專利名稱：：針對(duì)lct中毒的藥物的制作方法針對(duì)LCT中毒的藥物本發(fā)明涉及用于預(yù)防或減輕大梭菌細(xì)胞毒素(LCTs)，特別是艱難梭菌毒素A和B(TcdA和TcdB)、索氏梭菌致命毒素(TcsL)及諾維氏梭菌a毒素(Tcna)中毒的藥物。艱難梭菌(Clostridiumdifficile)是嚴(yán)格厭氧生長(zhǎng)、產(chǎn)生孢子的革蘭氏陽(yáng)性菌，于70年代末才被鑒定為與抗生素相關(guān)的腹瀉和假膜性結(jié)腸炎的病原體。從90年代起艱難梭菌被認(rèn)為是發(fā)展中國(guó)家最重要的醫(yī)院病菌。作為愈加廣泛地使用廣謙抗生素的后果，尤其是對(duì)于住院治療的患者，艱難梭菌感染的發(fā)病率進(jìn)一步持續(xù)上升。與艱難梭菌相關(guān)的疾病是由艱難梭菌所產(chǎn)生的外毒素毒素A(TcdA)和B(TcdB)引起的。存在顯示不同毒性和毒素產(chǎn)生的不同菌抹。大約所有菌林的四分之一不產(chǎn)生毒素。產(chǎn)生毒素的菌株幾乎總是產(chǎn)生這兩種毒素。TcdA是腸毒素，其通過(guò)對(duì)腸細(xì)胞的細(xì)胞毒性損害提高小腸粘膜上皮的滲透性并由此引起腹瀉。TcdB是細(xì)胞毒素，其干擾電解質(zhì)輸送并引起小腸脫水及功能紊亂。TcdA和TcdB屬于所謂的大梭菌細(xì)胞毒素(LCTs)，分別由具有3個(gè)功能結(jié)構(gòu)域的肽鏈組成，即負(fù)責(zé)毒素與宿主細(xì)胞膜綴合的C端結(jié)構(gòu)域，負(fù)責(zé)穿越細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)的疏水的中間結(jié)構(gòu)域，和具有糖基轉(zhuǎn)移酶功能和介導(dǎo)分子毒性活性的N端結(jié)構(gòu)域。盡管毒素被攝入宿主細(xì)胞的過(guò)程還未完全弄清，但被認(rèn)作事實(shí)的是，毒素在與宿主細(xì)胞受體綴合后通過(guò)胞吞作用進(jìn)入宿主細(xì)胞，N端催化結(jié)構(gòu)域被切離且被轉(zhuǎn)運(yùn)至宿主細(xì)胞胞漿內(nèi)以發(fā)揮其毒性。在胞漿內(nèi)催化結(jié)構(gòu)域?qū)ho-亞族(Rho,Rac和Cdc42)的GTP酶特異地糖基化(所述Rho-亞族本身參與大量信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián))，并以這種方式阻斷相關(guān)的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程，從而最終導(dǎo)致細(xì)胞骨架的解聚和細(xì)胞死亡。迄今為止，現(xiàn)有技術(shù)的出發(fā)點(diǎn)在于，TcdA和TcdB和其它"大梭5菌細(xì)胞毒素"LCT的毒素肽鏈上的N-端催化結(jié)構(gòu)域的切離，被一種細(xì)胞蛋白酶催化(Rupnik等人，2005和Pfeiffer等人，2003)。但是卻不能提供相應(yīng)的證據(jù)。然而在本發(fā)明以之為根據(jù)的研究過(guò)程中，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，TcdA和TcdB的裂解是自催化的過(guò)程，該過(guò)程由磷酸肌醇(IP)啟動(dòng)，因此艱難梭菌毒素除了它的糖基轉(zhuǎn)移酶的催化功能之外，還具有用于自我裂解和自催化性裂解的蛋白酶功能。該蛋白酶功能被鑒定為天門(mén)冬氨酸蛋白酶。鑒定為蛋白酶催化中心的蛋白區(qū)域是，涉及根據(jù)序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的TcdB的氨基酸位置從AS1653至AS1678的氨基酸序列。表征天門(mén)冬氨酸蛋白酶的DXG基序(Rao等人)處于氨基酸位置1665。鑒定為磷酸肌醇結(jié)合位點(diǎn)的蛋白區(qū)域是，涉及根據(jù)序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的TcdB蛋白的氨基酸位置從AS1517至AS2142的氨基酸序列。該氨基酸序列展現(xiàn)肌苷-5-單磷酸-脫氫酶(IMPDH)基序，該基序由兩個(gè)區(qū)域構(gòu)成，即AS1517-AS1593和AS1918-AS2142，它們通過(guò)325個(gè)氨基酸長(zhǎng)的無(wú)序列同源性的蛋白質(zhì)片段分隔開(kāi)。為了治療艱難梭菌感染的患者，首先要盡可能停用所述引發(fā)性抗生素。進(jìn)一步的治療僅僅針對(duì)癥狀進(jìn)行。在較長(zhǎng)持續(xù)的或者嚴(yán)重的病程情形下，以及如果出于其它原因不可能停用所述引發(fā)性抗生素，則施用甲硝唑或者萬(wàn)古霉素用于治療。常用的抗生素治療的缺點(diǎn)是多方面的。在此尤其重要的是，因?yàn)橛每股刂委熈硪环N感染狀況而引起的疾病，無(wú)法用抗生素治療有效治愈。其背景是以下事實(shí)，艱難梭菌在健康人的腸腔內(nèi)只相對(duì)很少地出現(xiàn)，并且相對(duì)于正常的腸菌叢不能夠發(fā)展。如果正常的腸菌叢經(jīng)抗生素治療而破壞，艱難梭菌能得以發(fā)展并有效地安頓于小腸。針對(duì)抗艱難梭菌的抗生素治療再度導(dǎo)致腸菌叢的破壞并由此在因果上還阻止健康腸菌叢的產(chǎn)生。這也解釋了抗生素治療結(jié)束后所觀察到的緩解(Remissionen)的高數(shù)目。常用的抗生素治療的額外缺點(diǎn)是，近期多重抗藥性的艱難梭菌屬種越來(lái)越多地出現(xiàn)。從而威脅到，使目前用于艱難梭菌誘發(fā)的疾病的唯一療法失效，并且因艱難梭菌疾病而死亡的數(shù)目上升。另外，用于治療艱難梭菌感染所必須的抗生素是非常昂貴的，且通常只有在有理由的情況下作為保留抗生素使用。因而存在對(duì)藥物的迫切需求，該藥物適用于特定地防治(預(yù)防、清除、緩解)艱難梭菌感染，而不存在梭菌或其它細(xì)菌發(fā)展耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)，并且不會(huì)損害相關(guān)患者的自然菌叢-特別是腸菌群。本發(fā)明的任務(wù)是提供這樣的藥物。所述任務(wù)的解決方案在于提供文端所提及的類(lèi)型的藥物，其特征在于，包含至少一種效應(yīng)劑作為活性物質(zhì)，所述效應(yīng)劑為L(zhǎng)CTs(大梭菌細(xì)胞毒素)自催化性蛋白酶活性抑制劑或激活劑，所述LCTs特別是艱難梭菌毒素A(TcdA)和/或艱難梭菌毒素B(TcdB)，和/或索氏梭菌致死毒素(TcsL)和/或諾氏梭菌oc毒素(Tenoc)。