專利名稱：一種含(E)-4-(β-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的IDO抑制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于新藥合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含(a-4-(p-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu) 的IDO抑制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO; MW 48,000; EC 1.13.11.42)是含有血紅素的酶，該酶 在哺乳動物色氨酸代謝中是第一個酶并且是限速酶。IDO催化必須氨基酸色氨酸通過雙 氧轉(zhuǎn)化為N-甲酰犬尿氨酸的氧化反應(yīng)，并且負(fù)責(zé)處理人體中的色氨酸。已知含有血紅素 的酶一般抑制劑以非特異性方式抑制IDO。此外，諸如l-甲基-L-色氨酸(1MT)和P-(3-苯并呋喃基)-DL-丙氨酸等某些色氨酸(底物)類似物是IDO的競爭性抑制劑(Cady, S.G. and Sono, M. Arch. 說o/ h^. 1991 291, 326)。
干擾素y是若干潛在的IDO表達(dá)誘導(dǎo)劑中的一種。在高水平干擾素y刺激的持續(xù)火 化期間，IDO降低了游離血清色氨酸的利用度。因而，也降低了 5-羥色胺的產(chǎn)生。與諸 如喹啉酸的具有神經(jīng)活性的犬尿氨酸代謝物的蓄積(也由IDO誘導(dǎo))相結(jié)合的這些變化 有助于神經(jīng)病學(xué)/精神病學(xué)病癥的發(fā)生并且是多種心境障礙的因素，也是具有IDO活化和 色氨酸降解特征的慢性病相關(guān)癥狀的因素，所述慢性病例如是獲得性免疫缺陷綜合癥 (AIDS)、阿爾茨海默病、多種類型的抑郁癥和癌癥(Wirleitner， Cwr MM. C&w. 2003, 10, 1581)。
IDO活性還涉及與年齡相關(guān)的核性白內(nèi)障的發(fā)生。IDO是晶體狀中紫外線濾器生物 合成中的第一個酶，并且是限速酶。來自色氨酸降解的紫外線濾器化合物(犬尿氨酸和 3-羥基犬尿氨酸葡萄苷)修飾存在于人晶狀體中的蛋白質(zhì)。這些紫外線濾器加合物的量隨 著年齡而增加(Takikawa et al. Jt/v. ￡平MM.歷o/. 1999, 241, 467)并且已經(jīng)報道了這些紫外 線濾器加合物會導(dǎo)致稱為與年齡相關(guān)的核性白內(nèi)障的晶體狀逐漸渾濁。IDO抑制劑將阻 止該自然過程(Takikawa et al. fic; . ￡^ 2001, 72, 271)。
IDO表達(dá)還涉及通過阻止局部T-淋巴細(xì)胞增殖而進(jìn)行的免疫應(yīng)答的抑制。T-淋巴細(xì)胞 對色氨酸的缺乏非常敏感并且在色氨酸缺失條件下，T-淋巴細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的Gl期。 這種T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的抑制是導(dǎo)致許多疾病的因素，所述疾病包括自身免疫性疾 病、異體排斥反應(yīng)、神經(jīng)退行性病癥、抑郁癥、細(xì)菌感染(例如人免疫缺陷病毒HIV) 和癌癥(Swanson et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2003 30， 311)。 IDO抑制劑可以用于調(diào)節(jié)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。此外胎盤中的IDO的活性對于避免胎兒的異體排斥反應(yīng)很重 要，IDO抑制劑l-甲基-L-色氨酸的給藥(lMT)從而出現(xiàn)的胎兒排斥反應(yīng)證明了上述觀點(diǎn)。 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)大多數(shù)人類腫瘤組成性地表達(dá)IDO。來自預(yù)先免疫小鼠的小鼠腫瘤細(xì)胞己 經(jīng)顯示可以通過表達(dá)IDO保護(hù)其不受排斥反應(yīng)，通過1MT的給藥消除了上述效應(yīng)。然后 通過IDO抑制劑的伴行給藥改善了癌癥治療的有效性(Uyttenhove et al. Waf. MW. 2003, 9, 1269)。
