專利名稱：：具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的新型納米微粒制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的新型納米微粒制劑。
背景技術(shù)：
：目前用于腫瘤治療的喜樹堿類藥物(屬細胞毒類藥物)，具有明顯的抗肺瘤活性，能夠延長患者的生存時間，降低了死亡率，對消化道腫瘤、白血病、膀胱癌等活性更強。但由這些治療引起的惡心、嘔吐、腹瀉等胃腸道毒性反應(yīng)仍是患者獲得治愈的限速步驟。其中如伊立替康(CPT-ll)，為晚期大腸癌治療的一線藥物，CPT-11及其活性代謝物SN-38、SN-38G在體內(nèi)消除途徑主要經(jīng)由膽汁排泄。當對不同的病人給予不同劑量的CPT-11時，其膽汁中CPT-ll、SN-38及SN-38G的累積排泄量變化范圍為25%~50%[1]。藥物在膽汁的排泄量越多，對胃腸道的刺激性越強。其胃腸道反應(yīng)主要表現(xiàn)為腹瀉，臨床應(yīng)用中腹瀉超過24小時者為40%，腹瀉超過48小時者20%，急性腹瀉者20%2。鹽酸拓樸替康治療小細胞肺癌的臨床觀察中胃腸道反應(yīng)亦較為常見，表現(xiàn)為惡心(38%)、嘔吐(28%)、腹瀉(21%)[3]。羥基喜樹堿治療小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的臨床觀察中，惡心、嘔吐發(fā)生率為30%，遲發(fā)性腹瀉發(fā)生率為39%[4]。這些細胞毒類藥物對胃腸粘膜中正常細胞的損傷常常會限制患者的治療劑量、治療持續(xù)時間，使患者的治療變得復(fù)雜，并且在殺死癌細胞的同時，亦損傷了胃腸粘膜中的正常細胞，導致粘膜的吸收和屏障作用不能正常發(fā)揮。目前腫瘤治療藥物常采用聯(lián)合給藥方式，以實現(xiàn)藥物的協(xié)同或相加作用，達到更好的療效，但其胃腸道毒副反應(yīng)也隨之加劇。據(jù)文獻報道，羥基喜樹石威聯(lián)合曱酰四氫葉酸鉀、氟尿嘧咬治療晚期消化系統(tǒng)腫瘤臨床^見察中，治療組胃腸道副作用更為明顯，其中惡心、嘔吐達55,56%,腹瀉發(fā)生率為5.56%[5];伊立替康聯(lián)合5-氟尿嗜"力亞葉酸鉤治療轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者，遲發(fā)性腹瀉發(fā)生率為85%(1~4級)，其中3級為15%，4級為8%[6]。這些胃腸道毒副反應(yīng)如惡心、嘔吐、腹渴、腹痛等影響了腸道吸收營養(yǎng)物質(zhì)，使腸缺少營養(yǎng)物質(zhì)，胃腸道效應(yīng)加重和延長，導致患者耐受性降低，且嚴重腹瀉使病人因脫水或相關(guān)感染易出現(xiàn)生命危險。這大大限制了喜樹堿類藥物的用藥劑量和治療持續(xù)時間，^吏藥物療效下降。目前常用的減小喜樹堿類藥物胃腸道毒性的方法有1)協(xié)同給藥。如化療前半小時給胃復(fù)安，抑制延髓催吐化學感受區(qū)；或樞復(fù)靈4~8mg靜脈注入，防止由化療藥引起的小腸5-羥色胺的釋放；或化療前給止吐、鎮(zhèn)靜劑；2)加強飲食護理，飲用大量含電解質(zhì)的飲料，給予易消化、少油膩的清淡飲食，少食多餐，必要時允許進食辛辣調(diào)p未品，以刺激食欲[3]。這些方法從一定程度上降低了胃腸道的毒性反應(yīng)，但是這些輔助治療在減少胃腸癥狀的同時會大大影響患者治療期間的生活質(zhì)量，同時影響患者的長期治療。近年研究表明，喜樹堿類藥物的代謝及排泄過程與乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)直接相關(guān)。BCRP是一種ATP結(jié)合盒高性能轉(zhuǎn)運蛋白(基因標記ABCG2),在胎盤合胞體滋養(yǎng)層頂膜、小腸內(nèi)皮頂膜及肝-膽小管膜等部位都有高表達。喜樹堿類藥物是BCRP的底物，BCRP在肝-膽小管的表達與喜樹堿類藥物的高膽汁排泄量及其胃腸毒性密切相關(guān)。文獻報道，協(xié)同給予BCRP的小分子抑制劑GF120918,可增加拓樸替康的血藥濃度并提高口服生物利用度。這提示我們嘗試抑制BCRP的活性對于減少喜樹堿類藥物經(jīng)膽汁排泄量，降低藥物胃腸毒性具有重要價值。目前發(fā)現(xiàn)的一些BCRP小分子抑制劑包括曱磺酰伊馬替尼、雌酮、環(huán)孢菌素A、GF120918等。但這些抑制劑往往會產(chǎn)生目標活性以外的藥理藥效，或全身性的抑制BCRP活性，引起不可預(yù)測的系統(tǒng)性代謝改變，毒副作用大，因此在臨床上難以推廣使用。傳統(tǒng)的觀點認為，藥用輔料應(yīng)該是惰性的，不應(yīng)具有任何生理活性。但隨著材料科學和藥學的交叉發(fā)展，近些年，許多具有特殊功能的新輔料不斷涌現(xiàn)。利用具有特殊功能的新輔料對于BCRP抑制作用的研究近幾年也有見報道。如PluronicP85及Tween20[7]等可對BCRP產(chǎn)生抑制作用，這些輔料在抑制BCRP的同時具有毒副作用較小的優(yōu)勢。