專利名稱：組蛋白去乙?；敢种苿┘捌渌幱弥苿┑闹苽浜蛻?yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有治療作用的全新小分子化合物的合成及其在治療腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)退化性疾病方面的臨床應(yīng)用背景技術(shù)基因表達(dá)異常在許多疾病的發(fā)病機(jī)理中起著重要作用，這些疾病包括腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)退化性疾病。人的基因組以DNA、組蛋白和非組蛋白包裝成的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)存在，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)在決定一個(gè)特定基因是否表達(dá)時(shí)起著重要的作用?？偟恼f(shuō)來(lái)，濃縮的染色質(zhì)抑制轉(zhuǎn)錄，而轉(zhuǎn)錄活躍的基因往往位于開(kāi)放的染色質(zhì)中。
組成染色質(zhì)的基本重復(fù)單位核小體由DNA雙鏈圍繞著含4種組蛋白的組蛋白核心構(gòu)成。這個(gè)組蛋白核心包含一個(gè)H3-H4四聚體和兩個(gè)H2A-H2B二聚體。組蛋白H1附著在核小體間的連接部分，并通過(guò)它富含正電核的羧基末端中和DNA鏈上的負(fù)電荷以保持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。核小體這種高度有序的結(jié)構(gòu)確定了染色質(zhì)組成和基因活化的關(guān)系(Ricky W.Johnstone，“Histone deacetylase inhibitorsnoveldrugs for the treatment of cancer”，Nature Reviews Drug Discovery 2002，1287)。組蛋白N末端可以被翻譯后修飾，而且因此可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。其中一種修飾是組蛋白尾部賴氨酸殘基可逆的乙酰化和去乙?；?。組蛋白乙?；绞怯山M蛋白乙?；?Histoneacetylases，HATs)和組蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases，HDACs)共同控制的。組蛋白N末端除了可以被乙?；揎椡猓€可以被磷酸化、甲基化和ADP-核糖基化。這些修飾影響組蛋白的電性及其功能，進(jìn)而改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)(Current Opinion in Oncology2001，13477-483)。
近幾年的研究揭示了組蛋白乙?；c染色質(zhì)重建以及基因調(diào)控間的緊密聯(lián)系。很多轉(zhuǎn)錄激活物復(fù)合體都有內(nèi)在的組蛋白乙?；富钚?，相反，轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合體則具有招募組蛋白去乙酰化酶到目標(biāo)基因啟動(dòng)子的活性(Bioassays 1998，20615)。一些特異性轉(zhuǎn)錄激活因子，如核受體超家族、cAMP效應(yīng)器結(jié)合蛋白(CREB)、信號(hào)傳導(dǎo)活化轉(zhuǎn)錄因子1(STAT-1)等可以與各種輔激活子和輔抑制子在不同組織和基因中選擇性作用，構(gòu)成了基因選擇性表達(dá)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。這些調(diào)控網(wǎng)絡(luò)控制著我們身體機(jī)能的平衡，干擾這些網(wǎng)絡(luò)將會(huì)導(dǎo)致疾病或影響疾病的進(jìn)程。因此，調(diào)節(jié)這些轉(zhuǎn)錄復(fù)合體蛋白間的相互作用為治療腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)退化性疾病提供了新的方法(E.Korzus，Transcription Factor-specific Requirements forCoactivator and Their Acetyltransferase Functions.Science 1998，279703-707；N.J.McKenna and B.W.O′Malley，Combinatorial Control ofGene Expression by Nuclear Receptors and Coregulators.Cell 2002，108(4)465-474；M.J.Pazin and J.T.Kadonaga，What′s Up and Downwith Histone Deacetylation and Transcription？Cell 1997，89(3)325-328；H.Zhong，R.E.Voll and S.Ghosh，Phosphorylation of NF-B p65 byPKA Stimulates Transcriptional Activity by Promoting a Novel BivalentInteraction with the Coactivator CBP/p300.Molecular Cell 1998，1(5)661-671；J.S.Steffan，Histone deacetylase inhibitors arrestpolyglutamine-dependent neurodegeneration in Drosophila，Nature 2001，413691-694；US20020115716A1，WO0056153A1)。
