專利名稱：：含有葒草素和異葒草素的組合物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含有葒草素和異葒草素的組合物制劑及其制備方法，屬于中藥制藥的
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：冠心病心絞痛是指由于冠狀動(dòng)脈硬化或痙攣導(dǎo)致心肌缺血、缺氧所引起的心絞痛，約占心絞痛患者的90%。它屬于人類重大疾病之一，其死亡率一直是重大疾病之首。冠心病心絞痛以前多發(fā)于中老年患者，隨著社會(huì)的發(fā)展，生活水平的提高，其發(fā)病年齡趨于年輕化。因此，冠心病的發(fā)病率趨向提高之勢(shì)，防治任務(wù)十分沉重，已引起國(guó)內(nèi)外關(guān)注。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)冠心病的診斷和防治也取得了一些進(jìn)展，藥物治療方面，在擴(kuò)張冠脈的基礎(chǔ)上(硝酸酯、亞硝酸酯類)，出現(xiàn)了鈣離子拮抗劑、P-受體阻滯劑、溶栓藥物的應(yīng)用，為治療冠心病心絞痛提供了多種手段。然而臨床實(shí)踐表明，單純西藥治療只治標(biāo)不治本，尤其是藥物的副作用，使患者難以接受和長(zhǎng)期服用。當(dāng)代人類回歸大自然的愿望日益強(qiáng)烈，普遍希望接受天然無(wú)公害的中藥治療，從而為中醫(yī)藥的發(fā)展提供了良好的契機(jī)。冠心病心絞痛在中醫(yī)中稱之為胸痹心痛，開(kāi)發(fā)一種高效、低毒、質(zhì)量穩(wěn)定、劑型先進(jìn)的治療冠心病心絞痛的純中藥制劑是本發(fā)明的目的。冠心病心絞痛病情來(lái)勢(shì)兇猛，對(duì)病人身心造成極大的傷害，因此，臨床上常常需要一種能夠迅速緩解癥狀、解除病人痛苦、起效迅速、效果明顯的藥物。中國(guó)專利02128066.5報(bào)道了葒草l-50、燈盞細(xì)辛50-0制作而成的一種中藥制劑，該制劑的制備采用以下工藝葒草、燈盞細(xì)辛水煮、醇沉處理，然后用乙酸乙酯提取，正丁醇提取，聚酰胺柱分離的方法獲得提取物。該工藝中將葒草和燈盞細(xì)辛共同提取，燈盞細(xì)辛在其中也采用乙酸乙酯提取和正丁醇提取，故造成了藥物有效成分的損失。在專利號(hào)200610051009.0中，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足以及工藝的優(yōu)化和改進(jìn)，本發(fā)明人將葒草和燈盞細(xì)辛分別進(jìn)行水煎煮提取，葒草提取后用乙酸乙酯、正丁醇以及聚酰胺柱進(jìn)行分離純化，而燈盞細(xì)辛水煎煮后利用黃酮類化合物在酸性條件下析出沉淀，不溶于水，在中性和弱堿性條件下溶解的性質(zhì)純化精制。該工藝較好的保留了藥效成分，并簡(jiǎn)化了操作步驟，但是本發(fā)明人對(duì)工藝優(yōu)化和改進(jìn)的過(guò)程中，還發(fā)現(xiàn)將葒草采用醇、水結(jié)合提取，燈盞細(xì)辛采用醇提取，然后采用不同的步驟進(jìn)行純化精制，得到的提取物有效成分更高，雜質(zhì)含量更低，藥效作用良好，更有利于注射制劑的制備。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種含有葒草素和異葒草素的組合物制劑及其制備方法，該制劑以注射制劑為主；本發(fā)明對(duì)本方的臨床應(yīng)用、組方及藥材資源進(jìn)行了調(diào)查研究，利用現(xiàn)代技術(shù)對(duì)制劑中藥材的質(zhì)量、制劑工藝、有效成分含量等進(jìn)行了研究，具有工藝先進(jìn)，臨床應(yīng)用安全有效，質(zhì)量可控，生物利用度高，療效確切，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明是這樣構(gòu)成的按照重量份計(jì)算，上述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑是由中藥原料葒草1IO份和燈盞細(xì)辛110份經(jīng)提取制備而成水針劑、輸液劑、粉針劑、凍干劑及其它藥劑學(xué)上可以接受的劑型。優(yōu)選的配比為葒草3-8份燈盞細(xì)辛1-5份最優(yōu)選的配比為葒草5份燈盞細(xì)辛1份本發(fā)明的中藥制劑，是葒草和燈盞細(xì)辛分別提取的步驟制備的，所述步驟進(jìn)一步包括將分別提取后得到的提取物合并，以該合并的提取物為藥物活性成分，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成制劑。所述分別提取，步驟如下步驟1)葒草乙醇回流提取，濾過(guò)，回收乙醇得醇提取液備用；藥渣加水煎煮，濾過(guò)，濾液濃縮，醇沉，濾過(guò)，回收乙醇，濾液與醇提取液合并，調(diào)ra值，用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)燈盞細(xì)辛乙醇回流提取，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，加水，靜置，調(diào)PH，棄上清液，沉淀用水洗，干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物。以上步驟進(jìn)一步包括將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物合并，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)，制成所述中藥制劑的步驟。本發(fā)明的組合物制劑，制備方法為步驟1)葒草乙醇回流提取，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，得醇提取液備用；藥渣加水煎煮，濾過(guò)，濃縮，醇沉，靜置，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，濾液與醇提液合并，用鹽酸調(diào)PH，然后用水飽和的正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)燈盞細(xì)辛乙醇回流提取，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，加水，靜置，用鹽酸調(diào)PH，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗，干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)上述提取物，加注射用水，攪拌使溶，再加入甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水，混勻，用微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，滅菌，即得注射液。