但此法需要使用的輔料量往往較大，易引起全身性的BCRP抑制作用，長期應(yīng)用同樣易引起安全性問題，基本不具備大規(guī)模臨床應(yīng)用的可能性。綜上可見,僅憑聯(lián)用BCRP小分子抑制劑或功能性輔料抑制BCRP作用來降低喜樹堿類藥物的胃腸毒性，難以獲得理想的效果。參考文獻[1]LokiecF，CanalP，GayC,etel.Pharmacokineticsofirinotecananditsmetabolitesinhumanblood,bile，andurine[J].CancerChemotherPharmacol，1995,36:79~82.[2]秦鳳平，馬娟等.伊立替康(CPT-ll)治療晚期大腸癌引起腹瀉的觀察與護理[J].山東醫(yī)藥,2002,42(28):58.[3]張莉，戰(zhàn)秀華等.鹽酸拓樸替康治療34例小細胞肺癌的臨床療效觀察[J].中華肺瘤防治雜志，2006，13(4):310-311.[4]沙建華.羥基喜樹堿治療小細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移的臨床觀察[J].牡丹江醫(yī)學院院報，2006,27(3):27~28.[5]劉國柱，王萍等.羥基喜樹堿聯(lián)合化療治療晚期胃癌近期療效觀察[J].濱州醫(yī)學院學報，2006,29(2):108-109.[6]SaltzLB,CoxJV，BlankeC，etal.Irinotecanplusfluorouracilandleucovorinformetastaticcolorectalcancer.IrinotecanStudyGroup[J].NEnglJMed.2000,343(13):905-914.[7]TetsuoY，HiroyukiK,MarikoM，etal.Improvementoftheoraldrugabsorptionoftopotecanthroughtheinhibitionofintestinalxenobioticeffluxtransporter,brestcancerresistanceprotein,byexcipients[J].Drugmetabolismanddisposition,2007，35:1142-1148.
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供一種具有能夠降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的新型納米微粒制劑。該制劑可減少藥物經(jīng)由膽汁的代謝量，降低藥物對胃腸道的刺激性，提高臨床療效。本發(fā)明的另一個目的是提供一種具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的新型納米微粒制劑的制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明技術(shù)方案提供了一種具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的新型納米微粒制劑，其組分包括治療有效量的喜樹堿類藥物、載體基質(zhì)、具有BCRP抑制作用的輔料和乳化劑。上述新型納米微粒制劑的各組分的重量百分比含量如下喜樹堿類藥物0.01~10.0wt%載體基質(zhì)3.0~75.0wt%乳化劑0.5~70.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料0.1~30.0wt%。下優(yōu)選地，上述新型納米孩支粒制劑的各組分的重量百分比含量如下喜樹堿類藥物0.01~10.0wt%載體基質(zhì)5.0-70.0wt°/o乳化劑0.5-50.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料0.527.5wt%。更優(yōu)選地，上述新型納米微粒制劑的各組分的重量百分比含量如喜樹》咸類藥物載體基質(zhì)乳化劑具有BCRP抑制作用的輔料0.05~10.0wt%5.0~70.0wt%0.5~30.0wt%1.0~20.0wt%選自D-alpha-生育酚及其衍生物(包括維生素E琥珀酸聚乙二醇酯)、薄荷油、莪術(shù)油、鴨膽子油、檸檬烯、橄香烯和白術(shù)油中的一種或多種。所述喜樹堿類藥物選自喜樹堿、羥基喜樹堿、脫氧喜樹堿、拓樸替康、依立替康、伊立替康、貝洛替康、勒托替康、魯比替康、7-乙基喜樹堿、9-硝基喜樹石咸、7-乙基-10-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、10-曱氧基喜樹堿、18-羥基喜樹堿和20-乙?；矘鋲A等喜樹堿衍生物中的一種或多種。所述的載體基質(zhì)選自固態(tài)脂類、注射用油、磷脂和聚合物材料中的一種或多種。其中，固態(tài)脂類選自下述各類的一種或多種三酰甘油類，如三棕櫚酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、二十二酸單/雙/三甘油酯混合物中的一種或多種；脂肪酸類，如硬脂酸、棕櫚酸中的一種或多種；蠟質(zhì)類，如鯨蠟醇十六酸酯、鯨蠟醇棕櫚酸酯中的一種或多種；固醇類，如膽固醇。