下文中，作為L(zhǎng)CTs自催化性蛋白酶活性的效應(yīng)劑，描述的既是LCTs自催化性蛋白酶的激活劑，又是LCTs自催化性蛋白酶的抑制劑。如果所述活性物質(zhì)或效應(yīng)劑是抑制劑，則其抗毒性作用基于抑制完整毒素(特別是TcdB或TcdA或TcsL或Tcnot)的蛋白酶活性，并由此阻止細(xì)胞毒素的具有糖基轉(zhuǎn)移酶功能的有效片段(在TcdB和TcdA的情形下是63kDa片段)的切除。適合的抑制劑是抑制毒素的蛋白酶活性的化學(xué)物質(zhì)。在上下文的闡述中，術(shù)語(yǔ)"化學(xué)物質(zhì)，，既表示無(wú)機(jī)化合物也表示有機(jī)化合物、離子和肽或蛋白。優(yōu)選的抑制劑是那些不可逆地抑制蛋白酶活性的化學(xué)物質(zhì)。對(duì)此的實(shí)例是物質(zhì)EPNP(1，2-環(huán)氧基-3-(對(duì)-硝基苯氧基)-丙烷)。該物質(zhì)在蛋白酶催化中心與天冬氨酸殘基不可逆反應(yīng)并抑制所述蛋白水解作用。其它蛋白酶抑制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的或可以由他們用已知的方法輕易鑒定的(計(jì)算機(jī)模擬、高通量篩選)。例如可以合成肽以實(shí)施高通量篩選，該肽的氨基酸序列對(duì)應(yīng)于LCTs的蛋白酶裂解位點(diǎn)的序列。通過(guò)這些肽鏈，例如運(yùn)用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法與染料AMC(7-氨基，4-甲基-香豆素)的偶合可以產(chǎn)生探針。為實(shí)施"高通量篩選"將已標(biāo)記的探針與毒素和候選物質(zhì)放置一起。如果探針被裂解，則產(chǎn)生熒光光譜的變化。本領(lǐng)域技術(shù)人員用通常的方法輕易捕獲該變化。試劑(Ansatze),其中觀察到焚光光鐠沒(méi)有變化的即包含潛在的蛋白酶抑制劑。還示例性地描述了另一種方法用于鑒定影響LCTs自催化性蛋白酶活性的活性的物質(zhì)。對(duì)此可以使用例如與染料連接的全毒素或者合適的毒素片段，所述染料的熒光在未裂解的毒素或者毒素片段中是淬滅的。通過(guò)毒素或毒素片段的自催化性裂解取消了淬滅性效應(yīng)。該熒光光鐠的變化，如所述，易于捕獲。特別合適的抑制劑，即具有抑制作用的效應(yīng)劑是化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白質(zhì)且其中尤其是抗體，通過(guò)與所述蛋白酶活性中心相互反應(yīng)抑制LCTs的自催化性蛋白酶活性。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"相互反應(yīng)"意指在LCT與化學(xué)物質(zhì)(特別是蛋白質(zhì))之間的任何類(lèi)型的相互作用，并特別是包括共價(jià)鍵如雙硫鍵和非共價(jià)鍵如范德華力、疏水或靜電的相互作用以及氫橋鍵。在此優(yōu)選蛋白質(zhì)且其中尤其是抗體，其與分別根據(jù)TcdB-氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)從AS1500至AS1800，優(yōu)選AS1653至AS1678的TcdB-蛋白質(zhì)區(qū)域，和尤其與1665位置處的DXG基序，或者與TcdA、TcsL或Tcnot的與此等同的或同源的蛋白區(qū)域相互作用。這些等同的/同源的蛋白區(qū)域，在TcdA的情況下，涉及根據(jù)TcdA-氨基酸序列號(hào)P16154(SwissProt/TrEMBL)位于AS1662位置處具有DXG基序的從AS1651至AS1675的氨基酸序列截段，在TcsL的情況下，涉及根據(jù)TcsL-氨基酸序列號(hào)Q46342(SwissProt/TrEMBL)位于AS1666位置處具有DXG基序的從AS1654至AS1679的氨基酸序列截段，在Tcna的情況下，涉及根據(jù)Tcna-氨基酸序列號(hào)(546149(SwissProt/TrEMBL)從AS1641至AS1665的氨基酸序列截段。其它適宜的抑制劑(具有抑制作用的效應(yīng)劑)是化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白質(zhì)且其中尤其是抗體，其通過(guò)抑制磷酸肌醇與毒素的相互作用來(lái)抑制LCTs的自催化性蛋白酶活性。通過(guò)阻止IP鍵，阻止毒素的溶蛋白性裂解。在此優(yōu)選蛋白質(zhì)且其中尤其是抗體，其與分別根據(jù)TcdB-氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)從AS1400至AS2300，優(yōu)選AS1517至AS2142，和尤其AS1517至AS1593或AS1918至AS2142的TcdB蛋白區(qū)域，或者與TcdA、TcsL或Tenct的與此等同的或同源的蛋白區(qū)域相互作用。同樣好的是也可以產(chǎn)生抗體和其它蛋白，其不直接與磷酸肌醇結(jié)合(特別是前述蛋白區(qū)域)相互作用，而是靶向相鄰區(qū)域并空間阻礙IP鍵并由此阻止毒素的溶蛋白性裂解。此外可以產(chǎn)生不直接與LCTs的蛋白酶作用的DXG基序相互作用，而是通過(guò)與相鄰蛋白質(zhì)片段結(jié)合阻止溶蛋白性裂解的抗體和其它蛋白。適宜的抑制劑(具有抑制作用的效應(yīng)劑)此外呈現(xiàn)出磷酸肌醇(IP)且特別是六磷酸肌醇(IP6)的類(lèi)似結(jié)構(gòu)，該類(lèi)似結(jié)構(gòu)可以具有LCT(特別是TcdA和/或TcdB、和/或TcsL和/或Tena)的反應(yīng)結(jié)合位點(diǎn)而非磷酸肌醇且特別是六磷酸肌醇的反應(yīng)結(jié)合位點(diǎn)，但是不具有IP或IP6的引發(fā)劑功能(Initiator-Funktion)。該類(lèi)似結(jié)構(gòu)由此是激動(dòng)劑IP(特別是IP6)的拮抗劑，并展現(xiàn)出與LCT(特別是TcdA和/或TcdB、和/或TcsL和/或Tcncc)的蛋白酶活性的竟?fàn)幰种谱饔?。適宜的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，或可應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的測(cè)試方式(例如對(duì)此是先前已經(jīng)描述過(guò)的)輕易鑒定。