專利名稱：：熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷在制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
。具體地說，是涉及熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷在制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：白細(xì)胞具有吞噬能力，能消滅外來的病原菌，保衛(wèi)身體的健康，所以人們將它譽(yù)為身體的衛(wèi)士。正常人血液循環(huán)中的白細(xì)胞為400010000/立方毫米。白細(xì)胞中最重要的是具有防衛(wèi)功能的中性粒細(xì)胞，占總數(shù)的50-70%。一般而言，白細(xì)胞減少最常見最主要的是指粒細(xì)胞減少。當(dāng)白細(xì)胞總數(shù)低于4000/立方毫米時(shí)，此時(shí)肌體抵抗力低下，極其容易引起細(xì)菌感染，嚴(yán)重時(shí)威脅生命。血小板是血液中的有形成分之一，人血液中血小板的數(shù)量變化很大，正常值為1530萬個(gè)/微升。血小板具有止血功能、吞噬病毒、細(xì)菌和其他顆粒物的功能，并能營養(yǎng)和支持毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，使毛細(xì)血管的脆性減少。如果血小板數(shù)量顯著減少或功能有障礙，將會(huì)導(dǎo)致出血傾向。白細(xì)胞和/或血小板減少癥是臨床常見的病癥，包括原發(fā)性、并發(fā)性和繼發(fā)性。除先天性的白細(xì)胞和/或血小板減少癥外，引起的病因是多方面的。疾病、藥物、放射線、感染、毒素、化學(xué)物質(zhì)、手術(shù)治療、環(huán)境因素等都有可能造成白細(xì)胞和/或血小板的減少。引起白細(xì)胞和/或血小板減少癥的疾病包括造血系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過敏性休克、血小板減少性紫癜等。骨髓增生異常，再生障礙性貧血癥都可能伴發(fā)白細(xì)胞和/或血小板減少癥。而骨髓移植、肝腎移植也直接導(dǎo)致白細(xì)胞和/或血小板的減少。特別對于癌癥病人來說，放化療常會(huì)造成骨髓造血的抑制，表現(xiàn)出外周白細(xì)胞和血小板明顯降低。目前治療各類白細(xì)胞和/或血小板減少癥的藥物還不多。基因工程產(chǎn)品粒細(xì)胞集落刺激因子GCSF、粒細(xì)胞巨噬集落刺激因子GMCSF升高白細(xì)胞的作用比較顯著，中藥地榆升白片也得到了廣泛應(yīng)用，但西藥有顯著療效的藥物則比較少見，所以在臨床上，對能治療白細(xì)胞和/或血小板減少癥療效明確、服用方便、易于質(zhì)量控制、合成易得的西藥還有廣泛的需求。五環(huán)三萜類化合物是天然分布的三萜類化合物中的一種，被發(fā)現(xiàn)具有廣泛的生理活性。熊果酸(英文名ursolicacid)以及齊墩果酸(oleanolicacid)就是其中最有代表性的化合物，在植物界中廣泛存在，可以大量獲得。齊墩果酸被用于肝病的治療藥物已經(jīng)有多年的歷史。兩者除了對肝臟具有有益作用，還被報(bào)道了其他的多種活性；Lin等人在文章Effectsofoleanolicacidandursolicacidoninhibitingtumorgrowthandenhancingtherecoveryofhematopoieticsystempostirradiationinmice(Cancerletter7-13，111，1997)中研究了熊果酸、齊墩果酸對抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用，并發(fā)現(xiàn)對放療模型引起的小鼠白細(xì)胞減少癥狀，熊果酸、齊墩果酸在25，50，100mg/kg劑量組腹腔給藥時(shí)，具有升高白細(xì)胞的作用，而且高劑量給藥組比較明顯，其中熊果酸作用強(qiáng)于齊墩果酸。曰本專利JP7048260也公開了熊果酸具有升高紅細(xì)胞、血小板的作用。中國專利CN03135776公開了一類從中藥地榆中分離得到，主要由19-羥基熊果酸(又名坡模醇酸，英文名pomolicadd)為苷元的三萜皂苷具有升高白細(xì)胞和/或血小板的顯著作用，由于中藥地榆中存在系列結(jié)構(gòu)類似、極性相近的此類皂苷，且含量有限，批量分離純化出有效單體供藥用有一定的困難，加上坡模醇酸或其苷本身在天然產(chǎn)物中的分布不多，因此從分離提取的角度不容易大量獲取；而從合成的角度而言，從容易獲得的熊果酸原料出發(fā)，19-羥基不容易簡便地轉(zhuǎn)化得到，因而對其開發(fā)使用存在一定的局限。迄今為止，尚未見到熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷在制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物的應(yīng)用報(bào)道。本發(fā)明創(chuàng)造性地利用在天然產(chǎn)物中廣泛分布且價(jià)廉易得的熊果酸、齊墩果酸為原料，通過結(jié)構(gòu)修飾引入了親水基團(tuán)，即單糖或寡糖基，發(fā)現(xiàn)所得到的皂苷在改善母核水溶性的同時(shí)，藥理實(shí)驗(yàn)證明具有顯著升高白細(xì)胞和/或血小板活性作用。與中藥地榆中分離得到的坡模醇酸皂苷相比，不僅藥理活性較強(qiáng)，還具有合成易得、適合工業(yè)生產(chǎn)、成本低廉等優(yōu)勢。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了通式(I)的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯在制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的用途，通式(I)為其中，Rl為氫、葡萄糖基，阿拉伯糖基，鼠李糖基，半乳糖基，木糖基，核糖基，來蘇糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、雞納糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基；R2為氫，葡萄糖基，阿拉伯糖基，鼠李糖基，半乳糖基，木糖基，核糖基，來蘇糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、雞納糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基；且R1、R2不同時(shí)為氫。R3為CH"R4為H時(shí)為熊果酸皂苷，見通式(II):進(jìn)一步地，通式II中，Gl、G2代表相同的單糖或寡糖時(shí)，稱為雙糖基化熊果酸皂苷。Gl、G2為氫或者單糖或寡糖，且G1不同于G2時(shí)，稱為非雙糖基化熊果酸皂苷。其中，所述的糖基為葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基。進(jìn)一步地，通式II中雙糖基化熊果酸皂苷選自3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯、3-0-(0-0-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。進(jìn)一步地，通式II中非雙糖基化熊果酸皂苷選自3_0-(e-D-吡喃半乳糖)熊果酸、3一0(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸、3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖灘果酸-28-0(P-纖維素二糖)酯、熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。