舉例來(lái)說(shuō)，細(xì)胞的發(fā)育和分化受到基因程序表達(dá)的調(diào)控，這是染色質(zhì)結(jié)構(gòu)水平上的調(diào)控。遺傳變異或突變引起組成型激活癌基因如RAS，或者使腫瘤的抑制基因失活如p53，都將會(huì)影響包括轉(zhuǎn)錄在內(nèi)的一系列分子進(jìn)程。此外，一些造成組蛋白乙?；负腿ヒ阴；府惓Ｗ饔玫倪z傳變異，如使它們的目標(biāo)基因錯(cuò)位，或使組蛋白乙?；腹δ苁Щ?，或過(guò)量表達(dá)組蛋白去乙?；傅榷紩?huì)打破細(xì)胞正常發(fā)育和分化的進(jìn)程，引起腫瘤的發(fā)生和發(fā)展(Current Opinion Genet.Development 1999，940-48 and 175-184)。一些人類腫瘤產(chǎn)生與組蛋白乙酰化酶和去乙?；富钚允д{(diào)有關(guān)，其中的一個(gè)例子是在人急性髓細(xì)胞白血病患者中，常見(jiàn)到15和17號(hào)染色體的異位，異位的結(jié)果會(huì)產(chǎn)生一種包含RARα、PML和PLZF三種蛋白分子的融合蛋白。這種異常的融合蛋白可以與RAR的順式作用元件結(jié)合，并且通過(guò)與SMRT輔抑制子強(qiáng)力結(jié)合招募來(lái)有高親和力的組蛋白去乙?；?，使得RAR的目標(biāo)基因表達(dá)受到了持續(xù)抑制，并且失去了對(duì)維生素A酸的反應(yīng)(Oncogene 2001，207204-7215)。維生素A酸受體(RAR)是一種依賴配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，它對(duì)骨髓的分化有非常重要的作用。RAR與RXR構(gòu)成的異二聚體，可以結(jié)合到目標(biāo)基因啟動(dòng)子區(qū)的維生素A酸反應(yīng)元件上。當(dāng)缺乏維生素A酸時(shí)，RAR/RXR可以通過(guò)輔抑制子NCOR和SMRT招募SIN/HDAC來(lái)抑制轉(zhuǎn)錄；而當(dāng)加入配體后，HDAC被釋放出來(lái)，隨即RAR/RXR可和TIF2、CBP等具有HAT活性的輔因子結(jié)合而激活轉(zhuǎn)錄。因此，激活或抑制含有維生素A酸反應(yīng)元件的基因?qū)撬杓?xì)胞的分化有很重要的作用。并且，外加HDAC的抑制劑可以使急性髓系白血病細(xì)胞恢復(fù)對(duì)維生素A酸誘導(dǎo)分化的能力，暗示異常的組蛋白去乙?；前籽“l(fā)病過(guò)程的一個(gè)關(guān)鍵因素。
已有報(bào)道表明，當(dāng)組蛋白去乙?；高^(guò)度表達(dá)時(shí)會(huì)抑制一些抑癌基因的表達(dá)，如p53。p53是細(xì)胞增殖的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控者，它可將信號(hào)傳給控制細(xì)胞周期的基因，并在外界壓力存在時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。p53功能的實(shí)現(xiàn)主要在于它能直接與特異的DNA序列結(jié)合并激活轉(zhuǎn)錄，如果它的DNA結(jié)合區(qū)發(fā)生突變而使功能失活，則常會(huì)導(dǎo)致癌癥。有證據(jù)表明CBP/p300可以通過(guò)使組蛋白和p53乙酰化而上調(diào)p53(W.Gu and R.G Roeder，Activation of p5 3 Sequence-Specific DNA Bindingby Acetylation of the p53 C-Terminal Domain.Cell 1997，90(4)595-606.)。相反，哺乳動(dòng)物體內(nèi)的HDAC-1、HDAC-2和HDAC-3可以通過(guò)使組蛋白和p53去乙酰化而下調(diào)p53(L.-J.Juan，et al.，Histone Deacetylases Specifically Down-regulate p53-dependent GeneActivation.The Journal of Biological Chemistry 2000，275(27)20436-20443)。
