專利名稱：：一種用于制備锝-99m標(biāo)記的GSA的藥盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于制備锝-99m("mTc)的GSA的配套凍干藥盒，以及該藥盒的制備方法。
背景技術(shù)：
：哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞膜上存在血漿去唾液酸糖蛋白受體(Asialoglycoproteinreceptor，ASGP-R)是介導(dǎo)肝臟清除血液中去唾液酸糖蛋白(asialoglycoprotein,ASGP)的專一位點(diǎn)。ASGP-R可以在一定程度上反映出有效肝細(xì)胞功能，在肝炎、肝硬化或肝癌等肝損傷性疾病發(fā)生時(shí)，其數(shù)量和活性均受到損害，因此對(duì)ASGP-R進(jìn)行定量分析有助于在手術(shù)前更好地判斷剩余肝的功能。在眾多評(píng)價(jià)肝功能的手段中，肝臟顯像方法發(fā)展迅速，特別是核醫(yī)學(xué)科應(yīng)用單光子發(fā)射型計(jì)算豐幾斷層掃描"(義(Singlephotonemissioncomputertomography,SPECT)進(jìn)ff月干細(xì)胞的攝取、代謝、排泄等功能過程的動(dòng)態(tài)觀察，可獲得肝細(xì)胞代謝的放射性一時(shí)間曲線并對(duì)肝細(xì)胞功能進(jìn)行定量分析，被認(rèn)為是最有發(fā)展前途的肝功能評(píng)價(jià)方法之一。肝受體顯像劑的發(fā)展是核醫(yī)學(xué)科進(jìn)行SPECT顯像的基礎(chǔ)，1984年Vera等通過化學(xué)的方法將半乳糖結(jié)構(gòu)與人血清白蛋白相連得到新乳糖白蛋白(galactosyl-neoglycoalbumin，NGA)，并通過99mTc標(biāo)記進(jìn)行肝的顯像研究。1986年Kubota等研制了一種99mTc標(biāo)記的二乙烯三胺五乙酸-半乳糖基人血清白蛋白(99mTc-diethylenetriaminepentaaceticacid-galactosyl-humanserumalbumin,99mTc-GSA)，通過增加雙功能連接劑DTPA結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)了標(biāo)記的穩(wěn)定性，減少了非特異性結(jié)合。其不但能夠評(píng)價(jià)肝臟的形態(tài)和功能，有助于肝病的早期診斷，而且對(duì)研究體內(nèi)物質(zhì)代謝、肝臟的生理學(xué)和病生理學(xué)也有重要價(jià)值。目前日本已有GSA藥盒應(yīng)用于臨床，但在歐美和中國(guó)尚未開展此技術(shù)。國(guó)內(nèi)華西醫(yī)科大學(xué)等單位也曾嘗試對(duì)GSA的合成。我國(guó)是肝炎疾病高發(fā)地區(qū)，特別是肝硬化繼發(fā)肝癌患者眾多，嚴(yán)重影響國(guó)民健康與生活質(zhì)量，其重要性已經(jīng)突現(xiàn)。日本已經(jīng)利用ASGPR顯像劑為核醫(yī)學(xué)肝臟SPECT顯像建立了三維肝臟模型，該顯像技術(shù)可以真實(shí)、數(shù)字化地反映肝臟功能，這樣既可以對(duì)肝硬化患者術(shù)前肝功能進(jìn)行正確的評(píng)估，幫助預(yù)測(cè)手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)、制定治療方案，降低肝臟手術(shù)的圍手術(shù)期死亡率。該項(xiàng)研究在我國(guó)尚屬空白，主要原因是缺乏可供核醫(yī)學(xué)科顯像用的ASGPR顯像劑，特別是缺乏可供臨床使用、使用簡(jiǎn)便、易于推廣的ASGPR顯像劑凍干配套藥盒?；谝陨峡紤]，發(fā)明人提出一種制備99mTc-GSA的一步法凍干配套藥盒。初步研究表明，該藥盒標(biāo)記簡(jiǎn)單、操作方法簡(jiǎn)便、標(biāo)記率高、成本低，并且能使制備的配合物同樣具有良好的生物性能，有望在臨床上得以推廣應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的首要目的在于提供一種制備99mTc-GSA的一步法凍干配套藥盒，使其具有標(biāo)記簡(jiǎn)單、標(biāo)記率高和成本低的特點(diǎn)，并且能使制備的配合物同樣具有良好的生物性能。