式，也可以同時(shí)連結(jié)到接頭上，以形成本發(fā)明的生物活性涂層組合物或界面生物材料。對(duì)于接頭，沒有特定的大小或含量限制，只要它能達(dá)到作為分子橋的目的，而且生物活性涂層組合物的結(jié)合特異性能大體上保持。接頭對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，包括但不限于化學(xué)鏈，化合物(例如試劑)等等。接頭可以包括，但不限于:同型雙功能接頭和異型雙功能接頭。異型雙功能接頭，如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的那樣，包含具有第一種反應(yīng)功能的一端(或化學(xué)部分)來特異地連結(jié)第一種分子，以及相對(duì)的具有第二種反應(yīng)功能的一端來特異地連接第二種分子。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然了解各種雙功能或多功能試劑，不管是同型的還是異型功能的(如Pierce化學(xué)公司，Rockford，Ill產(chǎn)品目錄上所述)，氨基酸接頭(典型地，3到15個(gè)氨基酸之間的短肽，通常包含如甘氨酸，和/或絲氨酸之類的氨基酸)，以及聚合物(例如聚乙二醇)都可以用作本發(fā)明的接頭。在一個(gè)實(shí)施例中，典型的多肽接頭包括多個(gè)與結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合的活性部位(例如聚賴氨酸、聚鳥氨酸、聚胱氨酸、聚谷氨酸以及聚天冬氨酸)或包括基本上惰性的多肽接頭(例如，lipolyglycine，聚絲氨酸，聚脯氨酸，聚丙氨酸，及其它包括丙氨酰，絲氨酰，脯氨酰，或苷氨酰氨基酸殘基的低聚肽)。在一些實(shí)施例中選擇氨基酸接頭，本發(fā)明的生物活性涂層組合物可以合成為一個(gè)單一的，連續(xù)的多肽，包括一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，一個(gè)接頭，以及一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。因此，接頭只是通過單一連續(xù)多肽的鍵進(jìn)行連接。適當(dāng)?shù)木酆辖宇^在本領(lǐng)域中是已知的，可以包括合成聚合物或天然聚合物。代表性的合成聚合物包括但不限于聚醚(例如聚乙二醇("PEG")，聚酯(例如聚乳酸(PLA)以及聚羥基乙酸(PGA))，聚胺，聚酰胺(例如尼龍)，聚氨基甲酸酯，聚甲基丙烯酸酯(例如聚甲基丙烯酸甲酯；PMMA)，聚丙烯酸，聚苯乙烯，聚己酸，柔性的螯合劑如EDTA、EGTA，及其它合成聚合物，優(yōu)選分子量大約20道爾頓至大約1，000千道爾頓。代表性的天然聚合物包括但不限于透明質(zhì)酸，海藻酸鹽，硫酸軟骨素，纖維蛋白原，纖連蛋白，白蛋白，膠原，鈣調(diào)蛋白，及其它天然聚合物，優(yōu)選地分子量大約200道爾頓至大約20,000千道爾頓(對(duì)于構(gòu)成的單體)。聚合接頭可以包括二嵌段聚合物，多嵌段共聚物，梳形聚合物，星形聚合物，枝狀或支化聚合物，雜合的線形枝狀聚合物，由賴氨酸組成的支鏈，或無規(guī)共聚物。接頭還可以包括巰基(氨基)羧酸，丙烯酰胺羧酸，丙烯酰胺-胺基三乙撐羥基乙酸，7-氨基苯甲酸，及其衍生物。接頭在本領(lǐng)域中已知，并且包括可以被分開的接頭，可以制成對(duì)于其它的分子部分或?qū)τ谄渥陨砭哂蟹磻?yīng)性的接頭，以用于交聯(lián)的目的。取決于要連接的分子的要素以及進(jìn)行連接的條件，接頭可以在長度以及組成上進(jìn)行變化，以優(yōu)化其維持生物功能，穩(wěn)定性，抵抗一定的化學(xué)和/或溫度參數(shù)，以及足夠的立體選擇性或大小的性質(zhì)。例如，接頭不應(yīng)該顯著地影響表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域在生物活性涂層組合物中發(fā)揮功能的能力(即以適當(dāng)?shù)挠H合力與根據(jù)本發(fā)明與其具有結(jié)合特異性的醫(yī)療器材表面充分地結(jié)合)。同樣地，接頭不應(yīng)該顯著地影響內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域在生物活性涂層組合物發(fā)揮功能的能力(即以適當(dāng)?shù)挠H合力充分地結(jié)合根據(jù)本發(fā)明與其具有特異性的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞)。優(yōu)選的接頭可以是具有增強(qiáng)或補(bǔ)充本發(fā)明的生物活性涂層組合物效果的活性的分子。例如，利用聚乙二醇或其它的聚合分子或蛋白質(zhì)(例如白蛋白)作為接頭，可以幫助阻止非特殊蛋白質(zhì)和/或不想要的細(xì)胞粘附在涂有本發(fā)明的生物活性涂層組合物的醫(yī)療器材表面。本發(fā)明可以使用優(yōu)選的接頭，而不使用除了優(yōu)選的接頭之外的接頭。術(shù)語"結(jié)合特異性"或"結(jié)合的特異性"，以及本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中使用的類似術(shù)語，可以交互使用，指一個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域(如本發(fā)明描述的那樣)所具有的的能力，其對(duì)于一種目的分子或選定結(jié)合的表面材料(后者稱"目標(biāo)表面材料")的結(jié)合親合力要大于別的分子或表面材料(除了目的分子或目標(biāo)表面材料之外)；例如，對(duì)于處于其它基質(zhì)的異源群體中的一種特定的基質(zhì)的親合力大于非特異性吸附的親合力。舉例來說，如果一種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)σ环N金屬表面具有結(jié)合特異性，優(yōu)選對(duì)于醫(yī)療器材的不銹鋼表面具有結(jié)合特異性，與醫(yī)療器材的其它成分或材料的結(jié)合相比較，這時(shí)該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域表現(xiàn)出優(yōu)先結(jié)合金屬。這種優(yōu)先的結(jié)合可以依賴于對(duì)于該結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合特異性的分子或材料上面或內(nèi)部的一種特定的構(gòu)象，結(jié)構(gòu)，和/或電荷存在，使得它能夠識(shí)別該分子或材料并與之結(jié)合，而不是一般的分子或材料。在一些實(shí)施例中，一種結(jié)合結(jié)構(gòu)域與一種特定的表面，材料或化學(xué)成份的特異結(jié)合，與該結(jié)合結(jié)構(gòu)域與一種適當(dāng)?shù)膶?duì)照，如一種不同的材料或表面，或一種一般用來作對(duì)比的蛋白如牛血清白蛋白的結(jié)合相比，比值至少10%,20%，30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%,100%,200%,300%，400%,500%,或更高的百分比。例如，結(jié)合特異性可以通過試驗(yàn)確定，在試驗(yàn)中定量的信號(hào)(例如熒光，或比色)代表多肽和靶細(xì)胞的結(jié)合與多肽和非目的細(xì)胞結(jié)合的相對(duì)數(shù)量。因此，如果在這種檢測(cè)中，結(jié)果表明大約40%的內(nèi)皮細(xì)胞(作為靶細(xì)胞)與一種多肽結(jié)合，并且小于10%的另一種細(xì)胞(例如平滑肌細(xì)胞；"非目的細(xì)胞")與該多肽結(jié)合，那么這種多肽就可以說對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞具有結(jié)合特異性。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合特異性具有另外的特征，即EC50為l(mM或更低，優(yōu)選小于1PM。EC50可以利用許多本領(lǐng)域公知方法測(cè)定，如根據(jù)一個(gè)結(jié)合試驗(yàn)制出濃度響應(yīng)曲線，其中多肽的濃度與已知數(shù)量的該多肽具有結(jié)合特異性的材料或細(xì)胞進(jìn)行滴定(例如，參見本發(fā)明實(shí)施例2和3所述的方法)。在此情況下，EC50代表在該試驗(yàn)中該多肽被觀察到形成最大結(jié)合值的50%時(shí)的多肽濃度。本發(fā)明說明書和權(quán)利要求中使用的術(shù)語"多肽"指的是一條氨基酸鏈，其長度不小于約3個(gè)氨基酸并且不大于約500氨基酸殘基，其中該氨基酸鏈可以包括天然氨基酸，合成氨基酸，遺傳編碼氨基酸，非遺傳編碼氨基酸，以及它們的組合；但是，"多肽"的范圍和定義中特別地排除其是一種抗體。優(yōu)選地，多肽包括一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包括一個(gè)連續(xù)的序列，長度不小于7個(gè)氨基酸并且不大于約60個(gè)氨基酸。本發(fā)明使用的多肽可以通過化學(xué)合成，重組體表達(dá)，大分子的生化或酶法斷裂，大分子的化學(xué)裂解，其前述方法的組合而生成，或者，一般而言，由本領(lǐng)域中的其它任何方法制得，優(yōu)選地用分離的方法。術(shù)語"分離"指一種多肽基本上不含有那些不具有該多肽本身的整體結(jié)構(gòu)的一部分的成分；例如，通過重組體方法制備時(shí)基本上不含多孔材料或培養(yǎng)基，或通過化學(xué)合成或利用生化或化學(xué)方法制備時(shí)基本上不含有化學(xué)前體或其它化學(xué)物質(zhì)。本發(fā)明可以使用一種優(yōu)選的多肽，而不使用除了該優(yōu)選多肽之外的多肽。多肽可以包括L型氨基酸、D型氨基酸，或其組合。代表性的非遺傳編碼氦基酸包括但不限于2-氨基己二酸；3-氨基己二酸；|3-丙氨酸；2-氨基丁酸；4-氨基丁酸(哌啶酸)；6-氨基己酸；2-氨基庚酸；2-氨基異丁酸；3-氨基異丁酸；2-氨基庚二酸；2,4-二氨基丁酸；鎖鏈賴氨素；2,2'-二氨基庚二酸；2,3-二氨基丙酸；N-乙基甘氨酸；N-乙基天冬酰胺；羥基賴氨酸；別羥基賴氨酸；3-羥脯氨酸；4-羥脯氨酸；異鎖鏈賴氨素；別-異殼氨酸；N-曱基甘氨酸(肌氨酸)；N-甲基異亮氨酸；N-甲基纈氨酸；正纈氨酸；正亮氨酸；鳥氨酸；和3-(3,4-二羥苯基)-L-丙氨酸("DOPA")。典型的氨基酸衍生物包括，例如，自由氨基衍生為胺氯化物，p-甲苯磺酰基基團(tuán),芐氧羰基基團(tuán)，t-丁基氧羰基基團(tuán)，氯乙?；鶊F(tuán)或醛基基團(tuán)的分子。自由羧基可經(jīng)衍生而形成鹽、甲基和乙酯或其它類型的酯或酰肼。游離羥基可以經(jīng)衍生形成O-?；騉-烷基衍生物。組氨酸的咪唑氮可以衍生形成N-亞胺基-苯甲基組氨酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，在本發(fā)明的生物活性涂層組合物中，該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)N末端氨基酸，一個(gè)C末端氨基酸，或其組合，其中該氨基酸是一種非遺傳編碼氨基酸，可增強(qiáng)該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與它具有結(jié)合特異性的醫(yī)療器材表面的結(jié)合親合力(相互結(jié)合的力)?？梢岳帽绢I(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法如固相和/或液相合成把這種氨基酸合并到一個(gè)包含表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽中。例如，在一個(gè)實(shí)施例中，在合成期間，將大約一到大約四個(gè)DOPA的殘基，一個(gè)羥基氨基酸(例如，一個(gè)或多個(gè)羥基賴氨酸，別-羥基賴氨酸，羥脯氨酸，等等)或其組合加入到一個(gè)多肽的氨基酸序列的氨基酸末端，其中該多肽包括一個(gè)用于本發(fā)明的生物活性涂層組合物的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，來增強(qiáng)該生物活性涂層組合物和被包覆的醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面之間相互結(jié)合的力(例如通過靜電作用或離子相互作用)。本發(fā)明的多肽可以經(jīng)過修飾，例如添加化學(xué)部分，或進(jìn)行氨基酸的替換，插入和缺失，在這種情況下該修飾對(duì)于它的應(yīng)用可以提供一定的優(yōu)勢(shì)；只要這種多肽基本為SEQIDNOs:l-47所例舉的氨基酸序列。在本發(fā)明的說明書和權(quán)利要求中所使用的術(shù)語"基本上存在"或類似的術(shù)語(例如，"基本上由……組成")指一種多肽，其包括本發(fā)明所述多肽的氨基酸序列，或者一種具有最小70%同一性(和優(yōu)選至少90%同一性)的多肽(如本發(fā)明更詳細(xì)描述的那樣)，并且可以在羧基和/或氨基末端包括另外的氨基酸(例如，每端大約1到大約20個(gè)氨基酸)，并且其保持多肽作為一個(gè)本發(fā)明所述的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的基本活性。在一個(gè)實(shí)施例中，多肽基本上由SEQIDNO:3的氨基酸序列組成包括一個(gè)SEQIDNO:l的氨基酸序列(后者的差別在于N末端具有另外的20個(gè)氨基酸，但是保持著對(duì)于金屬表面的結(jié)合特異性；例如，參見實(shí)施例2和表2)。