適宜的抑制劑此外是磷酸肌醇的抑制物質(zhì)(同義詞磷酸肌醇抑制物質(zhì)或磷酸肌醇抑制劑)，即這樣的抑制物質(zhì)，其如此結(jié)合或改性磷酸肌醇且特別是六磷酸肌醇，從而抑制它們引發(fā)LCT(特別是TcdA和/或TcdB和/或TcsL和/或Tcnot)的蛋白酶活性的能力。這樣的物質(zhì)的實(shí)例為二價(jià)離子如Ca2+，其與IP6形成不溶的配合物。類(lèi)似的物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，或可應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的測(cè)試方式(例如對(duì)此是先前已經(jīng)描述過(guò)的)輕易鑒定。9其它適宜的抑制劑(具有抑制作用的效應(yīng)劑)是抑制在患者(哺乳動(dòng)物，特別是人類(lèi))的腸腔中或患者(哺乳動(dòng)物，特別是人類(lèi))的體細(xì)胞內(nèi)的礴酸肌醇的形成，或者破壞已存在的磷酸肌醇的化學(xué)物質(zhì)，從而阻止LCT在穿透入細(xì)胞質(zhì)的情形下的溶蛋白性裂解。優(yōu)選這樣的物質(zhì)的實(shí)例是鋰、VPA(丙戊酸)或CBZ(卡馬西平)。適宜的激活劑，即具有激活作用的效應(yīng)劑，是激活毒素蛋白酶活性的化學(xué)物質(zhì)。激活劑的抗毒作用基于，毒素與宿主細(xì)胞如此結(jié)合，以致被裂解的片段能夠到達(dá)細(xì)胞內(nèi)(胞漿)之前，引發(fā)完整毒素(特別是TcdB或TcdA或TcsL或Tenot)的蛋白酶活性。所述激活劑因而在宿主細(xì)胞外起到裂解具有糖基轉(zhuǎn)移酶功能的細(xì)胞毒的有效片段(在TcdB和TcdA中為63kDa-片段)的作用。所述細(xì)胞毒的有效片段不能再進(jìn)入到達(dá)細(xì)胞內(nèi)并在那里發(fā)揮其細(xì)胞毒作用。特別適宜的激活劑(具有激活作用的效應(yīng)劑)是被分離的(以區(qū)別于胞漿內(nèi)的)磷酸肌醇(IP)，優(yōu)選六磷酸肌醇(IP6)。具有這種活性物質(zhì)的藥物具有下列優(yōu)點(diǎn)，存在于患者腸內(nèi)的LCT(特別是TcdB和/或TcdA和/或TcsL和/或Tcnot)，即在其能與腸細(xì)胞或其它體細(xì)胞結(jié)合并發(fā)揮毒性之前，通過(guò)藥物導(dǎo)入的IP已經(jīng)在腸中促使裂解。同樣良好地適宜作為激活劑(具有激活功能的效應(yīng)劑)的物質(zhì)，其類(lèi)似IP6地促進(jìn)LCT(特別是TcdA和/或TcdB和/或TcsL和/或Tena)的自催化性蛋白酶活性。這樣的物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，或可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式輕易鑒定。對(duì)此還適宜的是前述的"高通量試驗(yàn)"的改進(jìn)的變化方案。其中使毒素與潛在的激活物質(zhì)一起提供并依據(jù)時(shí)間過(guò)程研究熒光光譜中的變化。在短時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)強(qiáng)烈變化的檢測(cè)物(Ansatze)包含適宜的激活劑(具有激活功能的效應(yīng)劑)。根據(jù)本發(fā)明，LCT的蛋白酶功能的催化中心也可以用作靶向施用的抗原(接種物質(zhì))以產(chǎn)生對(duì)抗毒素的免疫。本發(fā)明的主題因此還有用于避免或減輕LCT(-大梭菌細(xì)胞毒素)中毒的藥物，其特征在于，適宜作為疫苗用于施用，并且具有TcdB和/或TcdA和/或TcsL和/或Tcnot的催化中心的完整氨基酸序列或其作為抗原性活性物質(zhì)的片段。所述抗原性活性物質(zhì)優(yōu)選選自下組的蛋白質(zhì)片段-TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的位于1665位置處的DXG基序-TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的氨基酸位置AS1653至AS1678-TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的氨基酸位置AS1500至AS1800-TcdA氨基酸序列號(hào)P16154(SwissProt/TrEMBL)的位于1662位置處的DXG基序-TcdA氨基酸序列號(hào)P16154(SwissProt/TrEMBL)的氨基酸位置AS1651至AS1675-TcsL氨基酸序列號(hào)Q46342(SwissProt/TrEMBL)的位于1666位置處的DXG基序-TcsL氨基酸序列號(hào)Q46342(SwissProt/TrEMBL)的氨基酸位置AS1654至AS1679-Tcna氨基酸序列號(hào)Q46149(SwissProt/TrEMBL)的氨基酸位置AS1641至AS1665。以下依據(jù)實(shí)施例和附圖進(jìn)一步闡述本發(fā)明。顯示圖1:TcdB1M63(270kDa)全毒素被裂解為在SDS-PAGE中的易位/配位體結(jié)構(gòu)域(207kDa)和N端催化結(jié)構(gòu)域(63kDa)，其實(shí)施采用a:Cy3標(biāo)記的TcdB簡(jiǎn)3和豬脾細(xì)胞提取物的混合物(實(shí)施例U);b:Cy3標(biāo)記的TcdB腦3和不含蛋白質(zhì)的豬脾細(xì)胞提取物的混合物(實(shí)施例IB);c:Cy3標(biāo)記的TcdB腦3和磷酸肌醇的混合物；d:無(wú)標(biāo)記的TcdB，3和磷酸肌醇的混合物；e:無(wú)標(biāo)記(借助親和色譜法純化)的TcdB腦3和磷酸肌醇的混合物;a-e分別在室溫下溫育1小時(shí)圖2:TcdB,和/或IP6的混合物的SDS-PAGE，該毒素用或沒(méi)有用EPNP預(yù)處理；泳道1:用EPNP預(yù)處理后且無(wú)IP6的TcdB腦3，在63kDa區(qū)域沒(méi)有可檢驗(yàn)的條帶；泳道2:用EPNP預(yù)處理后且與IP6溫育后的TcdB腦3，僅微弱地顯示出典型的63kDa條帶；泳道3:沒(méi)有用EPNP預(yù)處理且與IP6溫育后的TcdB，"在63kDa的分子量區(qū)域可識(shí)別明顯清晰的條帶；泳道4:沒(méi)有用EPNP預(yù)處理且無(wú)IP6的TcdB，"在63kDa區(qū)域沒(méi)有可檢驗(yàn)的條帶。