更進(jìn)一步地，通式II中熊果酸皂苷優(yōu)選自3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸及其鈉鹽、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0(p-0-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。更進(jìn)一步地，通式II中化合物進(jìn)一步優(yōu)選自3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。本發(fā)明還提供了上述通式II熊果酸皂苷在制備升高白細(xì)胞和血小板藥物中的用途。通式(I)所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其中，R3為H、R4為CH3時(shí)，為齊墩果酸皂苷，見通式III:III其中，G3、G4代表氫、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基，且G3、G4不同時(shí)為氫。進(jìn)一步地，通式(III)中化合物選自3-0-(P-D-吡喃葡萄糖醛酸)齊墩果酸、3-0-(P-D-吡喃木糖)齊墩果酸、3-0-(a-L-吡喃半乳糖)齊墩果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齊墩果酸及其鈉鹽、3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)齊墩果酸及其鈉鹽、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齊墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(3-D-吡喃葡萄糖)齊墩果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯、齊墩果酸-28-0-(P-龍膽二糖)酯、齊墩果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。更進(jìn)一步地，通式m中化合物選自3-0(a-L-吡喃阿拉伯糖)齊墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)齊墩果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。本發(fā)明還提供了上述通式III齊墩果酸皂苷在制備升高血小板藥物中的用途。其中，所述的升高白細(xì)胞和/或血小板藥物應(yīng)用于哺乳動(dòng)物原發(fā)性、并發(fā)性或繼發(fā)性白細(xì)胞和/或血小板減少癥的防治。還可將升高白細(xì)胞和/或血小板藥物單獨(dú)或合并使用于防治感染性疾病。其中，所述的白細(xì)胞和/或血小板減少癥是由疾病、藥物、放射線、感染、毒素、化學(xué)物質(zhì)、手術(shù)治療、環(huán)境因素引起。其中，引起白細(xì)胞和/或血小板減少癥的疾病包括造血系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、過敏性休克、血小板減少性紫癜以及癌癥病人放化療。本發(fā)明提供了一種具有升高人白細(xì)胞和/或血小板作用的藥物組合物，它是由通式(1)、(11)、(III)所述的化合物的任意一種，或其藥學(xué)上可接受的鹽、鹽的水合物、溶劑化物、酯以及前體藥物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或載體制備成的藥劑。進(jìn)一步地，所述的藥劑是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑以及各種微粒給藥系統(tǒng)。根據(jù)體內(nèi)代謝的一般規(guī)律，以及藥物化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員所能理解的常識，通式i-in中的化合物可以通過酯鍵連接衍生，而通式i-m中具有酸、堿根的化合物還可被制備成藥學(xué)上可被接受的鹽。這些藥學(xué)上可以接受的鹽、鹽的水合物、溶劑化物或者酯，特別是在體內(nèi)可代謝成上述通式i-m中化合物在用于制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的應(yīng)用時(shí)也被本專利所覆蓋。以及含有通式i-m中的任一一種化合物的中藥、植物藥及其有效部位在用于制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的應(yīng)用時(shí)也被本專利所覆蓋。更進(jìn)一步地，包含如通式i-in中的任一化合物以及藥學(xué)上可接受的鹽、鹽的水合物、溶劑化物、酯以及前體藥物、含有通式i-m中的任一一種化合物的中藥、植物藥及其有效部位與藥學(xué)上可接受的載體組成的藥物組合物，該藥用組合物可以是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑以及各種微粒給藥系統(tǒng)，在用于制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的應(yīng)用時(shí)也被本專利所覆蓋。具體實(shí)施方式下面用實(shí)施例進(jìn)一步說明本專利，但這并不意味著對本發(fā)明的限制。本發(fā)明采用的合成原料熊果酸、齊墩果酸均為市售商品。實(shí)施例1:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯的制備熊果酸lg(2.2mmol)在20ml干燥CH2C12溶液中，N2氣氛下，與阿拉伯糖糖基化給體2，3，4-三-0-苯甲酰基-e-L-吡喃阿拉伯糖基三氯乙酰亞胺酯3.4g(5.7mmol，2.6叫)(該化合物合成方法參考J.Org.Chem.1999,64,7265-7266)，粉末狀4埃分子篩1.5g混合后,于-10。C滴加三氟甲磺酸三甲基硅醇酯TMSOTf(0.03ml，0.15eq)，反應(yīng)逐漸升溫到室溫，攪拌過夜，加入少量Et3N(0.3ml)淬滅反應(yīng)，過濾，濾液濃縮后，硅膠柱層析，石油醚/乙酸乙酯體系(4/1一2/1)洗脫，得到雙糖基化中間體1.47g(l.lmmo1)，將其溶解于甲醇/二氯甲烷(2/l，30ml)并加入378mgNaOMe(7mmoI,6.4eq)，室溫反應(yīng)4小時(shí)，酸性樹脂DowexlT中和后，過濾濃縮，硅膠柱層析(氯仿/甲醇10/1-6/1)得到白色粉末0.61g，總收率為39%。[a]^-十29.0(C0.72，MeOH)IR(KBr)cm":3330,2958,1724,1068，926,852!HNMR(600MHz，CD3OD):Sppm5.40(d，J=5.8Hz，lH，H-r),5.28(t,lH，H-12)，4.30(d,J=6.8Hz，lH,H-l')，3.81-3.90(m，4H),3.67-3.71(m，2H),3.51-3.60(m,4H)，3.15(dd,J=ll,8，4.4Hz,lH，H-3)，2.29(d，J=11.6Hz，lH，H畫18),1.13，1.06，0.98,0.86，0.84(seach,3Heach,MeX5)，0.97(3H,d,J=4.0Hz)，0.91(3H,d,J=6.4Hz)，0.79(d，J=ll,6Hz，lH，H-5)13CNMR(150MHz,CD3OD):Sppm176,5(C-28),137.9(C-13),125.9(C-12)，105.7(C-r)，94.4(C畫r)，89.3(C-3)，72.9，72.2,71.4，69.9，68.1,67.0,64.9(d),55.6，52.7，48.2,48.0，41.9,39.6,39.0,38.8(d),38.6，36.5,36.2,32.9，30.3,27.9,27.2，25.7，23.7，23.0，22.6，20.1，17,9,16.5，16.2，15.6，14.7ESI-MS(m/z):743.3[M+Na〗+實(shí)施例2:3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯的制備類似實(shí)施例l的方法，2，3，4-三-苯甲酰基-e-L-吡喃鼠李糖基三氯乙酰亞胺酯為糖基化給體，可得到3-0(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯。