專利名稱：：使用酯化卵磷脂的納米脂質(zhì)體、其制備方法和含有其的用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種納米脂質(zhì)體，該納米脂質(zhì)體包含舍有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜和一種或多種包含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間中的生理學(xué)活性成分；及其制備方法；和含有該納米脂質(zhì)體的用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物。
背景技術(shù)：
：脂質(zhì)體是其中存在親水空間并具有封閉雙層脂質(zhì)膜的微內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。因此，脂質(zhì)體的特征在于在親水的內(nèi)部空間包含水溶性物質(zhì)，并且在外部雙層脂質(zhì)膜捕獲油溶性物質(zhì)。形成這類脂質(zhì)膜的物質(zhì)被稱為類脂。作為類脂，通常使用磷酸甘油酯類或鞘脂類。由于極佳的保濕特性和對(duì)人體無(wú)毒，卵磷脂或神經(jīng)酰胺在化妝品或食品領(lǐng)域使用最普遍。但是，這些卵磷脂和神經(jīng)酰胺是疏水的，并且難于在醇溶液和水溶液中分散。因此，為了作為類脂使用，它們需要加熱到70'C或更高溫度的高溫度而分散，然后向其中加入功能性物質(zhì)。因此，將在高溫度下氧化或熱不穩(wěn)定的功能性化合物(例如輔酶Q10和BGF)脂質(zhì)化時(shí)存在著一個(gè)大問(wèn)題。此外，由此所形成的脂質(zhì)體具有非常低的穩(wěn)定性和粒度不均勻的缺點(diǎn)。特別是將彼此具有極其不同極性的兩個(gè)功能性化合物(例如疏水性輔酶Q10和親水性EGF)共同脂質(zhì)化是困難的。最近，通過(guò)卵磷脂與磷酸或其它極性化合物反應(yīng)所獲得從而具有良好的水溶液可分散性的陰離子表面活性劑類型的磷脂基(phospholipidyl)類脂被廣泛應(yīng)用。但是，如果類脂過(guò)于親水，那么潤(rùn)濕性可能被增強(qiáng)，而進(jìn)入皮膚的滲透作用由于與皮膚表面的成分間極性的差異而明顯消失。此外，如果類脂是陰離子鹽的類型，那么它使化妝品的粘度降低，從而需要進(jìn)一步添加增稠劑。最初，輔酶Q10被稱作促進(jìn)人體細(xì)胞能量產(chǎn)生的輔酶，其具有針對(duì)活性氧的有效抗氧化能力。因此，它的吸入或在皮膚上施用能預(yù)防細(xì)胞的氧化，從而維持皮膚的彈性并有效預(yù)防衰老。特別地，這類輔酶Q10在人體以充足的量產(chǎn)生直到20歲，但是由于各種原因(例如飲食不均衡、應(yīng)激等)該量在20歲前后從峰值下降。在40歲前后，所述下降加速，因此需要對(duì)其加以補(bǔ)充。表皮生長(zhǎng)因子(EGF)是存在于母奶的初乳，并且在細(xì)胞再生和促進(jìn)傷口愈合方面具有極佳效力的一種蛋白，因此EGF作為用于治療糖尿病性足潰瘍的生物藥物使用。同樣地，EGF被認(rèn)為是具有使傷口自然愈合而沒(méi)有疤痕作用的一種成分，并且其具有皮膚再生作用。因此，EGF被廣泛作為功能性化妝品的原材料，以及作為用于使由糖尿病性足潰瘍、燒傷、刀傷等引起的傷口愈合的藥物使用。韓國(guó)專利特許公開(kāi)No.10-2005-0058635^公開(kāi)了具有抗炎和抗氧化活性的日本產(chǎn)山茶(Camelliajaponica)提取物。韓國(guó)專利特許公開(kāi)No.10-2006-0025423公開(kāi)了具有抗炎和抗氧化活性的槲寄生(ViscumalbumL.var.coloratum)的提取物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種納米脂質(zhì)體，該納米脂質(zhì)體包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜和一種或多種包含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間中的生理學(xué)活性成分。根據(jù)本發(fā)明，如果雙層脂膜通過(guò)使用在水或醇中良好分散并且具有親水性和疏水性的酯化卵磷脂形成，那么包含功能性物質(zhì)(例如輔酶Q10或表皮生長(zhǎng)因子)的納米脂質(zhì)體溶液可在低的溫度下制備，并且所制備的納米脂質(zhì)體具有長(zhǎng)期穩(wěn)定性和均勻性，因此可用作具有極佳的皮膚保濕和滲透特性的組合物(例如化妝品)的原材料或作為用于治療皮膚疾病的藥物，等等。本發(fā)明的另一個(gè)目的是通過(guò)使酯化卵磷脂和生理學(xué)活性成分的混合溶液以納米尺寸分散從而提供用于制備穩(wěn)定納米脂質(zhì)體的方法。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，如果表皮生長(zhǎng)因子作為納米脂質(zhì)體制備，并與具有抗炎活性的天然提取物共同配制，那么其穩(wěn)定性增加，并且EGF進(jìn)入皮膚的滲透性也得到加強(qiáng)，從而可以獲得具有對(duì)皮膚疾病極佳愈合作用的組合物。因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物，該組合物含有包含表皮生長(zhǎng)因子的納米脂質(zhì)體和一種或多種具有抗炎活性的天然提取物。