優(yōu)選為三棕櫚酸甘油酯、山崳酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、膽固醇。其中，注射用油選自下述中的一種或多種天然植物油，如大豆油、蓖麻油、花生油、紅花油、橄欖油中的一種或多種；鏈長在Qdo之間的脂肪酸甘油酯(包括中鏈三酸甘油酯)；油酸；亞油酸；肉豆蔻酸異丙酯；維生素E;維生素A;維生素酯類。優(yōu)選為中鏈三酸甘油酯、油酸、維生素E、大豆油、蓖麻油。其中，磷脂選自卵磷脂、大豆卵磷脂、氬化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酸膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、PEG衍生化磷脂酰乙醇胺和PEG衍生化磷脂酰絲氨酸等PEG衍生化磷脂中的一種或多種。優(yōu)選為大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、PEG衍生化磷脂酰乙醇胺。其中，聚合物材料選自葡聚糖、殼聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物、聚氰基丙烯酸酯、聚氰基丙烯酸酯衍生物和聚乙二醇-聚(丙交S旨-己內(nèi)酯)中的一種或多種。優(yōu)選為葡聚糖、殼聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物、聚乙二醇-聚(丙交酯-己內(nèi)酯)。所述的乳化劑選自下述各類中的一種或多種磷脂類，如大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂中的一種或多種；脂肪酸山梨坦類，如Span60、Span80中的一種或多種；聚山梨酯類，如Tween60、Tween80中的一種或多種；聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物類，如Poloxamer系列/Pluronic系列(包括Poloxamer188、Poloxamer105、PluronicP85)中的一種或多種；聚氧乙烯脂肪酸酯類，如Myrj52、Myrj59;聚氧乙烯脂肪醇醚類，如Brij30、Brij50;聚乙二醇酯類，如SolutolHS15。優(yōu)選為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、Span60、Tween80、Poloxamerl88(PluronicF68)、PluronicP85、SolutolHS15。本發(fā)明提供的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的新型納米微粒制劑，進一步還可以包括0-30wt°/。，優(yōu)選為0~15wt。/。的藥學上可接受的輔料。所述藥學上可接受的輔料選自界面膜穩(wěn)定劑、抗氧化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、金屬離子絡(luò)合劑和防腐劑中的一種或多種。其中，界面膜穩(wěn)定劑的作用是形成穩(wěn)定的界面膜包裹藥物和形成納米微粒，其選自丙三醇、丙二醇、甘露醇、油酸、油酸鈉和膽固醇中的一種或多種。由于磷脂、注射用油均易被氧化，根據(jù)需要，本發(fā)明所述的納米微粒制劑中還含有抗氧化劑，其選自亞硫酸鈉、亞石克酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、維生素C和維生素E中的一種或多種。根據(jù)需要，本發(fā)明的納米微粒制劑可以加入滲透壓調(diào)節(jié)劑，其選自氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、丙二醇和丙三醇中的一種或多種。根據(jù)需要，本發(fā)明的納米微粒制劑可加入pH調(diào)節(jié)劑，包括各類緩沖鹽體系如檸檬酸-檸檬酸鈉、醋酸-醋酸鈉、磷酸鹽劑等，以及NaOH溶液，HC1等堿和酸。根據(jù)需要，本發(fā)明的納米微粒制劑可加入金屬離子絡(luò)合劑，如EDTA或乙二銨四乙酸二鈉鹽等中的一種或多種。根據(jù)需要，本發(fā)明的納米微粒制劑可加入防腐劑，如苯扎溴銨、苯扎氯銨、對羥基苯曱酸酯類或山梨酸等中的一種或多種。本發(fā)明的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑制備方法可分為三種技術(shù)方案。方案一若載體基質(zhì)含有固態(tài)脂類，本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法為將喜樹^^類藥物、固態(tài)脂類材料、注射用油、乳化劑(脂溶性)、具有BCRP抑制作用的輔料溶于有機溶劑中，然后通過減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或真空千燥等方法除去有機溶劑，并加熱至熔融，以構(gòu)成有沖幾相；將乳化劑(水溶性)、藥學上可接受的輔料溶于注射用水中，水浴加熱，以構(gòu)成水相；在水浴中，攪拌或高剪切條件下將所述有機相和水相混合，以制備初乳；對初乳進行超聲或高壓均質(zhì)處理，冷卻后制得喜樹堿類藥物納米微粒1。