[a]2D°=-11.8(C0.17,DMF)!HNMR(600MHz，d5-pyridine):Sppm6.75(1H,s),5.46(1H，m),5.32(1H，s),4.56-4,57(2H,m)，4.52(1H,dd,J=9.12，3.2Hz),4.47(1H，dd,J=8.9,3.2Hz),4.38(1H,t，J=9.3Hz)，4.29-4.34(3H,m),3.17(H,dd，J=11.8，4.44Hz),2.44(1H,d，J=11.3Hz)，1.81(1H,m),L70(3H，d,J=6Hz),L67(3H,d，J=6Hz)，U7(3H,s),1.08(1H，m),0.93(3H，s)，0.92(6H，s)，0.90(3H,d，J=6.4Hz)，0.88(3H,d，J=6.4Hz)，0.87(3H,s)，0'70(1H,d,J=11.7Hz)"CNMR(150MHz,CD3OD):Sppm175.6(C-28)，138.1(C-13)，126.1(C-12),103.0(C-1')，93.6(C-r)，89.0(C-3),72.7，72.0，71.2,71.1(d),71.0，70.0，68.5，55.3,53.1，48.5,48.2,41.9,40.0,39.5,39.0,38.6，38.4，36.7，36.5，33,0，30.2，27.6，27.4，25.2，23.8，23.0，22.7，20.0，18.0，16.8,16.4,16.1，15.6，14.6ESI-MS(m/z):771[M+Na]+實(shí)施例3:3-0-(3-0』比喃葡萄銜熊果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯的制備類似實(shí)施例1的方法，糖基化給體為2，3，4，6-四-0-苯甲酰-a-D-葡萄糖基三氯乙酰亞胺酯，可得到3-0-(P-0-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。[a〗2D°=+21.7(C1.02，MeOH)IR(KBr)cm":3417，2925，1727,1672，1456，1377,1226，1075，1027，896，831iHNMR(600MHz,CD3OD):5ppm5.33(d,J=8.3Hz，lH，H-l")，5.24(t,1H,H-12),4.31(d，J=7.8Hz，lH，H-r),3.77-3.84(m,2H)，3.65誦3.68(m，2H),3.28—3.39(m,7H)，3.16畫3.18(m，2H),2.22(d，J=11.2Hz，1H，H-18),1.12,1.05,0.96,0.84，0.83(seach，3Heach,MeX5)，0.88(d,J=6.4Hz,3H)，0.78(d，J=l1.6Hz，lH,H-5)13CNMR(150MHz,CD3OD):Sppm176.5(C-28)，137.7(C-13)，125.9(C-12),105.3(C畫1')，94.3(C-1"),89.4(C-3)，77.2，76.9(d),76.3，74,3，72.5，70.3,69.8,61.4，61.1,55.7，52.8，48,7,48.0,41.9,39.6,39.0,38.9,38.8,38.6,36.4,36.1,32.9,30.3,27.9,27.2，25.7,23.9，23.0,22,6,20.1,17.9，16.5，16.2,15.7，14,8ESI國MS(m/z):803[M+Na]+實(shí)施例4:熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯的制備將熊果酸(195mg,0.43mmo1)與2，3，4-三-0-苯甲?；?L-吡喃阿拉伯糖溴苷(316mg,1.4eq)混合于CH2C12〃_K(1/1，10ml)體系中，加入K2C03(151mg，2.5叫)及Bu4NBr(56mg,0.4eq)，加熱回流至反應(yīng)完全，加入20ml012(:12，分出水相，有機(jī)相用水及鹽水洗滌，干燥，旋千，殘余物直接用于下步反應(yīng)。將上述中間體溶于CH2CyMeOH(5ml,1/1)體系中，與甲醇鈉(130mg,2.5mmo1)室溫反應(yīng)過夜，加入水淬滅后，用乙酸乙酯萃取多次，有機(jī)相合并后水洗，干燥后，旋干上硅膠柱，CHCVMeOH體系洗脫得到200mg白色粉末。收率79%。[《=+43.0(C0.97，MeOH)!HNMR(600固z，CD3OD):Sppm5.38(lH，d，J=5.8Hz)，5.26(lH,t，J=3.6Hz),3.85-3.88(2H，m)，3.64國3.69(2H，m),3.54-3.56(lH,m),3.14(lH，dd，J=11.6,4.5Hz),2,26(lH，d，J=11.0Hz)，Ul(3H,s)，0.97(3H，s)，0.96(3H，d，J=5.9Hz)，0.95(3H,s)，0.88(3H，d，J-6.5Hz)，0.82(3H,s),0.77(3H，s),0.74(lH,d，J=11.8Hz)13CNMR(150MHz，CD3OD):Sppml76,5,137.9,125.8,94.4，78.3,72.2，69,9，67.0，64.9,55.4，52.7，48.4，41.9，39.6,39.0,38.8,38.7，38.4,36.7,36.2，33.0,30.3,29.2,27.9，27.4，26.5，23.7，23.0,22.6，20.1,18.1，16.5，16.2,15.0,14.7ESI掘(m/z):611.0[M+Na]+實(shí)施例5:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸及其鈉鹽的制備熊果酸(lg,2.2mmo1),K2C03(0.6g)，氯節(jié)0.3ml，混合于10mlDMF中，10(fC加熱反應(yīng)直到原料反應(yīng)完全，冷卻后過濾，濾餅用DMF洗滌，合并有機(jī)相后，將其到入100ml水中，過濾得到白色粗品，硅膠柱層析，石油醚/乙酸乙酯體系洗脫得到熊果酸芐酯1.09g(2.0mmo1)。將上述干燥過的中間體，糖基給體2，3，4-三-0-苯甲?；?P-L-卩比喃阿拉伯糖基三氯乙酰亞胺酯1.7g(2.8mmol，1.4叫)，粉狀分子篩lg,混合于15ml干燥CH2Cl2中，&氣氛，于-10°<:滴加三氟甲磺酸三甲基硅醇酯丁1^80丁"78111,0.4311111101),丁0:跟蹤節(jié)酯原料，反應(yīng)完成后，加入Et3N淬滅，過濾，濾液濃縮后硅膠柱層析，石油醚/乙酸乙酯體系洗脫，得到糖基化中間體3-0-(2，3，4-三-0-苯甲?；鶗?huì)L-吡喃阿拉伯糖)-熊果酸芐酯1.65g(1.67mmo1)。將其溶解于15ml甲醇/CH2Cl2(l/2)中，0.1g5。/oPd/C催化下，常壓氫化過夜，過濾濃縮，硅膠柱層析，石油醚/乙酸乙酯體系洗脫可得3-0-(2，3，4-三-0-苯甲?；?cc-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸1.26g(1.4mmo1)。將其溶解于25mlMeOH/CH2C12(2/1),加入NaOMe(35mg，0.65mmo1),室溫反應(yīng)過夜，用稀醋酸溶液中和反應(yīng)液，濃縮后，硅膠柱層析，氯仿/甲醇體系洗脫，得到3-O-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸0.737g(1.25mmo1)，四步反應(yīng)總收率57%。