在另一個(gè)非限制性的實(shí)施例中，一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，"基本上"由SEQIDNOs:9-46所示氨基酸序列中的任何一個(gè)組成，其對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞具有結(jié)合活性；并且由此組成的材料所具有的特性不會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)樽鳛閮?nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽的基本的和新的特性(例如，在前面所述的實(shí)施方式中，一個(gè)全長的天然的多肽，或一種遺傳工程產(chǎn)生的多肽，其具有除了作為本發(fā)明所述的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的基本活性，并且其包含如本發(fā)明所述的多肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，不會(huì)構(gòu)成"基本上"由本發(fā)明所述的多肽或氨基酸序列的多肽)。因此，術(shù)語"多肽"包括任何一種形式的多肽衍生物，包括，例如酰胺，蛋白質(zhì)綴合物，環(huán)酮多肽，聚合的多肽，保守替換變體，類似物，片段，化學(xué)修飾多肽，以及多肽模擬物。任何具有期望的本發(fā)明的結(jié)合結(jié)構(gòu)域特征的多肽衍生物都可用于本發(fā)明的實(shí)施。例如，可以將一個(gè)化學(xué)基團(tuán)添加到多肽的N末端氨基酸以封閉多肽的氨基末端的化學(xué)反應(yīng)性，包括N末端基團(tuán)。這種用于保護(hù)氨基末端的N末端基團(tuán)在本領(lǐng)域中是公知的，包括但不限于低級(jí)烷?；鶊F(tuán)、?；鶊F(tuán)、磺?；鶊F(tuán)，以及氨基甲酸鹽形成基團(tuán)。優(yōu)選的N末端基團(tuán)可以包括乙?；?、Fmoc，以及Boc。也可以將一個(gè)化學(xué)基團(tuán)添加到一個(gè)合成多肽的C末端氨基酸來封閉多肽的羧基末端的化學(xué)反應(yīng)性，包括C-末端基團(tuán)。這種用于保護(hù)多肽的羧基末端的C末端基團(tuán)在本領(lǐng)域是公知的，包括，但不限于酯基或酰胺基。多肽的末端修飾對(duì)于減少被蛋白酶消化的敏感性通常是有用的，并因而在多肽存在于含有蛋白酶的生物體液中時(shí)可延長多肽的半壽期?；蛘?，本發(fā)明所述的包括一個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽，可以包括一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾的氨基酸，以包含一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)(例如具有活性的官能團(tuán)，如氟、溴或碘)來促進(jìn)多肽連結(jié)到接頭分子上。本發(fā)明使用的術(shù)語"多肽"也包括其中一個(gè)或多個(gè)肽鍵被擬肽鍵取代，擬肽鍵包括但不限于carba鍵(CH2-CH2)、depsi鍵(CO-O)、羥基亞乙基鍵(CHOH-CH2)、亞甲基酮鍵(CO-CH2)、亞甲基-氧鍵(CH2-0)、還原鍵(CH2-NH)、硫亞甲基鍵(CH2-S)、N-修飾鍵(-NRCO-)、以及硫肽鍵(CS-NH)。作為根據(jù)本發(fā)明的生物活性涂層組合物或利用生物活性涂層組合物的方法中的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽還可以包括相對(duì)于本發(fā)明的表1禾P3以及SEQIDNOs:l-47中公開的任何一個(gè)示范性多肽具有一個(gè)或多個(gè)殘基的替換，添加和/或缺失的多肽，只要基本上保持原有的示范性多肽的結(jié)合性質(zhì)。因此，本發(fā)明的結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括下述多肽，它與本發(fā)明公開的示范性的序列的不同之處在于，例如，與示范性多肽之間相差大約1%到大約25%的氨基酸序列；但基本上保持相應(yīng)的示范性序列結(jié)合特定材料的能力或者具有結(jié)合特異性而起到結(jié)合結(jié)構(gòu)域的作用的能力(例如，利用適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)檢測(cè)，其保持本發(fā)明公開的示范性序列的至少50%、75%、100%或更多的結(jié)合特異性)。也就是說，本發(fā)明的結(jié)合結(jié)構(gòu)域優(yōu)選包括那些與本發(fā)明公開的示范性序列的序列同一性在至少50%到大約99%之間，或具有更高序列同一性的多肽。序列同一性可以人工計(jì)算，也可能利用一種數(shù)學(xué)算法，例如GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA，或本領(lǐng)域已知的其它程序或方法的計(jì)算機(jī)實(shí)現(xiàn)進(jìn)行計(jì)算。利用這些程序的序列對(duì)比可以利用缺省參數(shù)執(zhí)行。例如，對(duì)比包括基本上由表l中鑒定的氨基酸序列SEQIDNOs:3和4的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域。共有序列可以(利用標(biāo)準(zhǔn)單字母氨基酸符號(hào))記作一種基本上由SEQIDNO:5所示的氨基酸序列組成的多肽。因此，這些氨基酸序列(SEQIDNOs:3和4)共有顯著的序列同源性(如本發(fā)明所示)，但是共有序列同一性小于大約50%，而基本上保持了對(duì)于金屬，尤其是不銹鋼的結(jié)合特異性。一種具有基本上與本發(fā)明公開的示范性多肽相同的氨基酸序列的多肽也可以具有一個(gè)或多個(gè)不同的氨基酸殘基，其由示范性多肽序列中的氨基酸殘基被功能上類似的氨基酸殘基替換("保守替換")而得到；只要包含保守替換的多肽基本上保持了不包含保守替換的示范性多肽的結(jié)合特異性。保守替換的例子包括將非極性的(疏水的)殘基如異亮氨酸，纈氨酸，亮氨酸或甲硫氨酸中的一個(gè)替換為另一個(gè)；將芳香氨基酸殘基如色氨酸，酪氨酸，或苯基丙氨酸中的一個(gè)替換為另一個(gè)；將極性的(親水的)殘基中的一個(gè)替換為另一個(gè)，如精氨酸和賴氨酸之間，谷氨酰胺和天冬酰胺之間，蘇氨酸和絲氨酸之間的替換；將堿性殘基如賴氨酸、精氨酸、組氨酸中的一個(gè)替換為另一個(gè)；或?qū)⑺嵝詺埢缣於彼峄蚬劝彼嶂械囊粋€(gè)替換為另一個(gè)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其基本上由可用于本發(fā)明的多肽(和/或其氨基酸序列)組成。[正式定義結(jié)束]本發(fā)明提供了一種生物活性涂層組合物(或界面生物材料)，包括內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽，包括表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽，包覆一種醫(yī)療器材的方法，制造一種醫(yī)療器材的方法，和一種被包覆的醫(yī)療器材；其都涉及一種生物活性涂層組合物，包括至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包括一個(gè)基本上由選自SEQIDNOs:l-8，及其組合的氨基酸序列組成的多肽；和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包括一個(gè)其本上由選自SEQIDNOs:9-46，及其組合的氨基酸序列組成的多肽；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合在一起。該至少一個(gè)表面結(jié)合的數(shù)量對(duì)于介導(dǎo)該生物活性涂層組合物與醫(yī)療器材的經(jīng)過選擇的金屬表面的結(jié)合是有效的，所述表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)τ卺t(yī)療器材的金屬表面具有結(jié)合特異性；并且該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域在數(shù)量上對(duì)于賦予被本發(fā)明的生物活性涂層組合物包覆的醫(yī)療器材表面能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞的連接，粘附，和內(nèi)皮化中的一種或幾種。本發(fā)明在下面的例子中進(jìn)行說明，其用意不在于限制。實(shí)施例1本實(shí)施例說明生成本發(fā)明的生物活性涂層組合物中的一種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的各種方法。包括本發(fā)明的生物活性涂層組合物中的結(jié)合結(jié)構(gòu)域(即一種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域)的許多多肽是利用噬菌體展示技術(shù)開發(fā)的。噬菌體展示技術(shù)在本領(lǐng)域中是公知的，可用于鑒定其它的多肽，用作本發(fā)明的界面結(jié)合材料中的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。通常，利用噬菌體顯示，各種多肽的庫可以展示在目的基質(zhì)上，并且可以選擇特異結(jié)合該基質(zhì)的多肽作為結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？梢岳眠B續(xù)多輪選擇，稱為"淘選"。如本領(lǐng)域中已知的那樣，任何一個(gè)庫和淘選方法都可用于鑒定可用于本發(fā)明的生物活性涂層組合物中的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。淘選方法可以包括,例如，液相篩選、固相篩選，或基于細(xì)胞的篩選。一旦一種候選的結(jié)合結(jié)構(gòu)域被鑒定出來，該序列的定向或隨機(jī)誘變可以用于優(yōu)化該結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合性質(zhì)(包括一種或多種特異性和親合力)。例如，篩選各種不同的噬菌體展示文庫，得到與選定的目標(biāo)基質(zhì)(例如，一種選定的基質(zhì)，用于找到可用于本發(fā)明的結(jié)合結(jié)構(gòu)域)結(jié)合的多肽。該基質(zhì)結(jié)合到96孔板的孔上或置于孔中(取決于選擇的基質(zhì))。該聚苯乙烯微孔板的孔表面的非特異性結(jié)合位點(diǎn)用含有1%牛血清白蛋白的緩沖液在4°(:下保溫過夜封閉。然后用含有磷酸鹽緩沖鹽水和Tween20("PBS-T")的緩沖液將孔洗5遍。每個(gè)庫在PBS-T中稀釋到濃度為10IQpfu/ml，總體積為100y1。在室溫下以50rpm振蕩保溫3小時(shí)后，用多次PBS-T洗滌去除未結(jié)合的噬菌體。結(jié)合噬菌體用O.lM甘氨酸緩沖液，pH2.2變性回收。洗脫的噬菌體用磷酸鹽緩沖液中和，然后加入到含有E.coli細(xì)胞的生長培養(yǎng)基中。含細(xì)胞和噬菌體的培養(yǎng)基在震蕩器中以200rpm的轉(zhuǎn)速于37。C保溫過夜培養(yǎng)。將培養(yǎng)液離心后收集含有噬菌體的上清液。第二輪和第三輪的選擇按第一輪選擇的類似方式進(jìn)行，利用前一輪擴(kuò)增的噬菌體作為給料。為了檢測(cè)特異結(jié)合選擇的基質(zhì)的噬菌體，利用抗噬菌體抗體綴合到檢測(cè)分子上進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附(ELISA-型)試驗(yàn)，然后對(duì)試驗(yàn)中結(jié)合的檢測(cè)分子進(jìn)行檢測(cè)和定量。然后確定編碼來自噬菌體的與選定的基質(zhì)特異結(jié)合的多肽的DNA序列；即編碼該多肽的序列定位于噬菌體基因組的插入部分，并且可以在噬菌體表面展示相應(yīng)的氨基酸序列。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，以及根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法，包含本發(fā)明結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽可以通過任何方法進(jìn)行多肽合成，包括但不限于，固相合成、液相合成，以及它們的組合。例如，包含可用于本發(fā)明的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽可在多肽合成儀上利用標(biāo)準(zhǔn)固相合成方法，利用標(biāo)準(zhǔn)FMOC多肽化學(xué)合成。在所有的殘基都已經(jīng)連結(jié)后，利用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法和試劑同時(shí)進(jìn)行解離和側(cè)鏈脫保護(hù)。從樹脂上解離后，將多肽沉淀，并且將沉淀物冷凍干燥。然后利用反相高效液相色譜法純化多肽；用質(zhì)譜分析法確認(rèn)多肽同一性。實(shí)施例2本實(shí)施例用于說明表面包含對(duì)于一種醫(yī)療器材的金屬表面，如一種斯坦特固定模的不銹鋼表面具有結(jié)合特異性的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的發(fā)現(xiàn)和特性。A.噬菌體篩選和選擇作為一個(gè)特定的說明性實(shí)施例，在含有不銹鋼斯坦特固定模材料的聚苯乙烯微孔板的孔中，非特異性結(jié)合位點(diǎn)用含有1%牛血清白蛋白的緩沖液在室溫下封閉2小時(shí)。