圖3:天然TcdB蛋白(a)和經(jīng)EPNP修飾的TcdB蛋白(b)的胰蛋白酶消化后的ESI-LCMSMS-分析。MS-SurveyScan(大圖)和裂解譜(插入部分)。的。如在Ausubel等人(2003)中所描述。實(shí)施例1:TcdB自催化性蛋白酶活性的證明參考菌林VPI10463的艱難梭菌毒素B(WOkDa)，下文中簡(jiǎn)稱為T(mén)cdB簡(jiǎn)"將首先用Cy3進(jìn)行熒光標(biāo)記。為此將200-400PgTcdB腦3(tgcB麗ICS，Mainz,德國(guó))用染料Cy3依據(jù)制造商(Amersham，Bioscience)的說(shuō)明進(jìn)行標(biāo)記，其通過(guò)將毒素與在二甲基甲酰胺中溶解的染料一起在4。C下溫育1小時(shí)的方式。未結(jié)合的染料隨即借助尺寸排阻色譜法(SizeExclusionChromatographie-SEC)去除，其中10mM的Tris-HClpH8.5溶液用作為洗脫緩沖液。染料與經(jīng)Cy3標(biāo)記的TcdB腦3之間的摩爾比為0.8-1.6。將經(jīng)標(biāo)記的TcdB腦3等分并于-80。C下儲(chǔ)存以備進(jìn)一步使用。(A)用于實(shí)施現(xiàn)有技術(shù)中已知的"體外裂解分析(In-vitro-cleavageassay)，，(對(duì)此特另'J參見(jiàn)Rupnik等人(2005);該公開(kāi)文獻(xiàn)的內(nèi)容明確在此引用)將融化至室溫的等份的經(jīng)Cy3標(biāo)記的TcdB自3在室溫下與豬脾細(xì)胞提取物溫育1小時(shí)。這種豬脾細(xì)胞提取物將如下制備將新鮮獲得的豬脾收納于磷酸緩沖液(PBS)中并破碎成單細(xì)胞混懸液。通過(guò)加入低鹽緩沖液(LowSaltBuffer)-即150mMNH4C1、1mMKHC03，0.1mMEDTA,pH7.6-，將存在的紅細(xì)胞胞溶并由此去除。隨即將脾細(xì)胞用lOmM的Tris-HClpH8.5洗滌兩次，并立即于-80匸深凍。就所希望的細(xì)胞提取物而言，視需要將一等份這種深凍的脾細(xì)胞在一等份10mM的Tris-HClpH8.5中融化并混懸，并且將該混懸液隨即經(jīng)受超聲波處理。將所獲得的溶胞產(chǎn)物在200000xg和4t:下離心1小時(shí)，并將上清液用于待進(jìn)行的試驗(yàn)。為了分離和驗(yàn)證在溫育過(guò)程中產(chǎn)生的TcdB片段，在溫育階段結(jié)束時(shí)將經(jīng)Cy3標(biāo)記的TcdB觸3和豬脾細(xì)胞提取物的混合物進(jìn)行SDS-PAGE。該SDS-PAGE的結(jié)果顯示于圖la中獲得了預(yù)期的這兩條艱難梭菌毒素B(在此為T(mén)cdB1M63)的已知的且特征性的63kDa片段和2O7kDa片段。未混合有脾細(xì)胞提取物的TcdB腦3等份用作為陰性對(duì)照(參見(jiàn)附圖1"-，，)。(B)在平行實(shí)驗(yàn)中，將(A)中所描述的脾細(xì)胞提取物在與經(jīng)Cy3標(biāo)記的TcdB,3溫育之前純化脫除蛋白質(zhì)。出于此目的，將一等份根據(jù)(A)制備的豬脾細(xì)胞提取物在緊隨超聲波處理后進(jìn)行6次苯酚-氯仿提取，其如以下步驟進(jìn)行將豬脾細(xì)胞提取物與苯酚-氯仿-異戊醇(25/24/1)以體積比例1:1混合。將該混合物在1，700xg和4匸下離心10分鐘。將含水的最上層傾倒入新的離心管并且將離心和傾倒再重復(fù)5次。為了將苯酚的最后殘留也去除掉，隨即進(jìn)行氯仿提取法。13以體積比例1:30(30),1:IOO(100)或1:300(300)用10mM的Tris-HClpH8.5稀釋，并如在(A)中所描述的與融化至室溫的經(jīng)Cy3標(biāo)記的TcdB腦3等份混合，并在室溫下溫育1小時(shí)。為了分離和驗(yàn)證在溫育過(guò)程中產(chǎn)生的TcdB片段，在溫育階段結(jié)束時(shí)將該混合物進(jìn)行SDS-PAGE。該SDS-PAGE的結(jié)果將借助GelDocEQSystemImageReader(BIO-RAD慕尼黑，德國(guó))使之可見(jiàn)并顯示于圖lb中在所有測(cè)試物中荻得這兩條TcdB，3的特征性的63kDa片段和207kDa片段。這說(shuō)明，脾細(xì)胞提取物的含水且無(wú)蛋白質(zhì)的級(jí)份始終具有將TcdBm63裂解為它的這兩條特征性部分片段的特性。在另一組平行實(shí)驗(yàn)中，將(A)中所描述的脾細(xì)胞提取物在其如(A)中所述與經(jīng)Cy3標(biāo)記的TcdB簡(jiǎn)3溫育和進(jìn)行SDS-PAGE之前，加熱(96'C，30分鐘)處理。該SDS-PAGE的結(jié)果同樣顯示于圖lb中再次獲得這兩條TcdBm"的特征性的63kDa片段和207kDa片段。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)熱誘導(dǎo)的脾細(xì)胞提取物仍具有將TcdB腦3裂解為它的兩條特征性部分片段的特性。(C)在另一實(shí)驗(yàn)系列中將經(jīng)Cy3標(biāo)記的TcdB腦3和未標(biāo)記的TcdB腦3單獨(dú)(即，沒(méi)有與脾細(xì)胞提取物混合)與不同的磷酸肌醇在室溫下溫育1小時(shí)并將各自的混合物隨即進(jìn)行SDS-PAGE。該研究的結(jié)果在表1和圖lc-e中顯示。它提供了令人驚奇的核心證據(jù)，即TcdB簡(jiǎn)3的溶蛋白性裂解可單獨(dú)由化學(xué)物質(zhì)如IP引發(fā)，且在這種溶蛋白性裂解的情形下由此涉及毒素蛋白的自催化過(guò)程。由表1所示，一系列的磷酸肌醇可以引發(fā)TcdB腦3的自催化性裂解。六磷酸肌醇(IP6)在所測(cè)試的肌醇中導(dǎo)致最強(qiáng)的裂解活性，這說(shuō)明IPs具有最高的引發(fā)活性(參見(jiàn)圖lc-e)。結(jié)構(gòu)類(lèi)似物或其它具有引發(fā)劑活性的磷酸肌醇相關(guān)物質(zhì)，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知或可以用已知方法(如，計(jì)算機(jī)4莫擬)輕易獲得的。例如也可以使用上文所描述的"高通量分析"。