[a]，=+41.9(C0.43,DMF)iHNMR(600MHz，CD3OD):Sppm5.22(lH，t，J=3.6Hz,H-12),4.27(lH，d,J=6.7Hz,H-r)，3.82(lH，dd,J=12.2,3.4Hz),3.79-3.80(m，lH),3.49-3,58(3H,m)，3.14(lH,dd,J=11.4，4.14Hz，H-3),2.19(lH，d，J=ll,0Hz，H-18)，l.l卿，s)，1.04(3H，s)，0.96(3H，s)，0.84(3H，s)，0.84(3H，s),0.87(3H，d,J二6.5Hz)，0.78(lH，d，J=11.2Hz，H-5)13CNMR(150MHz，CD3OD):Sppml75.0,139.6,126.9，107.1，90.7,74.3，72.8，69.5:66.4,57.0，54.4，48.0，42.2,40.8，40.4，40.2，39.9,38.1，37.8，34.3，31.8,29.2,28.6，27.0，25.3,24.4,24.1,21.6,19.3,17.8，17.7,17.0，16.1ESI-MS(m/z):611.0[M+Na〗+將30mg3-O-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸溶解于甲醇/氯仿(4ml，3/1)，加入5mg甲醇鈉，室溫?cái)嚢?0min,過濾析出的白色固體，甲醇洗滌，干燥得到3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸鈉鹽。實(shí)施例6:3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)熊果酸及其鈉鹽的制備以熊果酸為起始原料，以2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酰亞胺酯為糖基化給體，四步反應(yīng)可得到3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)熊果酸。[a〗2o。=+27.0(C0.2，DMF)'HNMR(600麗z，CD3OD):Sppm5.22(t,lH,H-12)，4.32(d，J=7.8Hz,lH，H-l')，3.83(dd,J=11.8，2,2Hz,lH,H-6'-l),3.67(dd，J=12,5.2Hz，1H,H畫6'-2)，3.17-3.35(m，5H),2.20(d，J=11.4，lH，H-18)，Ul(3H，s),1.06(3H,s)，0.97(6H,sMeX2)，0.90(3H，d，J=5.8Hz)，0.85(6H，s)，0.78(d,J=12.4Hz,lH，H-5)l3CNMR(150MHz，CD3OD):5ppm178.9(C-28)，137.0(013)，126.2(C-12),103.8(C-1')，88.0(C-3)，75.4，74.8，72.8，68.8，59.9，54.2，51.5,46.7，45.0，40.4，37.9，37.5,37.2，37.0,35.2，34.9,31.4，28.9，27.8,26.3,25.7,24.2，22.5，21.5，21.2,18.7，16.4，14.9，14.8，14.1,13.1ESI-MS(m/z):641.5[M+Na]+其鈉鹽制備方法同實(shí)施例5。實(shí)施例7:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯的制備熊果酸為原料，類似得到實(shí)施例4的方法，得到中間體熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯，再以2，3，4-三-0-苯甲?；?e-L-吡喃阿拉伯糖基三氯乙酰亞胺酯為二次糖基化給體，類似的糖基化條件，并用NaOMe脫保護(hù)得到3-0(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。'HNMR(600MHz,CD3OD):5ppm5.36(d，J=8.2Hz，lH，H-l")，5.26(t,lH,H-12)，4.29(d，J=6.7Hz，lH，H-r),3.80-3.86(m，3H),3.69(dd,J=12,4,6Hz,lH，H-6'-l)，3.57-3.58(m,lH,H-6'-2)，3.32-3.43(m,4H)，3.15(dd，J=11.6，2.4Hz,lH),2.24(d,J=11.2Hz，lH，H-18)，U3(3H，s)，1.06(3H,s),0.99(6H,s),0.91(d,J=6.3Hz,3H)，0.86(3H，s),0.85(3H，s)，0,79(d,J=11.7Hz,lH,H-5)"C畫R(150顧z，CD3OD):5ppm176.5(C-28)，137.7(C-13),125.9(C-12)，105.7(C-l')，94.3(C畫r),89.3(C-3)，77.2，76.9，72.9,72.5,71.4,69.8，68.1，64.9,61.1，55.6,52.8，48.2，41.9,39.6，39.0,38.9，38.8，38.6,36.5,36.1,32.9,30.3,29.3，27.9,27.2,25.7，23.9，23.0，22.6，20.1，17.9,16.5，16.2,15.6,14.7ESI-MS(m/z):773.4[M+Na]+。與從地榆中分離得到活性最高的化合物3-0-(01丄-吡喃阿拉伯糖)-19-羥基-熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯相比，本實(shí)施例中的化合物最接近，只少一個(gè)19位羥基。但是本實(shí)施例中的化合物合成方法可如上描述，以熊果酸為原料，易工業(yè)化的方法簡便獲得。而地榆中的該化合物，由于19-羥基-熊果酸原料不容易得到，而從熊果酸出發(fā)合成又不容易，所以該化合物的合成有一定難度，加上直接從天然產(chǎn)物中大量分離得到也有一定局限，所以一定程度上限制了其在醫(yī)藥中的應(yīng)用。本發(fā)明的創(chuàng)造性之一也就是提供了更易得到的系列化合物，可以從廉價(jià)易得的熊果酸、齊墩果酸出發(fā)合成，同時(shí)活性也得到增強(qiáng)，因此可以在醫(yī)藥中得到大量應(yīng)用。實(shí)施例8:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯銜熊果酸-28-0-(3-纖維素二糖)酯的制備類似方法可得。[a]^=+30.8(C0.9,MeOH)iHNMR(600MHz,CD3OD):3ppm5.36(lH，d，J=8.3Hz),5.24(1H，t)，4.43(lH，d，J=7.9Hz)，4.28(lH,d,J=6.7Hz)，3.21-3.89(16H,m),3.13(lH,dd，J=11.4,4.1Hz),2.22(lH，d，J=11.4Hz)，1.11(3H,s),1.04(3H，s),0.96(6H,s)，0.89(3H，d，J=6.4Hz)，0.84(3H，s)，0.83(3H,d.J=6.9Hz)，0.78(lH,d,J=l1.2Hz)ESI-MS(m/z):912[M]+實(shí)施例9:3-0-(a-L-吡喃鼠李銜熊果酸的制備用類似實(shí)施例5的方法，2，3，4-三-0-苯甲?；?P-L-批喃鼠李糖基三氯乙酰亞胺酯為糖基化給體，糖基化后脫保護(hù)基，可得到3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸。|a]，=+5.7(C0.74，MeOH)iHNMR(600固z，drpyridine):Sppm5.48(1H，m)，5.32(1H,s),4.55(1H，t，J=1.6Hz)，4.46(1H,dd,J=10.4,3.4Hz),4,26畫4,34(2H，m),3.17(1H,dd,J=11.8,4.4Hz)，2.62(1H,d，J=11.4Hz)，2.31(1H，dt,J=13.4,4.4Hz),2.12(1H，dt,J=4.0,12.6Hz),1.87-2.15(6H,m)，L66(3H，d,J=5.8Hz),L56(1H，m),L24(s,3H)，L02(3H，s)，L00(3H，d,J=6.4Hz),0.96(3H，d,J=6.4Hz)，0.93(3H，s)，0.83(3H，s)，0.79(3H，s),0.72(1H,d,J=l1.6Hz)13CNMR(150MHz,d5-pyridine):Sppml80.2，138.2，125.5,103.0，89.0,72.7,71.2,71.1，68.5，55.3，53.0，48.2,48.0,47.2，41.9,39.4，39.0,38.6,38.4,36.7，36.5，32.9，30.4，27.8，27.4,25.2，23.9,23.0,22.7，20.2,18.0,16.4(d),16.2，15.6,14.6ESI-MS(m/z):1203[2M-1]+,601[M-1]+實(shí)施例10:3-0-(0-D-吡喃半乳銜熊果酸的制備類似實(shí)施例5的方法，2，3，4，6-四-0-苯甲?