然后將孔和不銹鋼斯坦特固定模材料用PBS-T洗3遍。平板在室溫下以50rpm振蕩保溫1小時(shí)。17個(gè)不同的噬菌體展示文庫的每一個(gè)都用PBS+1%BSA稀釋，加至濃度為101Gpfu/ml，總體積為250iM。在室溫下以50rpm振蕩保溫1小時(shí)后，加入70ul牛血清，然后將平板在37°C振蕩保溫1小時(shí)。非結(jié)合的噬菌體用300ulPBS-T洗3遍除去。最后一遍洗滌后，結(jié)合到斯坦特固定模上的噬菌體用于感染E.coli細(xì)胞。受感染細(xì)胞置于96深孔平板中保溫，每孔含lml生長培養(yǎng)基(例如，2xYT+5ng/ml四環(huán)素)，在37。C振蕩過夜。通過離心作用收集每孔中含有擴(kuò)增噬菌體的上清液。第二、第三和第四輪的選擇按照第一輪類似的方式進(jìn)行，利用前一輪的150u1擴(kuò)增噬菌體上清液作為給料，并且用150lU的PBS-T+1。/。BSA稀釋。從第四輪的選擇中，分離出340個(gè)單株的克隆噬菌體，通過平板稀釋噬菌體庫來獲得單個(gè)的溶菌斑。為了檢測(cè)特異地結(jié)合金屬，如不銹鋼的噬菌體，利用綴合到辣根過氧化物酶上的抗M13噬菌體抗體進(jìn)行常規(guī)ELISAs，然后加入顯色劑ABTS(2,2，-連氮-雙(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)。噬菌體的相對(duì)的結(jié)合強(qiáng)度通過在ELISA中噬菌體與不銹鋼結(jié)合能力的連續(xù)稀釋檢驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，利用綴合于辣根過氧化物酶上的抗M13噬菌體抗體，然后加入顯色劑ABTS，并測(cè)量405nm下的吸光度。在測(cè)定相對(duì)結(jié)合強(qiáng)度的ELISA中，噬菌體滴定是只使用緩沖液，或使用含20。/。全血的緩沖液進(jìn)行的。確定編碼特異結(jié)合金屬表面的多肽的DNA序列。編碼多肽插入片段的序列位于噬菌體基因組中，并翻譯產(chǎn)生相應(yīng)的氨基酸序列，展示在噬菌體表面。在噬菌體滴定實(shí)驗(yàn)中，有三株噬菌體顯示出期望的相對(duì)結(jié)合特異性。這3株噬菌體的核酸插入片段的氨基酸分析顯示，該噬菌體展示了2種不同的多肽序列(即，3株中有2株具有相同的氨基酸序列)，如表1所示。因此，表l列出了這種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，它對(duì)于金屬，如斯坦特固定模的不銹鋼具有結(jié)合特異性，并且包含基本上由SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的氨基酸序列組成的多肽。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>B.表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的特性和修飾對(duì)于兩個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列(SEQIDNO:l和SEQIDNO:2)的分析顯示，在每個(gè)序列中，多肽的C末端富含堿性氨基酸，如賴氨酸和組氨酸。因此，為了確定對(duì)于不銹鋼的結(jié)合特異性是否主要由氨基酸序列的C末端部分產(chǎn)生，或者N末端區(qū)域是否也同樣影響結(jié)合，合成基本上由后面的SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所列的氨基酸序列組成的多肽。合成帶有生物素標(biāo)記的表2中所列的SEQIDNOs:l，3,和4的多肽，然后利用確定噬菌體展示多肽的相對(duì)結(jié)合強(qiáng)度的類似方法(如本發(fā)明前面所述)，通過ELISA檢測(cè)相對(duì)結(jié)合強(qiáng)度。在本試驗(yàn)中，連續(xù)稀釋(從OiiM到lOyM)每種多肽，使其與不銹鋼斯坦特固定模保溫，用PBS-T洗滌，通過檢測(cè)由抗生物素蛋白鏈菌素-堿性磷酸酶(抗生物素蛋白鏈菌素部分結(jié)合到生物素標(biāo)記多肽上)與發(fā)色基質(zhì)反應(yīng)引起的發(fā)色信號(hào)定量測(cè)定相對(duì)結(jié)合特異性。EC50由滴定曲線確定。如表2所列，與基本上由SEQIDNO:l或者SEQIDNO:4的氨基酸序列組成的多肽相比，基本上由SEQIDNO:3的氨基酸序列組成的多肽具有最強(qiáng)的結(jié)合特異性(或者結(jié)合親和性)。另外，該結(jié)果證明，富含賴氨酸和組氨酸的C末端的氨基酸(例如，SEQIDNO:l的21-39位氨基酸，其以SEQIDNO:3表示；和SEQIDNO:2的21-39位氨基酸(其以SEQIDNO:4表示))對(duì)于這些多肽與金屬(例如鈦，及其它具有氧化層的金屬)，以及優(yōu)選不銹鋼的結(jié)合特異性起主要作用。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>根據(jù)這些實(shí)驗(yàn)，以及考慮關(guān)鍵位置的氨基酸對(duì)于介導(dǎo)與金屬，例如不銹鋼的結(jié)合特異性的作用，優(yōu)選的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含任一個(gè)具有SEQIDNOs:1，2,3,或4的氨基酸序列多肽的變體或衍生物，該氨基酸序列至少包含一個(gè)具有SEQIDNO:5的基元的多肽，如下所述。SEQIDNO:5:X廣H-X-X曙X2-X2陽X2-K-X,-X廣X-K-X廣X廣N-K;其中X是任何氨基酸；X,是K,N,或S，但是優(yōu)選K或者N;并且X2是K，N，或H。因此，本發(fā)明的對(duì)于金屬，如一種醫(yī)療器材的不銹鋼具有結(jié)合特異性的一個(gè)優(yōu)選的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含一個(gè)多肽，其基本上由SEQIDNO:5代表的氨基酸序列組成。將基本上由SEQIDNO:3所示的氨基酸序列組成的多肽用環(huán)氧乙垸滅菌(642mg/L，2小時(shí))，用該多肽制定其它的滴定曲線。結(jié)果顯示，用環(huán)氧乙垸滅菌對(duì)于多肽與不銹鋼相對(duì)結(jié)合特異性影響最小(與沒有進(jìn)行環(huán)氧乙垸滅菌的多肽得到的滴定曲線相比，EC50基本相同，<50nm)。對(duì)一種包含基本由SEQIDNO:3所列序列組成的多肽的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域進(jìn)行進(jìn)一步的修飾，以評(píng)價(jià)參數(shù)，如pH對(duì)于結(jié)合特異性的影響，以及在血漿中的穩(wěn)定性(例如，在血漿中的蛋白酶存在的情況下)。在一個(gè)實(shí)施方案中，基本上由SEQIDNO:3所示的氨基酸序列組成的多肽用D-氨基酸合成(SEQIDNO:6)，而不是用L-氨基酸合成。在另一個(gè)實(shí)施方案中，合成的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含基本上由SEQIDNO:3所示氨基酸序列組成的多肽構(gòu)成的一個(gè)多聚體(二價(jià)體(SEQIDNO:7)，和四價(jià)體(SEQIDNO:8))。SEQIDNO:3的多聚體如下所示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>多聚體SEQIDNOs:7和8按下述方法合成。簡(jiǎn)單來說，該多聚體以賴氨酸MAP核心構(gòu)成，分別包括兩個(gè)和四個(gè)SEQIDNO:3的多肽單元。核心基元用于產(chǎn)生SEQIDNO:3的兩重和四重分枝。該多聚體在多肽合成器上利用固相化學(xué)順序合成。合成在0.05mmol規(guī)模上進(jìn)行以確保在合成中產(chǎn)物的最大程度偶聯(lián)。生物素報(bào)告部分加在分子的C末端，在賴氨酸核心上附加一個(gè)短的Gly-Gly-接頭。用標(biāo)準(zhǔn)的Fmoc/t-Bu化學(xué)進(jìn)行合成，以AA/HBTU/HOBt/NMM(1:1:1:2)作為偶聯(lián)劑(AA是氨基酸；HOBt是0-Pfp酯/1-羥基苯并-三唑；HBTU是N-[1H-苯并三唑-1-基)(二甲氨基)亞甲基]-N-甲基-甲基甲銨離子六氟磷酸鹽N-氧化物；NMM是N-甲基嗎啉)。在合成的循環(huán)中，所用的氨基酸保持5-10倍過量，并且所有的殘基隨偶聯(lián)殘基的組成而發(fā)生雙倍、三倍甚至四倍的偶聯(lián)。偶聯(lián)反應(yīng)通過凱撒茚三酮試驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。利用含有20。/。哌啶的二甲基甲酰胺進(jìn)行Fmoc脫保護(hù)反應(yīng)。多肽從樹脂上的解離是利用三氟醋酸(TFA:H20:三異丙基硅烷=95:2,5:2.5)在室溫下處理4小時(shí)完成的。粗產(chǎn)物在冷乙醚中沉淀。離心后得到的沉淀用冷的乙醚洗三次，并經(jīng)冷凍干燥，得到期望的粗產(chǎn)物白色固體。粗產(chǎn)物在C-18柱上用流動(dòng)洗脫液(A-H20/TFA(0.1%TFA)并且B-乙腈/TFA(0.1。/。TFA)進(jìn)行高效液相色譜分析法(HPLC)進(jìn)行分析。在通過HPLC進(jìn)行最后純化之前，對(duì)多聚體利用質(zhì)譜分析法進(jìn)行進(jìn)一步的分析。含有想要的產(chǎn)物的部分集中起來并進(jìn)行冷凍干燥，得到蓬松的白色粉末(〉98%純度)。為了確定pH對(duì)于結(jié)合特異性的影響，在不同緩沖液存在的情況下(通過ELISA)進(jìn)行確定相對(duì)結(jié)合強(qiáng)度的試驗(yàn)，pH的范圍在pH2到pH12之間。例如，含甘氨酸和水的緩沖液，用HCl調(diào)節(jié)至pH2;醋酸鹽緩沖液，調(diào)節(jié)至pH4.0(離子強(qiáng)度約0.001M);磷酸鹽緩沖液(NaH2P04)，調(diào)節(jié)至pH6.0(離子強(qiáng)度約0.012M);磷酸鹽緩沖液(NaH2P04)，調(diào)節(jié)至pH7.0(離子強(qiáng)度約0.019M);三羥甲基氨基甲烷緩沖液，調(diào)節(jié)至pH8.0(離子強(qiáng)度約0.006M);乙醇胺緩沖液，調(diào)節(jié)至pHIO.O(離子強(qiáng)度約0.003M);磷酸鹽緩沖液(NaH2P04)，調(diào)節(jié)至pH12.0(離子強(qiáng)度約0.044M)。本試驗(yàn)中，每種多肽的最終濃度是1Wvl。在本試驗(yàn)中檢驗(yàn)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含基本上由SEQIDNO:3所示氨基酸序列組成的多肽，及其多聚體(二價(jià)體(SEQIDNO:7)和四價(jià)體(SEQIDNO:8))。結(jié)合曲線顯示，全部三種多肽(SEQIDNO:3氨基酸序列的單體、二價(jià)體和四價(jià)體)在pH6.0到pH8.0的范圍中都能很好地結(jié)合，結(jié)合的最適pH值是pH7.0;在pH6.0或pH8.0時(shí)，結(jié)合活性的下降不超過20%?；旧嫌蒘EQIDNO:3的氨基酸序列的單體或四價(jià)體(SEQIDNO:8)組成的多肽，以及包含它的D-氨基酸形式(SEQIDNO:6)的多肽都基本上按照本發(fā)明所述在ELISA結(jié)合試驗(yàn)中進(jìn)行檢驗(yàn)，只是用存在于血漿中的不銹鋼進(jìn)行試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性(對(duì)于血漿中的蛋白酶的敏感度，或與血漿成分競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到不銹鋼上的能力中的一種或多種)。SEQIDNO:3的氨基酸序列的四價(jià)體(SEQIDNO:8)和基本上由SEQIDNO:6所示氨基酸序列組成的多肽，與基本上由SEQIDNO:3所示氨基酸序列組成的多肽相比，都顯著地表現(xiàn)出了在血漿存在下更好的穩(wěn)定性(例如，保持多于1.5到4倍的結(jié)合多肽)，包括對(duì)于蛋白水解酶降解的較低敏感度。實(shí)施例3本實(shí)施例說明對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞包括具有結(jié)合特異性的多肽的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的發(fā)現(xiàn)和特性。A.噬菌體篩選和選擇噬菌體庫集中為四群，篩選結(jié)合到人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的多肽。這四個(gè)庫首先在非靶細(xì)胞(例如，內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞之外的細(xì)胞)上進(jìn)行預(yù)凈化。對(duì)于每個(gè)庫，將10uL的噬菌體(10^噬菌體)加入下列每種細(xì)胞類型的細(xì)胞的1x106個(gè)細(xì)胞中HEK-293細(xì)胞，主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(AoSMC)，以及血小板。噬菌體和細(xì)胞在室溫下保溫1小時(shí)。細(xì)胞和附著的噬菌體通過離心作用沉淀。保留在上清液中的噬菌體用于隨后在HUVECs上的選擇。在HUVECS上的選擇利用本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行，包括一輪或多輪的細(xì)胞生物淘篩，包括差速離心，熒光激活細(xì)胞分類術(shù)(FACS)，以及細(xì)胞單層。