專(zhuān)利名稱(chēng)：作為組蛋白去乙?；敢种苿┑?-吲哚滿(mǎn)酮衍生物、其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有組蛋白去乙?；敢种苹钚缘?-吲哚滿(mǎn)酮衍生物的合成及其在治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常相關(guān)的疾病方面的臨床應(yīng)用。
背景技術(shù)：
組蛋白去乙?；?HDAC)蛋白在調(diào)控體內(nèi)的基因表達(dá)方面起著關(guān)鍵作用，它改變轉(zhuǎn)錄因子到染色體組DNA的可達(dá)性。尤其是HDAC去除組蛋白中乙?；?lài)氨酸殘基的乙酰基，從而導(dǎo)致核小體重構(gòu)(Grunstein，M.，1997，Nature，389349-352)。由于HDAC蛋白在基因表達(dá)中起著關(guān)鍵作用，所以它們與許多細(xì)胞功能密切相關(guān)，包括細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞增殖、分化、基因程序化表達(dá)和癌癥發(fā)生(Ruijter，A-J-M.，2003，Biochem.J.，370737-749；Grignani，F(xiàn).，1998，Nature，391815-818；Lin，R-J.，1998，391811-814；Marks，P-A.，2001，Nature Reviews Cancer，1194)。由組蛋白去乙?；刚`調(diào)所致的異常去乙酰化與許多臨床疾病密切相關(guān)，如魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病和其它各種癌癥(Langley B etal.，2005，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders，441-50)。試驗(yàn)表明，IIDAC抑制劑能夠抑制人類(lèi)及動(dòng)物體內(nèi)的腫瘤的生長(zhǎng)，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等(Dokmanovic，M.，2005，J.Cell Biochenm.，96293-304)。
組蛋白去乙酰化酶活性異常與各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病及神經(jīng)退化疾病密切相關(guān)，包括中風(fēng)、亨廷頓舞蹈(Huntington)疾病、肌萎縮側(cè)索硬化(Amyotrophic Lateral Sclerosis)和阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease)。抑制組蛋白去乙?；改軌蛘T導(dǎo)抗有絲分裂和抗凋亡基因的表達(dá)，如p21和HSP-70，有利于正常細(xì)胞的存活。HDAC抑制劑也能夠作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的其他神經(jīng)細(xì)胞，如反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞和小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，降低在神經(jīng)損傷或疾病中的炎癥和二次傷害。通過(guò)HDAC抑制劑增加乙?；?，可以誘導(dǎo)樹(shù)突發(fā)芽(突觸數(shù)量增加)，重建學(xué)習(xí)行為，進(jìn)入長(zhǎng)期記憶。HDAC抑制劑可以逆轉(zhuǎn)弗里德賴(lài)希共濟(jì)失調(diào)癥(Friedreich’s ataxia)的基因沉默。這些數(shù)據(jù)表明，HDAC抑制是一種極具希望的治療許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法(LangleyB et al.，2005，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders，441-50；Fischer A.，et al，2007，Nature 447(10)178-183；Herman D.，et al.，2006，Nature Chemical Biology 2(10)551-558)。
依據(jù)序列同源性，哺乳動(dòng)物的HDACs可以分為三類(lèi)。第一類(lèi)由酵母Rpd3-類(lèi)蛋白組成(HDAC 1，2，3，8和11)。第二類(lèi)由酵母HDA1-類(lèi)蛋白組成(HDAC 4，5，6，7，9和10)。第三類(lèi)由酵母SIR2-類(lèi)蛋白組成(SIRT 1，2，3，4，5，6和7)。
HDAC1的活性和細(xì)胞增殖(癌癥的標(biāo)志)相關(guān)。哺乳動(dòng)物細(xì)胞通過(guò)siRNA降低HDAC1表達(dá)，具有抗增殖性(Glaser，K-B.，2003，Biochem.Biophys.Res.Comm.，310529-536)。HDAC1基因敲除鼠是胚胎致死的，其余細(xì)胞表現(xiàn)出不一樣的細(xì)胞生長(zhǎng)(Lagger，G.，2002，EMBO J.，212672-2681)。HDAC1過(guò)度表達(dá)的老鼠細(xì)胞顯示G2和M期延長(zhǎng)及生長(zhǎng)速度降低(Bartl.S.，1997，Mol.Cell Biol.，175033-5043)。因此，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，HDAC1與細(xì)胞周期調(diào)控及細(xì)胞增殖密切相關(guān)。
HDAC2調(diào)控許多胎心肌蛋白異構(gòu)體的表達(dá)。HDAC2缺乏或是通過(guò)化學(xué)方法抑制組蛋白去乙?；缚梢宰柚古咛セ虻脑俦磉_(dá)，減少心室肥大。抗肥大和肌醇多磷酸鹽-5-磷酸酶f(Inpp5f)編碼基因表達(dá)增加有關(guān)，這種增加導(dǎo)致胸腺瘤濾過(guò)性病毒的原癌基因(Akt)和3-磷酸肌醇-依賴(lài)的蛋白激酶-1失活，激活了糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)。相反，HDAC2轉(zhuǎn)基因鼠心室肥大增加，這與失活的Gsk3β有關(guān)。通過(guò)化學(xué)方法抑制活化的Gsk3β使得HDAC2-缺乏的成人對(duì)心室肥大的刺激變得敏感。這些結(jié)果表明，在心臟中HDAC2是HDAC抑制劑的一個(gè)重要的分子靶標(biāo)。HDAC2和Gsk3β都是調(diào)控通路的組成部分，這為治療心室肥大和心力衰竭提供了極具吸引力的治療靶標(biāo)(Trivedi，C-M.，2007，Nat.Med，.13324-331)。
HDAC3在正常小腸的增殖隱窩細(xì)胞中表達(dá)最多。在結(jié)腸癌細(xì)胞系中HDAC3表達(dá)沉默導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、細(xì)胞存活降低和細(xì)胞凋亡增加。沉默HDAC2表達(dá)可以觀(guān)察到類(lèi)似的效果，而對(duì)于HDAC1，效果則沒(méi)有那么顯著。HDAC3基因沉默也選擇性的引起堿性磷酸酯酶的表達(dá)(結(jié)腸細(xì)胞成熟的標(biāo)志)。HDAC3的過(guò)度表達(dá)抑制基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄及丁酸酯誘導(dǎo)的P21轉(zhuǎn)錄，而沉默HDAC3則刺激P21基因啟動(dòng)了的活性和表達(dá)。這些發(fā)現(xiàn)表明HDAC3是在人體結(jié)腸癌中進(jìn)行下調(diào)的基因，是結(jié)腸細(xì)胞成熟和P21表達(dá)的一種新型的調(diào)節(jié)劑(Wilson，A-J.，2006，J.Biol.Chem.，28113548-13558)。
HDAC6是HDAC家族的一個(gè)亞型，它脫去α-微管蛋白的乙?；?，增加細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性。在九組口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)的細(xì)胞系和正常的口腔角化細(xì)胞(NOKs)上運(yùn)用定量實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和Western Blots技術(shù)分析，與NOKs相比，HDAC6 mRNA和蛋白表達(dá)水平在所有的癌細(xì)胞中都升高了。通過(guò)免疫熒光法分析，在OSCC細(xì)胞系的細(xì)胞質(zhì)中檢測(cè)到了HDAC6蛋白。和OSCC細(xì)胞系相似，在早期的人體OSCC腫瘤中HDAC6上調(diào)明顯，mRNA達(dá)74％，蛋白達(dá)51％。通過(guò)對(duì)臨床變量的分析，人們發(fā)現(xiàn)臨床腫瘤的發(fā)展階段和HDAC6的表達(dá)狀態(tài)相關(guān)。分析表明，HDAC6的表達(dá)水平在腫瘤早期(I和II期)和晚期(III和IV期)存在顯著差異(P＝0.014)。這些結(jié)果表明HDAC6的表達(dá)可能和腫瘤的惡性程度有關(guān)，這也為設(shè)計(jì)新的治療方法提供了線(xiàn)索(Sakuma，T.，2006，Int.J.Oncol.，29117-124)。