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)提供一種用于制備"mTc-GSA的藥盒，其中的還原劑GSA配體輔劑的重量比為0.010.2:28:0.05~2;所述還原劑為將""^7+(99，(:04—)還原為99mTc5+的常規(guī)化學(xué)試劑。優(yōu)選提供一種上述藥盒，其中還原劑用量為0.010.2mg;GSA配體的含量為28mg;輔劑含量為0.05~2mg。所述還原劑優(yōu)選SnClr2H20。所述的輔劑優(yōu)選酒石酸鉀鈉。所述藥盒優(yōu)選按照以下方法制備得到1)將GSA配體溶于0.2mol/LpH3.5醋酸-醋酸鈉緩沖液中；然后在其中加入含有還原劑的鹽酸溶液，混合均勻，使溶液中還原劑比配體的重量為1:10訓(xùn)，并控制溶液pH在2.5~4.0之間;2)按照輔劑比配體為1:1160的重量比，在步驟1)得到的溶液中加入輔劑，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保證還原劑不被氧化；3)將步驟2)得到的溶液無菌過濾后，分裝于容器中，經(jīng)冷凍干燥后，加塞密封，即得到所述用于制備99mTc-GSA的凍干藥盒。本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述的藥盒的制備方法，包括以下步驟1)將GSA配體溶于緩沖液中，然后在其中加入含有還原劑的鹽酸溶液，混合均勻，使溶液中還原劑比配體的重量為1:10~800，并控制溶液pH在2.54.0之間；2)按照輔劑比配體為1:1160的重量比，在步驟1)得到的溶液中加入輔劑，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保證還原劑不被氧化；3)將步驟2)制備的溶液無菌過濾后，分裝于容器中，經(jīng)冷凍干燥后，加塞密封，即得到所述用于制備"mTc-GSA的凍干藥盒。步驟1)所述的緩沖液優(yōu)選0.2mol/LpH3.5醋酸-醋酸鈉緩沖液。步驟O所述的還原劑優(yōu)選SnClr2H20。步驟2)所述的輔劑優(yōu)選酒石酸鉀鈉。步驟3)所述分裝的容器優(yōu)選管制抗生素瓶。上述藥盒制備方法用到的原料中，GSA配體可以按照現(xiàn)有技術(shù)的方法合成，比如，專利文獻(xiàn)EP0273452A2就公開了一種合成GSA的方法。原料中的緩沖液、鹽酸、還原劑和輔劑等試劑均可以從市場(chǎng)購得。本發(fā)明所述藥盒的使用方法將從醫(yī)用99Mo-99mTc發(fā)生器中淋洗獲得的991"化04-淋洗液加入上述凍干藥盒中，搖勻后室溫反應(yīng)530分鐘，得到產(chǎn)物即為锝-99m標(biāo)記的GSA配合物。本發(fā)明所提供的制備锝-99m-GSA的藥盒具有以下有益效果1.使用方法簡(jiǎn)單，更加適合臨床應(yīng)用與現(xiàn)有的常規(guī)制備方法相比，使用本發(fā)明的藥盒制備锝-99m-GSA毫無疑問是更加簡(jiǎn)便的。使用本發(fā)明的藥盒只需一個(gè)簡(jiǎn)單的歩驟即可制備出臨床所用的锝-99m-GSA，而如果采用常規(guī)的锝-99m-GSA的制備方法制備，不僅歩驟煩瑣、制備條件要求苛刻，而且對(duì)制備人員專業(yè)技術(shù)水平的要求相對(duì)較高，相應(yīng)的制備成本也就比較高。因此本發(fā)明的藥盒以其能夠簡(jiǎn)單快捷的制備锝-99m-GSA的特點(diǎn)，更加適合臨床應(yīng)用。2.標(biāo)記率高，制備得到的锝-99m-GSA純度高本發(fā)明的藥盒在制備锝-99m-GSA方面具有很高的標(biāo)記率，通過層析鑒定計(jì)算得到的，本發(fā)明實(shí)施例1藥盒標(biāo)記的配合物的標(biāo)記率見下表1:表1.99mTc-GSA的層析鑒定條件與結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>*ITLC-SG:快速硅膠層析紙；ACD:0.068mol/L檸檬酸鹽和0.074mol/L葡萄糖的混合溶液(pH=5.0)。