在HUVECs上進(jìn)行選擇后，細(xì)胞在緩沖液中漂洗并離心。HUVECs和附著的噬菌體重新懸浮在2ml2xYT細(xì)菌培養(yǎng)基中，用DH5aF，細(xì)胞培養(yǎng)。將噬菌體從細(xì)菌培養(yǎng)基中分離出來并用熒光激活細(xì)胞分類術(shù)(FACS)檢驗(yàn)靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞，以確認(rèn)特異性。細(xì)胞和附著的噬菌體再懸浮于含有與藻紅素綴合的抗M13噬菌體抗體的培養(yǎng)基中。經(jīng)洗滌后，將細(xì)胞再懸浮于緩沖液+1%BSA中，通過FACS分析相對(duì)陽性率。利用該過程，鑒定相對(duì)于平滑肌細(xì)胞和血小板對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞具有特異性的噬菌體展示多肽(例如，通過FACS顯示對(duì)于平滑肌細(xì)胞和血小板小于10%的陽性率)。確定編碼特異結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞的噬菌體DNA序列插入片段，然后經(jīng)翻譯產(chǎn)生相應(yīng)的氨基酸序列，展示在噬菌體表面(沒有鄰近的噬菌體序列；例如，SS或SR)。表3列出了這樣的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其包含基本上由SEQIDNO:9-46的氨基酸序列組成的多肽。表3所列的以SEQIDNOs:39-46表示的氨基酸序列來源于一個(gè)特定的偏好半胱氨酸存在的噬菌體庫。但是，從另一個(gè)噬菌體庫中發(fā)現(xiàn)氨基酸序列(即，SEQIDNOs:9-38)，在序列上顯示出對(duì)于甘氨酸(G)、纈氨酸(V)和丙氨酸(A)的富集的極大相關(guān)性(例如，序列中包含不少于10%至不大于75%的上述氨基酸殘基)，這可能是結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的一個(gè)指標(biāo)。在這方面，己有報(bào)道說由甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸和天冬氨酸形成的多肽具有潛在催化功能的三級(jí)結(jié)構(gòu)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>抗體標(biāo)記的細(xì)胞用清洗緩沖液(11888+1%BSA+0.1%疊氮化鈉，濾過除菌)通過離心作用漂洗兩次。一百(100)uL的全血按等份加入深孔聚丙烯平板的每個(gè)孔中。將多肽加入每個(gè)孔中，至要求的多肽濃度。向每孔中加入極小量的細(xì)胞(一般地10"L的細(xì)胞或約50,000個(gè)細(xì)胞)。在比較多肽與內(nèi)皮細(xì)胞和血小板的相對(duì)結(jié)合的實(shí)驗(yàn)中，制備以下兩組樣品第一組樣品由含有抗體標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞的全血組成；第二組樣品由含有未標(biāo)記的內(nèi)皮細(xì)胞和抗體標(biāo)記的血小板的全血組成。將平板蓋上，在室溫下振蕩保溫20分鐘。加入1mL的FACS裂解溶液裂解紅細(xì)胞，將平板蓋上，并在室溫下?lián)u動(dòng)15分鐘。在每個(gè)孔中加入一(l)mL的常溫清洗緩沖液，在室溫下以小于1500rpm的轉(zhuǎn)速離心。吸出孔中液體，加入1.5mL清洗緩沖液，然后再次離心和吸出。在室溫下將抗生物素蛋白鏈菌素-AlexaFluor532在培養(yǎng)基中按1:500稀釋，將細(xì)胞重懸浮于抗生物素蛋白鏈菌素-AlexaFluor532溶液中。將平板蓋上，在室溫下保溫20分鐘，然后通過加入常溫洗滌緩沖液，以小于1500rpm的轉(zhuǎn)速離心漂洗兩次。最終懸浮的細(xì)胞懸浮于250pL的洗滌緩沖液+50pL的4%多聚甲醛中。把樣品轉(zhuǎn)到分析平板上，利用FACS分析細(xì)胞結(jié)合。在該分析中，每種細(xì)胞類型的對(duì)照(帶有如表4中的相應(yīng)抗體，但不包含多肽)用來評(píng)價(jià)本底熒光。高于"無肽"的任何信號(hào)都用于計(jì)算陽性細(xì)胞百分比。結(jié)合特性的結(jié)果顯示，優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括基本上由SEQIDNOs:10，14-18,23,25-28,和30-32的氨基酸序列組成的多肽。經(jīng)FACs測(cè)定，這些內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域顯示出與人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，豬冠狀冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，和內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞的一種或幾種結(jié)合，結(jié)合的特異性和選擇性接近或超過40%陽性率，與血小板和平滑肌細(xì)胞的陽性率小于10%(常小于5%陽性率)。一些內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域與內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合相比，似乎更傾向于結(jié)合到內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞上(例如SEQIDNO:14的氨基酸序列)，而其它的更傾向于結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞(例如，SEQIDNO:32的氨基酸序列)。表征結(jié)合特異性的輔助試驗(yàn)顯示，這些優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的一個(gè)或多個(gè)(例如，SEQIDNO:19)的EC50小于10PM。實(shí)施例4如本發(fā)明己經(jīng)說過的那樣，在有些情況下，包含本發(fā)明多肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域也可以包括修飾；即，在N末端和/或C末端進(jìn)行封閉，和/或與別的多肽連接。例如，利用該方法，對(duì)于醫(yī)療器材的金屬表面具有結(jié)合特異性的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域相連，形成本發(fā)明的生物活性涂層組合物。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，優(yōu)選在一個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域上連接一個(gè)接頭分子的方法可以根據(jù)每個(gè)分子上存在的活性基團(tuán)而變化。利用活性基團(tuán)共價(jià)連接兩個(gè)分子的流程在本領(lǐng)域中是公知的。如本發(fā)明中前面所述的那樣，利用本領(lǐng)域中公知的方法，兩個(gè)結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過接頭連接的本發(fā)明的生物活性涂層組合物可以通過合成包含第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如，一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，一個(gè)包含3個(gè)以上氨基酸的接頭(例如，GSS)，和一個(gè)第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域(例如，一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域)的單一連續(xù)的多肽而形成。術(shù)語"第一"和"第二"只用來方便描述，而不是用于限制合成的順序。換言之，第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域可能包括一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以包括表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)方法中，至少一個(gè)(用抗生物素蛋白鏈菌素，抗生物素蛋白，或其功能衍生物，以及本領(lǐng)域公知的方法)親和素化的第一結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以與至少一個(gè)己經(jīng)(用生物素，和本領(lǐng)域公知方法)生物素化的第二結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接，形成本發(fā)明的生物活性涂層組合物。在這個(gè)實(shí)施例中，該抗生物素蛋白-生物素分子作為連結(jié)至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的接頭，形成本發(fā)明的界面生物材料。作為制造本發(fā)明的生物活性涂層組合物的說明性實(shí)施例，至少一個(gè)包含基本上由SEQIDNO:3的氨基酸序列組成的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接到至少一個(gè)包含基本上由SEQIDNO:19的氨基酸序列組成的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與該內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過一個(gè)包含IO個(gè)單位聚乙二醇的接頭("PEG")連接，以形成包含SEQIDNO:47所示氨基酸序列的生物活性涂層組合物(一個(gè)生物素標(biāo)記作為PEG接頭的一部分，便于檢測(cè)生物活性涂層組合物的特性，如本發(fā)明將要描述的那樣；并且游離C末端氨基酸被酰胺化)。SEQIDNO:47SSFYGEVGYVGASLYAGGASSRG-PEG陽SSHRTNHKK麗PKKKNKTRG簡(jiǎn)單來說，生物活性涂層組合物是在多肽合成器以線形方式合成，并按以下順序形成連續(xù)的鏈一個(gè)SEQIDNO:3的氨基酸序列，PEG接頭，一個(gè)SEQIDNO:19的氨基酸序列。利用AA/HBTU/HOBt/NMM(1:1:1:2)作為偶聯(lián)劑，按標(biāo)準(zhǔn)Fmoc/t-Bu化學(xué)進(jìn)行。在合成循環(huán)中，氨基酸過量5倍，所有殘基加倍偶聯(lián)。偶聯(lián)反應(yīng)用凱撒茚三酮試驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。為了抑制多肽聚集作用，用擬脯氨酸Fmoc-Ala-Ser(PsiMe，Mepro)-OH，也是以5倍過量雙倍偶聯(lián)。Fmoc-Lys(生物素)-OH和Fmoc-NH-(Peg)l(rCOOH用上述偶聯(lián)條件手工加倍偶聯(lián)，生成帶有生物素標(biāo)記的PEG接頭。Fmoc脫保護(hù)反應(yīng)在含有20%哌啶的DMF中進(jìn)行。用試劑K(TFA:EDT:H20:phenol:苯硫基甲烷82.5:2.5:5:5:5)在室溫下處理4小時(shí)將生物活性覆膜從樹脂上解離，產(chǎn)生粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物在冷的乙醚中沉淀。離心作用后得到的沉淀用冷的乙醚洗滌三次，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到粗產(chǎn)物的白色固體。粗產(chǎn)物用分析型HPLC和質(zhì)譜法進(jìn)行分行，然后用梯度緩沖液B(乙腈/TFA(0.P/。TFA))通過純化型HPLC進(jìn)行純化。所期望的產(chǎn)物，生物活性涂層組合物經(jīng)集中和冷凍干燥，獲得蓬松的白色粉末(>95%純度)。用類似于實(shí)施例2和3中所描述的方法，對(duì)包含SEQIDNO:47的氨基酸序列的生物活性涂層組合物，通過滴定該生物活性涂層組合物的濃度和測(cè)量其與包含不銹鋼的金屬的相對(duì)結(jié)合性，來測(cè)試其結(jié)合特異性。簡(jiǎn)單來說，'將不銹鋼珠用緩沖液(含有1%BSA的PBS-T)封閉，洗滌，然后與生物活性涂層組合物以0到10Wvl的濃度在室溫下保溫1小時(shí)。洗滌后，用抗生物素蛋白鏈菌素-堿性磷酸酶(抗生物素蛋白鏈菌素部分結(jié)合到生物素標(biāo)記的生物活性涂層組合物上)檢測(cè)帶有發(fā)色基質(zhì)的生物活性涂層組合物的數(shù)值。EC50由滴定曲線確定。包含SEQIDNO:47所示的氨基酸序列的生物活性涂層組合物具有與構(gòu)成它的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域(一個(gè)包含基本上由SEQIDNO:3的氨基酸序列組成的多肽的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域)類似的結(jié)合活性(例如，EC50)。然后測(cè)試包含如SEQIDNO:47所示的氨基酸序列的生物活性涂層組合物選擇性地使內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞粘附到醫(yī)療器材的金屬表面的能力。在本實(shí)施例中，不銹鋼盤用來代表一個(gè)醫(yī)療器材的金屬表面。