IIa類(lèi)HDAC包括HDAC4，5和7。在過(guò)去幾年中，研究人員確定了IIa類(lèi)HDAC在活體中的一些重要生理功能。令人吃驚的是，這些看似沒(méi)有聯(lián)系的生理過(guò)程有著共同的特征，它們都依賴(lài)于IIa類(lèi)HDAC對(duì)MEF2轉(zhuǎn)錄活動(dòng)的嚴(yán)密控制。諸如骨骼肌的形成、心肥大、骨發(fā)育、T-細(xì)胞分化和神經(jīng)元存活等關(guān)鍵生理過(guò)程都被IIa類(lèi)HDAC所控制，這一事實(shí)意味著許多人類(lèi)病理學(xué)的干預(yù)療法是有可能的，包括血管類(lèi)疾病如動(dòng)脈硬化、中風(fēng)和動(dòng)脈瘤、腫瘤血管生成和轉(zhuǎn)移、侏儒癥、骨骼畸形、自身免疫和淋巴增生綜合征、神經(jīng)退化性疾病和心肌肥大(MartinM.et al，2007，Oncogene 265450-5467)。
HDAC使功能染色體表觀(guān)基因沉默是許多病理過(guò)程的主要機(jī)制之一。其中，功能相關(guān)基因被HDAC抑制或重調(diào)，導(dǎo)致在終末分化、成熟和生長(zhǎng)控制中表型缺失，并且喪失組織功能。例如，腫瘤抑制基因經(jīng)常在癌癥的發(fā)展過(guò)程中被沉默，HDAC抑制劑能夠誘導(dǎo)這些腫瘤抑制基因的表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和分化(Glaros S et al.，2007，Oncogene June 4 Epub ahead ofprint；Mai，A，et al.，2007，Int J.Biochem Cell Bio.，April 4，Epub ahead of print；Vincent A.et al.，2007，Oncogene，April 30，Epub ahead of print；our unpublished results)。結(jié)構(gòu)基因(如與Friedreich’s運(yùn)動(dòng)失調(diào)相關(guān)的FXN基因和與脊柱肌肉萎縮相關(guān)的SMN基因)的抑制可以被HDAC逆轉(zhuǎn)，使得FXN和SMN基因重新表達(dá)，并恢復(fù)組織功能(Herman D et al.，2006，NatureChemical Biology，2(10)551-8；Avila AM et al.，2007，J Clinic Investigation，117(3)659-71；de BoreJ，2006，Tissue Eng.12(10)2927-37)。HDAC抑制劑在染色體6p21-22重調(diào)HDAC“熱點(diǎn)”程序，誘導(dǎo)了整個(gè)MHC II家族基因表達(dá)，進(jìn)一步延伸了免疫識(shí)別和免疫響應(yīng)的表觀(guān)基因調(diào)控(Gialitakis M et al.，2007，Nucleic Acids Res.，34(1)；765-72)。
目前已經(jīng)確定了幾類(lèi)HDAC抑制劑，包括1)短鏈脂肪酸，如丁酸和苯丁酸；2)有機(jī)羥肟酸，如suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)和trichostatin A(TSA)；3)含有2-胺基-8-氧-9，10-環(huán)氧癸?；?AOE)的環(huán)四肽，如trapoxin和HC-toxin；4)不含2-氨基-8-氧-9，10-環(huán)氧癸?；沫h(huán)四肽，如apicidin和FK228；5)苯酰胺類(lèi)，如MS-275(歐洲專(zhuān)利EP 0847992A1，美國(guó)專(zhuān)利2002/0103192A1，世界專(zhuān)利02/26696A1，世界專(zhuān)利01/70675A2，世界專(zhuān)利01/18171A2)。盡管HDAC是一個(gè)極具前景的藥物靶標(biāo)，但目前Merck公司研制的SAHA僅僅局限于對(duì)皮膚T細(xì)胞淋巴瘤的治療，而對(duì)實(shí)體瘤療效并不明顯。因此，有必要繼續(xù)研制新的化合物，使其具有更強(qiáng)的HDAC抑制活性、更強(qiáng)的抗癌活性、更好的HDAC亞型選擇性和更低的毒性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有組蛋白去乙?；敢种苹钚缘?-吲哚滿(mǎn)酮衍生物； 本發(fā)明的另一目的在于提供一種制備上述化合物的方法； 本發(fā)明的進(jìn)一步目的在于提供一種治療魯-泰二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學(xué)疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和神經(jīng)退化性疾病的藥用制劑。
本發(fā)明的另一目的在于提供上述化合物和藥用制劑，可以有選擇性地抑制組蛋白去乙?；福谟糜谥委熍c組蛋白去乙?；富钚援惓Ｏ嚓P(guān)的疾病，如魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學(xué)疾病、心肌肥大、骨骼疾病和各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病和神經(jīng)退化性疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如通式(I)所示
其中， R1、R2、R3和R4分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基； R5為-NHOH或
R6、R7、R8和R9分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基或三氟甲基； Ar為苯環(huán)或2，4-二甲基-1H-吡咯； 當(dāng)Ar為苯環(huán)時(shí)，X為＝CH-或＝N-N＝CH-；當(dāng)Ar為2，4-二甲基-1H-吡咯時(shí)，X為＝N-N＝CH-； n為1到7的整數(shù)； 包括其游離形式、鹽的形式、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或水合物。
所述鹵素為氟、氯、溴、碘中的一種，優(yōu)選為氟或氯，最優(yōu)選為氟。
所述烷基包括直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，優(yōu)選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基、正戊基、異戊基、正己基、異己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基中的一種；更優(yōu)選為甲基、乙基、正丙基、異丙基中的一種；最優(yōu)選為甲基或乙基。
所述烷氧基指烷基與氧原子相連所形成的基團(tuán)，其中，氧原子具有自由成鍵能力，優(yōu)選為甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、異丙氧基、特丁氧基、環(huán)丙氧基、環(huán)己基氧基中的一種；更優(yōu)選為甲氧基、乙氧基、丙氧基中的一種；最優(yōu)選為甲氧基、乙氧基。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物的合成路線(xiàn)如下所示 (a)將化合物1與化合物2進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物3；
(b)將化合物3水解得到化合物4；
(c)將化合物4與羥胺進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物5a；
(d)將化合物4與化合物6進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物5b。
上述縮合反應(yīng)(a)和(d)以肽縮合劑為催化劑，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺(EDC)，N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，N，N’-碳酰二咪唑(CDI)等。反應(yīng)溫度為0～80℃，反應(yīng)時(shí)間為4～72小時(shí)。反應(yīng)所用溶劑為常用溶劑，如苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環(huán)、一氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。必要時(shí)，也可以加入堿如氫氧化鈉、三乙胺或吡啶。
上述縮合反應(yīng)(c)以ClCOOEt為縮合劑，反應(yīng)溫度為0～80℃，反應(yīng)時(shí)間為1～24小時(shí)。反應(yīng)所用溶劑為常用溶劑，如苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環(huán)、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。必要時(shí)，也可以加入堿如氫氧化鈉、三乙胺或吡啶。