；?a-D-吡喃半乳糖基三氯乙酰亞胺酯為糖基化給體，糖基化后脫保護(hù)基，可得到3-0-(0-D-吡喃半乳糖)熊果酸。[a]2D°=+13.8(C0.8,MeOH)1HNMR(600MHz,d5-pyridine):Sppm5.48(1H,t,J=3.2Hz)，4.93(1H，d，J=6.6Hz)，4.57(1H，d,J=3.2Hz)，4.43畫4.48(3H,m),4.16(1H，dd，J=9.6，3.4Hz)，4.11(1H，t，J=6.2Hz)，3.41(1H,dd，J=11.8,4.4Hz)，2.62(1H,d，J=11.6Hz)，2.20-2.32(2H，m),2.12(1H,m)，L57(1H,t，J=8.0Hz),L31(3H，s),L26(3H，s)，L01(3H,s),L00(3H，d,J=5.8Hz)，0.96(3H,d,J=5.2Hz)，0.96(3H,s),0.85(3H，s)，0.80(1H，d，J=11.8Hz)ESI-MS(m/z):641[M+Na]+實(shí)施例ll:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齊墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯的制備類似實(shí)施例l的方法，2，3，4-三-0-苯甲?；?e-L-吡喃阿拉伯糖基三氯乙酰亞胺酯為糖基化給體，糖基化反應(yīng)后用甲醇鈉脫保護(hù)可得。[《=+35.5(C0.71，MeOH)!HNMR(600MHz，CD3OD):5ppm5.41(1H,d，J=5.7Hz，H-l"),5.27(1H，t，H曙12)，4.27(1H，d，J=6.7Hz)，3.79-3.90(4H，m)，3,66-3.70(2H,m),3.55-3.58(2H，m)，3.49-3.52(2H,m)，3.13(1H，dd,H畫3),2.00-2.06(lH,m，H-18)，1,15，1.04，0.95，0.94，0.900.83，0.79(each3H，s，MeX7)ESI誦MS(m/z):743.5[M+Na]+實(shí)施例12:3-0-(3-D-吡喃葡萄糖)齊墩果酸-28-0-(P-D-B比喃葡萄糖)酯的制備2，3，4，6-四-0-苯甲?；?a-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酰亞胺酯為糖基化給體，類似實(shí)施例1可得。!HNMR(600MHz，CD3OD):5ppm5.37(d,J=8.1Hz，lH,H-l")，5.25(m,lH，H-12),4.31(d，J=7.86Hz，lH，H-l')，3.17陽3.84(13H，m)，2.85(1H,m)，1.16，1.05,0.95,0.93,0.89,0.84，0.80(seach,3Heach，MeX7)ESI-MS(m/z):803[M+Na]+實(shí)施例13:3-0-(P-D-吡喃葡萄銜齊墩果酸的制備類似實(shí)施例5。^麗R(600麗z，CD3OD):5ppm5.26(1H,t，J=3.6Hz),4.34(1H,d，J=7.9Hz),3.86(1H，dd，J=11.8，2.3Hz)，3.68(1H,dd,J=l1.8，5.3Hz),3.19-3.37(5H，m),2.88(1H，m)，1.18，1.08,0.98，0.97,0.92，0.88,0.86(each3H，s),0.81(1H，d,J=11.6Hz)13CNMR(150MHz,CD3OD):5ppm181.5(C-28)，144.1(C13)，122.0(C12)，105.3(C，1)，89.4(C3)，76.9畫70.3(C，4，C，5，C，3，C'2)，61.4(C6)，55.7(C5)，48.2(C9)，47.2(C19)，46.5(C17)，46.1(C18)，41.5(C14)，39.2(C8)，38.8(C1)，38.4(C4)，36.5(C10),33.7(C21)，32,7(C29)，32.6(C7)，32.2(C22)，30.4(C20)，27.5(C23)，27.2(C15)，25.6，25.0(C27，C25)，23.1(C-30)，22.8(C11)，22.7(CI6)，18.0(C6)，16.4(C26)，15.6(C24)，14.5(C25)其鈉鹽制備方法同前。實(shí)施例14:3-0-(e-D-吡喃半乳糖)齊墩果酸的制備類似實(shí)施例5。^NMR(600畫z，d6-DMSO):5ppm12.00(brs,lH)，5.16(s，lH,H12)，4.71(d,J=4.7Hz，lH)，4.60(d，J=5.5Hz，lH),4.50(t,J=5.8Hz,lH)，4.29(d,J=4.4Hz,lH)，4.10(d,J=7.3Hz，IH)，3.6(t,J=3.7Hz，lH，H4)，3.54-3.50(m，lH)，3.39畫3.42(m，1H)，3.23隱3.29(m，3H)，3.02(dd，J=4.7，11.4Hz,1H,H3)，2.80(dd，J=3.3,13.6Hz，lH，H18)，1.89-1.93(m,1H)，1.80-1.77(m,3H)，1.09(s,3H)，0.98(S,3H)，0.87(S，9H)，0.75(s，3H),0.71(s，3H)13CNMR(150MHz，d6-DMSO):Sppm178.6(C28),143.8(C13)，12L5(C12)，106.0(C'1)，87.8(C3),74.8-68.0(C,4,C，5,C'2，C'3),60.3(C，6)，54.9(C5)，47.0(C9),45.7(C19)，45.2(C17)，41.2(C18),40.8(C14)，38.8(C8),38.7(C1),38.1(C4),36.3(C10),33.3(C21)，32.8(C29),32.3(C7)，32.1(C22)，30.4(C20),27.6(C23)，27.1(C15)，25.6(C27),25.5(C25)，23.3(C30)，22.9(C11),22.6(C16),17.7(C6),16.8(C26),16.4(C24)，15.1(C25)實(shí)施例15:3-0-(e-D-吡喃木糖)齊墩果酸的制備以2，3，4-三-0-苯甲酰基-a-D-吡喃木糖基三氯乙酰亞胺酯為糖基化給體，類似實(shí)施例5，得到3-0-(P-D-吡喃木糖)齊墩果酸。'HNMR(600MHz，d6-DMSO):5ppm12.00(brs，1H,COOH)，5.16(brs，1H，H12)，4.89-4.91(m，3H)，4.1l(d，J=7.8Hz，1H，H1)，3.63(dd，J=5.0，ll.OHz，1H)，3.21-3.26(m，1H)，2.92曙3.07(m，4H)，2.73(dd，J=3.7，13.7Hz，1H)，1.89畫1.93(m，1H)，1.79(brd，J=8.7Hz，2H)，1.09(s，3H)，0.97(s，3H),0.87(s，6H)，0.85(s,3H)，0.75(s，3H)，0.71(s，3H)13CNMR(150MHz，d6-DMSO):Sppm178.6(C28)，143.8(C13)，121.5(C12)，106.2(C，1)，87.6(C3)，76.7(C，3),73.7(C，2)，69.6(C，4),65.5(C，5),54.9(C5)，46.9(C9),45.7(C19),45.4(C17)，41.3(C18)，40.8(C14)，38.8(C8)，38.7(C1)，37.9(C4)，36.3(C10)，33.3(C21),32.8(C29),32.3(C7),32.1(C22),30.3(C20),27.4(C23),27.2(C15),25.7(C27),25.5(C2)，23,4(C30),22.9(C11),22.6(C16),17.7(C6),16.8(C26)，16,4(C24)，15.0(C25)實(shí)施例16:3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齊墩果酸的制備類似實(shí)施例5。