優(yōu)選的步驟l)為葒草加8-12倍50-80%乙醇浸泡10-14小時(shí)，回流提取1-3次，每次0.5-2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至50°C時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加8-12倍水煎煮2-4次，每次1_2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)50-75%，攪拌均勻，靜置10-24小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)ra卜4.5，用1/4-1倍量水飽和的正丁醇提取2-6次，合并正丁醇液，用1/16-1/2倍量水洗1-3次，減壓回收正丁醇，殘留物加60-90%乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為10-1000g，①4-10cm，徑高比1:2-10，吸附流速0.5_4.OBV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；優(yōu)選的步驟2)為燈盞細(xì)辛加6-10倍50-70%乙醇浸泡10_14小時(shí)，回流提取2-4次，每次0.5-2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水，不斷攪拌，靜置1024小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)PH14.5，55t:保溫210小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH25，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；進(jìn)一步包括步驟3)，步驟3)為將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提5取物合并，加注射用水，攪拌使溶，再加入甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水，混勻，用微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，滅菌，即得注射液。更優(yōu)選的步驟1)為葒草加10倍量70%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至50°C時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)K13，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80%乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為500g，①8cm，徑高比1:6，吸附流速1.5BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)為燈盞細(xì)辛加8倍65%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水1000毫升，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)ra2，55t:保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH34，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)為，將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物合并，加1800毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)rae.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105。C下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。本發(fā)明的功能主治具有活血化瘀、通脈止痛功能。用于冠心病心絞痛心血瘀阻證，癥見(jiàn)胸悶、胸部剌痛，固定不移，心悸不寧，唇舌暗紫，脈細(xì)澀等冠心病心絞痛見(jiàn)上述證候者。應(yīng)用范圍本藥劑用于冠心病心絞痛心血瘀阻證，癥見(jiàn)胸部剌痛、胸悶，固定不移，心悸不寧，唇舌暗紫，脈細(xì)澀等冠心病心絞痛見(jiàn)上述證候者。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明針對(duì)藥材的理化性質(zhì)，對(duì)葒草和燈盞細(xì)辛采用了分別提取的方法。將葒草采用醇、水相結(jié)合的粗提取，醇沉、正丁醇、聚酰胺多級(jí)分離精制的方法來(lái)制備得到葒草素和異葒草素提取物；將燈盞細(xì)辛采用醇提取，不同Kl分離純化的方法制備得到燈盞細(xì)辛總黃酮提取物，具有工藝先進(jìn)，臨床應(yīng)用安全有效，質(zhì)量可控，生物利用度高，療效確切，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。為了使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明，以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)及實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明組合物制劑的組成、其制備方法及用途—、本發(fā)明工藝的選擇1、葒草提取工藝研究1.1提取溶劑的選擇分別稱取葒草藥材50g，采用加水煎煮、乙醇回流、乙醇回流后藥渣加水煎煮三種方法進(jìn)行提取，以提取液色澤、過(guò)濾難易程度、葒草素、異葒草素提取率以及總固體物收率為考察指標(biāo)，對(duì)提取溶劑進(jìn)行研究。表1葒草提取工藝表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用醇、水分提相結(jié)合的方法提取葒草藥材，提取液在色澤、含量、過(guò)濾難易等方面均取得良好效果。雖然單獨(dú)采用醇提的含量也較高，但考慮下階段的精制純化工藝，優(yōu)選醇、水結(jié)合。