圖1是表示根據(jù)本發(fā)明的通過(guò)使用酯化卵磷脂所制備的具有EGF/輔酶Q10的雙層膜的納米脂質(zhì)體溶液的UV/可見(jiàn)光吸光度(％)的圖。圖2是表示根據(jù)本發(fā)明的通過(guò)使用酯化卵磷脂所制備的具有EGF/輔酶Q1Q的雙層膜的納米脂質(zhì)體溶液的UV/可見(jiàn)光透光度(％)的圖。圖3是表示根據(jù)本發(fā)明的通過(guò)使用酯化卵磷脂所制備的具有EGF/輔酶Q1Q的雙層膜的納米脂質(zhì)體粒度分布的圖。圖4是顯示當(dāng)組合物被施用于由于放射治療而引起皮炎的口腔癌患者和喉癌患者時(shí)，含有納米脂質(zhì)體的本發(fā)明組合物的治療作用。發(fā)明詳述本發(fā)明的一方面提供了一種納米脂質(zhì)體，該納米脂質(zhì)體包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜，和一種或多種含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間中的生理學(xué)活性成分。本發(fā)明的另一方面提供了用于制備納米脂質(zhì)體的方法，該方法包括使卵磷脂與有機(jī)酸反應(yīng)制備酯化卵磷脂的第1步驟；使酯化卵磷脂和一種或多種生理學(xué)活性成分在溶劑中溶解的第2步驟；以及使所得的溶液分散以獲得納米尺寸的脂質(zhì)體的第3步驟。本發(fā)明的另一方面提供了用于治療或預(yù)防皮膚疾病的組合物，該組合物含有納米脂質(zhì)體以及一種或多種具有抗炎活性的天然提取物，所述納米脂質(zhì)體包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜，和含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間中的表皮生長(zhǎng)因子。本發(fā)明如下述進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。如在本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"包含，，指在脂質(zhì)體中心的親水空間中含有水溶性物質(zhì)(例如，表皮生長(zhǎng)因子、抗壞血酸等)，或通過(guò)脂質(zhì)體的雙層脂膜捕獲油溶性物質(zhì)(例如輔酶QIO、視黃醇、視黃醇棕櫚酸酯、抗壞血酸棕櫚酸酯等)。如在本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"納米脂質(zhì)體"指具有約100-200nm直徑的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體通常通過(guò)在約1000psi或更高的壓力條件下以納米尺寸分散而制備。在本發(fā)明中，脂質(zhì)體膜包含酯化卵磷脂。如果需要的話，所述脂質(zhì)體膜可包含通常在脂質(zhì)體制備中所使用的脂質(zhì)體膜成分(即類脂)。所述類脂包括磷酸甘油酯類或鞘脂類，例如磷脂酰膽堿(即卵磷脂)、氳化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、神經(jīng)酰胺、腦苷脂(即半乳糖苷神經(jīng)酰胺)、鞘磷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂等。作為酯化卵磷脂，類脂還產(chǎn)生保濕作用。在上述類脂中，優(yōu)選使用氫化卵磷脂和/或神經(jīng)酰胺。所述氫化卵磷脂指由飽和烴構(gòu)成的卵磷脂，該飽和烴通過(guò)卵磷脂中的所有不飽和烴的還原獲得。包含在脂質(zhì)體膜中的酯化卵磷脂在水或醇中分散良好，并具有親水性和疏水性。因此，酯化卵磷脂具有足夠的極性在水性溶劑中分散，但是不足以完全在水性溶劑中溶解。因此，當(dāng)脂質(zhì)體膜通過(guò)使用酯化卵磷脂形成時(shí)，即使在低溫(20'C-60°C)下也可以制備穩(wěn)定的脂質(zhì)體溶液。酯化卵磷脂可通過(guò)使卵磷脂或氫化卵磷脂與有機(jī)酸反應(yīng)制備。該酯化過(guò)程是一種縮合反應(yīng)，其中印磷脂的醇基團(tuán)與有機(jī)酸反應(yīng)，所得到的水分子從其中除去。如此制得的酯化卵磷脂與水在水性溶液中反應(yīng)，并且再解離成卵磷脂(醇基團(tuán))和有機(jī)酸形式中。因此，在這個(gè)反應(yīng)中，該酯化卵磷脂、卵磷脂(或氫化卵磷脂)和有機(jī)酸根據(jù)酸性以在酯化和解離之間維持適當(dāng)?shù)钠胶鉅顟B(tài)共存，該反應(yīng)如下RC00R，(酯化卵磷脂)^RC00H(有機(jī)酸)+R，OH(卵磷脂或氬化卵磷脂)在制備酯化卵磷脂中所使用的有機(jī)酸包括在化妝品和食品中通常所使用的有機(jī)酸，例如乙酸、蘋(píng)果酸、乳酸、乙醇酸、檸檬酸或草酸，優(yōu)選為無(wú)水有機(jī)酸，更優(yōu)選為無(wú)水蘋(píng)果酸或無(wú)水乙酸。如果使用無(wú)水乙酸，那么酯化卵磷脂顯示出相對(duì)于使用無(wú)水蘋(píng)果酸更高的親水性。因此，有機(jī)酸可依賴于所要添加的親水性或疏水性功能性物質(zhì)的相對(duì)量或功能性物質(zhì)的極性程度而適宜地選擇。這些有機(jī)酸如果施用到皮膚還顯示出去除角質(zhì)化物質(zhì)的作用或軟化皮膚的作用。酯化卵磷脂以足夠的量使用以形成脂質(zhì)體，雖沒(méi)有具體限制，但基于1重量份的生理學(xué)活性成分的重量，優(yōu)選為1-5重量份。