由表1可見，利用三種層析體系中99mTc-GSA與其它放射性物質(zhì)Rf值的差異，可以有效地將99mTc-GSA與其它放射性物質(zhì)分開并計(jì)算其標(biāo)記率。結(jié)果表明本發(fā)明藥盒在加入"ntCV淋洗液后反應(yīng)10分鐘，標(biāo)記率即可達(dá)到96%，高于現(xiàn)有技術(shù)濕法標(biāo)記時(shí)的標(biāo)記率(90%左右)。高標(biāo)記率可以使標(biāo)記配合物在使用時(shí)無需進(jìn)行分離純化，這樣大大簡(jiǎn)化了制備過程。另外，通過HPLC分析發(fā)現(xiàn)由本發(fā)明藥盒制備的99mTc-GSA配合物不僅標(biāo)記率高，而且放射化學(xué)純度大于99%("mTc-GSA的保留時(shí)間為12.50min)。高放射化學(xué)純度可以有效的提高受體顯像質(zhì)量，可以更加準(zhǔn)確的反映肝功能情況。3.本發(fā)明藥盒制備得到的锝-99m-GSA生物性能優(yōu)良經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，與現(xiàn)有技術(shù)的制備方法相比，本發(fā)明藥盒制備得到的锝-99m-GSA在小鼠肝臟中也同樣有很高的攝取和很好的滯留，且具有較高的靶/非靶比值，生物性能優(yōu)良，完全可以滿足用作肝細(xì)胞受體顯像劑的要求。具體實(shí)施例方式以下通過具體的制備例和實(shí)施例可使本發(fā)明得到更清楚地說明、制備75支GSA凍干藥盒1)將225mgGSA配體溶于37.5mLpH3.5醋酸鈉-醋酸緩沖液中，然后加入0.4mL3.8mg/mL的SnCl2.2H20鹽酸溶液(1mol/L);將溶液混合均勻，控制其pH在3.03.5之間；2)在步驟1)得到的溶液中加入酒石酸鉀鈉75mg，然后用充氮二次水定容至75mL;3)將步驟2)制備的溶液無菌過濾后，分裝于75支管制抗生素瓶中，然后置于冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24小時(shí)，加塞密封，即得到本發(fā)明所述用于制備"，c-GSA的凍千藥盒。實(shí)施例2制備100支GSA凍干藥盒1)將200mgGSA配體溶于50mLpH3.5醋酸鈉-醋酸緩沖液中，然后加入1mL10mg/mL的SnClr2H20鹽酸溶液(1mol/L);將溶液混合均勻，控制其pH在2.5~3.0之間；2)在步驟l)得到的溶液中加入酒石酸鉀鈉200mg，然后用充氮二次水定容至100mL;3)將步驟2)制備的溶液無菌過濾后，分裝于IOO支管制抗生素瓶中，然后置于冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24小時(shí)，加塞密封，即得到本發(fā)明所述用于制備99mTc-GSA的凍干藥盒。、、、制備75支GSA凍干藥盒1)將600mgGSA配體溶于37.5mLpH3.5醋酸鈉-醋酸緩沖液中，然后加入0.2mL3.8mg/mL的SnCl2-2H20鹽酸溶液(1mol/L);將溶液混合均勻，控制其pH在3.54.0之間；2)在步驟1)得到的溶液中加入酒石酸鉀鈉3.75mg，然后用充氮二次水定容至75mL;3)將步驟2)制備的溶液無菌過濾后，分裝于75支管制抗生素瓶中，然后置于冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24小時(shí)，加塞密封，即得到本發(fā)明所述用于制備99mTc-GSA的凍干藥盒。實(shí)施例4制備150支GSA凍干藥盒1)將750mgGSA配體溶于75mLpH3.5醋酸鈉-醋酸緩沖液中，然后加入0.4mL3.8mg/mL的SnClr2H20鹽酸溶液(1mol/L);將溶液混合均勻，控制其pH在3.03.5之間;2)在步驟l)得到的溶液中加入酒石酸鉀鈉7.5mg，然后用充氮二次水定容至150mL;3)將步驟2)制備的溶液無菌過濾后，分裝于150支管制抗生素瓶中，然后置于冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24小時(shí)，加塞密封，即得到本發(fā)明所述用于制備"，c-GSA的凍干藥盒。