1.2醇提工藝研究a.提取次數(shù)考察樣品制備取葒草藥材50g，加70%乙醇加熱回流4次，每次1小時(shí)，分別收集每次的回流液，濾過(guò)。以葒草素和異葒草素總量提取率為指標(biāo)進(jìn)行考察表2提取次數(shù)_總固形物得率表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表中數(shù)據(jù)顯示，提取四次時(shí)，葒草中總固形物收率幾乎已經(jīng)無(wú)大變化，因此確定提取次數(shù)為1-3次，其中提取2次為最佳工藝，較經(jīng)濟(jì)合理。b.提取乙醇量的考察樣品制備取葒草50g，依下表?xiàng)l件加入不同的70X乙醇，加熱回流2次，每次l小時(shí)，濾過(guò)，收集濾液。結(jié)果如下表3提取量_總固形物得率表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>總固形物收率隨乙醇量的加大而增加，但到一定程度后沒(méi)有較大的增加，所以選擇乙醇的量為藥材的8-12倍，優(yōu)選加入量為10倍量。c.乙醇濃度的考察樣品制備取葒草50g，依下表?xiàng)l件加入不同濃度的乙醇，加熱回流2次，每次l小時(shí)，濾過(guò)，收集濾液。結(jié)果如下表4乙醇濃度_總固形物得率表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>總固形物收率隨乙醇濃度的加大而增加，但當(dāng)濃度增加到90%反而總收率下降，因此選擇乙醇濃度為50-80%，優(yōu)選為70%。另外，申請(qǐng)人在研究中發(fā)現(xiàn)，將葒草藥材提取之前浸泡10-14小時(shí)，其葒草素、異葒草素等的提取更為完全。故綜合上述結(jié)果，決定葒草藥材的醇提工藝為用50%_80%乙醇浸泡10-14小時(shí)，然后回流提取1-3次，每次8-12倍量、0.5-2小時(shí)。優(yōu)選為用70%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取2次，每次10倍量、1小時(shí)。1.3水提工藝研究將乙醇回流提取后的藥渣進(jìn)行水煎煮提取，參考本發(fā)明人在專利號(hào)200610051009.0中葒草的水煎煮工藝，以葒草素、異葒草素、總固休物收率為指標(biāo)，考察工藝的穩(wěn)定性及合理性。a.提取次數(shù)考察將藥渣加入IO倍量水，按下表次數(shù)進(jìn)行提取，每次1小時(shí)，以總固形物、葒草素、異葒草素提取率為指標(biāo)，考察提取次數(shù)對(duì)藥材有效成分提取率的影響。表5提取次數(shù)_提取率評(píng)價(jià)表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果表明，提取率隨提取次數(shù)的增加而增加，但到一定程度后沒(méi)有較大的增加，所以選擇提取2-4次，優(yōu)選提取3次，較經(jīng)濟(jì)合理。b.加水量考察乙醇提取后的藥渣，按下表加水量分別提取3次，每次1小時(shí)，以總固形物提取率為指標(biāo)，考察加水量對(duì)藥材有效成分提取率的影響。表6加水量_總固形物提取率評(píng)價(jià)表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)果表明，提取率隨加水量的加大而增加，但到一定程度后沒(méi)有較大的增加，所以選擇加水量為8-12倍，優(yōu)選加入量為10倍量，經(jīng)濟(jì)合理。2、葒草精制工藝研究在工藝改進(jìn)過(guò)程中，本發(fā)明人將葒草的粗提取物采用乙酸乙酯萃取，正丁醇萃取，最后過(guò)聚酰胺柱的方式除雜，其操作繁瑣，同時(shí)對(duì)半成品的相對(duì)密度、pH值等皆有要求，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)反復(fù)的試驗(yàn)以及對(duì)文獻(xiàn)的參考，去除乙酸乙酯萃取的步驟，試驗(yàn)結(jié)果表明，有效成分的轉(zhuǎn)移率、藥液的色澤、澄明度并無(wú)影響，同時(shí)由于工藝簡(jiǎn)化，節(jié)約了生產(chǎn)時(shí)間以及生產(chǎn)成本，適合大生產(chǎn)的要求。以精制前粗提取物中葒草素為100%計(jì)，結(jié)果如下表7不同純化條件結(jié)果表工藝<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用醋酸乙酯提取的樣品，色素較重，后續(xù)工藝處理中測(cè)定有效成分的損失率較大，而乙醇回流提取燈盞細(xì)辛藥材，提取液在色澤、含量、澄明度等方面均取得良好效果。故選擇乙醇為提取溶劑。3.2醇提工藝研究a.提取次數(shù)考察樣品制備取燈盞細(xì)辛藥材10g，加60%乙醇加熱回流5次，每次1小時(shí)，分別收集每次的回流液，濾過(guò)。表9提取次數(shù)_野黃吝甙得率表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表中數(shù)據(jù)顯示，提取四次時(shí)，燈盞細(xì)辛中野黃芩甙收率幾乎已經(jīng)無(wú)大變化，因此確定提取次數(shù)為2-4次，其中提取3次為最佳工藝，較經(jīng)濟(jì)合理。b.提取乙醇量的考察樣品制備取燈盞細(xì)辛10g，依下表?xiàng)l件加入不同量的65%乙醇，加熱回流3次，每次l小時(shí)，濾過(guò)，收集濾液。結(jié)果如下表10提取量_總固形物得率表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>野黃芩甙收率隨乙醇量的加大而增加，但到一定程度后沒(méi)有較大的增加，所以選擇乙醇的量為藥材的6-10倍，優(yōu)選加入量為8倍量。c.乙醇濃度的考察樣品制備取燈盞細(xì)辛10g，依下表?xiàng)l件加入不同濃度8倍量的乙醇，加熱回流3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，收集濾液。結(jié)果如下表11乙醇濃度_總固形物得率表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>野黃芩甙收率隨乙醇濃度的加大而增加，但當(dāng)濃度增加到70%后沒(méi)有較大的增加，因此選擇乙醇濃度為50-70%，優(yōu)選為65%。另外，申請(qǐng)人在研究中發(fā)現(xiàn)，將燈盞細(xì)辛藥材提取之前浸泡10-14小時(shí)，其野黃芩甙等有效成分的提取更為完全。