在與TcdB,3的溫育實(shí)驗(yàn)中，對(duì)不同濃度IP6的測(cè)試顯示(參見(jiàn)圖14lc和Id)，IP濃度為10幽(圖1C)足夠用于裂解經(jīng)熒光標(biāo)記的毒素B，而用于裂解未標(biāo)記的(且在SDS-PAGE中通過(guò)鋅染色(ZincStainandDestainKit,Biorad，Hercules,USA)才使之可見(jiàn))毒素B，更低的IP濃度直至1MM(圖Id)就夠了。類(lèi)似實(shí)驗(yàn)也用LCTs中的TcdA腦3、索氏梭菌的TcsL、和Tcnot進(jìn)行。其表明，磷酸肌醇對(duì)LCT家族的所有被研究的毒素的自催化性裂解起激活性作用。(D)為了排除，在實(shí)驗(yàn)中使用的來(lái)自艱難梭菌的培養(yǎng)基上清液的純化的TcdB，3被蛋白酶污染，用特別純化的TcdBw"進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。TcdB簡(jiǎn)3的這種純化借助親和色謙法在單克隆抗體2CV(DSMACC2321)的使用下如下進(jìn)行將7mg的TcdB特異性單克隆抗體2CV(經(jīng)G蛋白純化的無(wú)血清雜交瘤培養(yǎng)基上清液)偶合到HiTrapNHSSepharose柱上(商購(gòu)可得自GEHealthcare,Freiburg,FRG)。根據(jù)制造商的說(shuō)明進(jìn)行偶合和洗脫。用約4mg的TcdB脳3注入所述完備的柱并用50mM的Tris/HCl，pH7.0;125mMNaCl三次洗滌將未結(jié)合的蛋白質(zhì)去除。所述洗脫在一個(gè)步驟中用0.1M的三乙醇胺-HClpHll進(jìn)行。將毒素洗脫為具有濃度為450-185Pg/mg的3個(gè)4ml的級(jí)份。經(jīng)洗脫的毒素立即用1M的Tris/HCl,pH7.5以1/10的體積比中和，其經(jīng)此得以確保，即在洗脫開(kāi)始之前，所述中和溶液就已經(jīng)是被預(yù)置于級(jí)份的承接小管中的。隨即通過(guò)SDS-PAGE和隨后的鋅染色證明所述污染性蛋白不存在(參見(jiàn)圖le"-，，)。對(duì)照試驗(yàn)由如此純化的未標(biāo)記的TcdB,3與IP6的溫育和隨后的SDS-PAGE和借助鋅染色毒素和毒素片段的驗(yàn)證組成。該試驗(yàn)的結(jié)果顯示于圖le中并顯示全毒素完全裂解為這兩種已知的片段63kDa和207kDa。實(shí)施例2:通過(guò)與蛋白酶抑制劑的溫育而滅活TcdB腦3將TcdB,3如實(shí)施例1(D)中所述借助親和色譜法在單克隆抗體2CV的使用下純化，并隨后或者(i)與蛋白酶抑制劑EPNP(10mM的1，2-環(huán)氧基-3-(對(duì)-硝基苯氧基)-丙烷)或者(ii)-作為對(duì)照-與緩沖液(50mMHEPES，1MNaCl，1mMEDTA，pH8.0)在室溫下預(yù)處理6G分鐘。隨即類(lèi)似實(shí)施例1(A)進(jìn)行體外裂解分析。測(cè)試物各涉及IOW的體積，且包含各50-100ng未標(biāo)記的TcdB1(M63，100MMIP6和10mMTris-HClPH8.5。將這些測(cè)試物在緊接著溫育(室溫下l小時(shí))之后進(jìn)行SDS-PAGE(10%)，隨即借助鋅染色使毒素和毒素片段可見(jiàn)。圖2顯示這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果TcdB，3單獨(dú)與IP6進(jìn)行溫育后(泳道3)在63kDa的分子量區(qū)域顯示明顯清晰的條帶。如果將毒素事先用EPNP預(yù)處理后(泳道2),典型的63kDa條帶僅微弱地顯示。該發(fā)現(xiàn)說(shuō)明，通過(guò)添加EPNP幾乎完全抑制了TcdB廳3的蛋白水解活性(蛋白酶活性)。此外，用EPNP預(yù)處理的毒素將根據(jù)Moos等人(2000)的CHO試驗(yàn)測(cè)試其殘余活性(細(xì)胞毒作用)。CHO試驗(yàn)將如下進(jìn)行將CHO細(xì)胞(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)播種于96孔的微量滴定板中(5000細(xì)胞/孔)并在標(biāo)準(zhǔn)條件下(5%C02，37°C，用2mM的L-谷氨酰胺補(bǔ)充DMEMF12，5%FCS)溫育16小時(shí)。隨即向細(xì)胞中加入在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中逐級(jí)稀釋后的毒素。測(cè)試10°至10—8之間的稀釋級(jí)。將細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)條件下溫育3小時(shí)。隨即通過(guò)拍攝孔的多個(gè)代表性截面并且計(jì)數(shù)展開(kāi)的(ausgestreckt)、以及變圓的細(xì)胞的方式，用顯微鏡測(cè)定變圓(abgerundet)的細(xì)胞的份額(參見(jiàn)Moos等人，MethEnzymol.2000，325:114-125。在此明確引用該出版物的內(nèi)容)。該CHO試驗(yàn)的結(jié)果表明，所述經(jīng)EPNP預(yù)處理的TcdB腦3相比未經(jīng)處理的TcdB簡(jiǎn)3具有明顯較弱的細(xì)胞毒活性(見(jiàn)表2)。因?yàn)镋PNP的抑制作用已知基于，EPNP與催化性天冬氨酸殘基發(fā)生共價(jià)的相互作用并經(jīng)此導(dǎo)致蛋白酶的不可逆的滅活(Salto等人1994)，上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，TcdB,3的活性抑制基于毒素分子的蛋白酶活性的抑制。在此所描述實(shí)驗(yàn)用EPNP證明，TcdB腦3和其它LCT的毒性作用通過(guò)用適宜的蛋白酶抑制劑的預(yù)處理而明顯降低。EPNP表現(xiàn)為L(zhǎng)CT類(lèi)的共價(jià)抑制劑的模式物質(zhì)(Mode11stubstanz)。知的或由他們用已知方法，例如用已經(jīng)描述的"高通量分析"獲得。10463實(shí)施例3:通過(guò)用IP6細(xì)胞外激活蛋白酶活性，從而使TcdB的細(xì)胞毒作用滅活將TcdB腦3如實(shí)施例1(C)所述與100MMIP6溫育。緊接著溫育之后，通過(guò)將測(cè)試物經(jīng)Microcon-小管(Mi11ipore，孔尺寸為100kD)提純的方式，將通過(guò)蛋白酶活性切下的小的、毒素蛋白的63kDa片段分離。