上述水解反應(yīng)(b)以氫氧化鋰，氫氧化鈉或氫氧化鉀為水解試劑，反應(yīng)溫度為0～80℃，反應(yīng)時(shí)間為2～72小時(shí)。反應(yīng)所用溶劑為常用溶劑，如水、甲醇、乙醇、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)、N，N-二甲基甲酰胺等。
上述縮合反應(yīng)(a)所使用的化合物1，當(dāng)X為＝CH-時(shí)，其制備方法為
該反應(yīng)的反應(yīng)溫度為70～80℃，反應(yīng)時(shí)間為4～72小時(shí)，反應(yīng)所用溶劑為乙醇。
上述縮合反應(yīng)(a)所使用的化合物1，當(dāng)X為＝N-N＝CH-時(shí)，其制備方法為 步驟1
步驟2
其中，步驟1的反應(yīng)溫度為70～100℃，反應(yīng)時(shí)間為1～10小時(shí)，反應(yīng)所用溶劑為水；步驟2的反應(yīng)溫度為70～80℃，反應(yīng)時(shí)間為2～72小時(shí)，反應(yīng)所用溶劑為乙醇。
通式(I)所述的化合物及中間體(3)和中間體(4)，可以采用常見(jiàn)的分離方法進(jìn)行純化，如萃取、重結(jié)晶、柱層析等。
本發(fā)明的化合物和藥用制劑具有組蛋白去乙酰化酶抑制活性，可用于制備治療與組蛋白去乙?；富钚援惓Ｏ嚓P(guān)的疾病的藥物，尤其對(duì)魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學(xué)疾病、心肌肥大、骨骼疾病和各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病和神經(jīng)退化性疾病具有優(yōu)異療效。
本發(fā)明所述的化合物，可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法加工成常用的藥用制劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑。該制劑包括作為活性組分的通式(I)的化合物，以及藥用載體、輔料或稀釋劑。該制劑中通常含有0.5～70％的活性成分，較佳含量為1～20％。該藥用制劑的劑型規(guī)格為0.0001～200mg。
本發(fā)明所說(shuō)的藥用載體、輔料或稀釋劑，包括《藥用輔料手冊(cè)》(本手冊(cè)原著名為《Handbookof Pharmaceutical Excipients》由美國(guó)Pharmaceutical Press出版)所列的載體填料，但并不局限于這些載體填料。
本發(fā)明所述的化合物，在臨床上可以通過(guò)口服或注射方式對(duì)哺乳動(dòng)物(包括人)進(jìn)行用藥，其中尤以口服方式最佳。用藥劑量為每日0.0001～200mg/kg體重，較佳用藥劑量為每日0.01～100mg/kg體重，最佳用藥劑量為每日0.1～50mg/kg體重，同時(shí)，最佳劑量視個(gè)體而定，通常開(kāi)始時(shí)劑量較小，然后逐漸增加用量。
本發(fā)明所述的代表性化合物如表1所示?；衔锞幪?hào)與實(shí)施例部分中的“實(shí)施例編號(hào)”相一致，即表1中化合物5的合成在“實(shí)施例5”中得到描述，表1中化合物58的合成在“實(shí)施例58”中得到描述。
表1 本發(fā)明代表性化合物
下面結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅僅局限于這些實(shí)例。本發(fā)明所述的百分比除特別注明外，均為重量百分比。說(shuō)明書(shū)中所描述的數(shù)值范圍，如計(jì)量單位、反應(yīng)條件、化合物物理狀態(tài)或百分比，均是為了提供明白無(wú)誤的書(shū)面參考。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員在實(shí)踐本專(zhuān)利時(shí)，使用在此范圍之外或有別于單個(gè)數(shù)值的溫度、濃度、數(shù)量、碳原子數(shù)等，仍然可以得到預(yù)期的結(jié)果。
實(shí)施例1 4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸及 3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸的制備
于反應(yīng)瓶中加入1.51g(10mmol)5-氟-2-吲哚酮(US7,179,910 B2，Examplel)、1.50g(10mmol)4-羧基苯甲醛(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)、1.28g(15mmol)哌啶和25ml無(wú)水乙醇，加熱回流反應(yīng)6小時(shí)，冷至室溫，過(guò)濾。將濾餅轉(zhuǎn)入燒杯中，加入100ml水，用2M鹽酸中和至pH＝4，過(guò)濾收集固體，固體用水洗滌，真空干燥得棕色固體4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸(1.33g，產(chǎn)率47％)。LC-MS(m/z)284(M+1)。
以5-氟-2-吲哚酮和3-羧基苯甲醛(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)為原料，采用類(lèi)似方法制得3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸，LC-MS(m/z)284(M+1)。
實(shí)施例2 5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)- 2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸等化合物的制備
于反應(yīng)瓶中加入8.25g(50mmol)5-氟靛紅(購(gòu)于A(yíng)ldrich公司)和150ml50％水合肼，于80～90℃反應(yīng)3小時(shí)，冷至室溫，過(guò)濾，水洗，收集固體，真空干燥得黃色固體5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基肼(6.0g，產(chǎn)率67％)。LC-MS(m/z)180(M+1)。
于反應(yīng)瓶中加入1.79g(10mmol)5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基肼、1.67g(10mmol)5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(US 7,179,910 B2，Examplel)、1.28g(15mmol)哌啶和25ml無(wú)水乙醇，加熱回流反應(yīng)6小時(shí)，冷至室溫，過(guò)濾。將濾餅轉(zhuǎn)入燒杯中，加入100ml水，用2M鹽酸中和至pH＝4，過(guò)濾收集固體，固體用水洗滌，真空干燥得紅色固體5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(1.18g，產(chǎn)率36％)。LC-MS(m/z)329(M+1)。
以靛紅(購(gòu)于A(yíng)ldrich公司)為原料，采用類(lèi)似方法制得5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)311(M+1)。
以5-氯靛紅(購(gòu)于A(yíng)ldrich公司)為原料，采用類(lèi)似方法制得5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)345(M+1)。
以4-甲基靛紅(Sadler P.W.，1956，J.Org.Chem，Vol.2169)為原料，采用類(lèi)似方法制得5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)325(M+1)。
以5-硝基靛紅(購(gòu)于A(yíng)ldrich公司)為原料，采用類(lèi)似方法制得5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)356(M+1)。
以6-甲氧基靛紅(Sadler P.W.，1956，J.Org.Chem，Vol.2169)為原料，采用類(lèi)似方法制得5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)341(M+1)。
以6-三氟甲基靛紅(Simet L.，1963，J.Org.Chem，Vol.283580-3581)為原料，采用類(lèi)似方法制得5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸，LC-MS(m/z)398(M+1)。
以5-氟靛紅(購(gòu)于A(yíng)ldrich公司)及4-羧基苯甲醛(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)為原料，采用類(lèi)似方法制得4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酸，LC-MS(m/z)312(M+1)。
實(shí)施例3 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸甲酯的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151.8mg(1.2mmol)甘氨酸甲酯鹽酸鹽?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸甲酯(244mg，產(chǎn)率61％)。LC-MS(m/z)400(M+1)。
