專利名稱：：五味子或其有關(guān)單體化合物在預(yù)防或治療脂肪肝中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種植物提取物或其有關(guān)單體化合物的一種新醫(yī)藥用途，尤其涉及五味子提取物或其有關(guān)單體化合物在預(yù)防或治療脂肪肝中的用途，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：五味子為木蘭科多年生落葉木質(zhì)藤本植物五味子Sciiis朋c/raah化e/isis(Turcz.)或華中五味子Schis朋craspAenantheraiehdet的成熟果實。前者習(xí)稱"北五味子"，主產(chǎn)于東北；后者習(xí)稱"南五味子"，主產(chǎn)于西南及長江流域以南。主含揮發(fā)油、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、維生素、糖及樹脂等。種子揮發(fā)油中的主要成分為五味子素，主要含有聯(lián)苯環(huán)辛烯類物質(zhì)，有五味子甲素，乙素，丙素，醇甲(五味子素)，醇乙以及酯甲，已，丙，丁，戊；還含有揮發(fā)油，主要為單萜類，倍半萜類，十一烷酮等。其它尚含有機(jī)酸，維生素A，維生素E及多糖等。迄今為止，所發(fā)現(xiàn)五味子的主要藥理功效如下1、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有鎮(zhèn)靜作用。2、保肝作用五味子醇提物及五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲、酯乙等對化學(xué)毒物引起的動物肝細(xì)胞損傷有明顯的保護(hù)作用，可抑制轉(zhuǎn)氨酶的釋放，使血中ALT活性降低。能明顯誘導(dǎo)小鼠和大鼠肝微粒體細(xì)胞色素P-450活性。增加肝臟解毒能力。3、擴(kuò)張血管作用。4、延緩衰老作用。5、具有祛痰和鎮(zhèn)咳作用。6、對淋巴細(xì)胞DNA合成有促進(jìn)作用，使淋巴母細(xì)胞生成增多，并促進(jìn)脾免疫功能。7、抗?jié)冏饔?。?lián)苯雙酯為合成的五味子丙素類似物，能維護(hù)肝細(xì)胞膜完整，減輕毒物對肝細(xì)胞的損害，有明顯降氨基轉(zhuǎn)移酶作用，并可改善肝炎之肝區(qū)痛、乏力、腹脹等主要癥狀。雙環(huán)醇(商品名百賽諾)為聯(lián)苯雙酯結(jié)構(gòu)類似藥物，其化學(xué)名稱為4，4'-二甲氧基-5，6，5'，6'-雙(亞甲二氧基)-2-羥甲基-2'-甲氧羰基聯(lián)。雙環(huán)醇對四氯化碳、D-氨基半乳糖胺、撲熱息痛引起的小鼠急性肝損傷的氨基轉(zhuǎn)移酶升高、小鼠免疫性肝炎的氨基轉(zhuǎn)移酶升高有降低作用，肝臟組織病理形態(tài)學(xué)損害有不同程度的減輕。體外試驗結(jié)果顯示對肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染人乙肝病毒的2.2.15細(xì)胞株具有抑制HBeAg、HBV-DNA、HBsAg分泌的作用。雙環(huán)醇可能通過調(diào)節(jié)機(jī)體某種信號機(jī)制，或調(diào)動機(jī)體特異性免疫功能發(fā)揮作用，誘導(dǎo)感染肝炎病毒的肝細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，以達(dá)到抑制病毒復(fù)制的效果，而對肝細(xì)胞凋亡則起到保護(hù)作用。目前，雙環(huán)醇臨床用于治療慢性乙肝、丙肝，其保肝及抗病毒作用己得到證實。迄今為止，尚未有五味子、聯(lián)苯雙酯和雙環(huán)醇具有降低脂肪肝模型動物肝臟甘油三酯和膽固醇功效的有關(guān)報道。臨床流行病學(xué)調(diào)査表明，隨著人們生活習(xí)慣與飲食結(jié)構(gòu)的改變，以及臨床B超技術(shù)的進(jìn)步與廣泛應(yīng)用，近年來脂肪肝的檢出率日益增多，發(fā)病率呈上升趨勢。脂肪肝是指由于各種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過多的病變，并在此基礎(chǔ)上引起肝臟炎癥反應(yīng)、纖維化、肝硬化，甚至癌變。一般而言，脂肪肝屬可逆性疾病，早期診斷并及時治療?？苫謴?fù)正常。