該盤與濃度為的含有該生物活性涂層組合物的緩沖溶液在室溫下接觸1小時(shí)。作為非特異結(jié)合的對(duì)照，不銹鋼盤或者不覆蓋溶液，或者覆蓋包含基本上由SEQIDNO:3的氨基酸序列組成的多肽的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，或者覆蓋一種不相關(guān)的多肽(己知對(duì)于金屬或不銹鋼或者內(nèi)皮細(xì)胞沒有結(jié)合特異性)。將該盤用PBS洗滌，然后將25,000內(nèi)皮細(xì)胞加入含10%牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中，并在室溫下保溫15分鐘。將盤用PBS洗滌，將細(xì)胞用市售的熒光細(xì)胞存活力檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行定量，該系統(tǒng)用一個(gè)熒光讀出裝置測(cè)量細(xì)胞內(nèi)ATP。熒光用平板讀數(shù)器檢測(cè)。包含SEQIDNO:47所示氨基酸序列的生物活性涂層組合物顯示，其能夠?qū)?nèi)皮細(xì)胞結(jié)合到金屬表面，表現(xiàn)為與對(duì)照相比，結(jié)合到盤上的內(nèi)皮細(xì)胞在數(shù)量上有幾倍的增加。實(shí)施例5在這個(gè)實(shí)施例中，例舉本發(fā)明的方法(a)—種制造醫(yī)療器材的方法；(b)—種在醫(yī)療器材的金屬表面覆膜的方法，使得覆膜表面能夠粘附內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞；(c)一種促進(jìn)醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面內(nèi)皮化的方法；以及(d)—種促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞粘附到醫(yī)療器材的方法。該方法包括使醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬(優(yōu)選不銹鋼)表面與有效量的生物活性涂層組合物在適于在金屬表面形成覆膜的條件下接觸，其中該生物活性涂層組合物包含至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含一種多肽，該多肽的氨基酸序列組成基本選自由SEQIDNO:l,SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4.SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，及其組合所構(gòu)成的組；其中該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含一種多肽，該多肽的氨基酸序列組成基本選自由SEQIDNO:9,SEQIDNO:10,SEQIDNO:11,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:17，SEQIDNO:18,SEQIDNO:19，SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24，SEQIDNO:25,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27,SEQIDNO:28,SEQIDNO:29，SEQIDNO:30,SEQIDNO:31，SEQIDNO:32,SEQIDNO:33,SEQIDNO:34,SEQIDNO:35,SEQIDNO:36,SEQIDNO:37,SEQIDNO:38,SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43，SEQIDNO:44,SEQIDNO:45，SEQIDNO:46，及其組合所構(gòu)成的組。其中至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接。優(yōu)選地，該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過一個(gè)接頭共價(jià)連接。該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域是該生物活性涂層組合物的成分，主要直到使生物活性涂層組合物與被覆蓋的醫(yī)療器材的一個(gè)或多個(gè)表面結(jié)合的作用。對(duì)于本發(fā)明的這些方法，以及對(duì)于本發(fā)明的生物活性涂層組合物，其中醫(yī)療器材的至少一個(gè)將要覆膜的表面包含超過一種金屬材料(例如，兩種不同的金屬；一種金屬和一種金屬氧化物；一種金屬和金屬合金；等等)，生物活性膜中的至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以包括多種(兩種或更多種)類型的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中每種類型的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與生物活性涂層組合物中包括的其它表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域相比，對(duì)于要被覆蓋的一種不同的表面材料具有結(jié)合特異性。另外，對(duì)于本發(fā)明的方法，以及對(duì)于本發(fā)明的生物活性涂層組合物，該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以包括超過一種類型(例如，通過每種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合特異性確定；例如，兩種或更多種不同的多肽，一種多肽對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞具有結(jié)合特異性，另一種多肽對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞袓細(xì)胞具有結(jié)合特異性)。在本發(fā)明的方法中，當(dāng)生物活性涂層組合物與醫(yī)療器材的至少一個(gè)要被覆膜的金屬表面接觸時(shí)，(a)該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域己經(jīng)結(jié)合了內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞；或者(b)該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域還沒有結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞。對(duì)于后者，在進(jìn)一步的覆膜步驟中，該醫(yī)療器材的覆膜表面與足夠數(shù)量的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞(在體外或體內(nèi))在適于內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞與該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合的條件下接觸，細(xì)胞與該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合特異性。在一個(gè)實(shí)施例中，該醫(yī)療器材可以與(自體的或來自(例如，異源或異種)供體的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞在體外接觸，使細(xì)胞粘附到該器材的覆膜表面，隨后將該器材移植。在另一個(gè)實(shí)施例中，在本發(fā)明的用于促進(jìn)血管裝置內(nèi)皮化的方法中，一般來說，一旦器材被移植到個(gè)體內(nèi)，器件的--個(gè)或多個(gè)金屬表面將要暴露在脈管系統(tǒng)中，這些表面就是所要求，并挑選出來用本發(fā)明的生物活性涂層組合物覆膜的器件表面。該方法包括以下步驟(a)使本發(fā)明的生物活性涂層組合物與血管裝置的想要內(nèi)皮化的至少一個(gè)表面接觸，使得生物活性涂層組合物結(jié)合到該至少一個(gè)金屬表面，在該器材上形成覆膜表面；其中該生物活性涂層組合物包含至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，連接有至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；以及(b)將該器材移植到需要該器材的個(gè)體內(nèi)；其中內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞(由個(gè)體生成，并在個(gè)體的脈管系統(tǒng)中循環(huán))與該器材的覆膜表面(通過生物活性涂層組合物)接觸和附著，其中這種接觸和附著促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞在該器材的覆膜表面的擴(kuò)展，以促進(jìn)該血管裝置的內(nèi)皮化。促進(jìn)該移植裝置的內(nèi)皮化可以進(jìn)一步促進(jìn)靠近該移植裝置的組織或脈管系統(tǒng)愈合，促進(jìn)移植裝置與鄰近的組織結(jié)合(整合)，以及減少與移植裝置有關(guān)的血栓形成。本領(lǐng)域公知的慣用方法可以用于將本發(fā)明的生物活性涂層組合物涂于要被覆膜的醫(yī)療器材的一個(gè)或多個(gè)金屬表面(使生物活性涂層組合物與一個(gè)或多個(gè)表面接觸)。這種工藝是公知的，包括但不限于浸漬、刷涂、噴霧、汽相沉積，以及電鍍。本發(fā)明的生物活性涂層組合物的劑型可以取決于用來包覆醫(yī)療器材的工藝。例如，包括生物活性涂層組合物的溶液或混懸液可以通過噴灑器進(jìn)行噴涂，產(chǎn)生覆蓋在要被覆膜的醫(yī)療器材的金屬表面的液滴。醫(yī)療器材在使用前可以進(jìn)行干燥，也可以進(jìn)行進(jìn)一步的處理(例如，在溶液(例如，水或等滲的緩沖液)中清洗以除去過量的生物活性涂層組合物；利用本領(lǐng)域公知的任何一種方法對(duì)醫(yī)療器材除菌；等等)?；蛘?，該生物活性涂層組合物和該醫(yī)療器材可以在處理前先進(jìn)行滅菌，并且工藝在無菌條件下操作。在其它的將生物活性覆膜鍍?cè)谝桓材さ尼t(yī)療器材的一個(gè)或多個(gè)金屬表面的工藝中，要被覆膜的醫(yī)療器材的表面浸在含有效數(shù)量的用于覆膜該表面的生物活性涂層組合物液體(例如，溶液或混懸液，水或溶劑)中。例如，該表面浸漬或沉浸在含有該生物活性涂層組合物的浴器中。用于涂覆生物活性涂層組合物的適宜條件包括使要被覆膜的表面與含有生物活性涂層組合物的液體保持接觸適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如，從約5分鐘到約12小時(shí)；優(yōu)選地，從15分鐘到60分鐘)，在適當(dāng)?shù)臏囟认?例如，從10。C到約50。C;更優(yōu)選地，從常溫到37。C)該被包覆的醫(yī)療器材可以進(jìn)一步處理，如果對(duì)于使用是必需的話(洗滌、滅菌等等)。在別的將生物活性覆膜包覆在需要包覆的醫(yī)療器材的一個(gè)或多個(gè)金屬表面的工藝中，本發(fā)明的生物活性涂層組合物制成干粉的劑型(例如，通過風(fēng)干或冷凍干燥該生物活性涂層組合物)。然后將包括該生物活性涂層組合物的粉末用本領(lǐng)域公知的方法將粉末包覆在需要包覆的醫(yī)療器材表面。一般來說，一旦涂上，將這種粉末涂層經(jīng)過加熱處理(例如，利用紅外線加熱方式)來完成涂覆工藝。但是，這些例舉的用于將生物活性涂層組合物包覆在醫(yī)療器材表面的工藝不是排它的，因?yàn)槠渌陌埠头€(wěn)定方法也可以應(yīng)用(本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠選擇適于特定器材和目的需要的慣用方法)。例如，如果將要被包覆的醫(yī)療器材表面本質(zhì)上是金屬，可以將親水聚合物(如本發(fā)明前面詳細(xì)描述的那樣)用于連接(與涂覆過程同時(shí)，或者在隨后，來敷用本發(fā)明的生物活性涂層組合物)，只要醫(yī)療器材的金屬表面的該生物活性涂層組合物基本上保持其結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞來源的細(xì)胞的功能，以促進(jìn)在覆膜表面粘附和內(nèi)皮化的一種或多種作用。接著說這個(gè)例子，由于親水聚合物的彈性材料的性質(zhì)，在器材受到機(jī)械力或壓力時(shí)，它能夠增強(qiáng)生物活性涂層組合物結(jié)合到醫(yī)療器材表面的穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明的方法和組合物也可以用于連接用于藥物洗脫的醫(yī)療器材，或其它的包膜技術(shù)，其提供一種或多種不通過本發(fā)明的生物活性涂層組合物而有利于醫(yī)療器材的功能。另外，在一個(gè)根據(jù)本發(fā)明的方法中，包括生物活性涂層組合物的包膜可以進(jìn)行穩(wěn)定處理，例如，通過空氣干燥或通過冷凍干燥。但是，這些處理不是排它的，其它的包膜和穩(wěn)定方法也可以使用。適當(dāng)?shù)陌ず头€(wěn)定方法在本領(lǐng)域中是公知的。例如，需要涂覆本發(fā)明的生物活性涂層組合物的血管裝置的至少一個(gè)金屬表面可以在包膜步驟前進(jìn)行預(yù)處理，以增強(qiáng)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與包括將要被包覆的表面的材料的結(jié)合，以及包膜的堅(jiān)固性和均勻性的一種或幾種。