制得的喜樹堿類藥物納米微粒可進行凍干或噴干處理或密封保存。上述有機溶劑選自二氯曱烷、氯仿、丙酮、乙醇和異丙醇。方案二若載體基質(zhì)為磷脂和/或膽固醇，本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法為將喜樹堿類藥物、磷脂、膽固醇、具有BCRP抑制作用的輔料溶于有機溶劑中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，使溶質(zhì)在瓶壁形成一層均勻的脂質(zhì)薄膜，加入含乳化劑及藥學上可接受輔料的水溶液水化，高速攪拌、高剪切或高壓均質(zhì)作用下即可形成喜樹石威類藥物納米微粒2，上述納米微?？蛇M行凍干或噴干處理或密封保存。所述有機溶劑同技術(shù)方案一中所述。方案三若載體基質(zhì)為聚合物材料，本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法可分為二類(1)取水不溶性聚合物、喜樹堿類藥物及具有BCRP抑制作用的輔料加有機溶劑溶解，在攪拌或剪切作用下，加入含乳化劑及藥學上可接受輔料的水溶液，使成初乳，對初乳進行超聲或高壓均質(zhì)處理，于水浴中攪拌或減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，即得喜樹石咸類藥物納米微粒3-l。(2)取水溶性聚合物、藥學上可接受的輔料加注射用水溶解(可加入少量有機溶劑，采用攪拌等方式)，將喜樹堿類藥物、具有BCRP抑制作用的輔料及乳化劑用有機溶劑溶解，并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或水浴除去有機溶劑，在攪拌或剪切作用下，加入聚合物水溶液，使成初乳，對初乳進行超聲或高壓均質(zhì)處理，于水浴中攪拌或減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，即得喜樹堿類藥物納米微粒3-2。納米微粒3-1、3-2可進行凍干或噴干處理或密封保存。上述三種技術(shù)方案中得到的納米微粒可以直接作為制劑使用，也可進一步制成其他制劑。將其凍干制成凍干制劑時，凍干支撐劑選自右旋糖酐、甘露醇、乳糖、蔗糖和海藻糖中的一種或多種；將其噴霧干燥成粉末時，噴干支撐劑選自甘露醇、乳糖、淀粉、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羥丙基曱基纖維素(HPMC)中的一種或多種。本發(fā)明提供的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑有益效果表現(xiàn)為①本發(fā)明加入特異性具有抑制BCRP作用的輔料。喜樹堿類藥物包裹于納米微粒中，以制劑形式運載至肝-膽小管，其特異性的輔料可在肝-膽小管局部發(fā)揮抑制BCRP的作用，減少藥物經(jīng)膽汁的排泄量。由于納米微粒制劑中采用具有BCRP抑制作用的輔料用量較少，且高濃度作用于局部，因此不會對正常臟器產(chǎn)生副作用?？杀苊庖蛭改c副作用中斷治療。②納米微粒制劑中特異性輔料具有抑制BCRP的作用，在降低藥物經(jīng)膽汁排泄量的同時可提高喜樹堿類藥物的生物利用度，增加藥物的抗腫瘤作用。③納米微粒制劑的EPR效應(yīng)(腫瘤組織血管生長迅速，外膜細胞缺乏，基底膜變形，淋巴管道回流系統(tǒng)缺損)，使微?？梢源┩改[瘤血管內(nèi)皮細胞進入腫瘤組織，提高化療藥物在腫瘤細胞內(nèi)的濃度，最大限度的發(fā)揮抗腫瘤藥物的藥效。總之，本發(fā)明提供的納米微粒制劑含有特異性BCRP抑制作用的輔料，該新型納米微粒制劑具有如下優(yōu)點(1)本發(fā)明的納米微粒制劑中含有對BCRP起到特異性抑制作用的輔料，可在局部高濃度抑制BCRP的作用，減少藥物經(jīng)膽汁的排泄量，P爭低喜樹堿類藥物的胃腸毒性。(2)本發(fā)明的納米微粒制劑采用具有BCRP抑制作用的輔料用量較少，且納米微?？梢哉w形式運栽至腫瘤或肝-膽小管，在發(fā)揮抑制作用的同時可避免引起全身性的BCRP抑制作用及對其它組織器官的毒性，提高了安全性。(3)本發(fā)明的納米微粒制劑可以解決大多數(shù)喜樹堿類藥物存在的水溶性差，理化性質(zhì)不穩(wěn)定等缺陷。并且通過EPR(EnhancePermeabilityandRetention)效應(yīng)對腫瘤組織產(chǎn)生被動靶向性，提高胂瘤治療的藥效。(4)相對于未加入抑制BCRP輔料的普通納米粒，本發(fā)明的納米微粒制劑在具有普通納米粒緩釋藥物、緩慢代謝、提高生物利用度的同時，利用特異性輔料對于BCRP的抑制作用，有目的的減少藥物經(jīng)膽汁的排泄量，降低喜樹堿類藥物的胃腸毒性。圖1為羥基喜樹堿注射液及本發(fā)明實施例1納米孩t粒制劑經(jīng)膽汁代謝圖。圖2為伊立替康注射液(CPT-U)及本發(fā)明實施例3納米微粒制劑經(jīng)膽汁代謝圖。圖3為伊立替康注射液(CPT-ll)及本發(fā)明實施例5納米微粒制劑經(jīng)膽汁代謝圖。