iHNMR(600MHz,d6國DMSO):5ppml2.01(s，1H,COOH)，5.15(t，J=3.6Hz，1H，H12)，4.81(d,J=4.7Hz，1H)，4.52(d,J=5.9Hz,1H),4.47(d，風(fēng)4Hz，IH)，4.11(d，J=6.2Hz,lH，Hl),3.64(dd，J=3.3，12.5Hz,1H)，3.58(brs，IH)，3.33-3.34(m，3H),3.00(dd，J=4.4，11.4Hz，1H，H3)，2.74(dd，J=5.4，13.6Hz,1H)，1.88-1.93(m，1H),1.79(dd，J=3.3，8.4Hz，2H,Hll)，1.09(s，3H，H-27),0.96(s,3H,H23),0.87(s，9H),0.75(s，3H)，0.71(s，3H)13CNMR(150MHz，de-DMSO):Sppm178.6(C28),143.8(C13)，121.5(C12)，105.8(C1),87.6(C3),72.7，70.9,67.6，65.1，54.9,46.9，45.7，45.4，41.3，40.8，38.8，38.7，38.0，36.3，33.3，32,8，32.3，32.0,30.4，27.6,27.2,25.7,25.5,23.4,22.9，22.6，17.7，16,8,16.4，15.1其鈉鹽制備方法同前。實(shí)施例13、14、15、16中化合物圖譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2005,35(4):635-640)—致。實(shí)施例17:齊墩果酸-28-0-(e-D-吡喃葡萄糖)酯的制備以2，3，4，6-四-0-苯甲?；?ct-D-吡喃葡萄糖溴苷、齊墩果酸為原料，類似實(shí)施例4的相轉(zhuǎn)移法糖苷化后，甲醇鈉脫保護(hù)可得。m.p.180-183°C，[a]^=+22(C0.2，pyridine)IR(KBr)cm":3435，2933,2862，1695,1461,1386，1181,1030，996,762HNMR(600MHz，d5-pyridine):Sppm6.19(1H，d,J=8Hz，H，-l),5.35(1H,brs,H12)'1.18，1.17,1.13,1.06，0.91，0.90，0.86(21H,s，7Me)13CNMR:5ppml76.9,144.7，123.4，92.3,79.8，79.4,78.6，74.6，71.6，62.7,56.3，48.7，47.5,46.7,42.3，40.4，40.0,39.5，37.9，34.5,33.6,33.0，31.3，30,5，29.3,28.8，28.6，26.6，24.3，23.9,24.3，24.2，23.9，18.0，17.0,16.1ESI掘(m/z):641[M+Na]+實(shí)施例18:齊墩果酸-28-0-(e-龍膽二糖)酯的制備用全乙酰化龍膽二糖溴苷，齊墩果酸為原料，類似實(shí)施例4的相轉(zhuǎn)移法糖苷化后,甲醇鈉脫保護(hù)可得。m.p.248-250°C'HNMR(600MHz，CD3OD):5ppm5.41(lH，d,J=7,8Hz,H，l)，5.32(1H,d，H12),4.41(lH,d，J=8.7Hz，H"-l)，4.18(1H，d，J=11.6Hz)，3.91(1H,d，J=13.6Hz)，3.83(1H，dd,J=6,5.5Hz)，3.73(1H，dd，J=5.5，5.5Hz),1.22,1.03,1.01，1.00，0.97,0.87,0.84(21H,s，7XMe)實(shí)施例19:-D-吡喃葡萄糖醛酸)齊墩果酸的制備類似實(shí)施例5的反應(yīng)條件，糖基化后并脫保護(hù)基后可得。1HNMR(600MHz,d5-pyridine):Sppm5.65(lH,brs，H12)，4.82(1H，d，J=7Hz，H，-l)，1.33，1.32，1.29，1.04，0.99，0.98，0.79(21H，s，7XMe)ESI-MS(m/z):655[M+Na]+以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)進(jìn)一步證明本發(fā)明的有益效果。將實(shí)施例中化合物作了骨髓單核細(xì)胞增殖增加率體外實(shí)驗(yàn)，并對實(shí)施例中部分化合物進(jìn)行了小鼠升高白細(xì)胞和/或血小板的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，對比了從中藥地榆中分離出來的一個(gè)單體皂苷3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)-19-羥基-熊果酸-28-0-(3-0-吡喃葡萄糖)酯以及熊果酸、齊墩果酸的藥效，其結(jié)果證明了本發(fā)明的有益效果。試驗(yàn)例l對體外培養(yǎng)的小鼠骨髓單核細(xì)胞的促進(jìn)增殖的作用取昆明種小鼠15—20只(購自河南鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，雌雄兼用脫頸椎處死，分離兩側(cè)股骨，剪去股骨頭，用無血清RPMI1640(Gibco公司)反復(fù)沖洗骨髓，收集含骨髓細(xì)胞的沖洗液，用吸管反復(fù)吹打以使細(xì)胞分散，靜置片刻后吸取上清，100g離心3min，收集細(xì)胞沉淀，加入培養(yǎng)基重懸并定容至5mL，將此細(xì)胞懸液加到有5mL小鼠淋巴細(xì)胞分離液的離心管上層，400g離心30min，采集中間交界面乳白色的骨髓單核細(xì)胞(BMMNC)層，以無血清RPMI1640培養(yǎng)基洗滌三次，得骨髓單核細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后按40萬/孔接種于96孔板中，加入不同濃度的陽性藥物rhG-CSF(重組粒細(xì)胞集落刺激因子子，山東齊魯制藥有限公司)或待測樣品，同時(shí)設(shè)立不加藥的空白對照組，置37。C、5。/o的C02孵箱中培養(yǎng)5天，以常規(guī)SRB(Sigma)法測定細(xì)胞增殖情況，SRB染色后，測定490nm處的OD值。計(jì)算藥物處理后的細(xì)胞增殖增加率(細(xì)胞增殖增加率=實(shí)驗(yàn)組-空白對照組/空白對照組*100%)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表一。表一樣品編號及其對體外培養(yǎng)的小鼠骨髓單核細(xì)胞增殖增加率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>結(jié)果和討論如表一所示，本發(fā)明樣品G-1G-19的增殖增加率比熊果酸、齊墩果酸的增殖增加率高10%以上，差異顯著。地榆中分離得到的G-22為中國專利CN03135776公開的化合物中活性最強(qiáng)的化合物，樣品G-8和G-22結(jié)構(gòu)極其類似，G-8只少了19位羥基。從上表的結(jié)果可以提示，本發(fā)明以熊果酸、齊墩果酸為苷元的皂苷相對于坡模醇酸為苷元的皂苷不僅具有合成易得的優(yōu)勢，同時(shí)活性也得到了增強(qiáng)。從上述數(shù)據(jù)也可以看出，對于熊果酸皂苷G-1、G-3、G-6、G-8，齊墩果酸皂苷G-ll、G-12增殖增加率數(shù)值相對較高，所以進(jìn)一步優(yōu)選上述幾種化合物，并采用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的方法進(jìn)行研究。進(jìn)一步地，對本發(fā)明中涉及到的化合物進(jìn)行了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，采用環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)方法概述如下取健康昆明種小鼠，$^各半，每組18只，篩選體重為18-22g小鼠按體重隨機(jī)分組。各實(shí)驗(yàn)組給予不同藥物，陰性對照組、模型對照組給予同體積的生理鹽水，陽性對照藥皮下注射粒細(xì)胞集落刺激因子40ug/kg(注射容積0.1ml/10g)。除陰性對照組外，其它給藥組給藥三天后腹腔注射環(huán)磷酰胺(CY)100mg/kg，每天一次，連續(xù)三天造成小鼠白細(xì)胞減少，于末次腹腔注射環(huán)磷酰胺后一天、三天和/或五天眼眶后靜脈叢取一滴(20ul)測其血象(即造模后一天、三天和/或五天)，檢測了解白細(xì)胞及血小板情況。