故綜合上述結(jié)果，決定燈盞細(xì)辛藥材的醇提工藝為用50%_70%乙醇浸泡10-14小時(shí)，然后回流提取2-4次，每次8-10倍量、0.5-2小時(shí)。優(yōu)選為用65%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取3次，每次8倍量、1小時(shí)。4、燈盞細(xì)辛提取物精制工藝研究本發(fā)明人根據(jù)工藝研究的積累以及對(duì)大量文獻(xiàn)的考察，將燈盞細(xì)辛的醇提取物采用1%蛋白干溶液除雜，乙酸乙酯萃取，水溶液調(diào)節(jié)酸堿沉降除雜等方式，來(lái)考察提取物的純化精制工藝。以醇提取物精制前為100%計(jì)，結(jié)果如下表12不同溶劑純化工藝表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>以上試驗(yàn)表明，利用黃酮類化合物在酸性條件下析出沉淀，不溶于水，在中性和弱堿性條件下溶解的性質(zhì)，采用加水溶解，自然沉降，調(diào)節(jié)酸堿除雜的方式純化精制燈盞細(xì)辛提取物，是非常合理的，而有機(jī)溶劑的殘留會(huì)為后續(xù)注射制劑的制備帶來(lái)隱患，故酸堿調(diào)節(jié)的方式不僅簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝，降低成本，而且操作簡(jiǎn)便，是適合大生產(chǎn)的精制方式。二、葒草和燈盞細(xì)辛組合物制劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌缺血的作用2.1藥物香丹注射液，批號(hào)040706華西醫(yī)科大學(xué)制藥廠生產(chǎn)，為陽(yáng)性對(duì)照藥1;注射用復(fù)方葒草，按照專利號(hào)200610051009.0所述的方法制備，為陽(yáng)性對(duì)照藥2;按本發(fā)明制備方法制成的復(fù)方葒草注射液，為本發(fā)明藥物。動(dòng)物SD雄性大鼠。2.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果取SD雄性大鼠，隨機(jī)分為4組，按照下表劑量分組給藥。試驗(yàn)前動(dòng)物麻醉、固定，記錄正常心電圖。打開(kāi)胸腔前接上人工呼吸機(jī)，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈降支后，迅速關(guān)閉胸腔，恢復(fù)呼吸，記錄心電圖，有明顯ST段抬高者為手術(shù)成功征象(剔除未出現(xiàn)明顯心肌梗死心電圖波形者)。各組分別股靜脈給藥6.0g/kg，生理鹽水對(duì)照組給同體積生理鹽水。記錄結(jié)扎喉10、30、120min各時(shí)間點(diǎn)心電圖，計(jì)算各時(shí)間ST段上下偏移總mv數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，結(jié)果見(jiàn)表13。試驗(yàn)結(jié)束后，立即取出心臟，用生理鹽水洗余血，剪心房及各大血管、筋膜、心耳，稱取心室重量，然后將心肌切成等厚度的5片，置于37°C0.5%N-BT染色體液中染色10min，取出剪去被染色的非梗塞心肌，稱重未染色的梗塞心肌，按式子心肌缺血百分比=缺血區(qū)重量+心室重量X100X，計(jì)算心肌缺血區(qū)百分率，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，結(jié)果見(jiàn)表14。表13對(duì)大鼠結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支后ECG的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與N.S對(duì)照組比較*P<0.05**P<0.01表14對(duì)大鼠急性心肌梗塞范圍的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與N.S對(duì)照組比較*P<0.05**P<0.01試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明復(fù)方葒草注射液與已有注射制劑及申請(qǐng)專利的工藝比較，可以明顯提高對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌缺血的作用效果，且相對(duì)已有來(lái)說(shuō)療效相當(dāng)，相對(duì)于申請(qǐng)人之前的研究工藝，本發(fā)明注射制劑的療效更好，生物利用度更高。2.3對(duì)小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)取小鼠按表15分組及劑量給藥，各給藥組給藥0.lml/只，對(duì)照組給等量N.S，10min后，放入預(yù)先放15g鈉石灰的廣口瓶?jī)?nèi)，記錄小鼠死亡時(shí)間，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見(jiàn)表15。表15對(duì)小鼠常壓耐缺氧時(shí)間的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與N.S對(duì)照組比較*P<0.05**P<0.01試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明葒草和燈盞細(xì)辛組合物制劑有明顯耐缺氧作用，與生理鹽水組比較均有顯著性差異C"P〈0.01)，與陽(yáng)性對(duì)照1比較療效相當(dāng)，優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照2。以上試驗(yàn)表明，本發(fā)明葒草和燈盞細(xì)辛組合物制劑能明顯改善缺血性心肌心電圖，對(duì)大鼠急性心肌梗塞有明顯保護(hù)作用，同時(shí)對(duì)小鼠常壓下的耐缺氧作用較為明顯。說(shuō)明本發(fā)明工藝所得到的產(chǎn)品療效確切，臨床應(yīng)用安全有效，穩(wěn)定性好，質(zhì)量可控，生物利用度高，工藝先進(jìn)合理。