圖4為BCRP小分子抑制劑環(huán)孢菌素A及本發(fā)明實施例2納米微粒制劑對羥基喜樹名威經(jīng)膽汁代謝的影響。圖5為未加入BCRP抑制劑的納米粒制劑及本發(fā)明實施例6納米微粒制劑中羥基喜樹堿經(jīng)膽汁的累積代謝量。具體實施方式制備實施例實施例1組成成分含量喜樹堿類藥物羥基喜樹堿7.6wt%單硬脂酸甘油酯42.0wt%載體基質(zhì)中鏈三酸甘油酯8.6wt%乳化劑大豆磷脂10.3wt%具有BCRP抑制作用的輔料橄香烯27.5wt%藥學上可接受的輔料油酸鈉4.0wt%制備方法取處方量的羥基喜樹堿、單硬脂酸甘油酯、中鏈三酸甘油酯(MCT)、大豆磷脂、橄香烯加入適量乙醇溶解，旋轉(zhuǎn)蒸干有機溶劑，真空干燥，8(TC加熱溶解作為油相。將油酸鈉溶于注射用水中，加熱至80。C作為水相。在80。C攪拌下將水相趁熱滴入油相，通N2條件下于高剪切均質(zhì)機制備初乳，8(TC通N2條件下高壓均質(zhì)處理，冷卻后制得羥基喜樹堿納米微粒，分裝后凍干，即得羥基喜樹堿納米微粒凍干制劑。平均粒徑(Particlesize)=112.4±3Unm;多分散系數(shù)(PI)=0.114實施例2組成成分含量喜樹堿類藥物羥基喜樹堿0.7wt%栽體基質(zhì)硬脂酸64.2wt%大豆磷脂22.4wt%乳化劑Poloxamer-1885.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料檸檬烯2.0wt%藥學上可接受的輔料丙三醇5.7wt%制備方法按處方量稱取羥基喜樹堿、檸檬烯、大豆磷脂和硬脂酸，在通氮氣條件下加熱至(80±5)°C,然后在攪拌條件下加入相同溫度含丙三醇和Poloxamer-188的水溶液，制成粗乳；在(80±5)。C通氮氣條件下在高壓乳勻機上4114MPa壓力下乳勻5次，充氮氣分裝后，迅速冷卻形成羥基喜樹堿納米微粒，分裝后凍干，即得羥基喜樹堿納米微粒凍干制劑。Particlesize=201.0土15.9nm;PI=0.102實施例3<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>制備方法稱取處方量的CPT-11、單硬脂酸甘油酯、莪術(shù)油、Tween80、蛋黃卵磷脂加入適量乙醇溶解，旋轉(zhuǎn)蒸干除去有機溶劑，真空干燥，80。C加熱溶解作為油相。將油酸鈉溶于注射用水中，加熱至8(TC作為水相。在8(TC攪拌下將水相滴入油相，通N2條件下于高剪切均質(zhì)機制備初乳，8(TC通N2條件下高壓均質(zhì)處理，冷卻后制得伊立替康納米微粒，分裝后凍干，4。C貯存，即得伊立替康納米微粒凍干制劑。Particlesize=123.6士21.0nm;PI=0.124喜樹堿類藥物9-硝基喜樹堿1.0wt%載體基質(zhì)膽固醇15.0wt%載體基質(zhì)/乳化劑大豆磷脂65.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料維生素E琥珀酸聚乙二醇酯19.0wt%制備方法準確稱取處方量的9-硝基喜樹堿、大豆磷脂、膽固醇，加入氯仿-曱醇混合溶劑(2:1，r/"適量，使其完全溶解并轉(zhuǎn)移至茄形瓶中。25。C恒溫水浴減壓蒸發(fā)除去有機溶劑，使藥物和脂質(zhì)在瓶壁上形成均勻薄膜。茄形瓶置真空干燥箱內(nèi)真空干燥過夜，加入一定量含有維生素E琥珀酸聚乙二醇酯的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(pH=5.5)，55。C水浴使脂質(zhì)膜脫落，得淺黃色混懸液；冰浴下探頭超聲5s,間歇3s,重復(fù)60次，功率160W;過孔徑為0.45pm微孔濾膜，得9-硝基喜樹堿納米微粒，分裝后凍干，即得9-硝基喜樹堿納米微粒凍干制劑。Particlesize=91.7±21.3nm;PI=0.176實施例5:組成成分含量喜樹堿類藥物CPT-ll0.9wt%栽體基質(zhì)膽固醇10.0wt%載體基質(zhì)/乳化劑卵磷脂45.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料鴨膽子油5.0wt%藥學上可接受的輔料甘露醇39.1wt%制備方法取處方量的CPT-ll、卵磷脂、膽固醇、鴨膽子油置圓底燒瓶中，加入乙醇，使上述混合物完全溶解成澄明溶液，置恒溫水浴減壓干燥成膜，加入含甘露醇的水溶液溶解膜，用超聲儀超聲粉碎，得CPT-11納米微粒。分裝后凍干，即得CPT-ll納米微粒凍干制劑。Particlesize=86.7士15.6nm;PI=0.211實施例6<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>制備方法稱取葡聚糖、Poloxamer-188溶于水中，用lMNaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為9.32，將此水溶液緩緩注入含白術(shù)油的丙酮中，磁力攪拌，70。C水浴加熱。稱取10-羥基喜樹堿于水中，滴加NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值為9.5。