包含在本發(fā)明脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間中的生理學(xué)活性成分可以是，但不限于水溶性藥物、油溶性藥物、熱不穩(wěn)定的功能性物質(zhì)等。優(yōu)選地，生理學(xué)活性成分是選自輔酶Q10和表皮生長(zhǎng)因子中的一種或多種。本發(fā)明的納米脂質(zhì)體還包括選自下述的一種或多種甘油三酯型有機(jī)化合物，優(yōu)選為辛酸/癸酸甘油三酯；陰離子表面活性劑，優(yōu)選為二乙胺鯨蠟基磷酸酯、抗壞血酸磷酸酯鈉、磷脂酰膽堿或三乙胺椰子?；劝彼徕c(triethylaminecoconylglutaminesodium);氳化飽和烴卵磷脂；軟化劑，優(yōu)選為丁基羥基曱苯、甜菜堿型兩親型表面活性劑優(yōu)選為例如月桂胺丙基甜菜堿、月桂基甜菜堿、月桂胺甜菜堿或椰油酰胺丙基甜菜堿；和螯合劑，優(yōu)選為乙二胺四乙酸的鈉鹽。本發(fā)明還涉及用于制備納米脂質(zhì)體的方法，該方法包括使卵磷脂與有機(jī)酸反應(yīng)制備酯化卵磷脂的第1步驟；使酯化卵磷脂和一種或多種生理學(xué)活性成分在溶劑中溶解的第2步驟；以及使所得的溶液分散以獲得納米尺寸的脂質(zhì)體的第3步驟。在第1步驟中，所述酯化卵磷脂通過(guò)卵磷脂與有機(jī)酸的縮合反應(yīng)制備。所述有機(jī)酸優(yōu)選選自乙酸、蘋(píng)果酸、乳酸、乙醇酸、檸檬酸和草酸以及其酸酐。在第2步驟中，所述生理學(xué)活性成分優(yōu)選但不限于水溶性藥物、油溶性藥物或熱不穩(wěn)定功能性物質(zhì)。更優(yōu)選地，所述生理學(xué)活性成分是選自輔酶Q10和表皮生長(zhǎng)因子中的一種或多種。此外，如果需要，作為生理學(xué)活性成分還可以使用抗氧化劑，例如輔酶QIO、視黃醇、視黃醛、視黃醇棕櫚酸酯、視黃酸、抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯或其鹽、或抗壞血酸棕櫚酸酯等。當(dāng)疏水性成分(例如輔酶Q10)和親水性成分(例如EGF)同時(shí)使用時(shí)，第2步驟優(yōu)選包括下述步驟通過(guò)在有機(jī)溶劑中溶解酯化卵磷脂和疏水性活性成分(例如輔酶Q10)制備油相溶液；通過(guò)在水性溶劑中溶解親水活性成分(例如EGF)制備水相溶液；以及將油相溶液和水相溶液混合。在上述制備油相溶液的步驟中，酯化卵磷脂和疏水性活性成分(例如輔酶Q10)溶解在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中。優(yōu)選地，還可以在有機(jī)溶劑中加入氫化飽和烴卵磷脂；甘油三酯型親水性有機(jī)化合物，例如辛酸/癸酸甘油三酯；陰離子表面活性劑，例如二乙胺鯨蠟磷酸酯、抗壞血酸磷酸酯鈉、磷脂酰膽堿或三乙胺椰子酰基谷氨酸鈉；或軟化劑，例如丁基羥基曱苯。在上述制備水相溶液的步驟中，通過(guò)在純凈水中溶解親水性活性成分(例如EGF)制備水相溶液。優(yōu)選地，還可以在水相溶液中加入陰離子表面活性劑，例如二乙胺鯨蠟磷酸酯、抗壞血酸磷酸酯鈉、磷脂酰膽堿或三乙胺椰子?；劝彼徕c；或螯合劑，例如乙二胺四乙酸的鈉鹽。酯化卵磷脂和生理學(xué)有效成分在溶劑中的溶解過(guò)程優(yōu)選在20°C-60。C的溫度下進(jìn)行。如果溫度低于2(TC，溶解可以進(jìn)行，但是溶解時(shí)間較長(zhǎng)，并且在溶解后存在穩(wěn)定性的問(wèn)題。在此，如果溫度高于60。C，那么輔酶Q10和/或EGF等作為生理學(xué)活性成分可能不穩(wěn)定。在如上述所制備的油相溶液和水相溶液混合后，該混合物通過(guò)使用高速攪拌器成為均勻的。同時(shí)，脂質(zhì)體在均勻的脂質(zhì)體溶液中顯示出微米數(shù)量級(jí)的粒度。在第3個(gè)步驟中，在1000psi或更高的壓力下通過(guò)使第2步驟的均勻混合的溶液通過(guò)微射流均質(zhì)機(jī)(microfluidizer)(M/F)—次或多次獲得納米脂質(zhì)體溶液，并且使其分散到納米尺寸的脂質(zhì)體。如果所述壓力低于1000psi,可能很難形成納米尺寸的脂質(zhì)體。優(yōu)選地，均勻混合的溶液通過(guò)微射流均質(zhì)機(jī)(M/F)兩次或多次。包含在如上述所制備的納米脂質(zhì)體溶液中的脂質(zhì)體在水性溶液中形成了水相/油相的雙脂質(zhì)體，因此還可以使存在于水相最內(nèi)部的功能性物質(zhì)(例如EGF和任選水溶性抗氧化劑)穩(wěn)定，并且能進(jìn)一步同時(shí)使親水性活性成分(例如EGF)和疏水性活性成分(例如輔酶Q10)穩(wěn)定。使用酯化卵磷脂的包含輔酶Q10和EGF的本發(fā)明納米脂質(zhì)體可在制備用于皮膚的組合物(例如化妝品)、用于治療皮膚疾病的藥物等中通過(guò)常規(guī)方法使用。在制備組合物中所使用的原材料的優(yōu)選的量在實(shí)施例中詳細(xì)描述。此外，上述的添加劑可^皮其它適合的添加劑替代，并且所述添加劑的量可根據(jù)功能性物質(zhì)的量進(jìn)行適當(dāng)?shù)卣{(diào)整以優(yōu)化制備條件。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物，該組合物含有納米脂質(zhì)體以及一種或多種具有抗炎活性的天然提取物，所述的納米脂質(zhì)體包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜和包含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間的表皮生長(zhǎng)因子。