IDO抑制劑可以用于心境障礙的抑制以及治療其他具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑 的病理學(xué)特征的疾病，這些疾病包括諸如AIDS等病毒的感染、諸如萊姆病和鏈球菌感染 等細(xì)菌感染、神經(jīng)退行性病癥(例如阿爾茨海默病、亨廷頓病和帕金森病)、抑郁癥、癌 癥(包括T細(xì)胞白血病和結(jié)腸癌)、眼鏡疾病狀態(tài)(例如白內(nèi)障核語年齡相關(guān)的黃化)以 及自身免疫性疾病。
可以使用多種體外分析(例如參見Takikawa, et al. J C/ze肌1998,263,2041)來
篩選(例如高通量篩選)或者測試反應(yīng)參物或從天然來源得到的提取物的IDO抑制劑活
性或確定IDO抑制動力學(xué)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種含(》-4-(p-溴乙烯基)苯氧酰基結(jié)構(gòu)的IDO抑制劑及其 制備方法。
本發(fā)明關(guān)注本文所述的化合物、其互變異構(gòu)形式、以及其結(jié)構(gòu)類似物、其藥物可接受 的鹽和含有至少一種該化合物、類似物或鹽的藥物可接受的組合物用于抑制IDO并在治 療或預(yù)防具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑的病理學(xué)特征的疾病中的用途。這樣的疾病包 括，但不限于腫瘤性疾病、癌癥、眼睛疾病、自身免疫性疾病、心境障礙、抑郁癥和焦慮 癥。用途包括體內(nèi)和體外應(yīng)用，以及在制造藥物和IDO抑制劑和組合物中的用途。
本發(fā)明提出的含(￡)-4-(|3-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的IDO抑制劑，結(jié)構(gòu)式如下
其中，R為下述中任意一種:<formula>formula see original document page 4</formula>本發(fā)明提出的含(A-4-(P-溴乙烯基)苯氧酰基結(jié)構(gòu)的IDO抑制劑的制備方法，以 (￡)-4-(卩-溴乙烯基)苯羧酸為反應(yīng)原料，通過酯化反應(yīng)獲得目標(biāo)產(chǎn)物新型IDO抑制劑。 具體合成路線如下
RCOOH
DCC, DMAP
Benzene
其中，R為下述中任意一種<formula>formula see original document page 31</formula>具體步驟如下
向燒瓶中分別加入溶劑苯、("-4-(卜溴乙烯基)苯酚、羧酸(RC02H)、對-二甲氨基 吡啶(DMAP)，在室溫下磁力攪拌5-20分鐘，然后加入N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)， 室溫下反應(yīng)2-24小時反應(yīng)即完成，減壓蒸去溶劑苯，殘留物以乙酸乙酯/石油醚為淋洗液 進(jìn)行柱層析分離提純，即得所需產(chǎn)品；其中，溶劑苯與CE)-4-(P-溴乙烯基)苯酚摩爾比為 50: 1-200: 1,羧酸(RC02H)與CE)-4-(p-溴乙烯基)苯酚摩爾比為1: 1-1,5: 1，對-二 甲氨基吡啶(DMAP)與(五)-4-(卩-溴乙烯基)苯酚摩爾比為0.1: 1-1.5- 1， N,N，-二環(huán)己基
碳二亞胺(DCC)與(五)-4-(P-溴乙烯基)苯酚摩爾比為1: 1-1.2: 1。
本發(fā)明中，所述羧酸為2-吡咯酸、2-呋喃酸或異煙酸等中任一種。
本發(fā)明中，所述淋洗液中，乙酸乙酯與石油醚的體積比為1: 1-1: 20。 本發(fā)明中，CE)-4-(p-溴乙烯基)苯酚的制備方法已申請中國專利，申請?zhí)枮?200710040775.1。
本發(fā)明以CE)-4-(P-溴乙烯基)苯酚為合成砌塊，通過酯化反應(yīng)獲得一系列含 4-(2-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的新型IDO抑制劑，用于治療具有IDO介導(dǎo)的色氨酸
代謝途徑病理學(xué)特征的疾病。
具體實(shí)施例方式
下述通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不能限制本發(fā)明的內(nèi)容。
實(shí)施例1: (￡) -4- ((3-溴乙烯基)苯酚的制備
合成路線如下-.