上述實(shí)驗(yàn)表明，由HDACs介導(dǎo)的非正常的轉(zhuǎn)錄抑制作用可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)，干擾正常的細(xì)胞分化，導(dǎo)致腫瘤及其它增生疾病的發(fā)生。因此，抑制HDAC的活性可能是治療腫瘤及其它增生疾病的有效方法。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾類組蛋白去乙?；傅囊种苿?1)短鏈脂肪酸，如丁酸和苯丁酸；(2)有機(jī)異羥肟酸，如suberoylanilidehydroxamic acid(SAHA)和trichostatin A(TSA)；(3)含2-氨基-8-氧-9，10-環(huán)氧癸酰基的環(huán)四肽，如trapoxin和HC-toxon；(4)不含2-氨基-8-氧-9，10-環(huán)氧癸?；沫h(huán)四肽，如Apicidin和FK228；(5)苯甲酰胺類化合物，如MS-275(EP0847992A1，US2002/0103192A1，WO02/26696A1，WO01/70675A2，WO01/18171A2)。
丁酸作為一種細(xì)胞增殖的抑制劑和細(xì)胞分化的誘導(dǎo)劑，其活性主要源于對(duì)組蛋白去乙?；傅囊种?A.Nudelman and A.Rephaeli，Novel Mutual Prodrug of Retinoic and Butyric Acids with EnhancedAnticancer Activity.J.Med.Chem.2000，43(15)2962-2966.)。苯丁酸可以用來(lái)單獨(dú)治療地中海貧血、弓漿蟲(chóng)病、瘧疾等疾病，也可以與維生素A酸聯(lián)合治療急性髓細(xì)胞白血病(R.P.Warrell.et al.，Therapeutictargeting of transcription in acute promyelocytic leukemia by use of aninhibitor of histone deacetylase.J.Natl.Cancer Inst.1998，90(21)1621-1625.)。丙戊酸是抗驚厥藥物，也被發(fā)現(xiàn)是通過(guò)直接抑制組蛋白去乙?；付鹱饔玫?C.J.Phiel et al.，Histone Deacetylase Is aDirect Target of Valproic Acid，a Potent Anticonvulsant，Mood Stabilizer，and Teratogen.The Journal of Biological Chemistry 2001，276(39)36734-36741；EP1170008A1)。
一些苯甲酰胺類化合物在較低的微摩爾級(jí)濃度下就具有組蛋白去乙?；敢种苿┗钚浴Ｆ渲蠱itsui Chemicals公司研制的先導(dǎo)化合物MS-275是第一個(gè)被證明在動(dòng)物體內(nèi)具有口服抗癌活性的組蛋白去乙?；敢种苿覜](méi)有嚴(yán)重的副作用(A.Saito et al.，A syntheticinhibitor of histone deacetylase，MS-27-275，with marked in vivoantitumor activity against human tumors.Proceedings of the NationalAcademy of Sciences of the United States of America 1999，96(8)4592-4597；EP 0847992A1)。目前，MS-275正在馬里蘭大學(xué)的Greenebaum癌癥中心進(jìn)行白血病的臨床研究，同時(shí)在美國(guó)國(guó)家癌癥研究院進(jìn)行實(shí)體瘤的臨床研究(E.B.Levit，Clinical Trials in Leukemiafocus on New Treatment Approaches.2001 Release-University ofMaryland Medical News 2001 Marylandhttp//www.umm.edu/news/releases/karp.html，A Phase I Study of an Oral Histone DeacetylaseInhibitor，MS-275，in Refractory Solid Tumors and Lymphomas.2001，National Cancer Institute)。然而，一些新的有更好性能的化合物仍有待于開(kāi)發(fā)，以便能得到有更強(qiáng)HDAC抑制活性和更低副作用的藥物。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明目的之一在于公開(kāi)一類基于組蛋白去乙?；冈O(shè)計(jì)的具有治療腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)退化性疾病方面的化合物；本發(fā)明目的之二在于公開(kāi)這一類所述的化合物的制備方法；本發(fā)明目的之三在于公開(kāi)這一類所述的化合物作為治療腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)退化性疾病的臨床應(yīng)用。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如通式(I)所示 其中，Ar1為芳基或雜環(huán)芳基，可以含有1個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基、?；Ⅴ０被?、硫代烷基、全氟烷基、全氟烷氧基、羧基、苯基或雜環(huán)取代基；Ar2為芳撐或雜環(huán)芳撐，可以含有1個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基、?