實(shí)施例4 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸的制備
將399mg(1mmol)2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸(128mg，產(chǎn)率33％)。LC-MS(m/z)386(M+1)。
實(shí)施例5 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基乙酰胺的制備
將385mg(1mmol)2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基乙酰胺(140mg，產(chǎn)率35％)。LC-MS(m/z)401(M+1)。
實(shí)施例6 2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)乙酰胺的制備
將385mg(1mmol)2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體2-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)乙酰胺(342mg，產(chǎn)率72％)。LC-MS(m/z)476(M+1)。
實(shí)施例7 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸甲酯的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和202mg(1.2mmol)5-氨基戊酸甲酯鹽酸鹽?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸甲酯(300mg，產(chǎn)率68％)。LC-MS(m/z)442(M+1)。
實(shí)施例8 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸的制備
將441mg(1mmol)5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸(167mg，產(chǎn)率39％)。LC-MS(m/z)428(M+1)。
實(shí)施例9 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)戊酰胺的制備
將427mg(1mmol)5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)二乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)戊酰胺(388mg，產(chǎn)率75％)。LC-MS(m/z)518(M+1)。
實(shí)施例10 5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)-戊酰胺的制備
將427mg(1mmol)5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)戊酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體5-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟基苯基)戊酰胺(439mg，產(chǎn)率82％)。LC-MS(m/z)536(M+1)。
實(shí)施例11 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯等化合物的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯(287mg，產(chǎn)率63％)。LC-MS(m/z)456(M+1)。
以5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)438(M+1)。
以5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)472(M+1)。
以5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)452(M+1)。
以5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)483(M+1)。
以5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)468(M+1)。
以5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯，LC-MS(m/z)506(M+1)。
實(shí)施例12 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)己酸等化合物的制備
將455mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸(163mg，產(chǎn)率37％)。LC-MS(m/z)442(M+1)。
以6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)424(M+1)。
以6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)458(M+1)。
以6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)438(M+1)。
以6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)469(M+1)。
以6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)454(M+1)。
以6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸甲酯為原料，采用類(lèi)似方法制得6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸，LC-MS(m/z)492(M+1)。
實(shí)施例13 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯?；旌衔镌?℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基己酰胺(201mg，產(chǎn)率44％)。LC-MS(m/z)457(M+1)。
實(shí)施例14 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺(417mg，產(chǎn)率76％)。1HNMR(DMSO-d6)δ 1.35(m，2H，CH2)，1.53(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.33(s，3H，pyrrole-CH3)，2.43(s，3H，pyrrole-CH3)，3.21(m，2H，NCH2)，5.12(s，2H，benzene-NH2)，6.28(m，1H，Ar-H)，6.47(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.85(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.07(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.20(td，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，7.64(t，J＝4.0Hz，CONH)，8.33(dd，J＝4.0 and 8.0Hz，1H，Ar-H)，8.63(s，1H，vinyl-H)，9.02(s，1H，benzene-NH)，10.72(s，1H，indolinone-NH)，11.82(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)550(M+1)。
實(shí)施例15 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(430mg，產(chǎn)率81％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.62(m，2H，CH2)，2.30(s，3H，pyrrole-CH3)，2.32(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，2.41(s，3H，pyrrole-CH3)，3.22(m，2H，NCH2)，4.82(s，2H，benzene-NH2)，6.51(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.87(m，2H，Ar-H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.20(m，1H，Ar-H)，7.65(t，J＝4.0Hz，1H，CONH)，8.33(dd，J＝4.0 and8.0Hz，1H，Ar-H)，8.63(s，1H，vinyl-H)，9.11(s，1H，benzene-NH)，10.73(s，1H，indolinone-NH)，11.82(s，1H，pyrrole-NH)。LC-MS(m/z)532(M+1)。