正常人的肝內(nèi)總脂量，約占肝重的5%，內(nèi)含磷脂、甘油三酯、脂酸、膽固醇及膽固醇脂等。而患脂肪肝者，總脂量可達(dá)40%-50%，主要是甘油三酯及脂酸，而磷脂、膽固醇及膽固醇脂只少量增加。在某些地區(qū)，脂肪肝已成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。在中國，脂肪肝的發(fā)病率為8-10%，而北京市的發(fā)病率為26%，上海市為30%。在美國，脂肪肝的發(fā)病率為10-15%，在肥胖與糖尿病患者中脂肪肝的發(fā)病率為50%，在已知的易患因素中，依次為肥胖(69%)，高脂血癥(56%)、飲酒(44%)和糖尿病(17%)。目前，脂肪肝分酒精性和非酒精兩種類型，其中以非酒精性脂肪肝居多，在中國上海市，90%的脂肪肝病人為非酒精性脂肪肝。在酒精性脂肪肝患者中，只有少部分病人可能出現(xiàn)血脂增高。非酒精性脂肪肝，其原因比較復(fù)雜，包括肥胖、糖尿病、高血脂、藥物及遺傳因素等，還有40%左右是原因不明的脂肪肝。在非酒精性脂肪肝患者中，也只有部分人的血脂升高。顯而易見，血脂不高的脂肪肝患者服用降血脂藥，對治療脂肪肝沒有任何意義。脂肪肝患者即使伴有高血脂癥，也不能貿(mào)然使用降血脂藥。這是因為，多數(shù)降血脂藥可促使血液中的脂質(zhì)集中到肝臟進(jìn)行代謝，患了脂肪肝的肝臟原本就存在脂肪代謝障礙，對從血中突然來到的脂質(zhì)更加難于處理，只能將其再度堆積在肝臟內(nèi)，這無疑會加重脂肪肝。另外，醫(yī)生們還觀察到，長期濫用降血脂藥者可發(fā)生門靜脈炎、門靜脈周圍纖維化，甚至可促進(jìn)脂肪肝向肝硬化發(fā)展。到目前為止，尚無防治脂肪肝的有效藥物。一般常選用保護(hù)肝細(xì)胞、去脂藥物及抗氧化劑等，如維生素B、C、E、卵磷脂、熊去氧膽酸、水飛薊素、肌苷、輔酶A、還原型谷胱甘肽、?；撬?、肉毒堿乳清酸鹽、肝泰樂，以及某些降脂藥物等等。上述藥物雖然很多，但大多仍需要進(jìn)一步驗證其療效和安全性。因此，治療脂肪肝藥物的研發(fā)越來越受到人們的重視，然而到目前為止還沒有發(fā)現(xiàn)一種特異性的治療脂肪肝的藥物。目前那些對脂肪肝有治療作用的藥物多是降血脂藥，即通過降低血脂的作用達(dá)到治療脂肪肝的目的，這類藥物長期服用后會對肝功能產(chǎn)生傷害作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供中藥五味子及其有關(guān)單體化合物(五味子乙素、聯(lián)苯雙酯和雙環(huán)醇)的一種新用途，即這些化合物作為藥物在治療脂肪肝和脂質(zhì)代謝研究中的新用途。本發(fā)明人通過大量的試驗發(fā)現(xiàn)，中藥五味子提取物、五味子提取物中的單體化合物或五味子有關(guān)的人工合成的有關(guān)化合物，能夠降低脂肪肝模型動物肝臟的甘油三酯和總膽固醇含量，并且在迅速降低肝臟脂質(zhì)的同時，不影響模型動物的血脂。所述的中藥五味子提取物優(yōu)選為乙醇提取物，所述的五味子乙醇提取物可按照各種文獻(xiàn)所記載的方法制備得到，這些都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的技術(shù)，此外，五味子乙醇提取物也可通過各種商業(yè)途徑購買得到。作為參考，五味子乙醇提取物也可按照以下方法制備得到..取五味子500g，破碎，然后用8(m的乙醇5000ml分兩次提取，合并兩次提取液，過濾、水浴濃縮成250ml(每ml含生藥2g)，置4'C冰箱備用。所述的五味子提取物的單體化合物優(yōu)選為五味子甲素，五味子乙素，五味子丙素；更優(yōu)選為五味子乙素；所述的五味子有關(guān)的人工合成的有關(guān)化合物為聯(lián)苯雙酯或雙環(huán)醇(商品名為"百賽諾")。本發(fā)明利用五味子提取物和有關(guān)單體化合物(五味子乙素、聯(lián)苯雙酯或雙環(huán)醇治療脂肪肝，具有下述優(yōu)點1)起效快；2)降低肝臟甘油三酯和膽固醇作用明顯；3)在降低肝臟脂質(zhì)的同時，不影響模型動物的血脂。所以本發(fā)明藥物的副作用小，尤其適合于治療血脂水平不高的脂肪肝患者。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換(如改變五味子提取物的提取方法、改變有關(guān)化合物的分子結(jié)構(gòu)等)，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。