；?、酰氨基、硫代烷基、全氟烷基、全氟烷氧基、羧基、苯基或雜環(huán)取代基；Q1、Q2、Q3分別為共價(jià)鍵或C1-7烷撐，該烷撐可以是線性的或環(huán)狀的，可以是飽和或不飽和的，可以含有1個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基、酰基、酰氨基、硫代烷基、全氟烷基、全氟烷氧基、羧基、苯基或雜環(huán)取代基；J為下列結(jié)構(gòu)之一 其中，R1為H、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、雜環(huán)取代基、芳基或雜環(huán)芳基；Z為-OH或2-氨基環(huán)己基。
本發(fā)明所述的治療與分化和增殖相關(guān)的疾病如癌癥和牛皮癬的化合物的優(yōu)選方法之一如通式(1)所示，其中Ar1為雜環(huán)芳基；Ar2為芳撐；Q1、Q2、Q3分別為共價(jià)鍵或C1-2烷撐；J為下列結(jié)構(gòu)之一 其中，R1為H或烷基；Z為-OH或2-氨基環(huán)己基。
本發(fā)明所述的治療與分化和增殖相關(guān)的疾病如癌癥和牛皮癬的化合物的優(yōu)選方法之二如通式(1)所示，其中Ar1為吡啶；Ar2為苯環(huán)；Q1、Q2、Q3分別為共價(jià)鍵或C1-2烷撐；
J為下列結(jié)構(gòu)之一 其中，R1為H；Z為-OH或2-氨基環(huán)己基。
本發(fā)明所述的“鹵素”，為氟、氯、溴、碘；本發(fā)明所述的“烷基”，包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、特丁基等；本發(fā)明所述的“烷氧基”，包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基等；本發(fā)明所述的“氨基烷基”，包括氨基乙基、1-氨基丙基、1-氨基丙基等；本發(fā)明所述的“烷基胺基”，包括N-甲胺基、N-乙胺基、N-異丙胺基等；本發(fā)明所述的“酰基”，包括乙?；?、丙?；?、異丁酰基等；本發(fā)明所述的“酰胺基”，包括乙酰胺基、丙酰胺基、丁酰胺基、異丁酰胺基等；本發(fā)明所述的“硫代烷基”，包括甲硫基、乙硫基、丙硫基等；本發(fā)明所述的“全氟烷基”，包括三氟甲基、五氟乙基等；本發(fā)明所述的“全氟烷氧基”，包括三氟甲氧基、五氟乙氧基等；本發(fā)明所述的“C1-7烷撐”，包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-CH＝CH-CH＝CH-等。
本發(fā)明所述的“芳烷基”，包括芐基、苯乙基、3-苯基丙基、1-萘甲基等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)芳烷基”，包括2-呋喃甲基、3-呋喃甲基、2-吡啶甲基等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)”，是指含一個(gè)或多個(gè)雜原子(氮、氧或硫)的飽和或不飽和雜環(huán)，包括四氫吡咯、二氫吡咯、二氫吡唑、哌啶、嗎啉、咪唑、吡啶等；本發(fā)明所述的“芳基”，包括含取代基或不含取代基的芳環(huán)，取代基可以是鹵素、氨基、羥基、烷基或烷氧基，如苯基、萘基等；本發(fā)明所述的“雜環(huán)芳基”，是指含有一個(gè)或多個(gè)雜原子(O、S或N原子)的五員、六員單環(huán)或九員、十員雙環(huán)芳香取代基，如呋喃、硫酚、吡咯、咪唑、三唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、喹啉、吲哚、苯并咪唑等；本發(fā)明所說(shuō)的化合物的合成方法如下(a) 將通式(II)化合物與通式(III)化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)得到通式(IV)化合物Ar1-Q1-R2(II)
其中，Ar1、Ar2、Q1、Q2、Q3、J同前所述；R2為-OH或-NH2；當(dāng)R2為-OH時(shí)，R3為-NH2；當(dāng)R2-NH2時(shí)，R3為-OH。
該縮合反應(yīng)以N，N-碳酰二咪唑(CDI)為催化劑，先將N，N-碳酰二咪唑與通式(II)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得活性中間體，然后再與通式(III)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得通式(IV)化合物；(b)將通式(IV)化合物與通式(V)化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)得到目標(biāo)化合物(I)H2N-Z(V)其中，Z同前所述。
該縮合反應(yīng)以氯甲酸乙酯為催化劑，先將氯甲酸乙酯與通式(IV)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得活性中間體，然后再與通式(V)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得通式(I)化合物。