5CH2(COOH):
■COOH NBS,LiOAc
MeCN-H20
第一步4-羥基本丙烯酸的制備
在裝有回流冷凝管、溫度計的50mL三頸瓶中，加入0.611g(5mmol)4-羥基苯甲醛、 1.040g(10mmol)丙二酸、10mL卩比啶、3滴哌啶，升溫至80。C，磁力攪拌反應(yīng)6至8小時， TLC跟蹤檢測(乙酸乙酯/正己垸/乙酸=10/20/1做展開劑)。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，以 6M冷鹽酸在中和至pH=2，經(jīng)過濾、冰水及乙酸乙酯洗滌、P205真空干燥得淡黃色粉末 0.700g,即CE)-4-((3-溴乙烯基)苯酚，收率92%。
第一歩CE)-3- (4-乙酰苯基)丙烯酸的制備
在裝有氯化鈣干燥管的25mL蛋形瓶中，加入0.761 g(5mmo1) (￡) -4-(|3-溴乙烯基) 苯酚、5mL乙酐、0.5niL三乙胺，于70。C反應(yīng)2小時，TLC跟蹤檢測。反應(yīng)結(jié)束后加水 15mL，于室溫下劇烈攪拌0.5小時，使乙肝分解完全，體系呈混濁狀。過濾，濾餅以20 mL 水洗滌3次，經(jīng)P205真空干燥即得淡黃色粉末(￡>3- (4-乙酰苯基)丙烯酸0.907g,收率 88%。
第三歩(￡) -4-((3-溴乙烯基)乙酸苯酯的制備
在10mL反應(yīng)介質(zhì)(9.5 mL乙月青十0.5mL水)中加入1.031g (5mmo1) ("-3- (4-乙 酰苯基)丙烯酸、0.934g(5.25mmol)N-溴代丁二酰亞胺、0.05g(0.5mmol)醋酸鋰，在250 瓦下進(jìn)行微波反映1分鐘。TLC跟蹤檢測，待反應(yīng)完全后用200mL乙酸乙酸酯分三次萃 取，有機(jī)層經(jīng)無水硫酸鈉干燥后減壓蒸去乙酸乙酸酯得白色粉末1.186g,即(￡) -4-(卩-溴乙烯基)乙酸苯酯，收率96%。
第四歩(￡) -4-((3-溴乙烯基傳酚的制備
將20mL含1.235g(5mmo1)(五)-4鄰-溴乙烯基)乙酸苯酯的氯仿溶液和10mL含 0.68g(10mmol)乙醇鈉的乙醇溶液混合，磁力攪拌反應(yīng)3分鐘。反應(yīng)結(jié)束后以100mL氯仿 稀釋反應(yīng)體系，再加入100mL2。/。的鹽酸并劇烈攪拌。靜置后分出有機(jī)層，水層以50mL 氯仿分兩次萃取，有機(jī)層合并，依次經(jīng)水洗至中性、無水硫酸鈉干燥、減壓蒸去氯仿即得 淡棕色固體0.876g，艮P (五)-4-(卩-溴乙烯基)苯酚,收率88%。實(shí)施例2: CE)-4-(P-溴乙烯基)苯酚2-吡咯酸酯(化合物l)的制備 向25mL的干燥的圓底燒瓶中加入10mL (llOmmol)苯、199mg (lmmol) CE)-4-(p-溴乙烯基)苯酚、117 rng (1.05 mmol) 2-吡咯酸、12 mg(O.l mmol)對-二甲氨基吡啶 (DMAP)，在室溫下磁力攪拌8分鐘后加入206 mg (lmmol) N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺 (DCC)，室溫下進(jìn)行24小時反應(yīng)即完成。減壓蒸去溶劑，殘留物以乙酸乙酯:石油醚 =1:5-1:9為淋洗液進(jìn)行柱層析分離提純即得(五)-4-(P-溴乙烯基)苯鼢2-吡咯酸酯285 mg， 收率為98%。反應(yīng)及產(chǎn)物表征數(shù)據(jù)如下
Light yellow solid; mpl30.6-132.7 °C. IR(KBr): 1719， 935,751 cm-1.
NMR (300 MHz, CDC13): S = 6.36-6.37 (IH， m), 6.75 (1H, d, 14.4 Hz)， 7.06-7.18 (5H, m), 7.35 (2H， d， /= 8.4 Hz), 9.21-9.25 (1H, m).
13C NMR (75 MHz, CDC13): S = 106.62, 110.95, 116.98， 121,69, 122,16, 124.21， 127,10, 133.60,136.22, 150.38, 159.26.
實(shí)施例3: CE)-4-(p-溴乙烯基)苯酚2-呋喃酸酯(化合物2)的制備 向25mL的干燥的圓底燒瓶中加入12mL (130mmol)苯、199mg (lmmol) (￡)-4-(|3-溴乙烯基)苯酚、123 mg(l.lmmol)2-呋喃酸、61 mg(0.5 mmol)對-二甲氨基吡啶(DMAP)， 在室溫下磁力攪拌10分鐘后加入227 mg (l.lmmol) N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)， 室溫下進(jìn)行22小時反應(yīng)即完成。減壓蒸去溶劑，殘留物以乙酸乙酯:石油醚=1:6-1:10為淋 洗液進(jìn)行柱層析分離提純即得CE)-4-((3-溴乙烯基)苯酚2-呋喃酸酯270mg，收率為92%。 反應(yīng)及產(chǎn)物表征數(shù)據(jù)如下
White solid; mpl00.6-100.8 。C. IR (KBr): 1734, 930, 762 cm".
!H NMR (300 MHz, CDC13): S = 6.60-6.61 (1H， m), 6.76 (1H, (!， /= 14,1 Hz), 7.11 (1H, d, / = 14.1 Hz), 7.19 (2H, (!，《/= 8.4 Hz)， 7.34-7.40 (3H, q), 7.69(1H, s).