這種TcdB腦3的63kDa片段隨即在實(shí)施例2中所描述的根據(jù)Moos等人(2000)的CHO試驗(yàn)以研究細(xì)胞的變圓。其中向細(xì)胞中加入未稀釋和不同稀釋級(jí)的蛋白質(zhì)。該實(shí)驗(yàn)表明，具有TcdBw"的糖基轉(zhuǎn)移酶功能的63kDa片段，在所給定的條件下，不能單獨(dú)引起細(xì)胞毒作用。在稀釋和未稀釋的情況下都不能觀察到細(xì)胞變圓(因Rho亞族的特異性GTPase的糖基化而引起信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程阻斷，并從而引起細(xì)胞骨架解聚)。該發(fā)現(xiàn)，即所述借助自催化產(chǎn)生的毒素片段是細(xì)胞外失活的，證明了Pfeifer等人(2003)和Rupnik等人U005)的結(jié)果，其顯示，已切離的TcdB10463的催化性結(jié)構(gòu)域不能進(jìn)入真核細(xì)胞并因而在細(xì)胞培養(yǎng)基中失活。(而在該工作中明顯排除LCT的自催化活性[Pfeiffer等人，2003]，或推斷通過(guò)細(xì)胞蛋白酶激活LCTs[Rupnik等人，2005]，所述與本發(fā)明相關(guān)地獲得的試驗(yàn)結(jié)果第一次表明，N-末端的毒素片段自催化切離。)TcdB,3和其它LCTs的毒性作用可以因此通過(guò)在毒素進(jìn)入細(xì)胞前誘導(dǎo)毒素的溶蛋白性裂解而抑制。實(shí)施例4:TcdB蛋白酶活性中心的證明將經(jīng)EPNP滅活(參見(jiàn)實(shí)施例2)和未經(jīng)處理的TcdB10463借助SDS-凝膠分離并用鋅染色顯示。隨即切割相應(yīng)于蛋白質(zhì)的條帶并破碎成小塊。將其脫色并干燥，隨即在2mMDTT中還原并用20mM乙酰胺碘烷基化。在洗滌和重新干燥凝膠片段后，將其用胰蛋白酶在37。C下過(guò)夜消化。所獲得的肽鍵隨即通過(guò)HPLC分離(NanoAcquity高效液相色語(yǔ)法，Waters,Milford，USA)。為此將樣品加載到在2%的流動(dòng)相B緩沖液(于乙腈中的0.1%的蟻酸)中的反相柱上(NanoEase，BEHC18(75x10cm),Waters,Milford，USA)。流動(dòng)相A緩沖液包含于水中的0.1%的蟻酸。隨即將所述片段通過(guò)梯度為3-40%的流動(dòng)相B緩沖液(90分鐘，300nl/min)從該柱中洗脫。將經(jīng)洗脫的片段隨即進(jìn)行質(zhì)傳研究。為此使用Waters公司的Q-TofPremier質(zhì)語(yǔ)儀。該儀器用[Glu-1]-纖維蛋白原肽溶液(500fmol/pl于300nl/min)通過(guò)NanoLockSpay-Quelle(Waters)的參考噴霧劑(Referenz—Sprayer)校準(zhǔn)。<吏用MassLnyx4.1軟件(Waters)用于結(jié)果的分析。結(jié)果的分析表明，未處理的TcdB與經(jīng)EPNP處理的毒素僅在一個(gè)典型片段有區(qū)別(附圖3)。該片段包括根據(jù)TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的TcdB蛋白的氨基酸AS1653至AS1678，其具有于位置1665處的天冬氨酸蛋白酶特征性DXG基序。TcdB催化中心的氨基酸序列AS1653至AS1678與毒素TcdA，TcsL和Tcnoc的對(duì)應(yīng)的催化中心和蛋白區(qū)域的對(duì)比顯示，該區(qū)域是高度保守的(參見(jiàn)表3)。本領(lǐng)域技術(shù)人員因此可以用已知方法產(chǎn)生抗體或其它蛋白，其特異性地與毒素的蛋白酶結(jié)構(gòu)域的活性中心相互作用，并由此例如阻止LCTs的自催化性裂解。同樣好的是也可產(chǎn)生不直接阻斷活性中心而是靶向相鄰區(qū)域并由此空間阻礙毒素的自催化溶蛋白裂解的抗體或蛋白。實(shí)施例5:由于經(jīng)滅活的TcdB的免疫作用通過(guò)抗體抑制TcdB作用為了誘導(dǎo)出對(duì)抗TcdB細(xì)胞毒效應(yīng)的保護(hù)，制備以下TcdB制劑并18在家兔中用于免疫制劑A:用甲醛滅活的TcdB制劑B:用EPNP滅活的TcdB(參見(jiàn)實(shí)施例2)制劑C:TcdB片段AS1601至AS1716(DSG基序)制劑D:TcdB片段AS1508至AS1601(肌苷結(jié)合性基序的一部分)制劑E:TcdB片段AS1508至AS2157(DSG基序和全部肌苷結(jié)合性基序)用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法在質(zhì)粒pET-19(Novagen)中表達(dá)TcdB片段并通過(guò)綴附的His-Tag進(jìn)行純化。隨即將His-Tag借助腸激酶消化而切除。蛋白純度將在SDS凝膠中檢驗(yàn)(數(shù)據(jù)未展示)。為進(jìn)行免疫，首先用抗原將家兔進(jìn)行基礎(chǔ)免疫并隨后進(jìn)行多次強(qiáng)化免疫。最終由家兔血液中獲得多克隆的抗血清。為檢驗(yàn)多克隆抗血清的中和作用，首先將TcdB用多克隆抗血清預(yù)處理(稀釋級(jí)1:100)并在室溫下溫育1小時(shí)。隨即依據(jù)CHO試驗(yàn)如在實(shí)施例2中所述檢測(cè)抗血清的中和作用。血清的中和作用的標(biāo)準(zhǔn)是，使細(xì)胞免受TcdB的細(xì)胞毒作用的保護(hù)有多長(zhǎng)時(shí)間。用制劑A免疫的家兔只顯示微量的抗體滴度(參見(jiàn)表4)，而且該家兔的血清不起中和作用。該發(fā)現(xiàn)符合本領(lǐng)域技術(shù)人員已知于用甲醛處理的LCT的免疫實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。用制劑B免疫的動(dòng)物，雖然形成明顯的滴度(可稀釋至1:1500)，然而該抗血清在CHO試驗(yàn)中也不顯示中和作用(表4)。用制劑C至E免疫的家兔，同樣顯示抗體滴度，而且它們的多克隆血清在CHO試驗(yàn)中顯示出明顯的中和作用(表4)。通過(guò)用制劑E免疫產(chǎn)生的多克隆血清，在此顯示出最強(qiáng)的中和性特性。通過(guò)用制劑C和D分開(kāi)免疫而產(chǎn)生的血清，顯示出相對(duì)較低的中和作用。用含有部分肌醇結(jié)合性區(qū)域的D片段的成功免疫證明，LCT的該截段涉及對(duì)于激活毒素重要的區(qū)域。