上述縮合反應(yīng)(a)和(b)的反應(yīng)溫度為-10～80℃，反應(yīng)時(shí)間為1～72小時(shí)。反應(yīng)所用溶劑為常用溶劑，如苯、甲苯、四氫呋喃、二氧六環(huán)、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。必要時(shí)，可以加入堿如氫氧化鈉、三乙胺、吡啶等，或加入酸如鹽酸、醋酸、三氟乙酸等。
通式(I)所述的化合物，可以采用常見(jiàn)的分離方法進(jìn)行純化，如萃取、重結(jié)晶、柱層析等。
本發(fā)明所述的化合物，具有治療腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)退化性疾病方面的療效。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物，可以制成常見(jiàn)的藥用制劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑，可以加入香料、甜味劑、液體或固體填料或稀釋劑等常用載體物質(zhì)(見(jiàn)《藥用賦形劑手冊(cè)》，美國(guó)藥學(xué)協(xié)會(huì)，1986年10月)。該制劑通常含有1～70％的有效成分，較佳含量為5～50％，其余組分為載體填料、稀釋劑或溶劑。
本發(fā)明所說(shuō)的化合物在臨床上可以通過(guò)口服或注射方式對(duì)哺乳動(dòng)物(包括人)進(jìn)行給藥，其中尤以口服方式最佳。用藥劑量為每日0.0001～200mg/kg體重。最佳劑量視個(gè)體而定，通常開(kāi)始時(shí)劑量較小，然后逐漸增加用量。
下面結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅僅局限于這些實(shí)例。本發(fā)明所述的百分比除特別注明外，均為重量百分比。
具體實(shí)施方法實(shí)施例14-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酸的制備 于反應(yīng)瓶中加入0.81克(5.0mmol)N，N-碳酰二咪唑及10毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，滴加10毫升溶有0.63克(5.0mmol)4-氟苯甲醇的四氫呋喃溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3小時(shí)，然后滴加5毫升溶有0.76克(5.0mmol)4-氨甲基苯甲酸的1M氫氧化鈉溶液，室溫繼續(xù)攪拌反應(yīng)5小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，向殘留物中加入5毫升飽和氯化鈉溶液，并用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7。將析出的固體過(guò)濾、冰水洗滌、干燥得1.19克(78.8％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例2N-(2-氨基環(huán)己基)-4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0513)的制備 于反應(yīng)瓶中加入0.21克(0.70mmol)4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酸和4加入毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，加入0.21克(2.10mmol)三乙胺和0.12克(1.10mmol)氯甲酸乙酯，于0℃繼續(xù)反應(yīng)30min。過(guò)濾除去生成的固體，將濾液轉(zhuǎn)入另一反應(yīng)瓶中，加入0.32克(2.80mmol)環(huán)己二胺，室溫反應(yīng)10小時(shí)，真空濃縮得粗產(chǎn)物，層析分離(展開(kāi)劑氯仿∶甲醇＝8∶1)得0.15克(53.7％)目標(biāo)化合物，m.p.178-180℃。IR(KBr)cm-13328，2926，1691，1629，1540，1266，1140。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm1.12-1.24(m，6H)，1.66(m，2H)，1.86(m，2H)，2.61(m，1H)，3.47(m，1H)，4.24(d，2H)，5.03(s，3H)，7.18(t，2H)，7.30(d，2H)，7.41(t，2H)，7.75(d，1H)，7.80(d，2H)，8.04(m，1H)。HRMS(C22H26FN3O3)計(jì)算值(％)399.4629；實(shí)測(cè)值(％)399.4627。
實(shí)施例3