本發(fā)明組合物使用以包含在納米脂質(zhì)體中的形式存在的表皮生長(zhǎng)因子，通過(guò)該形式使藥物的藥學(xué)穩(wěn)定性和進(jìn)入皮膚的滲透性增強(qiáng)。此外，在制備脂質(zhì)體中所使用的酯化卵磷脂可提供有利于治療皮膚疾病的其它保濕作用。通常地，皮膚疾病由燒傷、刀傷等創(chuàng)傷或癌癥患者的放射治療引起。因此，對(duì)創(chuàng)傷區(qū)域提供的保濕作用的酯化卵磷脂對(duì)于治療皮膚疾病顯示出更好作用。此外，酯化卵磷脂提供了軟化皮膚和促進(jìn)皮膚滲透的作用，由此增強(qiáng)了表皮生長(zhǎng)因子和天然提取物進(jìn)入皮膚的滲透性。此外，由于本發(fā)明組合物含有通過(guò)在脂質(zhì)體膜中包含酯化卵磷脂所制備的納米脂質(zhì)體，因此可解決在高溫度(70X:或更高下)加熱和分10散活性成分、低穩(wěn)定性、均一性等常規(guī)問(wèn)題。在本發(fā)明組合物中，以足夠的量使用表皮生長(zhǎng)因子以治療皮膚疾病，并且用于治療的有效量可隨患者的病癥、年齡、性別、易感性等發(fā)生變化?；诩{米脂質(zhì)體的總重量，在本發(fā)明組合物中所述表皮生長(zhǎng)因子的量可為l-50wt%。在本發(fā)明組合物中，包含EGF的納米脂質(zhì)體還包含抗氧化劑。所述抗氧化劑可非限制性地包括輔酶QIO、視黃醇、視黃醛、視黃醇棕櫚酸酯、視黃酸、抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯或其鹽、或抗壞血酸棕櫚酸酯。所述輔酶Q10起到了促進(jìn)人體細(xì)胞能量產(chǎn)生的輔酶的作用，并且該輔酶Q1G具有針對(duì)活性氧的有效抗氧化能力，因此它的吸入或在皮膚上施用對(duì)于有效預(yù)防細(xì)胞氧化，從而有效保持皮膚彈性和抗衰老是眾所周知的?；诩{米脂質(zhì)體的總重量，在本發(fā)明組合物中所述抗氧化劑的量可為0.l-10wt%。具有抗炎活性的天然提取物包括來(lái)自天然產(chǎn)的提取物，已知該天然產(chǎn)物非限制性地含有抗炎成分。用于本發(fā)明組合物的具有抗炎活性的天然提取物包括一種或多種天然產(chǎn)物(例如山茶(Camelliajaponica)、槲寄生(ViscumalbumL，var.coloratum)、榆白皮(Ulmicortex)、百合(LiIliumb函niiF.E.)、半夏(PimelliaternataThunbBreit)、白茨(BletillastriataReichb.fil.)、芍藥(PaeonialactifloraPall)、乳香(Boswelliacarter"Birdw)、知母(Anemarrhenarhizome)、檢木皮(Araliacortex)、生地黃(Rehmaniaeradix)、山藥(DioscoreaeRadix)、山茱萸(CorniFructus)、茯茶(Hoelen)、牡丹皮(MoutanCortexRadicis)、五味子(SchizandraeFructus)、天冬(AsparagiTuber)、麥冬(LiriopsisTuber)、貝母(FritillariaeBulbus)、杏仁(ArmeniacaeSemen)、半夏(PinelliaeTuber)、桔梗(PlaticodiRadix)、黃茶(ScutellariaeRadix)、黃連(CoptidisRhizoma)等)的提取物。所述天然提取物可單獨(dú)使用或與兩種或多種提取物組合使用。優(yōu)選地，所述天然提取物是來(lái)自山茶和/或槲寄生，并且更優(yōu)選為如在韓國(guó)特許公開(kāi)No.10-2005-0058635所^Hf的山茶提取物或如在韓國(guó)特許公開(kāi)No.10-2006-0025423所公開(kāi)的槲寄生提取物。可以以不同量使用天然提取物，這取決于所使用的天然產(chǎn)物、提取方法等。通常，基于組合物的總重量，本發(fā)明的天然提取物的含量可以為0.01-10wt%。用于預(yù)防或治療皮膚疾病的本發(fā)明組合物可通過(guò)配制納米脂質(zhì)體和具有抗炎活性的天然提取物制備，該納米脂質(zhì)體如上所述制備以包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜，和包含在該脂質(zhì)體膜內(nèi)部空間的表皮生長(zhǎng)因子。所述配制可通過(guò)在如上述所獲得的納米脂質(zhì)體溶液中分散和/或溶解具有抗炎活性的天然提取物進(jìn)行。所述分散和/或溶解優(yōu)選地在室溫下進(jìn)行。任選地，本發(fā)明組合物還含有穩(wěn)定劑，例如氨基酸、亞硫酸氬鈉、焦亞石克酸鈉、亞石危酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、石克氫化鈉、甲醛次石克酸氫鈉、硫脲、丙酮亞石克酸氬鈉等；濕潤(rùn)劑例如神經(jīng)酰胺、丙二醇、藻酸銨、環(huán)聚二甲基硅氧烷、二甲基硅酮、聚葡萄糖、透明質(zhì)酸鈉、乳酸鈉、山梨糖醇、三乙酸甘油酯、三乙醇胺、木糖醇等；乳化劑，例如聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯等；或藥學(xué)上可接受的添加劑，例如苯甲酸鈉、尼泊金曱酯、尼泊金乙酯、尼泊金(異)丙酯、尼泊金(異)丁酯、山梨酸、山梨酸鉀、山梨酸鈉、脫氫醋酸、脫氫醋酸鈉、苯扎氯銨、節(jié)索氯銨、苯酚、甲酚、氯甲酚、苯甲醇等。本發(fā)明組合物還可配制為用于外部使用的藥物，例如軟膏劑、霜?jiǎng)?、洗劑等。