試驗例1五味子乙醇提取物降低脂肪肝模型小鼠肝臟的脂質(zhì)含量一、實驗材料實驗動物ICR小鼠，雄性，體重25-30g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號SCXK(京)2002-0003。正常小鼠用常規(guī)飼料喂養(yǎng)，脂肪肝模型小鼠用高脂/膽固醇飼料喂養(yǎng)，其中豬油含量為10%(W/W)，膽固醇含量為1%(w/W)。五味子提取物五味子購于安國中藥材批發(fā)市場，經(jīng)鑒定為北五味子。取五味子500g，破碎，然后用8(m的乙醇5000ml分兩次提取，合并兩次提取液，過濾、水浴濃縮成250ml(每ml含生藥2g)，置4"C冰箱備用。其他藥品和試劑膽固醇購于北京化學(xué)試劑公司；菲諾貝特購于北京永康醫(yī)藥公司；甘油三酯和總膽固醇測定試劑盒購于北生化學(xué)試劑公司。二、實驗方法和結(jié)果小鼠用高脂/膽固醇詞料喂養(yǎng)7天后，分別用五味子乙醇提取物0.5ml/kg(相當(dāng)于生藥lg/kg)和2.5ml/kg(相當(dāng)于生藥5g/kg)灌胃，每天1次，連續(xù)7天。陽性藥組用菲諾貝特0.lg/kg(用0.5%CMC配制)，正常和未給藥模型組小鼠用0.59&CMC(羧甲基纖維素)10ml/kg灌胃。每組動物數(shù)10只。最后一給藥后24小時，取肝臟，稱重、勻漿、離心，取上清液測定肝組織甘油三酯和總膽固醇含量。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)五味子乙醇提取物能夠降低脂肪肝模型小鼠肝臟膽固醇和甘油三酯水平。結(jié)果見表l。表1.五味子提取物降低脂肪肝模型動物肝臟脂質(zhì)含量的作用(meaniSEM)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>'PO.05,與正常組比；#P<0.05，與脂肪肝模型組比。試驗例2五味子乙素降低脂肪肝模型小鼠肝臟的脂質(zhì)含量一、實驗材料實驗動物ICR小鼠，雄性，體重25-30g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號SCXK(京)2002-0003。正常小鼠用常規(guī)飼料喂養(yǎng)，脂肪肝模型小鼠用高脂/膽固醇飼料喂養(yǎng)，其中豬油含量為10%(W/W)，膽固醇含量為1%(W/W)。五味子乙素由香港科技大學(xué)提供，純度大于95%。其他藥品和試劑膽固醇購于北京化學(xué)試劑公司；菲諾貝特購于北京永康醫(yī)藥公司；甘油三酯和總膽固醇測定試劑盒購于北生化學(xué)試劑公司。二、實驗方法和結(jié)果小鼠用高脂/膽固醇飼料喂養(yǎng)7天，同時分別用五味子乙素0.05、0.1、0.2g/kg，菲諾貝特O.lg/kg灌胃，每天1次，連續(xù)6天。每組動物數(shù)10只。藥物用橄欖油配制。正常和未給藥模型組小鼠用橄欖油10ml/kg灌胃。最后一給藥后24小時，取肝臟，稱重、勻漿、離心，取上清液測定肝組織甘油三酯和總膽固醇含量。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)五味乙素有降低脂肪肝模型小鼠肝臟膽固醇和甘油三酯的作用。結(jié)果見表2。表2.五味子乙素降低脂肪肝模型動物肝臟脂質(zhì)含量的作用(mean±SEM)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>:P<0.05,與正常組比；#P<0.05，與脂肪肝模型組比。試驗例3聯(lián)苯雙酯降低脂肪肝模型小鼠肝臟的脂質(zhì)含量一、實驗材料實驗動物ICR小鼠，雄性，體重25-30g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號SCXK(京)2002-0003。正常小鼠用常規(guī)飼料喂養(yǎng)，脂肪肝模型小鼠用高脂/膽固醇詞料喂養(yǎng)，其中豬油含量為10%(W/W)，膽固醇含量為1%(w/W)。聯(lián)苯雙酯北京協(xié)和藥廠生產(chǎn)。其他藥品和試劑膽固醇購于北京化學(xué)試劑公司；菲諾貝特購于北京永康醫(yī)藥公司；甘油三酯和總膽固醇測定試劑盒購于北生化學(xué)試劑公司。