實(shí)施例5制備120支GSA凍干藥盒1)將720mgGSA配體溶于60mLpH3.5醋酸鈉-醋酸緩沖液中，然后加入0.6mL3.8mg/mL的SnCl2.2H20鹽酸溶液(1mol/L);將溶液混合均勻，控制其pH在3.03.5之間；2)在步驟l)得到的溶液中加入酒石酸鉀鈉9mg，然后用充氮二次水定容至120mL;3)將步驟2)制備的溶液無菌過濾后，分裝于120支管制抗生素瓶中，然后置于冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24小時(shí)，加塞密封，即得到本發(fā)明所述用于制備99mTc-GSA的凍干藥盒。應(yīng)用實(shí)施例利用實(shí)施例1制備的藥盒制備"mTc-GSA將約18.5~185兆貝可(扁q)從醫(yī)用99Mo-99mTc發(fā)生器獲得的"，c(V淋洗液加入到實(shí)施例1制備的GSA藥盒中，混勻后室溫反應(yīng)10分鐘，即得到所需的"，c-GSA配合物。對(duì)上述用本發(fā)明藥盒制備得到的99mTc-GSA的性能測(cè)定描述如下1.層析鑒定見前述表l。2.體外穩(wěn)定性測(cè)定分別將上述制得的99mTc-GSA溶液在室溫下放置不同時(shí)間(l、2、3、4、5和6小時(shí))，然后進(jìn)行點(diǎn)樣層析分析，計(jì)算放射化學(xué)純度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明99mTc-GSA在室溫下可穩(wěn)定存在6小時(shí)以上，其外觀和放射化學(xué)純度均無明顯變化。3.正常小鼠體內(nèi)生物分布。將上述制備好的放射化學(xué)純度大于95%的99mTc-GSA溶液，給正常昆明小鼠(1822g)經(jīng)尾靜脈注射0.1mL，1pg(0.37MBq)的劑量，5、30和120分鐘后斷頭處死。取出心、肝、肺、腎、肌肉、骨、血等組織，稱量并在锝分析儀內(nèi)測(cè)其放射性計(jì)數(shù)。計(jì)算各單位質(zhì)量組織的攝取劑量占總注射劑量的百分?jǐn)?shù)(%ID/g)，結(jié)果見表2。表2.99mToGSA在正常小鼠單位質(zhì)量組織劑量分布(。/。ID/g士SD,n=3)組織5min30min120min<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>生物分布數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，99mTc-GSA在正常小鼠肝臟中有較高的初始攝取(84.14±6.70%ID/g)，并在肝臟中有一定的保留，主要通過肝膽消化系統(tǒng)代謝。在30min時(shí)，肝臟攝取仍大于70%ID/g。其在血中清除較快，骨、肌肉本底均較低。在30min時(shí)，肝/腎、肝/脾比分別為5.6和14.4，有較高的靶/非靶比，腹腔內(nèi)肝臟附近其它臟器的攝取均較低，有利于肝顯像時(shí)得到清晰的圖像。4.正常小鼠體內(nèi)飽和及抑制實(shí)驗(yàn)將上述制備好的放射化學(xué)純度大于95%的99mTc-GSA溶液，高劑量組從正常昆明小鼠(1822g)尾靜脈注射0.1mL，200|ig(0.37MBq)的劑量；抑制組從正常昆明小鼠(1822g)先尾靜脈注射O.lmL，200)igGSA，5分鐘后注射所述制備好的99mTc-GSA0.1mL，1pg(0.37MBq)的劑量。分別在5、30和120分鐘后斷頭處死。取出心、肝、肺、腎、肌肉、骨、血等組織，稱量并在锝分析儀內(nèi)測(cè)其放射性計(jì)數(shù)。計(jì)算各單位質(zhì)量組織的攝取劑量占總注射劑量的百分?jǐn)?shù)(%ID/g)，結(jié)果見表3。表3.高劑量組和抑制組"mTc-GSA在正常小鼠單位質(zhì)量組織劑量分布_(%ID/g±SD，n=3)_<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由表3可知，高劑量組肝攝取明顯降低。在30min時(shí)，高劑量組肝攝取僅有31.89士2.38。/。ID/g;而腎攝取明顯增高，達(dá)到70.31±12.28%ID/g;同時(shí)血清除減慢。