此外，本發(fā)明組合物還可配制為不同形式的化妝品，例如皮膚洗劑、營(yíng)養(yǎng)洗劑、營(yíng)養(yǎng)霜?jiǎng)茨λ獎(jiǎng)?、營(yíng)養(yǎng)精華、包裝組、化妝基質(zhì)、粉底、體油、發(fā)油、香波、漂洗劑等。本發(fā)明將通過(guò)下述實(shí)施例進(jìn)行具體說(shuō)明。但是，應(yīng)當(dāng)理解的是下述實(shí)施例是用于說(shuō)明本發(fā)明，而不能以任何方式對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍進(jìn)行限制。實(shí)施例酯化卵磷脂的合成<實(shí)施例1>將31g氫化飽和烴卵磷脂加入到被加熱至70r的200g的四氬呔喃溶劑中并溶解。在完全溶解所述卵磷脂后，向該混合物中加入3g無(wú)水蘋(píng)果酸并溶解。在完全溶解無(wú)水蘋(píng)果酸后，向其中加入0.5g作為催化劑的三乙胺，并且該反應(yīng)在回流狀態(tài)下保持3小時(shí)以上。在完成所述反應(yīng)之后，在45。C的真空下干燥所得的混合物以獲得白色粉末形式的酯化卵磷脂。<實(shí)施例2>除了使用2.5g無(wú)水乙酸代替無(wú)水蘋(píng)果酸外，通過(guò)如實(shí)施例1的同樣方法合成酯化卵磷脂。制備納米脂質(zhì)體溶液<實(shí)施例3>1)制備油相溶液將15g酯化卵磷脂、15g氫化飽和烴卵磷脂、200g辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、10g二乙胺鯨蠟基磷酸酯和0.5g丁基羥基甲苯(BHT)加入到110g乙醇中，并且將該混合物加熱到約4(TC攪拌并溶解。然后，將所述溶解的混合物冷卻到室溫以獲得油相溶液。2)制備水相溶液在室溫?cái)嚢柘?，?.5gNa-EDTA、lg抗壞血酸磷酸酯鈉(NAP)和2gEGF溶解在650g水中以獲得水相溶液。3)油相溶液和水相溶液的混合將如上述所獲得的水相溶液加入到所制備的油相溶液中，并且使用均質(zhì)混合機(jī)將該混合物充分?jǐn)嚢?分鐘以上以獲得均勻混合物。4)制備納米脂質(zhì)體納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)使所獲得的均勻混合物在高于1000psi的壓力下通過(guò)微射流均質(zhì)機(jī)一次或多次以使脂質(zhì)體以納米尺寸分散而制備。該通過(guò)過(guò)程的溫度條件通過(guò)使用冷卻水冷卻到室溫下。<實(shí)施例3，>除了使用2.4gEGF外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例3同樣的方法制備。13<實(shí)施例4>除了使用30g酯化卵磷脂外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例3同樣的方法制備。<實(shí)施例5>除了使用10g月桂基甜菜堿(甜菜堿型兩親性表面活性劑)替代二乙胺鯨蠟基磷酸酯(陰離子表面活性劑)外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例3同樣的方法制備。<實(shí)施例6>除了使用50g月酯化卵磷脂以及不使用氫化飽和烴卵磷脂和二乙胺鯨蠟基磷酸酯外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例3同樣的方法制備。<實(shí)施例7〉1)制備油相溶液將15g酯化卵磷脂、15g氫化飽和烴卵磷脂、200g辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、10g二乙胺鯨蠟基磷酸酯、0.5g丁基羥基曱苯(BHT)和10g輔酶Q10加入到110g乙醇中，并且將該混合物加熱到約40。C攪拌并溶解。然后，將所述溶解的混合物冷卻至室溫以獲得油相溶液。2)制備納米脂質(zhì)體根據(jù)如實(shí)施例3同樣的方法，制備水相溶液，將如此制得的水相溶液與如上述所制得的油相溶液混合，并且該混合物以納米尺寸分散從而制備納米脂質(zhì)體溶液。<實(shí)施例8>除了使用30g酯化卵磷脂以及不使用氫化飽和烴印磷脂外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例7同樣的方法制備。<實(shí)施例9>除了使用10g月桂基甜菜堿(甜菜堿型兩親性表面活性劑)替代二乙胺鯨蠟基磷酸酯外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例7同樣的方法制備。<實(shí)施例10〉除了使用50g月酯化卵磷脂以及不使用氫化飽和烴卵磷脂和二乙胺鯨蠟基磷酸酯外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例7同樣的方法制備。<實(shí)施例11>1)15g酯化卵磷脂、15g氫化飽和烴卵磷脂、200g辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、0.5g丁基羥基曱苯(BHT)和10g輔酶Q10加入到110g乙醇中，并且將該混合物加熱到約50。C攪拌并溶解。然后，將所述溶解的混合物冷卻至室溫。2)將2，化EGF溶解在10g蒸餾水中。將如此得到的溶液加入到如上述步驟l)中所制備的溶液中。3)在上述步驟2)中所制備的混合溶液使用均質(zhì)混合機(jī)充分?jǐn)嚢鐸O分鐘以上。4)在上述步驟3)中所制備的溶液在高于1000psi的壓力下通過(guò)微射流均質(zhì)機(jī)。5)將在上述步驟4)中所制備的溶液加入到使用均質(zhì)混合機(jī)攪拌的650g的水中，該水含有O.5gNa-EDTA和lg抗壞血酸磷酸酯鈉。