二、實驗方法和結(jié)果小鼠用高脂/膽固醇飼料喂養(yǎng)10天，第六至第九天，治療組小鼠分別用聯(lián)苯雙酯0.03、0.1、0.3g/kg灌胃，每天1次。陽性藥組用菲諾貝特O.lg/kg灌胃。藥物用0.5%CMC配制。正常和未治療模型組小鼠用0.5%CMC10ml/kg灌胃。每組動物數(shù)10只。最后一給藥后24小時，取肝臟，稱重、勻漿、離心，取上清液測定肝組織甘油三酯和總膽固醇含量。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)聯(lián)苯雙酯有降低脂肪肝模型小鼠肝臟膽固醇和甘油三酯的作用。結(jié)果見表3。表3.聯(lián)苯雙酯降低脂肪肝模型動物肝臟脂質(zhì)含量的作用(meaniSEM)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*P<0.05,與正常組比；#P<0.05，與脂肪肝模型組比。試驗例4雙環(huán)醇降低脂肪肝模型小鼠肝臟的脂質(zhì)含量一、實驗材料實驗動物ICR小鼠，雄性，體重25-30g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號SCXK(京)2002-0003。正常小鼠用常規(guī)飼料喂養(yǎng)，脂肪肝模型小鼠用高脂/膽固醇詞料喂養(yǎng)，其中豬油含量為10%(W/W)，膽固醇含量為1%(W/W)。雙環(huán)醇北京協(xié)和藥廠生產(chǎn)；化學(xué)名稱為4，4'-二甲氧基-5，6,5',6'-雙(亞甲二氧基)-2-羥甲基-2'-甲氧羰基聯(lián)。其他藥品和試劑膽固醇購于北京化學(xué)試劑公司；菲諾貝特購于北京永康醫(yī)藥公司；甘油三酯和總膽固醇測定試劑盒購于北生化學(xué)試劑公司。二、實驗方法和結(jié)果小鼠用高脂/膽固醇詞料喂養(yǎng)8天，同時治療組小鼠分別用雙環(huán)醇0.1、0.3g/kg，或菲諾貝特O.lg/kg灌胃。每天1次，連續(xù)7天。藥物用0.5y。CMC配制。正常和未治療模型組小鼠用0.5%CMC10ml/kg灌胃。每組動物數(shù)10只。最后一給藥后24小時，取肝臟，稱重、勻槳、離心，取上清液測定肝組織甘油三酯和總膽固醇含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)雙環(huán)醇有降低脂肪肝模型小鼠肝臟膽固醇和甘油三酯的作用。結(jié)果見表4。表4.雙環(huán)醇降低脂肪肝模型動物肝臟脂質(zhì)含量的作用(meaniSEM)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>'PO.05,與正常組比；#P<0.05，與脂肪肝模型組比。權(quán)利要求1、五味子、五味子單體化合物或其有關(guān)的人工合成的單體化合物在制備預(yù)防或治療脂肪肝藥物中的用途。2、五味子、五味子單體化合物或其有關(guān)的人工合成的單體化合物在制備研究脂質(zhì)代謝工具藥中的用途。3、按照權(quán)利要求1的用途，其特征在于所述的脂肪肝是非酒精性脂肪肝。4、按照權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于所述的五味子是五味子乙醇提取物。5、按照權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于所述的五味子單體化合物選自五味子甲素，五味子乙素或五味子丙素中的任意一種。6、按照權(quán)利要求5的用途，其特征在于所述的五味子單體化合物是五味子乙素。7、按照權(quán)利要求1或2的用途，其特征在于所述的五味子有關(guān)的人工合成的單體化合物是聯(lián)苯雙酯或雙環(huán)醇。全文摘要本發(fā)明公開了五味子、五味子單體化合物或其有關(guān)的人工合成的單體化合物(聯(lián)苯雙酯或雙環(huán)醇)在制備預(yù)防和治療脂肪肝藥物中的用途。本發(fā)明通過大量的試驗發(fā)現(xiàn)，五味子提取物或其有關(guān)單體化合物(五味子乙素、聯(lián)苯雙酯或雙環(huán)醇)能有效降低脂肪肝模型動物的肝臟甘油三酯和總膽固醇的含量，本發(fā)明藥物尤其適合用于治療血脂水平不高的脂肪肝患者。文檔編號A61P1/00GK101549039SQ20081010326公開日2009年10月7日申請日期2008年4月2日優(yōu)先權(quán)日2008年4月2日發(fā)明者潘思源申請人:潘思源