N-羥基-4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0512)的制備 于反應(yīng)瓶中加入0.21克(0.70mmol)4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酸和4加入毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，加入0.21克(2.10mmol)三乙胺和0.12克(1.1mmol)氯甲酸乙酯，于0℃繼續(xù)反應(yīng)30min，過(guò)濾除去生成的固體，收集濾液備用。在另一反應(yīng)瓶中加入0.21克(3.0mmol)鹽酸羥胺、0.17克(3.0mmol)氫氧化鉀和5毫升甲醇，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)30min，滴加上述濾液，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)20小時(shí)，真空濃縮得粗產(chǎn)物，層析分離(展開(kāi)劑氯仿∶甲醇＝4∶1)得0.12克(53.9％)目標(biāo)化合物。IR(KBr)cm-13331，2914，1632，1629，1518，1263。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm4.24(d，2H)，5.03(s，3H)，7.18(t，2H)，7.30(d，2H)，7.41(t，2H)，7.75(d，1H)，7.80(d，2H)，8.68(s，1H)，10.34(s，1H)。HRMS(C16H15FN2O4)計(jì)算值(％)318.3023；實(shí)測(cè)值(％)318.3020。
實(shí)施例44-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酸的制備 于反應(yīng)瓶中加入0.81克(5.0mmol)N，N-碳酰二咪唑及10毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，滴加10毫升溶有0.54克(5.0mmol)3-羥甲基吡啶的四氫呋喃溶液，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3小時(shí)，然后滴加5毫升溶有0.76克(5.0mmo1)4-氨甲基苯甲酸的1M氫氧化鈉溶液，室溫繼續(xù)攪拌反應(yīng)5小時(shí)。將反應(yīng)混合物真空濃縮，向殘留物中加入5毫升飽和氯化鈉溶液，并用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7。將析出的固體過(guò)濾、冰水洗滌、干燥得1.20克(83.9％)目標(biāo)化合物。
實(shí)施例5N-(2-氨基環(huán)己基)-4-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0504)的制備 于反應(yīng)瓶中加入0.20克(0.70mmol)4-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酸和4加入毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，加入0.21克(2.10mmol)三乙胺和0.12克(1.10mmol)氯甲酸乙酯，于0℃繼續(xù)反應(yīng)30min。過(guò)濾除去生成的固體，將濾液轉(zhuǎn)入另一反應(yīng)瓶中，加入0.32克(2.80mmol)環(huán)己二胺，室溫反應(yīng)10小時(shí)，真空濃縮得粗產(chǎn)物，層析分離(展開(kāi)劑氯仿∶甲醇＝8∶1)得0.12克(44.9％)目標(biāo)化合物，m.p.159-160℃。IR(KBr)cm-13303，2933，1694，1595，1549，1421，1227，1137。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm1.25(m，4H)，1.69(m，2H)，1.90(m，2H)，2.92(m，1H)，4.22(m，2H)，5.09(s，3H)，7.00(s，1H)，7.27(d，1H)，7.39(s，1H)，7.62(s，1H)，7.77(s，1H)，7.86(m，3H)，8.55(m，1H)。HRMS(C21H26N4O3)計(jì)算值(％)382.4602；實(shí)測(cè)值(％)382.4603。
實(shí)施例6N-羥基-4-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0505)的制備 于反應(yīng)瓶中加入0.20克(0.70mmol)4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酸和4加入毫升四氫呋喃，冷卻至0℃，加入0.21克(2.10mmol)三乙胺和0.12克(1.1mmol)氯甲酸乙酯，于0℃繼續(xù)反應(yīng)30min，過(guò)濾除去生成的固體，收集濾液備用。在另一反應(yīng)瓶中加入0.21克(3.0mmol)鹽酸羥胺、0.17克(3.0mmol)氫氧化鉀和5毫升甲醇，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)30min，滴加上述濾液，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)20小時(shí)，真空濃縮得粗產(chǎn)物，層析分離(展開(kāi)劑氯仿∶甲醇＝4∶1)得0.10克(47.5％)目標(biāo)化合物。IR(KBr)cm-13308，2911，1682，1583，1549，1229。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm4.22(m，2H)，5.09(s，3H)，7.00(s，1H)，7.27(d，1H)，7.39(s，1H)，7.62(s，1H)，7.77(s，1H)，7.86(m，3H)，8.72(s，1H)、10.40(s，1H)。HRMS(C15H15N3O4)計(jì)算值(％)301.2996；實(shí)測(cè)值(％)301.2998。