將此液加入上述水溶液中，用濃度為HCl調(diào)pH值為6.84,溶液顏色變淺，可見大量細小混濁產(chǎn)生，將混合液超聲振蕩5min，靜置于室溫下24h，高速2000rpm離心15min,棄去上清液，加新鮮蒸餾水洗滌2次，得10-羥基喜樹堿葡聚糖納米微粒。分裝后密封保存，即得10-羥基喜樹堿納米微?；鞈抑苿articlesize=223.5土32.1nm;PI=0.225實施例7<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>喜樹堿類藥物7-乙基-10-羥基喜樹堿9.0wt%載體基質(zhì)聚乳酸63.0wt%乳化劑聚乙二醇硬脂酸酯(SolutolHS15)7.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料薄荷油21.0wt%制備方法將7-乙基-10-羥基喜樹堿、聚乳酸、薄荷油溶于三氯曱烷-無水乙醇溶液中，50。C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，在瓶壁上得到干燥的聚合物薄膜，將此聚合物薄膜置于60。C水浴中預(yù)熱至透明膠狀，加入60。C含有SolutolHS15的注射用水和玻璃珠若干枚，60。C攪拌分散混懸30min，超聲10min，形成載藥亞微粒分散液，過0.45fim的微孔濾膜，去除未包裹的藥物結(jié)晶及聚合物聚集體。即得7-乙基-10-羥基喜樹堿納米微粒制劑。以甘露醇為支撐劑經(jīng)噴霧干燥后分裝保存，可進一步制得7-乙基-lO-羥基喜樹堿納米微粒噴干制劑。Particlesize=201.2±21.4nm;PI=0.204實施例8組成喜樹堿類藥物載體基質(zhì)乳化劑成分含量喜樹堿0.60wt%聚乙二醇-聚,(丙交酯-已內(nèi)酯)20.0wt%Tween6070.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料莪術(shù)油9.40wt%制備方法取喜樹堿和聚乙二醇(5000)-聚(丙交酯-己內(nèi)酯)聚合物、莪術(shù)油溶解在四氫呋喃和二曱亞^5風的體積比例為4/1的混合溶劑中，充分溶解之后倒入滴液漏斗中，緩慢滴入Tween60的水中(滴加速度為6~10秒/滴)，滴完之后，繼續(xù)攪拌2h(600~800轉(zhuǎn)/分鐘)，倒入透析袋中，透析24h，每隔lh,2h,2h,3h,4h，6h，12h換水，透析之后的樣品過濾，濾液離心分離，除去游離的喜樹堿，得到的產(chǎn)品重新用水分散，即得喜樹堿聚乙二醇-聚(丙交酯-己內(nèi)酯)納米微粒制劑。以蔗糖為支撐劑經(jīng)噴霧干燥后分裝保存，可進一步制得喜樹堿納米微粒噴干制劑。藥理實施例藥物膽汁代謝研究(1)取SD大鼠隨機分組，每組3只，腹腔注射20%烏拉坦麻醉，沿腹中線于劍突下劃開腹部肌層約lcm做膽管插管，分別尾靜脈注射實施例l，3，5納米纟效粒制劑，羥基喜桐^威注射液，CPT-11注射液。并于給藥后預(yù)設(shè)時間段收集膽汁，膽汁樣品經(jīng)處理后HPLC測定。羥基喜樹堿(HCPT)測定色譜條件為色譜柱十八烷基鍵合硅膠柱(150x4.6mm,5pm);流動相曱醇-0.05M醋酸胺(冰醋酸調(diào)節(jié)pH6.0)(45:55);才企測波長382nm;流速1.0ml/min。CPT-1l測定色i普條件為十八烷基4建合硅月交柱(150x4.6mm,5nm);流動相乙腈-0.05M磷酸二氫鉀含0.01M辛烷磺酸鈉溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH3.0)(22:78);檢測波長370nm;流速1.0ml/min。結(jié)果見圖l-3。結(jié)果表明，實施例l,3,5納米微粒制劑顯著降低了喜樹堿類藥物經(jīng)膽汁的代謝量，為制劑減小喜樹堿類藥物胃腸毒性提供了基礎(chǔ)。(2)考察BCRP小分子抑制劑環(huán)孢菌素A(CsA)及未加入具有BCRP抑制作用輔料的納米微粒對藥物膽汁代謝的影響。取SD大鼠隨機分組，每組3只，膽管插管后分別經(jīng)尾靜脈注射HCPT注射液、含CsA的HCPT注射液、實施例2納米微粒；實施例6納米微粒及實施例6中未加入具有BCRP抑制作用輔料(白術(shù)油)的納米微粒。并于給藥后預(yù)設(shè)時間段收集膽汁，膽汁樣品經(jīng)處理后按上述HPLC色譜條件下測定。結(jié)果見圖4-5。結(jié)果表明，CsA由于抑制了BCRP的活性，可降低HCPT經(jīng)膽汁的排泄量；未加入具有BCRP抑制作用輔料的納米微粒由于可在一定程度上改變藥物的組織分布，具有減緩HCPT經(jīng)膽汁代謝量的作用。而本發(fā)明納米微粒制劑(如實施例2，6納米微粒)可在二者基礎(chǔ)上顯著降低藥物經(jīng)膽汁的代謝量，大大提高了制劑降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的作用。藥物對小鼠胃腸蠕動功能的影響以胃腸蠕動功能實驗考察本發(fā)明納米微粒制劑對小鼠腹瀉作用的影響。