具體實(shí)施例方式需要說(shuō)明的是，本制備實(shí)施例僅僅是介紹一種制備提取物的方法，是為了闡釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例l:注射液的制備原料葒草7500g、燈盞細(xì)辛1500g制備方法步驟1)為葒草加10倍量70%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至50°C時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)K13，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80%乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為500g，①8cm，徑高比1:6，吸附流速1.5BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)為燈盞細(xì)辛加8倍65%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水1000毫升，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)ra2，55t:保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH34，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)為，將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物合并，加1800毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)rae.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105。C下滅菌60分鐘，即得復(fù)方葒草注射液1000支。實(shí)施例2:輸液的制備原料葒草1000g、燈盞細(xì)辛5000g制備方法步驟1)為葒草加8倍50%乙醇浸泡10小時(shí)，回流提取0.5小時(shí)，提取液濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加8倍水煎煮2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)50%，攪拌均勻，靜置10小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)rai，用1/4倍量水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇液，用1/16倍量水洗，減壓回收正丁醇，殘留物加60%乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為100g，①4cm，徑高比1:2，吸附流速0.5BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)為燈盞細(xì)辛加10倍70%乙醇浸泡14小時(shí)，回流提取4次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水，不斷攪拌，靜置24小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)ra4.5，55t:保溫10小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至ra5，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)為將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物合并，加注射用水，攪拌使溶，再加入甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)PH6.8-7.8，補(bǔ)加注射用水，用常規(guī)方法制成輸液制劑。實(shí)施例3:凍干粉針劑的制備原料葒草3000g、燈盞細(xì)辛1000g制備方法步驟1)為葒草加12倍80%乙醇浸泡14小時(shí)，回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加12倍水煎煮4次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至50°C時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)75%，攪拌均勻，靜置24小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)5，用l倍量水飽和的正丁醇提取6次，合并正丁醇液，用1/2倍量水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加90X乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為1000g，①10cm，徑高比1:IO，吸附流速4.OBV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)為燈盞細(xì)辛加6倍50%乙醇浸泡10小時(shí)，回流提取2次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水，不斷攪拌，靜置io小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)rai，55t:保溫2小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至ra2，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)為將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物混合，加注射用水，攪拌使溶，用常規(guī)方法制備成凍干粉針劑。