實(shí)施例7化合物N-(2-氨基環(huán)己基)-4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0513)、N-羥基-4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0512)、N-(2-氨基環(huán)己基)-4-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0504)、和N-羥基-4-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0505)對(duì)組蛋白去乙酰化酶體外活性的抑制實(shí)驗(yàn)采用HDAC比色分析試劑盒(BIOMOL Research Laboratories，PA，USA)完成。所有操作均按照實(shí)驗(yàn)手冊(cè)進(jìn)行。首先將被測(cè)試的化合物按不同濃度加到96孔板中，然后與HeLa細(xì)胞的核提取物混合并加入組蛋白去乙?；傅牡孜铮?7℃放置10分鐘后用終止顯色液終止反應(yīng)，隨后在酶標(biāo)儀上用405nm波長(zhǎng)讀取結(jié)果。抑制率的計(jì)算參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1(NA10μM時(shí)無(wú)活性)。
實(shí)施例8化合物N-(2-氨基環(huán)己基)-4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0513)、N-羥基-4-[N-(4-氟苯甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0512)、N-(2-氨基環(huán)己基)-4-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0504)、和N-羥基-4-[N-(吡啶-3-甲氧基羰基)氨甲基]苯甲酰胺(HYM0505)對(duì)癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)抑制活性用MTS法測(cè)定生長(zhǎng)抑制率。在96孔板中接種待測(cè)細(xì)胞每孔5000個(gè)(不同生長(zhǎng)速度的細(xì)胞接種量不同)。培養(yǎng)24小時(shí)后加入不同濃度的待測(cè)化合物，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后每孔加入20μlMTS檢測(cè)底物(Promega)，37℃孵浴2小時(shí)后在酶標(biāo)儀上用490nm波長(zhǎng)讀取結(jié)果。相對(duì)活細(xì)胞量以實(shí)驗(yàn)組/對(duì)照組×100％計(jì)算。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制50％的化合物濃度標(biāo)為GI50。所有化合物都溶在DMSO中，并在加藥時(shí)進(jìn)行1∶1000的稀釋，使DMSO的終濃度≤0.1％。每個(gè)實(shí)驗(yàn)都獨(dú)立重復(fù)三次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
表1。化合物對(duì)組蛋白去乙?；傅捏w外抑制
表2.化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用

*細(xì)胞來(lái)源U2OS人骨肉瘤細(xì)胞 HeLa人宮頸癌細(xì)胞DU-145人前列腺癌細(xì)胞 SGC-7901人胃癌細(xì)胞SMMC-7721人肝癌細(xì)胞 HepG2人肝癌細(xì)胞293人胚腎細(xì)胞MCF-7人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞 H292人肺癌細(xì)胞LNCaP人前列腺癌細(xì)胞 SK-N-SH人神經(jīng)母細(xì)胞瘤PANC-1人胰腺癌細(xì)胞 SK-OV-3人卵巢癌細(xì)胞28SC人單核巨噬細(xì)胞 Raji人Burkitt淋巴瘤HL-60人髓系白血病細(xì)胞Jurkat人T淋巴細(xì)胞白血病
權(quán)利要求