實(shí)施例16 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氯苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和171mg(1.2mmol)4-氯鄰苯二胺(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氯苯基)己酰胺(402mg，產(chǎn)率71％)。LC-MS(m/z)566(M+1)。
實(shí)施例17 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和146mg(1.2mmol)4-甲基鄰苯二胺(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲基苯基)己酰胺(376mg，產(chǎn)率69％)。LC-MS(m/z)546(M+1)。
實(shí)施例18 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和166mg(1.2mmol)4-甲氧基鄰苯二胺(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)己酰胺(427mg，產(chǎn)率76％)。LC-MS(m/z)562(M+1)。
實(shí)施例19 6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)己酰胺的制備
將441mg(1mmol)6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺內(nèi)基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和211mg(1.2mmol)4-三氟甲基鄰苯二胺(購(gòu)于A(yíng)lfa Aesar公司)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)己酰胺(390mg，產(chǎn)率65％)。LC-MS(m/z)600(M+1)。
實(shí)施例20 6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將423mg(1mmol)6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(395mg，產(chǎn)率77％)。LC-MS(m/z)514(M+1)。
實(shí)施例21 6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將458mg(1mmol)6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-氯-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(438mg，產(chǎn)率80％)。LC-MS(m/z)548(M+1)。
實(shí)施例22 6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將437mg(1mmol)6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((4-甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(427mg，產(chǎn)率81％)。LC-MS(m/z)528(M+1)。
實(shí)施例23 6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將468mg(1mmol)6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((5-硝基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(402mg，產(chǎn)率72％)。LC-MS(m/z)559(M+1)。
實(shí)施例24 6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將453mg(1mmol)6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((6-甲氧基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(408mg，產(chǎn)率75％)。LC-MS(m/z)544(M+1)。
實(shí)施例25 6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4- 二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將491mg(1mmol)6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體6-(5-(((6-三氟甲基-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(384mg，產(chǎn)率66％)。LC-MS(m/z)582(M+1)。
實(shí)施例26 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸甲酯的制備
將328mg(1mmol)5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸溶丁8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和251mg(1.2mmol)8-氨基辛酸甲酯鹽酸鹽?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸甲酯(287mg，產(chǎn)率59％)。LC-MS(m/z)484(M+1)。
實(shí)施例27 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸的制備
將483mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸(159mg，產(chǎn)率34％)。LC-MS(m/z)470(M+1)。
實(shí)施例28 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基辛酰胺的制備
將469mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯?；旌衔镌?℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-羥基辛酰胺(237mg，產(chǎn)率49％)。LC-MS(m/z)485(M+1)。
實(shí)施例29 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺的制備
將469mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺(386mg，產(chǎn)率67％)。LC-MS(m/z)578(M+1)。
實(shí)施例30 8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基- 1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺的制備
將469mg(1mmol)8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得紅色固體8-(5-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺(402mg，產(chǎn)率72％)。LC-MS(m/z)560(M+1)。
實(shí)施例31 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- 己酸甲酯的制備
將311mg(1mmol)4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(114mg，產(chǎn)率28％)。LC-MS(m/z)439(M+1)。
實(shí)施例32 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基) 己酸的制備
將438mg(1mmol)6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸(119mg，產(chǎn)率28％)。LC-MS(m/z)425(M+1)。
實(shí)施例33 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-羥基己酰胺的制備
將424mg(1mmol)6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯?；旌衔镌?℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基己酰胺(224mg，產(chǎn)率51％)。LC-MS(m/z)440(M+1)。
實(shí)施例34 6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-(2-氨基苯基)己酰胺的制備
將424mg(1mmol)6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(375mg，產(chǎn)率76％)。LC-MS(m/z)515(M+1)。