6)加入后，該混合物充分?jǐn)嚢鐸O分鐘以上。7)在上述步驟6)中所制備的溶液通過(guò)微射流均質(zhì)機(jī)一次或多次以獲得雙層納米脂質(zhì)體溶液。<實(shí)施例12>除了使用35g酯化卵磷脂以及不使用氫化飽和烴卵磷脂外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例11同樣的方法制備。<實(shí)施例13>除了使用50g酯化卵磷脂以及不使用氫化飽和烴卵磷脂外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例11同樣的方法制備。<實(shí)施例14>1)將lg二乙胺鯨蠟基磷酸酯、MOg辛酸/癸酸甘油三酯(MCT)、10g酯化卵磷脂、0.5g丁基羥基甲苯和10g輔酶Q10加入到110g乙醇中，并且將該混合物劇烈攪拌并在室溫下溶解以獲得油相溶液。2)將2.3gEGF溶解在10g蒸餾水中。將如此得到的溶液加入到如上迷步驟l)中所制備的溶液中。153)在上述步驟2)中所制備的混合溶液使用均質(zhì)混合機(jī)充分?jǐn)嚢鐸O分鐘以上。4)在上述步驟3)中所制備的溶液在高于1000psi的壓力下通過(guò)」微射流均質(zhì)機(jī)。5)將在上述步驟4)中所制備的溶液加入到使用均質(zhì)混合機(jī)攪拌的6S0g的水中，該水含有O.5gNa-EDTA和lg抗壞血酸磷酸酯鈉。6)加入后，該混合物充分?jǐn)嚢鐸O分鐘以上。7)在上述步驟6)中所制備的溶液通過(guò)微射流均質(zhì)機(jī)一次或多次以獲得雙層納米脂質(zhì)體溶液。<實(shí)施例'15>除了使用lg抗壞血酸磷酸酯鈉替代二乙胺鯨蠟基磷酸酯外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例14同樣的方法制備。<實(shí)施例16>除了使用lg三乙胺椰子?；劝彼徕c(MIAMICT130,陰離子表面活性劑)替代二乙胺鯨蠟基磷酸酯外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例14同樣的方法制備。<實(shí)施例17>除了使用lg月桂胺丙基甜菜堿(甜菜堿型兩親性表面活性劑)替代二乙胺鯨蠟基磷酸酯外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例14同樣的方法制備。<比較實(shí)施例>除了使用30g氫化飽和烴卵磷脂而不使用酯化卵磷脂外，納米脂質(zhì)體溶液通過(guò)如實(shí)施例7同樣的方法制備。制備用于外部使用的制劑<實(shí)施例18>將在實(shí)施例3中所制備的5ml納米脂質(zhì)體溶液加入到95g營(yíng)養(yǎng)洗劑的基質(zhì)中，該基質(zhì)含有根據(jù)韓國(guó)特許公開(kāi)No.10-2005-0058635的實(shí)施例2制備的山茶提取物。然后，將所述混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘以獲得用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物。<實(shí)施例19>將在實(shí)施例3中所制備的5ml納米脂質(zhì)體溶液加入到95g營(yíng)養(yǎng)洗劑的基質(zhì)中，該基質(zhì)含有根據(jù)韓國(guó)特許公開(kāi)No.10-2006-0025423的制劑實(shí)施例1制備的槲寄生提取物。然后，將所述混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘以獲得用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物。測(cè)定實(shí)施例1<穩(wěn)定性測(cè)定>對(duì)于上述實(shí)施例8(僅使用酯化印磷脂)、實(shí)施例7(使用酯化卵磷脂和氫化飽和烴卵磷脂)和比較實(shí)施例(僅使用氫化飽和烴卵磷脂)中所制備的納米脂質(zhì)體溶液，比較由于長(zhǎng)期在室溫儲(chǔ)存所引起的平均粒度和膠凝化。在下列表l中顯示了結(jié)果。此外，進(jìn)行了觀察以確定是否出現(xiàn)奧斯特瓦爾德熟化(即一種由于溶液中粒子間粒度的差異通過(guò)在較大粒子上沉積物質(zhì)而使粒子生長(zhǎng)的機(jī)制)[Ostwald，ZPhys.Chem.(34)，1900,495-5031〗。如果脂質(zhì)體溶液長(zhǎng)期儲(chǔ)存，一般會(huì)由于聚沉引起膠凝化出現(xiàn)。因此，形成膠凝化的時(shí)間可通過(guò)下述時(shí)間確定，即盡管對(duì)膠凝化溶液進(jìn)行再攪拌但其沒(méi)有再分散或再溶解的時(shí)間。表1.穩(wěn)定性測(cè)定的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>*測(cè)定溫度室溫(平均20°C)〈納米脂質(zhì)體溶液在UV/可見(jiàn)光區(qū)域的吸光度和透光度〉測(cè)定了在上述實(shí)施例8中根據(jù)本發(fā)明僅使用酯化卵磷脂所制備的納米脂質(zhì)體溶液在UV/可見(jiàn)光區(qū)域的吸光度和透光度，該溶液具有EGF(水相)/輔酶Q10(油相)的雙層膜。在表1和2中顯示了結(jié)果。如在圖1和2中所示，可見(jiàn)光在400nm至700nm的區(qū)域基本上沒(méi)有散射和吸收，這說(shuō)明所制備的納米脂質(zhì)體溶液非常澄清，并且該脂質(zhì)體的粒度均勻。