實(shí)施例4:粉針劑的制備原料葒草1000g、燈盞細(xì)辛100g制備方法步驟l)為葒草加9倍60%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取2次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加9倍水煎煮4次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)70%，攪拌均勻，靜置18小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)K12-4.5，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取3次，合并正丁醇液，用1/4倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加70%乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為400g，①6cm，徑高比1:40，吸附流速2.0BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)為燈盞細(xì)辛加9倍55%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取3次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水，不斷攪拌，靜置15小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)PH13，55t:保溫5小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH24，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)為將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物混合，加注射用水，攪拌使溶，用常規(guī)方法制備成粉針劑。實(shí)施例5:片劑的制備原料葒草100g、燈盞細(xì)辛1000g制備方法步驟1)為葒草加11倍75%乙醇浸泡10小時(shí)，回流提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加11倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至50°C時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)55%，攪拌均勻，靜置15小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)rai-3，用3/4倍量水飽和的正丁醇提取5次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗3次，減壓回收正丁醇，殘留物加85X乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為600g，①9cm，徑高比l:8，吸附流速3.OBV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)為燈盞細(xì)辛加7倍60%乙醇浸泡14小時(shí)，回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水，不斷攪拌，靜置18小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)PH24.5，55t:保溫8小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH35，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)為取葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物，混合均勻，加入輔料，制粒，壓片，即得。實(shí)施例6:取葒草4000g和燈盞細(xì)辛1000g，粉碎，采取上述實(shí)施例中任一方法得到葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物，再加入常規(guī)輔料制備成滴丸。實(shí)施例7:將上述實(shí)施例中任一方法得到的葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成丸劑。實(shí)施例8:將實(shí)施例1得到的葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成膠囊劑。實(shí)施例9:將實(shí)施例4得到的葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物混合，加入乙醇制軟材，制粒，干燥，包裝，得顆粒劑。權(quán)利要求一種含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于按照重量組分計(jì)算它是由中藥原料葒草1～10份和燈盞細(xì)辛1～10份經(jīng)以下制備方法制備而成步驟1)葒草乙醇回流提取，濾過(guò)，回收乙醇得醇提取液備用；藥渣加水煎煮，濾過(guò)，濾液濃縮，醇沉，濾過(guò)，回收乙醇，濾液與醇提取液合并，調(diào)PH值，用正丁醇萃取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)燈盞細(xì)辛乙醇回流提取，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，加水，靜置，調(diào)PH，棄上清液，沉淀用水洗，干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物；步驟3)將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物合并，按照制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)，制成所述中藥制劑。2.如權(quán)利要求1所述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于生藥的重量配比為葒草3-8份燈盞細(xì)辛l-5份。3.如權(quán)利要求1所述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于生藥的重量配比為葒草5份燈盞細(xì)辛1份。4.如權(quán)利要求l-3任一所述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于其中所述步驟1)為葒草乙醇回流提取，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，得醇提取液備用；藥渣加水煎煮，濾過(guò)，濃縮，醇沉，靜置，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，濾液與醇提液合并，用鹽酸調(diào)PH，然后用水飽和的正丁醇提取，合并正丁醇液，用水洗，回收正丁醇，殘留物加乙醇溶解，上聚酰胺柱，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；所述步驟2)為燈盞細(xì)辛乙醇回流提取，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮，加水，靜置，用鹽酸調(diào)PH，保溫，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗，干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物。