實(shí)施例35 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基) 辛酸甲酯的制備
將311mg(1mmol)4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和251mg(1.2mmol)8-氨基辛酸甲酯鹽酸鹽?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯(290mg，產(chǎn)率62％)。LC-MS(m/z)467(M+1)。
實(shí)施例36 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基) 辛酸的制備
將466mg(1mmol)8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸(149mg，產(chǎn)率33％)。LC-MS(m/z)453(M+1)。
實(shí)施例37 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-(2-氨基苯基)辛酰胺的制備
將452mg(1mmol)8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺(423mg，產(chǎn)率72％)。LC-MS(m/z)543(M+1)。
實(shí)施例38 8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)- N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺的制備
將452mg(1mmol)8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(4-(((5-氟-2-氧-1，2-二氫-氫吲哚-3-亞基)亞肼基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺(358mg，產(chǎn)率64％)。LC-MS(m/z)561(M+1)。
實(shí)施例39 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(362mg，產(chǎn)率88％)。LC-MS(m/z)411(M+1)。
實(shí)施例40 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸的制備
將410mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸(305mg，產(chǎn)率77％)。LC-MS(m/z)397(M+1)。
實(shí)施例41 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(394mg，產(chǎn)率81％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.38(m，2H，CH2)，1.54(m，2H，CH2)，1.60(m，2H，CH2)，2.32(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.28(m，2H，NCH2)，4.80(s，2H，benzene-NH2)，6.52(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.86(m，2H，Ar-H)，7.14(m，2H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.92(m，1H，Ar-H)，7.96(m，1H，Ar-H)，8.39(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，8.50(m，1H，Ar-H)，9.09(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)487(M+1)。
實(shí)施例42 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺(348mg，產(chǎn)率69％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.36(m，2H，CH2)，1.60(m，2H，CH2)，1.60(m，2H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.29(m，2H，NCH2)，5.12(s，2H，benzene-NH2)，6.27(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.46(dd，J＝4.0Hz and 8.0Hz，1H，Ar-H)，6.88(m，1H，Ar-H)，7.10(m，2H，Ar-H)，7.71(s，1H，vinyl-H)，7.77(m，1H，Ar-H)，7.92(m，1H，Ar-H)，7.96(m，1H，Ar-H)，8.39(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，8.50(m，1H，Ar-H)，9.01(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)505(M+1)。
實(shí)施例43 6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯。混合物在0℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基己酰胺(189mg，產(chǎn)率46％)。LC-MS(m/z)412(M+1)。
實(shí)施例44 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲胺基)己酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和219mg(1.2mmol)6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯(332mg，產(chǎn)率81％)。LC-MS(m/z)411(M+1)。
實(shí)施例45 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸的制備
將410mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸(289mg，產(chǎn)率73％)。LC-MS(m/z)397(M+1)。
實(shí)施例46 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)己酰胺(379mg，產(chǎn)率78％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.36(m，2H，CH2)，1.59(m，4H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.29(t，J＝8.0Hz，2H，NCH2)，4.80(s，2H，benzene-NH2)，6.50(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.87(m，2H，Ar-H)，7.12(m，2H，Ar-H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，7.64(m，1H，Ar-H)，7.73(s，0.6H，vinyl-H)，7.83(m，1H，Ar-H)，7.94(m，1H，Ar-H)，8.15(s，0.4H，vinyl-H)，8.57(m，1H，Ar-H)，9.08(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)487(M+1)。
實(shí)施例47 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)己酰胺(373mg，產(chǎn)率74％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.36(m，2H，CH2)，1.59(m，4H，CH2)，2.30(t，J＝8.0Hz，2H，CH2CO)，3.28(t，J＝8.0Hz，2H，NCH2)，5.12(s，2H，benzene-NH2)，6.26(t，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.46(d，J＝8.0Hz，1H，Ar-H)，6.87(m，1H，Ar-H)，7.12(m，3H，Ar-H)，7.64(m，1H，Ar-H)，7.73(s，0.6×1H，vinyl-H)，7.83(m，1H，Ar-H)，7.94(m，1H，Ar-H)，8.16(s，0.4×1H，vinyl-H)，8.57(m，1H，Ar-H)，9.02(s，1H，benzene-NH)，10.68(s，1H，CONH)。LC-MS(m/z)505(M+1)。
實(shí)施例48 6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基己酰胺的制備