<粒度分布的檢測(cè)>檢測(cè)了在上述實(shí)施例8中所制備的具有雙層膜的納米脂質(zhì)體溶液的粒度分布。結(jié)果在表3中顯示。如在表3中所示，所述納米脂質(zhì)體在較窄范圍分布，這說(shuō)明所制備的納米脂質(zhì)體溶液非常澄清，并且該脂質(zhì)體的粒度均勻。測(cè)定實(shí)施例2為了比較EGF在其被納米脂質(zhì)化以及納米脂質(zhì)體在化妝品中分散時(shí)的穩(wěn)定性，將10mMEGF磷酸鹽緩沖液(pH7.4)、實(shí)施例3的EGF納米脂質(zhì)體溶液以及實(shí)施例18的EGF納米脂質(zhì)體分散體組合物在40。C和75%RH的嚴(yán)格的條件下儲(chǔ)存三個(gè)月，并比較其相對(duì)穩(wěn)定性。使用ELISA方法分析殘余量。結(jié)果在下列表2中顯示。如表2所示，相對(duì)于緩沖液，包含在納米脂質(zhì)體中的EGF的穩(wěn)定性顯著增加，并且配制在組合物中的EGF的穩(wěn)定性進(jìn)一步增加，表2.穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果-EGF在10mMEGF磷酸鹽緩沖液(pH7.4)、EGF納米脂質(zhì)體以及EGF納米脂質(zhì)體分散體組合物中的穩(wěn)定性的比較(n=3)時(shí)間EGF含量(％)磷酸鹽緩沖液(pH7.4)EGF納米脂質(zhì)體溶液含EGF納米脂質(zhì)體的組合物2周72,23±2.395.42±3.096.51±1.04周55.82±5.588.57±2.889.95±7.28周31.67±4.767.04±4.175.36±2.212周23.39±1.251.08±4.264.18±1.6測(cè)定實(shí)施例3對(duì)一名經(jīng)歷33次放射治療(59.4Gy)并在放射治療后而患有嚴(yán)重的皮膚炎癥(圖4的左欄)的口腔癌患者施用在實(shí)施例18中所制備的組合物，即每天徹底覆蓋患處2次施用約1.5個(gè)月(2006.2.28~2006.4.17)。在施用所述組合物期間，每天觀察患處。在施用518天后，患處的炎癥明顯緩解。在10天后，患處的顏色發(fā)生變化，并且在約1個(gè)月后患處恢復(fù)到幾乎正常皮膚(圖4)。對(duì)兩名患有嚴(yán)重皮膚炎癥的喉癌患者施用在實(shí)施例18中所制備的組合物，即每天徹底覆蓋患處2次施用約1個(gè)月(2006.3.29~2006.4.17)和每天徹底覆蓋患處2次施用約1周(2006.4.11~2006.4.18)。在施用期間，每天觀察患處。在分別施用約l個(gè)月和約l周后患處恢復(fù)到幾乎正常皮膚(圖4)。工業(yè)應(yīng)用根據(jù)本發(fā)明的納米脂質(zhì)體形成了舍有酯化卵磷脂脂質(zhì)體膜，因此可使熱不穩(wěn)定的功能性物質(zhì)在低溫脂質(zhì)化，并且同時(shí)捕獲親水性物質(zhì)和疏水性物質(zhì)。此外，由于用于清除角質(zhì)化物質(zhì)的無(wú)水有機(jī)酸被用作官能團(tuán)，因此其有利地表現(xiàn)出不同功能作用，例如清除角質(zhì)化物質(zhì)或軟化皮膚。此外，用于預(yù)防或治療皮膚疾病的本發(fā)明組合物含有包含在納米脂質(zhì)體中的表皮生長(zhǎng)因子，由此顯示出極佳的促進(jìn)皮膚滲透作用和良好的藥物穩(wěn)定性。此外，在制備脂質(zhì)體中所使用的酯化卵磷脂能提供其它有利治療皮膚疾病的保濕作用。通常，皮膚疾病由燒傷、刀傷等帶來(lái)的傷口或癌癥患者的放射治療引起。因此，對(duì)傷口區(qū)域提供保濕作用的酯化卵磷脂能表現(xiàn)出對(duì)皮膚疾病治療的良好作用。此外，酯化卵磷脂提供了軟化皮膚和促進(jìn)皮膚滲透的作用，由此增加了表皮生長(zhǎng)因子和天然提取物進(jìn)入皮膚的滲透性。此外，由于本發(fā)明組合物含有通過(guò)在脂質(zhì)體膜含有酯化卵磷脂所制備的納米脂質(zhì)體，因此解決了在較高的溫度(70°C或更高)加熱和分散活性成分、低穩(wěn)定性和均勻性等常見(jiàn)問(wèn)題。權(quán)利要求1.納米脂質(zhì)體，其包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜和一種或多種包含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間的生理學(xué)活性成分。2.根據(jù)權(quán)利要求1的納米脂質(zhì)體，其中所述生理學(xué)活性成分是選自輔酶Q10和表皮生長(zhǎng)因子中的一種或多種。3.根據(jù)權(quán)利要求1的納米脂質(zhì)體，其中所述酯化卵磷脂是卵磷脂與有機(jī)酸的反應(yīng)產(chǎn)物。4.根據(jù)權(quán)利要求3的納米脂質(zhì)體，其中所述有機(jī)酸選自無(wú)水乙酸、無(wú)水蘋(píng)果酸、無(wú)水乳酸、無(wú)水乙醇酸、無(wú)水檸檬酸和無(wú)水草酸。5.根據(jù)權(quán)利要求1的納米脂質(zhì)體，還包括選自下述的一種或多種氬化飽和烴卵磷脂、陰離子表面活性劑、甘油三酯型有機(jī)化合物、軟化劑、螯合劑和甜菜堿型兩親型表面活性劑。6.制備納米脂質(zhì)體的方法，包括通過(guò)卵磷脂與有機(jī)酸反應(yīng)制備酯化卵磷脂的第1步驟；使該酯化卵磷脂和一種或多種生理學(xué)活性成分在溶劑中溶解的第2步驟；以及使所得的溶液分散以獲得納米尺寸的脂質(zhì)體的第3步驟。7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述生理學(xué)活性成分是選自輔酶Q10和表皮生長(zhǎng)因子中的一種或多種。