例如，這種預(yù)處理可以包括浸蝕或血漿處理要被包覆的器材的表面材料使得表面更親水，增強(qiáng)在氨基酸序列中包括一些疏水氨基酸的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合，疏水氨基酸對(duì)于作為結(jié)合特異性相互作用表面的親水部分有影響。另外，還可以在其它的步驟中，在覆膜后，移植到個(gè)體體內(nèi)之前，對(duì)涂有本發(fā)明的生物活性涂層組合物的血管裝置至少一個(gè)金屬表面進(jìn)行處理，以便增強(qiáng)該覆膜表面的內(nèi)皮化。例如，可以將一種支持內(nèi)皮化，特別是粘附到覆膜表面的內(nèi)皮細(xì)胞生長(包括增殖)的生物學(xué)基質(zhì)的一個(gè)基片或一層加入(例如，覆蓋和/吸附)在覆膜表面(例如，在內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞結(jié)合和附著到覆膜表面之前或之后)。該層或基片的成分可以包括一個(gè)血管生物制劑，其包括一種或多種膠原(例如，IV型和/或V型)、vitrogen、層粘連蛋白、巢蛋白、纖連蛋白、聚糖(例如，蛋白多糖、氨基多糖)，以及支持內(nèi)皮細(xì)胞生長的生長因子(例如，VEGF、EGF、FGF、肝素結(jié)合表皮生長因子樣生長因子等等)。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法，醫(yī)療器材可以首先進(jìn)行增強(qiáng)生物活性涂層組合物與至少一個(gè)經(jīng)處理的器材表面結(jié)合的工藝處理(例如，通過增強(qiáng)該器材的至少一個(gè)金屬表面親水性，或分子的附著力)；在生物活性涂層組合物與該至少一個(gè)經(jīng)處理的表面結(jié)合的過程中，使該生物活性覆膜與該至少一個(gè)經(jīng)處理的表面接觸，以形成覆膜表面。該方法可以進(jìn)一步包括使有效數(shù)量的血管生物制劑與覆膜表面接觸，以促進(jìn)覆膜表面的內(nèi)皮化。該方法可以進(jìn)一步包括，在將該器材移植之前，有一個(gè)使被包覆的器材與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸的步驟，以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞的附著或粘附，支持內(nèi)皮細(xì)胞生長，以及支持內(nèi)皮細(xì)胞分化的一種或多種作用。例如，內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞可以用本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行純化和分離。例如，內(nèi)皮祖細(xì)胞可以從人外周血液中用涂覆有CD34抗體的磁珠進(jìn)行磁分離。在別的實(shí)施例中，可以通過膠原酶治療血管壁釋放內(nèi)皮細(xì)胞，從臍帶中分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，也可以在本領(lǐng)域公知的適當(dāng)?shù)闹闻囵B(yǎng)基中培養(yǎng)。實(shí)施例6對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，根據(jù)包含本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽的氨基酸序列，可以合成或構(gòu)建編碼這種多肽(或如本發(fā)明所述的其變體)的多核苷酸(核酸分子)，并且這種多肽可以是通過DNA重組技術(shù)作為制備方法生成(例如，在培養(yǎng)物中)和/或通過將這種多核苷酸引入體內(nèi)而在體內(nèi)產(chǎn)生。例如，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，編碼一個(gè)基本上由根據(jù)本發(fā)明的SEQIDNO:3氨基酸序列組成的多肽的多核苷酸序列可以超過一種，而且這種多核苷酸可以根據(jù)公知的編碼基本上由SEQIDNO:3的氨基酸序列組成的多肽的三聯(lián)體密碼子，三堿基簡(jiǎn)并性，以及宿主細(xì)胞對(duì)于三聯(lián)體密碼子用法偏好的選擇而進(jìn)行合成。宿主細(xì)胞一般是對(duì)于表達(dá)所需要的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞(例如，細(xì)菌細(xì)胞，如大腸桿菌；酵母細(xì)胞；哺乳動(dòng)物細(xì)胞；鳥類細(xì)胞；兩棲動(dòng)物細(xì)胞；植物細(xì)胞；魚類細(xì)胞；以及昆蟲細(xì)胞；無論在體外表達(dá)或體內(nèi)表達(dá))。產(chǎn)生如上所述的簡(jiǎn)并變體對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是常規(guī)技術(shù)，例如，對(duì)于特定的宿主優(yōu)化密碼子表達(dá)(例如，將細(xì)菌mRNA中的密碼子改變?yōu)椴溉閯?dòng)物、植物或其它細(xì)菌宿主如大腸桿菌所偏好的密碼子)。用于說明而非限制的是，本發(fā)明提供了SEQIDNO:48作為編碼SEQIDNO:3的氨基酸序列的多核苷酸，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，其中的密碼子用法可以廣泛地適用于編碼一個(gè)優(yōu)選的包含基本上由SEQIDNO:3所示氨基酸序列多肽的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域。另外提供了SEQIDNO:49，作為編碼SEQIDNO:19的氨基酸序列的多核苷酸，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，從其中得到的密碼子用法可以廣泛地地適合于編碼優(yōu)選的包含基本上由SEQIDNO:19所示氨基酸序列組成的多肽的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多核苷酸。因此，舉例來說，利用與SEQIDNO:3相關(guān)的SEQIDNO:48和也SEQIDNO:19相關(guān)的SEQIDNO:49，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地構(gòu)建體編碼如SEQIDNO:3或SEQIDNO:19所示氨基酸序列的變體，或者編碼本發(fā)明提供的任何一個(gè)或一個(gè)以上的其它氨基酸序列(例如，SEQIDNOs:l-2，和4-18，以及20-47)的多核苷酸。在一個(gè)說明性的實(shí)施方案中，提供了一種包含編碼一個(gè)用于本發(fā)明的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的原核表達(dá)載體；以及它用于重組產(chǎn)生包含該結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽的用途。在一個(gè)實(shí)施例中，該多核苷酸可以位于一個(gè)原核表達(dá)載體中，使得當(dāng)多肽在細(xì)菌宿主細(xì)胞中產(chǎn)生時(shí)，它是以與其它氨基酸序列融合的蛋白的形式產(chǎn)生(例如，有助于該多肽提純的氨基酸序列；或與本發(fā)明的別的結(jié)合結(jié)構(gòu)域重組連接在一起)。舉例來說，存在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的序列，其作為融合蛋白的一部分，與期望的蛋白一起表達(dá)，促成用于表達(dá)的原核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中包涵體的形成和/或利于提純包含這種序列的融合蛋白?？梢岳帽绢I(lǐng)域公知方法將包涵體與其它的原核生物的細(xì)胞組分分離，包括變性劑處理，分級(jí)處理(例如，離心，柱色譜法，等等)。在別的實(shí)施例中，有市場(chǎng)上可買到的載體，可以將感興趣的想要表達(dá)為蛋白質(zhì)或多肽的核酸序列插入其中，使得在表達(dá)中，該基因產(chǎn)物還包含多個(gè)末端組氨酸殘基("組氨酸標(biāo)記")，它有利于利用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方法提純?cè)摶虍a(chǎn)物。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，編碼一個(gè)包含用于本發(fā)明的多肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域(內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域、或表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域、或其組合)的核酸序列可以被插入一個(gè)核酸分子，并成為其一部分，這樣的核酸分子包括質(zhì)粒，或除了質(zhì)粒之外的載體；以及其它可以利用的表達(dá)系統(tǒng)，包括但不限于用噬菌體載體，或粘粒DNA轉(zhuǎn)化的細(xì)菌；包含酵母載體的酵母；包含真菌載體的真菌；感染病毒(如桿狀病毒)的昆蟲細(xì)胞系；以及(例如，通過轉(zhuǎn)染或電穿孔)引入質(zhì)?；虿《颈磉_(dá)載體，或以重組體病毒(例如牛痘病毒，腺病毒，腺病毒相關(guān)病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒等等)感染的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。多肽的成功表達(dá)要求包含多肽的編碼序列的重組體核酸分子，或者載體本身包含必要的轉(zhuǎn)錄和翻譯控制元件，該元件要適合于特定的用于表達(dá)的宿主系統(tǒng)，并被宿主系統(tǒng)所識(shí)別。利用本領(lǐng)域公知的分子生物學(xué)方法，包括如上所述的方法，各種啟動(dòng)子和增強(qiáng)子可以并入包含編碼序列的載體或重組核酸分子，以增強(qiáng)多肽的表達(dá)，只要多肽的增強(qiáng)表達(dá)適于特定的所使用的宿主細(xì)胞系統(tǒng)(舉例來說，對(duì)其無毒)。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，啟動(dòng)子的選擇取決于所使用的表達(dá)系統(tǒng)。啟動(dòng)子的強(qiáng)度，即促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的能力是不同的。一般來說，為了表達(dá)一個(gè)克隆基因，期望使用一個(gè)比較強(qiáng)的啟動(dòng)子，以獲得該基因的高水平轉(zhuǎn)錄和基因產(chǎn)物表達(dá)。舉例來說，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本領(lǐng)域公知的細(xì)菌，噬菌體，或質(zhì)粒啟動(dòng)子在包括E.coii的宿主細(xì)胞系統(tǒng)中產(chǎn)生高水平的轉(zhuǎn)錄，這些啟動(dòng)子包括乳糖啟動(dòng)子、色氨酸啟動(dòng)子、T7啟動(dòng)子、recA啟動(dòng)子、核蛋白體RNA啟動(dòng)子、P.sub.R和P.sub丄啟動(dòng)子、lacUV5、ompF、bla、Ipp等等，都可以用于編碼合成多肽的核苷酸序列的插入片段的轉(zhuǎn)錄。通常使用的用于哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)載體中的哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子來自哺乳動(dòng)物病毒基因。這樣的啟動(dòng)子的例子包括SV40早期啟動(dòng)子，鼠乳腺瘤病毒晚期啟動(dòng)子，腺病毒主要晚期啟動(dòng)子，單純皰疹病毒啟動(dòng)子，以及CMV啟動(dòng)子。如果多肽的表達(dá)對(duì)于宿主細(xì)胞是致死的或者有害的，可以對(duì)宿主細(xì)胞株/系以及表達(dá)載體進(jìn)行選擇，使得啟動(dòng)子的作用在進(jìn)行誘導(dǎo)前受到抑制。舉例來說，在特定的操縱子中添加對(duì)于插入DNA片段的有效轉(zhuǎn)錄所必需的特異誘導(dǎo)物(例如，乳糖操縱子是通過添加乳糖或異丙基-J3-D-半乳糖苷("IPTG")誘導(dǎo)的；色氨酸操縱子是由生長培養(yǎng)基缺乏色氨酸誘導(dǎo)的；四環(huán)素可以用于含有tet敏感啟動(dòng)子的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中)。因此，多肽的表達(dá)可以通過培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在一定條件下進(jìn)行控制，該條件使得啟動(dòng)子控制的編碼序列的表達(dá)不被誘導(dǎo)，當(dāng)細(xì)胞在生長培養(yǎng)基中達(dá)到適當(dāng)?shù)拿芏葧r(shí)，可以對(duì)啟動(dòng)子誘導(dǎo)，使得編碼序列進(jìn)行表達(dá)。其它的對(duì)于有效率基因轉(zhuǎn)錄或信息翻譯的控制元件對(duì)于本領(lǐng)域是公知的，包括增強(qiáng)子，轉(zhuǎn)錄或翻譯起始信號(hào)，轉(zhuǎn)錄終止序列以及多聚腺苷酸序列，等等。本發(fā)明前面所詳細(xì)描述的特定實(shí)施方案的目的在于說明。