(注；期間各給藥組均不間斷給藥)。于末次腹腔注射環(huán)磷酰胺后五天(即造模后五天)處死小鼠，對血象指標(biāo)中白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)進(jìn)行記數(shù)。試驗(yàn)例2熊果酸皂苷對環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥動(dòng)物模型白細(xì)胞(WBC)的影響本次實(shí)驗(yàn)主要研究熊果酸皂苷G-1、G-6、G-8升白作用，比較了苷元熊果酸、齊墩果酸以及專利已公開化合物G-22的藥效。結(jié)果如下表二表二熊果酸皂苷對CY致小鼠白細(xì)胞減少癥動(dòng)物模型白細(xì)胞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注與模型對照組組間比較，*P<0.05，**P<0.01，A為具有很好的趨勢，與G-22組間比較,女P〈0.05，女女P〈0.01。從上表可以看出，本發(fā)明提供的熊果酸皂苷G-1、G-6、G-8在0.8mg/kg劑量下，相對于已經(jīng)公開了的G-22升高白細(xì)胞具有顯著差異，特別在造模后第三天。而苷元G-20、G-21在此劑量下無明顯升高白細(xì)胞作用。試驗(yàn)例3熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷對環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少癥動(dòng)物模型白細(xì)胞以及血小板的影響本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖?，研究相對于專利己公開化合物G-22，熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷G-1、G-3、G-ll、G-12的升血小板作用，同時(shí)也觀察齊墩果酸皂苷G-ll、G-12是否具有升白作用。實(shí)驗(yàn)方法同上，結(jié)果如下表表三熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷對CY致小鼠白細(xì)胞減少癥動(dòng)物模型白細(xì)胞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注與模型對照組組間比較，*P<0.05，**P<0.01;表四熊果酸、齊墩果酸皂苷對CY致小鼠白細(xì)胞減少癥動(dòng)物模型血.<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注與模型對照組組間比較，*P<0.05，**P<0.01，A為具有很好的趨勢，與G-22組間比較，女P<0.05，★★<().01。從試驗(yàn)3的結(jié)果表三、表四可以看出，熊果酸皂苷G-1升高白細(xì)胞和血小板作用明顯。熊果酸皂苷G-1、G-3相對于G-22在第五天具有升高血小板的顯著差異。齊墩果酸皂苷G-ll、G-12在造模后一天升高白細(xì)胞作用明顯，具有一定的升白作用。第一、五天升血小板作用明顯，第五天相對于G-22也有顯著差異。陽性藥G-CSF沒有升高血小板的明顯作用。試驗(yàn)例4為進(jìn)一步地說明本發(fā)明，以6°Co-Y射線造模，比較了G-l與G-22對放療引起白細(xì)胞減少癥小鼠白細(xì)胞的作用。具體操作及其結(jié)果如下給藥方案見下表表五藥物給藥方案動(dòng)物組別受試物藥物濃度(mg/ml)給藥體積(ml/kg)給藥劑量(mg/kg)給藥途徑給藥吋間(天)正常對照組0.9%生理鹽水/20/i.g21模型組0.9%生理鹽水/20/i-g21小鼠G-lG-10.04200.80i.g21G-22G-220.04200.80i.g21陽性(G-CSF)G-CSF4iig/ml1040ug/kgs.c照射后5天實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果取昆明種小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組1718只。尾靜脈取血定正常血象(白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板和血紅蛋白)，根據(jù)體重及血象結(jié)果進(jìn)行調(diào)整。按表五所示藥物和劑量ig給藥，正常對照組和模型組給予等容積生理鹽水，每天1次，連續(xù)給藥7天后測定照射前血象。除正常對照組外其余各組小鼠進(jìn)行總劑量為3.0Gy的6"Co-Y射線全身照射一次，制備小鼠白細(xì)胞減少癥模型，繼續(xù)給藥14天，G-CSF組于照射當(dāng)日起連續(xù)皮下注射給藥5天，并于照射后3、7和14天分別取血測定血象。具體結(jié)果見下表表六受試藥物對，o-Y射線致白細(xì)胞減少癥小鼠WBC的影響(107L)組別劑量只數(shù)檢測時(shí)間點(diǎn)(mg/kg)(只)正常給藥l周照射3天照射7天照射14天止常組模型組/178.51±1.8810.08±2.8910.71±3.6312.30±3.6711.35±3.92/188.47±2.3710.03±2.322.48±0.97A厶3.45±1.13AA5.06±1.08厶AG-l0.80178.96土1.589.21±2.162.06±0.754.59±1.52**6.37±1.54林G-220.80178,56±2.439.50±3.172.21±0.924.08±1.505.44±1.13G-CSF40ug188.64±2.019.89±3.303.71±1.ll林4.56±1.17林7.01±1,52林(與正常組相比，△△為P〈0.01，A為P〈0.05;與模型組相比，林為P〈0.01，*為P〈0.05。)由表六可見模型組小鼠照射后3天、7天和14天的外周血WBC均明顯降低，與正常組比較差異顯著；G-l組灌胃后，可明顯升高白細(xì)胞減少癥小鼠白細(xì)胞數(shù)，在照射后7天和14天與模型組相比有顯著差異，G-22無明顯作用。試驗(yàn)例5溶血性比較待測樣品用溶媒DMSO/生理鹽水(1:4)溶解配置成40，80，120，160，200ug/ml受試濃度梯度。從家兔心臟取血25ml，放入含玻璃珠的三角燒瓶中輕輕振搖IO分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液。將血移入刻度離心管，加入生理鹽水約10倍量，搖勻，2000rpm離心5分鐘，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水按上述方法洗滌，共4次，至上清液呈無色透明為止。將所得紅細(xì)胞用生理鹽水配成10%的混懸液，供試驗(yàn)用。在2.5ml受試樣品、溶媒(空白對照)或蒸餾水(陽性對照)中加入10%紅細(xì)胞懸液250Pl，混勻后，立即置37。C恒溫箱中進(jìn)行溫育；1小時(shí)后取出，3000rpm離心5分鐘，取上清夜在分光光度計(jì)540nm處比色測定OD值。溶血度(溶血率)=(樣品吸光度-空白對照吸光度)X100%+(陽性對照吸光度-空白對照吸光度)；數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，以藥物濃度為自變量x，溶血度為因變量y進(jìn)行線性回歸，得出線性回歸方程；再根據(jù)方程計(jì)算出導(dǎo)致溶血度為50%的藥物濃度，即HD50。以PO.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。表七G系列樣品回歸方程及HDi清況表<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>從上表可以看出，G-l具有最大的HD5Q，表明在幾個(gè)樣品中最不容易引起溶血，所以得到進(jìn)一步優(yōu)選。