8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述第2步驟包括下述步驟通過(guò)在有機(jī)溶劑中溶解酯化卵磷脂和輔酶Q10制備油相溶液；通過(guò)在水性溶劑中溶解表皮生長(zhǎng)因子制備水相溶液；以及將油相溶液和水相溶液混合。9.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述第2步驟是在20X:-60。C的溫度下進(jìn)行的。10.用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物，該組合物含有納米脂質(zhì)體和一種或多種具有抗炎活性的天然提取物，所述納米脂質(zhì)體包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜和包含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間中的表皮生長(zhǎng)因子。11.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其中所述納米脂質(zhì)體還包含一種或多種選自下迷的抗氧化劑輔酶QIO、視黃醇、視黃醛、視黃醇棕櫚酸酯、視黃酸、抗壞血酸、抗壞血酸磷酸酯或其鹽、和抗壞血酸棕櫚酸酯。12.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其中所述天然提取物是一種或多種選自下述天然產(chǎn)物的提取物山茶(Camelliajaponica)、槲寄生(ViscumalbumL.var.coloratum)、榆白皮(Ulmicortex)、百合(LilliumbrowniiF.E.)、半夏(PimelliaternataThunbBreit)、白茨(BletillastriataReichb.fil.)、芍藥(PaeonialactifloraPall)、乳香(BoswelliacarteriiBirdw)、知母(Anemarrhenarhizome)、橡木皮(AraliacortexAraliacortex)、生地黃(Rehmaniaeradix)、山藥(DioscoreaeRadix)、山茱萸(CorniFructus)、茯茶(Hoelen)、牡丹皮(MoutanCortexRadicis)、五味子(SchizandraeFructus)、天冬(AsparagiTuber)、麥冬(LiriopsisTuber)、貝母(Friti1lariaeBulbus)、杏仁(ArmeniacaeSemen)、半夏(PinelliaeTuber)、桔梗(PlaticodiRadix)、黃茶(ScutellariaeRadix)和黃連(CoptidisRhizoma)。13.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其中所述天然提取物是山茶(Camelliajaponica)或槲寄生(ViscumalbumL.var.coloratum)的提取物。14.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其中所述脂質(zhì)體膜除了包括酯化卵磷脂以外，還包括氫化卵磷脂、神經(jīng)酰胺或其混合物。15.根據(jù)權(quán)利要求10-14中任一項(xiàng)的組合物，其中所述酯化卵磷脂是卵磷脂與有機(jī)酸的反應(yīng)產(chǎn)物。16.根據(jù)權(quán)利要求15的組合物，其中所述有機(jī)酸是乙酸、蘋(píng)果酸、乳酸、乙醇酸、檸檬酸、草酸或其酸酐。17.根據(jù)權(quán)利要求10-14中任一項(xiàng)的組合物，其中所述納米脂質(zhì)體還包括選自下述的一種或多種陰離子表面活性劑、甘油三酯型有機(jī)化合物、軟化劑、螯合劑和兩親型表面活性劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種納米脂質(zhì)體，該納米脂質(zhì)體包含含有酯化卵磷脂的脂質(zhì)體膜和一種或多種包含在該脂質(zhì)體膜的內(nèi)部空間中的生理學(xué)活性成分；及其制備方法；和其用于預(yù)防或治療皮膚疾病的組合物。根據(jù)本發(fā)明的納米脂質(zhì)體具有長(zhǎng)期穩(wěn)定性和均勻性，因此該納米脂質(zhì)體可用于制備具有極佳皮膚保濕和滲透特性的組合物或用于治療皮膚疾病等的藥物。特別地，用于預(yù)防或治療皮膚疾病的本發(fā)明組合物含有包含于納米脂質(zhì)體中的表皮生長(zhǎng)因子，由此該組合物顯示出極佳促進(jìn)皮膚滲透作用和良好的藥物穩(wěn)定性。此外，在制備脂質(zhì)體中所使用酯化卵磷脂可提供軟化皮膚和促進(jìn)皮膚滲透作用，由此增強(qiáng)了表皮生長(zhǎng)因子和天然提取物進(jìn)入皮膚的滲透性，以及在治療皮膚疾病中有利的其它保濕作用。另外，由于本發(fā)明組合物含有通過(guò)在脂質(zhì)體膜中包含酯化卵磷酯所制備的納米脂質(zhì)體，因此解決了在高溫(70℃或更高)加熱和分散活性成分、低穩(wěn)定性和均勻性等常見(jiàn)問(wèn)題。文檔編號(hào)A61K9/127GK101511340SQ200780032707公開(kāi)日2009年8月19日申請(qǐng)日期2007年8月1日優(yōu)先權(quán)日2006年8月2日發(fā)明者尹彩夏,樸勝國(guó),李相吉,李相旭,洪晙杓,申敬善,金原徹申請(qǐng)人:株式會(huì)社大熊