IP6在該毒素截段的結(jié)合導(dǎo)致自催化性蛋白酶活性的激活，并由此導(dǎo)致LCT的激活。涉及DSG基序的區(qū)域的中和作用證明，乾向蛋白酶活性中心的抗體能夠抑制蛋白水解活性。用這樣的抗體還能夠在體內(nèi)形成對(duì)LCT的毒性效應(yīng)的保護(hù)。在用制劑E進(jìn)行免疫的情形下只是將所述成功的制劑C和D的這兩種片段一起使用。用這兩種TcdB片段的成功免疫基于，在動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)了抗體，其既靶向蛋白酶活性中心，又是結(jié)合磷酸肌醇結(jié)合性區(qū)域的這樣的抗體?？寡宓淖饔糜纱嘶?，第一次能夠誘導(dǎo)針對(duì)性地阻止毒素激活的特異性抗體。毒素的自催化性裂解對(duì)于LCT在其宿主細(xì)胞中的自然攝入是重要的，因?yàn)橹挥羞@樣所述N末端，作為真正的毒性活性的介導(dǎo)性片段才能釋放入宿主細(xì)胞。在天冬氨酸蛋白酶和磷酸肌醇結(jié)合位點(diǎn)的DSG基序的環(huán)境下，特異性抗體的結(jié)合阻止了毒素的自催化性裂解。由此在患者中可通過(guò)使用對(duì)LCT的自催化性裂解必要的毒素片段，達(dá)到針對(duì)LCT的有效免疫。文獻(xiàn)A咖bel,F.M.etal,:"CurrentProtocolsinMolecularBiology"(2003),JohnWileyandSons,Inc.Rupniketal.(2005)"CharacterizationofthecleavagesiteandftinctionofresultingcleavagefragmentsafterlimitedproteolysisofCVoWcA'"/wd砂d/etoxinB(TcdB)byhostcells."M歸i'o/151，199-208.Moosal.(2000)"PurificationandevaluationoflargeClostridia!cytotoxinsthatinhibitsmallGTPasesofRhoandRassubfamilies"MethEnzymol.325:114-125.Pfeiferetal,(2003)"CelluiarUptakeofClostridiumdifficiletoxinsB"丄Biol.Chem.278:44535-41.Raoetal.(1998)"Molecularandbiotechnologicalaspectsofmicrobialproteases"Microbiol.Mol.Biol.Rev.62:597-635.Saltoetal.(1994)"InvitrocharacterizationofnonpeptideirreversibleinhibitorsofHIVproteases",J.Biol.Chem.269:10691-8.Tang(1971)"Specificandirreversibleinactivationofpepsinbysubstrate-HkeEpoxides",J.Biol.Chem.246:4510-17.21表1:在加入給定的磷酸肌醇下的TcdB,3的自催化性裂解。<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表2:與TcdB腦3孵化后的CHO-細(xì)胞的細(xì)胞變圓(以％)-經(jīng)EPNP或者未經(jīng)EPNP-預(yù)處理稀釋3小時(shí)后變圓的細(xì)胞(以％)TcdB-10463TcdB-10463+EPNPIO一3100%100%10"100%100%10-5100%50%10—6100%10%l(T10%<5%l(T8>5%<5%表3:TcdB的蛋白酶功能的催化中心的氨基酸序列AS1653至AS1678與毒素TcdA、TcsL和Tcnoc相對(duì)應(yīng)的催化中心和蛋白質(zhì)區(qū)域的比較毒素同族序列范圍TcdB-104631653-Q麗IVEPNYDLDDSGDISSTVINFSQ-1678TcdA-104631649-RNVVVEPIYNPDTGEDISTSL-DFSY-1675TcsL1654-QNLIVEPSYHLDDSGNISSTVINFSQ-1679丁cna1638-CNVIVSGSNKLNSEGDLADT-IDVLD-1663表4:與用多克隆抗血清預(yù)處理的TcdB溫育后CHO-細(xì)胞的細(xì)胞變圓的開(kāi)始時(shí)間(以h計(jì))_制劑抗體滴度在…之后開(kāi)始細(xì)胞變圓A1:1001.5hB1:15003hC1:75012-15hD1:5009-12hE1:1000>24h2權(quán)利要求1.用于預(yù)防或減輕LCT(＝大梭菌細(xì)胞毒素)中毒的藥物，其特征在于，作為活性物質(zhì)，含有至少一種效應(yīng)劑，即LCT(大梭菌細(xì)胞毒素)的蛋白酶活性的抑制劑或激活劑。2.根據(jù)權(quán)利要求l的藥物，其特征在于，所述活性物質(zhì)是效應(yīng)劑，即艱難梭菌毒素A(TcdA)和/或艱難梭菌毒素B(TcdB)和/或索氏梭菌致死毒素(TcsL)和/或諾氏梭菌a毒素(Tcnoc)的蛋白酶活性的抑制劑或激活劑。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是1，2-環(huán)氧-3-(對(duì)-硝基苯氧基)-丙烷(EPNP)。4.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物，其特征在于，所述激活劑是磷酸肌醇，特別是肌醇六磷酸(IP6)。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述效應(yīng)劑是磷酸肌醇的竟?fàn)幰种菩越Y(jié)構(gòu)類(lèi)似物，特別是與肌醇六磷酸(IP6)竟?fàn)帯?.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述激活劑是類(lèi)似IP6地促進(jìn)LCT的(自催化性)蛋白酶活性，特別是促進(jìn)TcdA和/或TcdB和/或TcsL和/或Tcncc的(自催化性)蛋白酶活性的物質(zhì)。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述效應(yīng)劑是適用于降低哺乳動(dòng)物，特別是人類(lèi)的腸腔內(nèi)的磷酸肌醇濃度的化學(xué)物質(zhì)。8.