通過上述藥理實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明化合物具有顯著升高白細(xì)胞和/或血小板活性作用，與中藥地榆中分離得到的坡模醇酸皂苷相比，藥理活性均較強(qiáng)，且有顯著差異，尤其是雙糖基化熊果酸皂苷Gl藥效最佳。從溶血性實(shí)驗(yàn)可知雙糖基化熊果酸皂苷G1在本發(fā)明化合物中具有最大的HD50值，安全性好；綜合藥效與安全性試驗(yàn)，雙糖基化熊果酸皂苷G1為本發(fā)明化合物中最佳選擇。本發(fā)明藥物組合物的制備片劑成分?jǐn)?shù)量(mg/片)G-l5淀粉50微晶纖維素40硬脂酸鎂2羧甲基纖維素鈉5按照以上配比，將G-1與淀粉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉混勻，用水潤濕，制顆粒，干燥，整粒，加入硬脂酸鎂，混勻后壓片可得。注射劑稱取50毫克G-12，用適量無水乙醇溶解，加入l克聚氧乙烯蓖麻油酸酯，使其完全溶解，加葡萄糖注射液稀釋至100ml，加入0.05%注射用活性炭80度保溫15分鐘，垂熔玻璃以及微孔濾膜過濾，濾液分裝成2ml針劑。每單位制劑含lmgG-12。膠囊取10gG-6，微晶纖維素400g，充分混勻后，罐裝1號膠囊2000粒。每單位制劑含5mgG國6。權(quán)利要求1、通式(I)的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯在制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的用途，其特征在于通式(I)為其中，R1為氫、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、核糖基、來蘇糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、雞納糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基；R2為氫，葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、核糖基、來蘇糖基、甘露糖基、阿洛糖基、阿卓糖基、古洛糖基、果糖基、山梨糖基、雞納糖基、夫糖基、阿洛酮糖基、2-氨基葡糖基、半乳糖醛酸基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基；且R1、R2不同時(shí)為氫；R3為CH3、R4為H時(shí)為熊果酸皂苷；R3為H、R4為CH3時(shí)為齊墩果酸皂苷。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于R3為CH3、R4為H，為熊果酸皂苷，見通式II:II其中，Gl、G2為H、單糖或寡糖，且G1、G2不同時(shí)為H;所述的單糖或寡糖的糖基為葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于Gl、G2為相同的單糖或寡糖，所述化合物為3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃鼠李糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-CKP-D-吡喃葡萄糖)酯。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于，Gl、G2為不相同的基團(tuán)，通式II中化合物選自3-0-(0-D-吡喃半乳糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃鼠李糖)熊果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)熊果酸及其鈉鹽、3-0(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(e-纖維素二糖)酯、熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。5、根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于，通式II中化合物為3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-CKa-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸及其鈉鹽、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯、3-0-(0。-吡喃葡萄糖)熊果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于，通式II中化合物為3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)熊果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于R3為H、R4為CH3時(shí)，為齊墩果酸皂苷，見通式III:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>III其中G3、G4為氫、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、葡萄糖醛酸基，或由這些單糖2-5個(gè)組成的寡糖基，且G3、G4不同時(shí)為氫。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于，通式III中化合物為3-0-(P-D-吡喃葡萄糖醛酸)齊墩果酸、3-0-(0-D-吡喃木糖)齊墩果酸、3-0-(a-L-吡喃半乳糖)齊墩果酸、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯銜齊墩果酸及其鈉鹽、3-0-(e-D-吡喃葡萄糖)齊墩果酸及其鈉鹽、3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齊墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)齊墩果酸-28-0-(3-D-吡喃葡萄糖)酯、齊墩果酸-28-0-(P-龍膽二糖)酯、齊墩果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷的用途，其特征在于，齊墩果酸皂苷為3-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)齊墩果酸-28-0-(a-L-吡喃阿拉伯糖)酯、3-0-(P-D-吡喃葡萄糖)齊墩果酸-28-0-(P-D-吡喃葡萄糖)酯。10、一種具有升高人白細(xì)胞和/或血小板作用的藥物組合物，其特征在于是由如權(quán)利要求l-9任一項(xiàng)所述的化合物的任意一種，或其藥學(xué)上可接受的鹽、鹽的水合物、溶劑化物、酯以及前體藥物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或載體制備成的藥劑。11、根據(jù)權(quán)利要求10所述藥物組合物，其特征在于，所述的藥劑是片劑、膠囊、丸劑、注射劑、緩釋制劑、控釋制劑或微粒給藥系統(tǒng)。全文摘要本發(fā)明提供了通式I的熊果酸皂苷、齊墩果酸皂苷在制備升高白細(xì)胞和/或血小板藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了含有該化合物的藥物組合物。本發(fā)明利用在天然產(chǎn)物中廣泛分布且價(jià)廉易得的熊果酸、齊墩果酸為原料，通過結(jié)構(gòu)修飾引入了單糖或寡糖基，藥理實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的升高白細(xì)胞和/或血小板活性。文檔編號A61K31/7028GK101224215SQ20081000274公開日2008年7月23日申請日期2008年1月16日優(yōu)先權(quán)日2007年1月16日發(fā)明者劉軍劍,偉占,周美榮,姬建新,兵廣,彭向陽,晏菊芳,李伯剛,秦東光,董光新,振黃,瑜黃,龔曉霞申請人:成都地奧九泓制藥廠