根據(jù)說明書和插圖，本領(lǐng)域的其它技術(shù)人員可以通過應(yīng)用現(xiàn)有知識(shí)，容易地對(duì)本發(fā)明的各種應(yīng)用在不脫離本發(fā)明基本概念的前提下進(jìn)行改動(dòng)和/或改編；因此，這種改動(dòng)和/或改編規(guī)定為在附加的權(quán)利要求的含義和范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種生物活性涂層組合物，包含至少一個(gè)特異地結(jié)合一種醫(yī)療器材的金屬表面材料的結(jié)合結(jié)構(gòu)域(“表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域”)，和至少一個(gè)特異地結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞譜系細(xì)胞的結(jié)合結(jié)構(gòu)域(“內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域”)；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含一種多肽，該多肽的氨基酸序列組成基本選自由SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，及其組合所構(gòu)成的組；其中該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含一種多肽，該多肽的氨基酸序列組成基本選自由SEQIDNO:9，SEQIDNO:10，SEQIDNO:11，SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:14，SEQIDNO:15，SEQIDNO:16，SEQIDNO:17，SEQIDNO:18，SEQIDNO:19，SEQIDNO:20，SEQIDNO:21，SEQIDNO:22，SEQIDNO:23，SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:28，SEQIDNO:29，SEQIDNO:30，SEQIDNO:31，SEQIDNO:32，SEQIDNO:33，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37，SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41，SEQIDNO:42，SEQIDNO:43，SEQIDNO:44，SEQIDNO:45，SEQIDNO:46，及其組合所構(gòu)成的組；并且該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域相連。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性涂層組合物，其中該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞結(jié)合。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性涂層組合物，其中該生物活性涂層組合物包含超過一種類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，并且其中每種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)τ趦?nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞具有一種結(jié)合特異性，其不同于存在于該生物活性涂層組合物中的別的類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性涂層組合物，其中對(duì)于該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合特異性的內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞選自由內(nèi)皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞祖細(xì)胞，及其組合所構(gòu)成的組。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性涂層組合物，其中該生物活性涂層組合物包含超過一種類型的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中每種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域能夠結(jié)合該醫(yī)療器材的不同表面材料。6、根據(jù)權(quán)利要求i所述的生物活性涂層組合物，其中對(duì)于至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合特異性的金屬表面材料，包括一種材料，該材料選自由金屬，金屬氧化物，金屬合金，及其組合所組成的組。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性涂層組合物，其中對(duì)于至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合特異性的金屬表面材料包括不銹鋼。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性涂層組合物，其中至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽的多聚體。9、根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物活性涂層組合物，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過接頭連接。10、一種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:9，SEQIDNO:10，SEQIDNO:11,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22，SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26，SEQIDNO:27,SEQIDNO:28，SEQIDNO:29，SEQIDNO:30，SEQIDNO:31,SEQIDNO:32，SEQIDNO:33，SEQIDNO:34，SEQIDNO:35，SEQIDNO:36,SEQIDNO:37，SEQIDNO:38,SEQIDNO:39,SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44，SEQIDNO:45，SEQIDNO:46,及其組合所組成的組。11、一種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，包括一個(gè)多肽，該多肽的氨基酸序列基本上選自由SEQIDNO:l,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，以及它們的組合所組成的組。12、根據(jù)權(quán)利要求11所述的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括該多肽的一個(gè)多聚體。13、一種在醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面覆膜的方法，該方法包括使醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面與一種生物活性涂層組合物接觸，使得在該至少一個(gè)表面上形成覆膜；其中該生物活性涂層組合物包括至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本上選自由SEQIDNO:l,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，及其組合所組成的組；其中的至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:9，SEQIDNO:IO,SEQIDNO:ll，SEQIDNO:12,SEQIDNO:13，SEQIDNO:14，SEQIDNO:15，SEQIDNO:16，SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:19，SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23，SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26，SEQIDNO:27,SEQIDNO:28，SEQIDNO:29,SEQIDNO:30，SEQIDNO:31，SEQIDNO:32，SEQIDNO:33，SEQIDNO:34,SEQIDNO:35,SEQIDNO:36,SEQIDNO:37，SEQIDNO:38,SEQIDNO:39,SEQIDNO:40,SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46及其組合所組成的組；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域與該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接；其中覆膜中的至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)τ趦?nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞附著在該至少一個(gè)金屬表面在數(shù)量上有效。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中的醫(yī)療器材包括一個(gè)血管裝置。15、根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中該血管裝置包括一個(gè)斯坦特固定模。16、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過一個(gè)接頭連接。17、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括該多肽的一個(gè)多聚體。18、一種促進(jìn)醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面內(nèi)皮化的方法，該方法包括使醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面與一種生物活性涂層組合物接觸，使得在該至少一個(gè)金屬表面上形成覆膜；其中該生物活性涂層組合物包括至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，它與至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域連接；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本上選自由SEQIDNO:l,SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6,SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，及其組合所組成的組；其中的至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:9，SEQIDNO:10,SEQIDNO:ll,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14，SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:19，SEQIDNO:20，SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26，SEQIDNO:27,SEQIDNO:28,SEQIDNO:29，SEQIDNO:30,SEQIDNO:31,SEQIDNO:32,SEQIDNO:33，SEQIDNO:34,SEQIDNO:35,SEQIDNO:36,SEQIDNO:37,SEQIDNO:38,SEQIDNO:39,SEQIDNO:40,SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46及其組合所組成的組；其中覆膜中的該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域在數(shù)量上對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞在該至少一個(gè)表面上是有效的；其中該至少一個(gè)表面與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸，使得內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞附著在覆膜上，促進(jìn)該至少一個(gè)表面的內(nèi)皮化。19、根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中該醫(yī)療器材包括一個(gè)血管裝置。20、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中該血管裝置包括一個(gè)斯坦特固定模。21、根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過一個(gè)接頭連接。22、根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括該多肽的一個(gè)多聚體。