取KM小鼠隨機分組，每組6只，每隔一天尾靜脈注射實施例1,3,5納米微粒制劑，羥基喜樹堿(HPCT)注射液，CPT-ll注射液及生理鹽水，連續(xù)給藥五次，并于最后一次尾靜脈注射IO分鐘后，經(jīng)口灌入亞曱藍溶液0,2ml，經(jīng)30分鐘后處死小鼠，打開腹腔，將腸管輕拉成直線，自幽門起測量腸管全長及亞甲藍移動長度，計算移動比(移動比=亞甲藍移動長度/腸管全長)。結(jié)果見表1-2。表1HCPT注射液及本發(fā)明納米微粒制劑對小鼠胃腸蠕動的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>*P<0,05表2CPT-1l注射液及本發(fā)明納米4敖粒制劑對小鼠胃腸蠕動的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>生理鹽水組52.0±2.147.8±3.4CPT-11注射液組51.1±2.059.8±2.7*實施例3組48.9±4.751.0±5.3實施例5組50.6±3.152.2±5.0*P<0.05。結(jié)果表明，羥基喜樹堿注射液及CPT-ll注射液顯著增加了小鼠的胃腸蠕動速率，致小鼠腹瀉率提高，胃腸副作用明顯。實施例l，3，5的納米微粒制劑經(jīng)尾靜脈注射給藥后小鼠的胃腸蠕動速率與陰性對照組(生理鹽水)無顯著性差異，可明顯降低喜樹堿類藥物的胃腸副作用。權(quán)利要求1、具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其組分包括治療有效量的喜樹堿類藥物、載體基質(zhì)、具有BCRP抑制作用的輔料和乳化劑。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，各組分的重量百分比含量如下喜樹堿類藥物0.01-10.0wt%載體基質(zhì)3.0~75.0wt%乳化劑0.5~70.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料0.1~30.0wt%。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，各組分的重量百分比含量如下喜樹堿類藥物0.01-10.0wt%載體基質(zhì)5.0-70.0wt%乳化劑0.5-50.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料0.5-27.5wt%。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，各組分的重量百分比含量如下喜樹石咸類藥物0.05~i0.0wt°/o載體基質(zhì)5.0~70.0wt%乳化劑0.5-30.0wt%具有BCRP抑制作用的輔料1.0-20.0wt%。5、根據(jù)權(quán)利要求l-4之一所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，所述的具有BCRP抑制作用的輔料選自D-alpha-生育酚及其包括維生素E琥珀酸聚乙二醇酯的衍生物、薄荷油、莪術(shù)油、鴨膽子油、檸檬烯、橄香烯和白術(shù)油中的一種或多種。6、根據(jù)權(quán)利要求14之一所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，所述的喜樹堿類藥物選自喜樹堿、羥基喜樹堿、脫氧喜樹堿、拓樸替康、依立替康、伊立替康、貝洛替康、勒托替康、魯比替康、7-乙基喜樹堿、9-硝基喜樹堿、7-乙基-10-羥基喜樹堿、9-氨基喜樹堿、10-羥基喜樹堿、10-曱氧基喜樹堿、18-幾基喜樹堿和20-乙酰基喜樹堿中的一種或多種。7、根據(jù)權(quán)利要求14之一所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，所述的載體基質(zhì)選自固態(tài)脂類、注射用油、磷脂和聚合物材料中的一種或多種；所述的固態(tài)脂類選自三酰甘油類、脂肪酸類、蠟質(zhì)類和固醇類中的一種或多種；其中三酰甘油類選自三棕櫚酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯和二十二酸單/雙/三甘油酯混合物中的一種或多種；脂肪酸類選自硬脂酸和棕櫚酸中的一種或多種；蠟質(zhì)類選自鯨蠟醇十六酸酯和鯨蠟醇棕櫚酸酯中的一種或多種；固醇類選自膽固醇；所述的注射用油選自天然植物油、包括中鏈三酸甘油酯的鏈長在Q-Cu)之間的脂肪酸甘油酯、油酸、亞油酸、肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、維生素A和維生素酯類中的一種或多種；其中天然植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、紅花油和橄欖油中的一種或多種；所述的磷脂選自卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酸膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酸磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、PEG衍生化磷脂酰乙醇胺和PEG衍生化磷脂酰絲氨酸中的一種或多種；所述的聚合物材料選自葡聚糖、殼聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物、聚氰基丙烯酸酯、聚氰基丙烯酸酯衍生物和聚乙二醇-聚(丙交西旨-己內(nèi)酯)中的一種或多種。