將396mg(1mmol)6-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)己酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯?；旌衔镌?℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體6-(4-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基己酰胺(168mg，產(chǎn)率41％)。LC-MS(m/z)412(M+1)。
實(shí)施例49 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基) 戊酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和202mg(1.2mmol)5-氨基戊酸甲酯鹽酸鹽?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸甲酯(337mg，產(chǎn)率89％)。LC-MS(m/z)397(M+1)。
實(shí)施例50 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸的制備
將396mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml4M的氫氧化鋰水溶液。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸(294mg，產(chǎn)率77％)。LC-MS(m/z)383(M+1)。
實(shí)施例51 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)戊酰胺的制備
將382mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)戊酰胺(382mg，產(chǎn)率81％)。LC-MS(m/z)473(M+1)。
實(shí)施例52 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)戊酰胺的制備
將382mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基4-氟苯基)戊酰胺(372mg，產(chǎn)率76％)。LC-MS(m/z)491(M+1)。
實(shí)施例53 5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基戊酰胺的制備
將382mg(1mmol)5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)戊酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯?；旌衔镌?℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體5-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基戊酰胺(186mg，產(chǎn)率47％)。LC-MS(m/z)398(M+1)。
實(shí)施例54 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)- 辛酸甲酯的制備
將283mg(1mmol)3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酸溶于8毫升DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和251mg(1.2mmol)8-氨基辛酸甲酯鹽酸鹽?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯(333mg，產(chǎn)率76％)。LC-MS(m/z)439(M+1)。
實(shí)施例55 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸的制備
將438mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸甲酯溶于300ml甲醇中，然后加入25ml 4M的氫氧化鋰水溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。將混合物用鹽酸中和至pH值為7，減壓除去甲醇。殘留物用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸(305mg，產(chǎn)率72％)。LC-MS(m/z)425(M+1)。
實(shí)施例56 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基苯基)辛酰胺的制備
將424mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和432mg(4mmol)鄰苯二胺。混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基苯基)辛酰胺(426mg，產(chǎn)率83％)。LC-MS(m/z)515(M+1)。
實(shí)施例57 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- (2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺的制備
將424mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸溶于8mlDMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、162mg(1.2mmol)1-羥基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟鄰苯二胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)。然后用400ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體。固體用水洗滌。真空干燥得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-(2-氨基-4-氟苯基)辛酰胺(436mg，產(chǎn)率82％)。LC-MS(m/z)533(M+1)。
實(shí)施例58 8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N- 羥基辛酰胺的制備
將424mg(1mmol)8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)辛酸、151mg(1.5mmol)三乙胺溶于20ml DMF中，于0℃加入163mg(1.5mmol)氯甲酸乙酯?；旌衔镌?℃下攪拌2小時(shí)后加入1.32g(20mmol)50％的羥胺水溶液?；旌衔镌谑覝叵吕^續(xù)攪拌3小時(shí)，然后用1000ml鹽水稀釋。真空抽濾收集固體，水洗，真空干燥得得棕色固體8-(3-((5-氟-2-氧-1，2-二氫-吲哚-3-亞基)甲基)苯甲酰胺基)-N-羥基辛酰胺(224mg，產(chǎn)率51％)。LC-MS(m/z)440(M+1)。
實(shí)施例59 片劑的制備 處方(1000片) 化合物13 5g 微晶纖維素 90g 羧甲基淀粉鈉 5g 4％聚維酮K30無(wú)水乙醇溶液 50g 滑石粉 0.5g 制備工藝將化合物13過(guò)100目篩，將微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉和滑石粉過(guò)80目篩，稱(chēng)取處方量的微晶纖維素和羧甲基淀粉鈉，混合均勻，然后將化合物13與其按等量遞加法混勻，加入4％聚維酮K30無(wú)水乙醇溶液適量制粒，干燥后加入處方量滑石粉混勻，壓片即得。
實(shí)施例60 膠囊的制備 處方(1000粒) 化合物13 5g 微晶纖維素 55g 乳糖 35g 羧甲基淀粉鈉 5g 硬脂酸鎂 0.5g 制備工藝將化合物13過(guò)100目篩，將微晶纖維素、乳糖、羧甲基淀粉鈉和硬脂酸鎂過(guò)80目篩，稱(chēng)取處方量的微晶纖維素、乳糖和羧甲基淀粉鈉，混合均勻，然后將化合物13與其按等量遞加法混勻，加入處方量硬脂酸鎂混勻，灌裝膠囊即得。
實(shí)施例61 注射液的制備 處方 化合物11 1.00mg 藥用DMSO 0.10ml 藥用乙醇 1.00ml 制備工藝將化合物11溶于藥用DMSO，加入藥用乙醇即得。
實(shí)施例62 化合物7-56體外抑制HDAC總酶活性，體外抑制HDAC 亞型活性及細(xì)胞內(nèi)微管蛋白乙?；涂偟鞍滓阴；脑囼?yàn) 一、體外HDAC總酶活性的測(cè)定 體外HDAC總酶活性的測(cè)定是我們采用BIOMOL公司的HDAC Fluorimetric Assay/DrugDiscovery Kit對(duì)抑制劑的體外抑制活性進(jìn)行測(cè)試。實(shí)驗(yàn)的原理如下一種特殊的底物Fluor deLys在組蛋白去乙?；?實(shí)驗(yàn)中采用HeLa細(xì)胞的核提取物，富含多種亞型的HDAC)的作用下會(huì)去掉一個(gè)乙?；┞冻鲇坞x的氨基，當(dāng)加入Developer后會(huì)產(chǎn)生一種可誘導(dǎo)的熒光。這種熒光的激發(fā)波長(zhǎng)為360nm，發(fā)射波長(zhǎng)為460nm。底物去乙酰化越充分，誘導(dǎo)的熒光值就越高，在無(wú)抑制劑情況下的熒光值為對(duì)照；而當(dāng)有抑制劑存在的時(shí)候，被誘導(dǎo)的熒光值會(huì)降低，而無(wú)酶時(shí)(相當(dāng)于酶活性完全被抑制)的熒光值為空白。而一般抑制后的熒光值會(huì)介于對(duì)照和空白之間。在分析時(shí)我們將空白作為0，對(duì)照作為1進(jìn)行計(jì)算，值越小則說(shuō)明抑制活性越高。