證實(shí)了作為受體顯像劑，"mTc-GSA在肝的攝取具有飽和性。抑制組的結(jié)果表明，在初始階段，抑制效果較為明顯，與低劑量組相比30min時(shí)肝攝取降低了27.6%。說明通過預(yù)注射未標(biāo)記的GSA，可抑制"mTc-GSA在肝的攝取。上述各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)足以證明，本發(fā)明所述藥盒制備得到的99mTc-GSA具有優(yōu)良的生物性能，完全能夠滿足作為肝細(xì)胞受體顯像劑的條件，進(jìn)而說明本發(fā)明所述藥盒可以在臨床上推廣應(yīng)用。權(quán)利要求1.一種用于制備99mTc-GSA的藥盒，其特征在于其中的還原劑∶GSA配體∶輔劑的重量比為0.01～0.2∶2～8∶0.05～2；所述還原劑為將99mTc7+還原為99mTc5+的常規(guī)化學(xué)試劑。2.權(quán)利要求1所述的用于制備99mTc-GSA的藥盒，其特征在于其中還原劑用量為0.010.2mg;GSA配體的含量為2~8mg;輔劑含量為0.05-2mg。3.權(quán)利要求l或2所述的任一用于制備"mTc-GSA的藥盒，其特征在于所述的還原劑為SnCl2.2H20。4.權(quán)利要求1或2所述的任一用于制備99mTc-GSA的藥盒，其特征在于所述的輔劑為酒石酸鉀鈉。5.權(quán)利要求1所述的用于制備""^c-GSA的藥盒，其特征在于它是按照以下方法制備得到的1)將GSA配體溶于0.2mol/LpH3.5醋酸-醋酸鈉緩沖液中；然后在其中加入含有還原劑的鹽酸溶液，混合均勻，使溶液中還原劑比配體的重量為1:10廳，并控制溶液pH在2.54.0之間；2)按照輔劑比配體為1:1~160的重量比，在步驟1)得到的溶液中加入輔劑，然后用充氮二次水定容；3)將歩驟2)得到的溶液無菌過濾后，分裝于容器中，經(jīng)冷凍干燥后，加塞密封，即得到所述用于制備99mTc-GSA的凍干藥盒。6.—種權(quán)利要求l所述制備"mTc-GSA的藥盒的制備方法，包括以下步驟1)將GSA配體溶于緩沖液中，然后在其中加入含有還原劑的鹽酸溶液，混合均勻，使溶液中還原劑比配體的重量為1:10800，并控制溶液pH在2.5~4.0之間；2)按照輔劑比配體為1:1~160的重量比，在步驟1)得到的溶液中加入輔劑，然后用充氮二次水定容；3)將步驟2)制備的溶液無菌過濾后，分裝于容器中，經(jīng)冷凍干燥后，加塞密封，即得到所述用于制備99mTc-GSA的凍干藥盒。7.權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的緩沖液為0.2mol/LpH3.5醋酸-醋酸鈉緩沖液。8.權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于步驟1)所述的還原劑為SnCl2-2H20。9.權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于步驟2)所述的輔劑為酒石酸鉀鈉。10.權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于步驟3)所述分裝的容器為管制抗生素并瓦。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于制備^99mTc-GSA的藥盒，所述藥盒中的還原劑∶GSA配體∶輔劑的重量比為0.01～0.2∶2～8∶0.05～2；所述還原劑為將^99mTc⁷⁺(^99mTcO₄^-)還原為^99mTc⁵⁺的常規(guī)化學(xué)試劑。本發(fā)明還涉及該藥盒的制備方法。本發(fā)明所述的藥盒在制備^99mTc-GSA的方面具有方法簡(jiǎn)便、標(biāo)記率高、制備得到的^99mTc-GSA生物性能良好及使用成本低等優(yōu)點(diǎn)，有利于臨床廣泛應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K51/08GK101219226SQ20081005722公開日2008年7月16日申請(qǐng)日期2008年1月30日優(yōu)先權(quán)日2008年1月30日發(fā)明者唐志剛,張現(xiàn)忠,楊文江,王學(xué)斌申請(qǐng)人:北京師范大學(xué)