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，所述的固態(tài)脂類選自三棕櫚酸甘油酯、山崳酸甘油酯、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸和膽固醇中的一種或多種；所述的注射用油選自中鏈三酸甘油酯、油酸、維生素E、大豆油和蓖麻油中的一種或多種；所述的磷脂選自大豆卵磷脂、氬化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化卵磷脂、磷脂酰乙醇胺和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺中的一種或多種；所述的聚合物材料選自葡聚糖、殼聚糖、聚乳酸、聚乳酸衍生物和聚乙二醇-聚(丙交酯-己內(nèi)酯)中的一種或多種。9、根據(jù)權(quán)利要求l-4之一所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，所述的乳化劑選自磷脂類、脂肪酸山梨坦類、聚山梨酯類、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物類、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪醇醚類和聚乙二醇酯類中的一種或多種；其中磷脂類選自大豆卵磷脂、蛋黃卯磷脂和氫化卵磷脂中的一種或多種；脂肪酸山梨坦類選自Span60和Span80中的一種或多種；聚山梨酯類選自Tween60和Tween80中的一種或多種；聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物類選自包4舌Poloxamer188、Poloxamer105、PluronicP85的Poloxamer系列中的一種或多種；聚氧乙烯脂肪酸酯類選自Myrj52和Myrj59中的一種或多種；聚氧乙烯脂肪醇醚類選自Brij30和Brij50中的一種或多種；聚乙二醇酯類選自SolutolHS15。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，所述的乳化劑選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷月旨、Span60、Tween80、Poloxamer188、PluronicP85和SolutolHS15中的一種或多種。11、根據(jù)權(quán)利要求14之一所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，還可以包含030wt。/。的藥學上可接受的輔料；其中所述的藥學上可接受的輔料選自界面膜穩(wěn)定劑、抗氧化劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、金屬離子絡(luò)合劑和防腐劑中的一種或多種。12、根據(jù)權(quán)利要求11所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，包含的藥學上可接受的輔料的重量百分比含量為015wt%。13、根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的納米微粒制劑，其特征在于，其中所述的界面膜穩(wěn)定劑選自丙三醇、丙二醇、甘露醇、油酸、油酸鈉和膽固醇中的一種或多種；所述的抗氧化劑選自亞>5危酸鈉、亞>5危酸氬鈉、焦亞>5克酸鈉、維生素C和維生素E中的一種或多種；所述的滲透壓調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、丙二醇和丙三醇中的一種或多種；所述的pH調(diào)節(jié)劑包括檸檬酸-檸檬酸鈉、醋酸-醋酸鈉、磷酸鹽緩沖鹽體系、NaOH溶液和HC1溶液；所述的金屬離子絡(luò)合劑選自EDTA和乙二銨四乙酸二鈉鹽中的一種或多種；所述的防腐劑選自苯扎溴銨、苯扎氯銨、對羥基苯曱酸酯類和山梨酸中的一種或多種。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及具有降低喜樹堿類藥物胃腸毒性的新型納米微粒制劑。其主要由治療有效量的喜樹堿類藥物、載體基質(zhì)、具有BCRP抑制作用的輔料和乳化劑組成。本發(fā)明提供的喜樹堿類藥物新型納米微粒制劑，能夠減少藥物經(jīng)由膽汁的代謝量，降低藥物對胃腸道的刺激性，減小藥物胃腸毒性。文檔編號A61P35/00GK101229131SQ200810033268公開日2008年7月30日申請日期2008年1月30日優(yōu)先權(quán)日2008年1月30日發(fā)明者張馨欣,朱春柳,勇甘,莉甘申請人:中國科學院上海藥物研究所