23、根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中該至少一個(gè)表面與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸的步驟發(fā)生在體內(nèi)，并且在將醫(yī)療器材移植到需要該醫(yī)療器材的個(gè)體體內(nèi)之后。24、一種制造醫(yī)療器材的方法，該方法包括使醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面與一種生物活性涂層組合物接觸，形成至少一個(gè)被覆膜的表面；以及使該至少一個(gè)被覆膜的表面與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸；其中該生物活性涂層組合物包括至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本上選自由SEQIDNO:l，SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5，SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:8，及其組合所組成的組；其中的至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:9,SEQIDNO:IO,SEQIDNO:ll，SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15，SEQIDNO:16,SEQIDNO:n，SEQIDNO:18，SEQIDNO:19,SEQIDNO:20，SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:28,SEQIDNO:29,SEQIDNO:30，SEQIDNO:31，SEQIDNO:32,SEQIDNO:33，SEQIDNO:34,SEQIDNO:35，SEQIDNO:36，SEQIDNO:37,SEQIDNO:38，SEQIDNO:39，SEQIDNO:40，SEQIDNO:41，SEQIDNO:42，SEQIDNO:43,SEQIDNO:44，SEQIDNO:45,SEQIDNO:46，及其組合所組成的組；并且其中至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域是連接在一起的。25、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中該醫(yī)療器材包括一個(gè)血管裝置。26、根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中該血管裝置包括一個(gè)斯坦特固定模。27、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過一個(gè)接頭連接。28、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括該多肽的一個(gè)多聚體。29、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中該生物活性涂層組合物包含超過一種類型的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中每種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域能夠結(jié)合該醫(yī)療器材的不同表面材料。30、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中該生物活性涂層組合物包含超過一種類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，并且其中每種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)τ趦?nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞具有一種結(jié)合特異性，其不同于存在于該生物活性涂層組合物中的別的類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。31、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，進(jìn)一步包括使該至少一個(gè)被覆膜的表面與一種血管生物制劑接觸的步驟。32、一種醫(yī)療器材，包括在該醫(yī)療器材的至少一個(gè)金屬表面，在該金屬表面涂有一種生物活性涂層組合物，其中該生物活性涂層組合物包括至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域；其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:l,SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4,SEQIDNO:5，SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:8，及其組合所組成的組；其中的至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:9,SEQIDNO:IO,SEQIDNO:11，SEQIDNO:12,SEQIDNO:13，SEQIDNO:14，SEQIDNO:15，SEQIDNO:16,SEQIDNO:17，SEQIDNO:18，SEQIDNO:19,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21,SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24，SEQIDNO:25，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27,SEQIDNO:28,SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:31，SEQIDNO:32,SEQIDNO:33,SEQIDNO:34，SEQIDNO:35,SEQIDNO:36，SEQIDNO:37,SEQIDNO:38，SEQIDNO:39,SEQIDNO:40，SEQIDNO:41,SEQIDNO:42,SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45，SEQIDNO:46，及其組合所組成的組；并且其中至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域是連接在一起的。33、根據(jù)權(quán)利要求32所述的醫(yī)療器材，其中該醫(yī)療器材包括一個(gè)血管裝置。34、根據(jù)權(quán)利要求33所述的醫(yī)療器材，其中該血管裝置包括一個(gè)斯坦特固定模。35、根據(jù)權(quán)利要求32所述的醫(yī)療器材，其中該至少一個(gè)表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域和該至少一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過一個(gè)接頭連接。36、根據(jù)權(quán)利要求32所述的醫(yī)療器材，其中該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括該多肽的一個(gè)多聚體。37、根據(jù)權(quán)利要求32所述的醫(yī)療器材，其中該生物活性涂層組合物包含超過一種類型的表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中每種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域能夠結(jié)合該醫(yī)療器材的不同表面材料。38、根據(jù)權(quán)利要求32所述的醫(yī)療器材，其中該生物活性涂層組合物包含超過一種類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域，并且其中每種內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域?qū)τ趦?nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞具有一種結(jié)合特異性，其不同于存在于該生物活性涂層組合物中的別的類型的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域。39、根據(jù)權(quán)利要求32所述的醫(yī)療器材，進(jìn)一步包括使該至少一個(gè)被覆膜的表面與一個(gè)血管生物制劑接觸的步驟。40、一種多核苷酸，包括編碼一種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的核酸分子，該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括-一個(gè)多肽，該多肽的氨基酸序列基本上選自由SEQIDNO:l,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7,SEQIDNO:8，及其組合所組成的組。41、一種重組載體，包括編碼一種表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域的核酸分子，該表面結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，該多肽的氨基酸序列基本上選自由SEQIDNO:l，SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5，SEQIDNO:6，SEQIDNO:7，SEQIDNO:8，及其組合所組成的組。42、一種多核苷酸，包括一種編碼內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的核酸分子，所述的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:9，SEQIDNO:10，SEQIDNO:11,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13，SEQIDNO:14,SEQIDNO:15，SEQIDNO:16,SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20，SEQIDNO:21，SEQIDNO:22,SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27，SEQIDNO:28,SEQIDNO:29,SEQIDNO:30，SEQIDNO:31,SEQIDNO:32,SEQIDNO:33,SEQIDNO:34,SEQIDNO:35,SEQIDNO:36,SEQIDNO:37，SEQIDNO:38,SEQIDNO:39,SEQIDNO:40,SEQIDNO:41，SEQIDNO:42,SEQIDNO:43，SEQIDNO:44，SEQIDNO:45，SEQIDNO:46及其組合所組成的組。43、一種重組體載體，包括一種編碼內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域的核酸分子，所述的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)多肽，其氨基酸序列基本選自由SEQIDNO:9,SEQIDNO:IO,SEQIDNO:ll,SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:14，SEQIDNO:15，SEQIDNO:16，SEQIDNO:17，SEQIDNO:18,SEQIDNO:19,SEQIDNO:20,SEQIDNO:21，SEQIDNO:22，SEQIDNO:23,SEQIDNO:24,SEQIDNO:25,SEQIDNO:26,SEQIDNO:27,SEQIDNO:28，SEQIDNO:29,SEQIDNO:30,SEQIDNO:31,SEQIDNO:32，SEQIDNO:33,SEQIDNO:34,SEQIDNO:35,SEQIDNO:36,SEQIDNO:37，SEQIDNO:38,SEQIDNO:39，SEQIDNO:40,SEQIDNO:41，SEQIDNO:42，SEQIDNO:43,SEQIDNO:44,SEQIDNO:45,SEQIDNO:46，及其組合所組成的組。全文摘要本發(fā)明提供用于改進(jìn)對(duì)醫(yī)療器材進(jìn)行覆膜的組合物和方法。本發(fā)明提供一種生物活性涂層組合物，其包括至少一個(gè)對(duì)于醫(yī)療器材的金屬表面材料具有結(jié)合特異性的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，和至少一個(gè)對(duì)于內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞具有結(jié)合特異性的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。對(duì)于醫(yī)療器材的金屬表面進(jìn)行覆膜，以及制造醫(yī)療器材的方法包括使要進(jìn)行覆膜的金屬表面與數(shù)量上有效的生物活性涂層材料接觸，形成一層覆膜，并且可以進(jìn)一步包括使覆膜表面與內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞接觸，使內(nèi)皮細(xì)胞譜系的細(xì)胞結(jié)合到覆膜表面。文檔編號(hào)A61L33/00GK101370444SQ200780002211公開日2009年2月18日申請(qǐng)日期2007年1月9日優(yōu)先權(quán)日2006年1月11日發(fā)明者丹尼爾·凱南,保羅·漢密爾頓,艾米·索蘭申請(qǐng)人:阿費(fèi)內(nèi)基有限公司