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述效應(yīng)劑是適用于降低哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，特別是人類(lèi)細(xì)胞內(nèi)的磷酸肌醇濃度的化學(xué)物質(zhì)o9.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與蛋白酶活性中心相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體，該活性中心根據(jù)TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)在AS1500至AS1800的TcdB蛋白區(qū)域中。10.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的AS1653至AS1678的TcdB蛋白區(qū)域相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。11.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的位于TcdB蛋白的氨基酸位置AS1665處的DXG基序相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。12.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcdA氨基酸序列號(hào)P16154(SwissProt/TrEMBL)的AS1651至AS1675的TcdA蛋白區(qū)域相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。13.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcdA氨基酸序列號(hào)P16154(SwissProt/TrEMBL)的位于TcdA蛋白的氨基酸位置AS1662處的DXG基序相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。14.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcsL氨基酸序列號(hào)Q46342(SwissProt/TrEMBL)的AS1654至AS1679的TcsL蛋白區(qū)域相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。15.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcsL氨基酸序列號(hào)Q46342(SwissProt/TrEMBL)的位于TcsL蛋白的氨基酸位置AS1666處的DXG基序相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。16.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)Tcnot氨基酸序列號(hào)Q46149(SwissProt/TrEMBL)的AS1641至AS1665的Tcnoc蛋白區(qū)域相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。17.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的AS1400至AS2300的TcdB蛋白區(qū)域，或者與與此等同或同源的TcdA或TcsL或Tcnot的蛋白區(qū)域相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。18.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與根據(jù)TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的AS1517至AS2142的TcdB蛋白區(qū)域，或者與與此等同或同源的TcdA或TcsL或Tena的蛋白區(qū)域相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。19.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物，其特征在于，所述抑制劑是與才艮據(jù)TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的AS1517至AS1593或者AS1918至AS2142的TcdB蛋白區(qū)域，或者是與此等同或同源的TcdA或TcsL或Tenet的蛋白區(qū)域相互作用的化學(xué)物質(zhì)，特別是蛋白，尤其特別是抗體。20.用于預(yù)防或減輕大梭菌細(xì)胞毒素(LCT)中毒的藥物，其特征在于，該藥物(1)是適用于作為疫苗施用的，且(2)作為抗原性活性物質(zhì)-(a)含有TcdB氨基酸序列號(hào)P18177(SwissProt/TrEMBL)的那些TcdB蛋白片段，至少包括位置1665上的DXG基序，優(yōu)選氨基酸位置AS1653至AS1678的氨基酸序列，特別優(yōu)選氨基酸位置AS1500至AS1800的氨基酸序列，-和/或(b)含有TcdA氨基酸序列號(hào)P16154(SwissProt/TrEMBL)的那些TcdA蛋白片段，至少包括1662位置處的DXG基序，優(yōu)選氨基酸位置AS1651至AS1675的氨基酸序列，-和/或(c)含有TcsL氨基酸序列號(hào)Q46342(SwissProt/TrEMBL)的那些TcsL蛋白片段，至少包括1666位置處的DXG基序，優(yōu)選氨基酸位置AS1654至AS1679的氨基酸序列，-和/或(d)含有Tcnoc氨基酸序列號(hào)Q46149(SwissProt/TrEMBL)的那些Tcnoc蛋白片段，至少包括氨基酸位置AS1641至AS1665的氨基酸序列。全文摘要用于預(yù)防或減輕大梭菌細(xì)胞毒素(LCT)中毒的藥物，特別是艱難梭菌毒素A和B(TcdA和TcdB)，其特征在于，作為活性物質(zhì)，至少含有一種效應(yīng)劑，即LCT(大梭菌細(xì)胞毒素)自催化性蛋白酶活性的抑制劑或激活劑。文檔編號(hào)A61K31/661GK101516359SQ200780035763公開(kāi)日2009年8月26日申請(qǐng)日期2007年5月26日優(yōu)先權(quán)日2006年8月2日發(fā)明者C·馮埃歇爾斯特雷伯,H·希爾德,J·雷尼克,M·魯普尼克,S·藤澤申請(qǐng)人:美因茨約翰內(nèi)斯古藤貝格大學(xué)