二、報(bào)告基因?qū)σ种苿〩DAC亞型選擇性的測(cè)定 HDAC不同亞型可以與不同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，參與不同基因的表達(dá)調(diào)控中。選擇合適轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控元件構(gòu)建成報(bào)告基因，可以用來(lái)評(píng)估抑制劑對(duì)HDAC亞型的選擇性抑制作用。在轉(zhuǎn)染前一天將HeLa細(xì)胞種入96孔板使轉(zhuǎn)染時(shí)密度達(dá)到50-80％的融合。在熒光素酶基因上游插入了p21-啟動(dòng)子，gdf11-啟動(dòng)子，MEF-結(jié)合元件，Nur77-啟動(dòng)子等調(diào)控序列的報(bào)告基因質(zhì)粒分別使用FuGene6(Roche)轉(zhuǎn)染試劑，根據(jù)操作說(shuō)明進(jìn)行轉(zhuǎn)染。同時(shí)為了校正轉(zhuǎn)染效率，共轉(zhuǎn)染了綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)質(zhì)粒。在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后加入化合物或溶劑對(duì)照(DMSO)。再過(guò)24小時(shí)后收集并裂解細(xì)胞，按照操作說(shuō)明使用熒光素酶(Promega)檢測(cè)試劑盒對(duì)熒光素酶的量進(jìn)行評(píng)估。同時(shí)進(jìn)一步測(cè)定GFP的含量，對(duì)轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行校正。
三、細(xì)胞內(nèi)乙?；降臏y(cè)定 (一)微管蛋白乙酰化水平的ELISA檢測(cè) 材料和試劑 1.96孔組織培養(yǎng)白板 2.A549細(xì)胞系 3.抗乙?；?微管蛋白抗體(Upstate) 4.HRP-標(biāo)記的羊抗鼠lgG(Uptate) 5.固定液95％乙醇，5％乙酸 6.TBS0.15M NaCl，0.02M Tris-Cl pH7.4 7.ADSTBS+2％BSA+0.1％Triton X-100 8.加強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑(ECL)(Amersham) (二)賴(lài)氨酸乙酰化水平的ELISA檢測(cè) 材料和試劑 1.96孔組織培養(yǎng)白板 2.A549細(xì)胞系 3.抗賴(lài)氨酸乙?；?抗體(Upstate) 4.HRP-標(biāo)記的羊抗鼠1gG(Uptate) 5.固定液95％乙醇，5％乙酸 6.TBS0.15M NaCl，0.02M Tris-Cl pH7.4 7.ADSTBS+2％BSA+0.1％Triton X-100 8.加強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑(ECL)(Amersham)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
表2
實(shí)施例63 化合物26-56 對(duì)腫瘤細(xì)胞增值抑制的MTS試驗(yàn)。
將腫瘤細(xì)胞用胰酶消化后，以3000個(gè)每孔的密度分種于96孔微孔板，在含10％FBS的完全培養(yǎng)基里培養(yǎng)24小時(shí)。加入待測(cè)化合物和溶劑對(duì)照，最終化合物濃度為100nmol/L到100μmol/L。然后在完全培養(yǎng)基里培養(yǎng)72小時(shí)。根據(jù)說(shuō)明書(shū)的方法加入MTS試劑(Promega)，在37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2小時(shí)，然后在ELISA酶標(biāo)儀上讀取490nm的吸收值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
表3
nd＊未測(cè)定。
權(quán)利要求
1.一種具有通式(I)的2-吲哚滿(mǎn)酮衍生物
其中，
R1、R2、R3和R4分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH或
R6、R7、R8和R9分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
Ar為苯環(huán)或2，4-二甲基-1H-吡咯；
當(dāng)Ar為苯環(huán)時(shí)，X為＝CH-或＝N-N＝CH-；當(dāng)Ar為2，4-二甲基-1H-吡咯時(shí)，X為＝N-N＝CH-；
n為1到7的整數(shù)；
包括其游離形式、鹽的形式、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體或水合物。
2.通式(I)的化合物的制備方法，該方法包括如下步驟
(a)將化合物1與化合物2進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物3；
(b)將化合物3水解得到化合物4；
(c)將化合物4與羥胺進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物5a；
(d)將化合物4與化合物6進(jìn)行縮合反應(yīng)得到化合物5b；
其中，
R1、R2、R3和R4分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基、硝基或三氟甲基；
R5為-NHOH或
R6、R7、R8和R9分別為氫、鹵素、烷基、烷氧基或三氟甲基；
Ar為苯環(huán)或2，4-二甲基-1H-吡咯；
當(dāng)Ar為苯環(huán)時(shí)，X為＝CH-或＝N-N＝CH-；當(dāng)Ar為2，4-二甲基-1H-吡咯時(shí)，X為＝N-N＝CH-；
n為1到7的整數(shù)。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，反應(yīng)步驟(a)和(d)均使用肽縮合劑作催化劑。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述肽縮合劑選自1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亞胺，N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺或N，N’-碳酰二咪唑。
5.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，反應(yīng)步驟(c)使用ClCOOEt作縮合劑。
6.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，反應(yīng)步驟(b)使用水解試劑進(jìn)行反應(yīng)。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述水解試劑選自氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀中的一種。
8.一種用于治療魯-泰二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學(xué)疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和神經(jīng)退化性疾病的藥用制劑，它包括作為活性組分的權(quán)利要求1所述通式(I)的化合物，以及藥用載體、輔料或稀釋劑。
9.如權(quán)利要求1所述化合物在制備用于治療魯-泰二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學(xué)疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和神經(jīng)退化性疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種2-吲哚滿(mǎn)酮衍生物、其制備方法及用途，其結(jié)構(gòu)如通式(I)所示，其中，R1、R2、R3、R4、R5、X、Ar和n的定義同說(shuō)明書(shū)。該類(lèi)化合物具有組蛋白去乙酰化酶抑制活性，可以用于治療與組蛋白去乙酰化酶活性異常相關(guān)的疾病，包括魯-泰(Rubinstein-Taybi)二氏綜合征、脆性X染色體綜合癥、白血病、癌癥、免疫學(xué)疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和神經(jīng)退化性疾病。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101397295SQ20081017216
公開(kāi)日2009年4月1日 申請(qǐng)日期2008年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月12日
發(fā)明者魯先平, 李志斌, 余金迪, 松 山, 馬保順, 吳仲聞, 王祥輝, 寧志強(qiáng) 申請(qǐng)人:深圳微芯生物科技有限責(zé)任公司