5.如權(quán)利要求4所述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于其中所述步驟1)為葒草加8-12倍50-80%乙醇浸泡10-14小時(shí)，回流提取1-3次，每次0.5-2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至50°C時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加8-12倍水煎煮2-4次，每次1_2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)50-75%，攪拌均勻，靜置10-24小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)ra卜4.5，用1/4-1倍量水飽和的正丁醇提取2-6次，合并正丁醇液，用1/16-1/2倍量水洗1-3次，減壓回收正丁醇，殘留物加60-90%乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為10-1000g，①4-10cm，徑高比1:2-10，吸附流速0.5_4.OBV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；所述步驟2)為燈盞細(xì)辛加6-10倍50-70%乙醇浸泡10-14小時(shí)，回流提取2_4次，每次O.5-2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水，不斷攪拌，靜置1024小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)PH14.5，55t:保溫210小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH25，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物。6.如權(quán)利要求5所述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于進(jìn)一步包括步驟3)為將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物合并，加注射用水，攪拌使溶，再加入甘油，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)rae.8-7.s，補(bǔ)加注射用水，混勻，用微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，滅菌，即得注射液。7.如根據(jù)權(quán)利要求5所述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于步驟1)為葒草加10倍量70%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至得至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，得醇提取液備用；藥渣加10倍水煎煮3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.05-1.07，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.04-1.06，與前述醇提取液合并，用鹽酸調(diào)ra3，用1/2倍量水飽和的正丁醇提取4次，合并正丁醇液，用1/8倍量水洗2次，減壓回收正丁醇，殘留物加80%乙醇2500ml溶解，上聚酰胺柱，柱參數(shù)為500g，①8cm，徑高比1:6，吸附流速1.5BV/h，收集流穿液和洗脫液，回收乙醇，殘留物真空干燥，得葒草素和異葒草素提取物；步驟2)為燈盞細(xì)辛加8倍65%乙醇浸泡12小時(shí)，回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濾液回收乙醇并減壓濃縮至5(TC時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.12，加水1000毫升，不斷攪拌，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液用鹽酸調(diào)ra2，55t:保溫6小時(shí)，傾棄上清液，抽濾，沉淀用水洗至PH34，真空干燥，得燈盞細(xì)辛總黃酮提取物。8.如權(quán)利要求6所述含有葒草素和異葒草素的組合物制劑，其特征在于其中所述步驟3)為將葒草素、異葒草素提取物和燈盞細(xì)辛總黃酮提取物合并，加1800毫升注射用水，攪拌使溶，再加入甘油適量，混勻，用飽和碳酸鈉調(diào)rae.8-7.8，補(bǔ)加注射用水至10000毫升，混勻，用0.45um和0.22um微孔濾膜濾過(guò)，濾液無(wú)菌灌裝，每支10ml，105t:下滅菌60分鐘，即得1000支注射液。全文摘要本發(fā)明涉及一種含有葒草素、異葒草素的組合物制劑及其制備方法，它是用葒草1-10份、燈盞細(xì)辛1-10份分別進(jìn)行提取，然后精制純化制備而成。其中葒草采取醇、水提取相結(jié)合的方法得到粗提取物，再經(jīng)過(guò)正丁醇萃取、聚酰胺除雜的方法精制而成葒草素、異葒草素提取物；燈盞細(xì)辛采取乙醇提取得到粗提取物，再經(jīng)過(guò)酸堿調(diào)節(jié)沉降精制而成燈盞細(xì)辛總黃酮提取物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明制備方法在有效降低藥物的不良反應(yīng)，提高療效的同時(shí)簡(jiǎn)化了生產(chǎn)工藝，降低成本，而且操作簡(jiǎn)便，使得到的產(chǎn)品臨床應(yīng)用安全有效，穩(wěn)定性好，生物利用度高，從而提高和保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。文檔編號(hào)A61K36/185GK101757129SQ200810069078公開(kāi)日2010年6月30日申請(qǐng)日期2008年12月26日優(yōu)先權(quán)日2008年12月26日發(fā)明者竇啟玲申請(qǐng)人:貴州益佰制藥股份有限公司