1.一種組蛋白去乙?；敢种苿?，其特征在于，該化合物的立體異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、水合物及其鹽的結(jié)構(gòu)通式如下所示 其中，Ar1為芳基或雜環(huán)芳基，可以含有1個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基、?；?、酰氨基、硫代烷基、全氟烷基、全氟烷氧基、羧基、苯基或雜環(huán)取代基；Ar2為芳撐或雜環(huán)芳撐，可以含有1個(gè)或多個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基、?；Ⅴ０被?、硫代烷基、全氟烷基、全氟烷氧基、羧基、苯基或雜環(huán)取代基；Q1、Q2、Q3分別為共價(jià)鍵或C1-7烷撐，該烷撐可以是線性的或環(huán)狀的，可以是飽和或不飽和的，可以含有1個(gè)或多個(gè)取代基其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、氨基烷基、烷基氨基、?；Ⅴ０被?、硫代烷基、全氟烷基、全氟烷氧基、羧基、苯基或雜環(huán)取代基；J為下列結(jié)構(gòu)之一 其中，R1為H、烷基、芳烷基、雜環(huán)芳烷基、雜環(huán)取代基、芳基或雜環(huán)芳基；Z為-OH或2-氨基環(huán)己基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物的優(yōu)選方法之一為Ar1為雜環(huán)芳基；Ar2為芳撐；Q1、Q2、Q3分別為共價(jià)鍵或C1-2烷撐；J為下列結(jié)構(gòu)之一 其中，R1為H或烷基；Z為-OH或2-氨基環(huán)己基。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物的優(yōu)選方法之二為Ar1為吡啶；Ar2為苯環(huán)；Q1、Q2、Q3分別為共價(jià)鍵或C1-2烷撐；J為下列結(jié)構(gòu)之一 其中，R1為H；Z為-OH或2-氨基環(huán)己基。
4.如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法，其特征在于，所述化合物的立體異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、水合物及其鹽，可以通過(guò)以下二步反應(yīng)進(jìn)行制備(a)將通式(II)化合物與通式(III)化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)得到通式(IV)化合物Ar1-Q1-R2(II) 其中，Ar1、Ar2、Q1、Q2、Q3、J同前所述；R2為-OH或-NH2；當(dāng)R2為-OH時(shí)，R3為-NH2；當(dāng)R2-NH2時(shí)，R3為-OH。(b)將通式(IV)化合物與通式(V)化合物進(jìn)行縮合反應(yīng)得到目標(biāo)化合物(I)H2N-Z(V)其中，Z同前所述。
5.如權(quán)利要求4所述的制備過(guò)程，其特征在于，反應(yīng)(a)以N，N-碳酰二咪唑(CDI)為催化劑，先將N，N-碳酰二咪唑與通式(II)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得活性中間體，然后再與通式(III)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得通式(IV)化合物。
6.如權(quán)利要求4所述的制備過(guò)程，其特征在于，反應(yīng)(b)以氯甲酸乙酯為催化劑，先將氯甲酸乙酯與通式(IV)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得活性中間體，然后再與通式(V)化合物進(jìn)行反應(yīng)制得通式(I)化合物。
7.如權(quán)利要求4所述的合成方法，其特征在于，反應(yīng)(a)和反應(yīng)(b)的反應(yīng)溫度為-10～80℃，反應(yīng)時(shí)間為1～72小時(shí)。
8.組蛋白去乙?；敢种苿┧幱弥苿┑闹苽浞椒?，其特征在于，其藥用制劑由活性組分組蛋白去乙?；耕}及藥用載體輔料或稀釋劑所組成。
9.如權(quán)利要求8所述的藥用制劑，其特征在于，所述有效劑量為每日每公斤體重用藥于0.0001～200mg之間。
10.如權(quán)利要求8所述的藥用制劑，其特征在于，其用藥方式可以是經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)皮、經(jīng)肺、肌注或靜脈注射等方式。
11.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，該化合物的藥用制劑可以與常用的腫瘤化學(xué)治療藥物或甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑合用，用于治療細(xì)胞增殖疾病，可以加入一種或多種藥用載體輔料或稀釋劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種具有可治療腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)退化性疾病的組蛋白去乙?；敢种苿┘捌渌幱弥苿┑闹苽浞椒ㄅc應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)如通式(I)所示，其中，Ar
文檔編號(hào)C07C271/24GK1524850SQ0314684
公開(kāi)日2004年9月1日 申請(qǐng)日期2003年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月12日
發(fā)明者魯先治, 寧志強(qiáng), 胡偉明 申請(qǐng)人:深圳市?；涢T(mén)生物科技開(kāi)發(fā)有限公司