13CNMR(75 MHz, CDC13): 5= 106.81， 112,21, 119.61， 121.93, 127.17, 133.89, 136.13, 143.79: 147.25, 150.00, 156.64.
實(shí)施例4: (￡)-4-(卩-溴乙烯基)苯酚異煙酸酯(化合物3)的制備
^ Br
DCC, DMAP向25mL的干燥的圓底燒瓶中加入15mL (160mmol)苯、199mg (lmmol) (￡)-4-((3-溴乙烯基)苯酚、148 mg (1.2mmo1 )異煙酸、128 mg(l .05 mmol)對-二甲氨基吡啶(DMAP )， 在室溫下磁力攪拌12分鐘后加入206mg (lmmol) N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)，室 溫下進(jìn)行15小時反應(yīng)即完成。減壓蒸去溶劑，殘留物以乙酸乙酯:石油醚=1:4-1:6為淋洗 液進(jìn)行柱層析分離提純即得CE)-4-((3-溴乙烯基)苯酚異煙酸酯295 mg，收率為97%。反應(yīng) 及產(chǎn)物表征數(shù)據(jù)如下
<formula>formula see original document page 8</formula>
Light yellow solid; m.p. 124.0-125.3 °C. IR(KBr): 1734， 1271， 1087, 935, 746 cm".
NMR (300 MHz, CDC13): 5 = 6,79 (1H, d, J= 14.3 Hz), 7.13 (1H, d, /= 14.3 Hz), 7.20 (2 H: d， /= 8.3 Hz), 7.38 (2H， d, J= 8.3 Hz)， 7.50 (2H， d, J= 5.7 Hz), 8.87 (2H， d, 5.7 Hz). 13C NMR (75 MHz, CDC13): S = 107.14, 121.82, 123.17， 127.26, 134,21, 136.00, 136.62, 150.21, 150.78, 163.55.
實(shí)施例5: IDO抑制活性實(shí)驗(yàn)方法測試方法
通過含有磷酸鉀緩沖液(50 mM, Ph 6.5)、抗壞血酸(20 mM)、過氧化氫酶(200 昭/mL)、亞甲基藍(lán)(lOmM)、 L-色氨酸(400 mM)和純化的人IDO的反應(yīng)混合物(總 體積100 |aL)分析IDO的活性?？梢詫⑷缦率剿镜姆磻?yīng)進(jìn)行40 min (37 'C)并通過加入 20 的30% (w/v)三氯乙酸終止反應(yīng)。然后通過在65 。C下孵育該反應(yīng)混合物15 min， 將在此期間從該反應(yīng)混合物中色氨酸形成的N-甲酰基犬尿氨酸轉(zhuǎn)化為犬尿氨酸。將該反 應(yīng)混合物冷卻至室溫后，加入等體積的2% (w/v)對二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液以便將 存在于該反應(yīng)混合物中的犬氨酸轉(zhuǎn)化為可以在480nm檢測的黃色加合物?？梢允褂脧恼?正的L-犬尿氨酸制備的標(biāo)準(zhǔn)溶液構(gòu)建后一反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。可以使用Bradford的考馬斯 藍(lán)燃料結(jié)合法，使用牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)來確定蛋白質(zhì)的濃度(Takikawaetal. J歷0/. C/z綴1988,263,2041 )。
8上述實(shí)施例2-4中合成的化合物的IDO抑制活性見如下:
IC50 (|ag/ml) 1-MT 34.6 化合物1 37.8 化合物2 63.7 化合物3 65.2。
權(quán)利要求
1、一種含(E)-4-(β-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的IDO抑制劑，其特征在于該IDO抑制劑結(jié)構(gòu)式如下其中，R為下述中任意一種
2、 一種如權(quán)利要求1所述的含(0-4-((3-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的IDO抑制劑的制 備方法，其特征在于具體步驟如下向燒瓶中分別加入溶劑苯、(巧-4-(e-溴乙烯基)苯酚、羧酸、對-二甲氨基吡啶，在室溫下磁力攪拌5-20分鐘，然后加入N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺，室溫下反應(yīng)2-24小時反應(yīng) 即完成，減壓蒸去溶劑苯，殘留物以乙酸乙酯/石油醚為淋洗液進(jìn)行柱層析分離提純，即 得所需產(chǎn)品；其中，溶劑苯與CE)-4-(P-溴乙烯基)苯酚摩爾比為50: 1-200: 1，羧酸與 CE)-4-(P-溴乙烯基)苯酚摩爾比為1: 1-1.5: 1，對-二甲氨基吡啶與CE)-4-(P-溴乙烯基) 苯酚摩爾比為0.1: 1-1.5: 1， N，N，-二環(huán)己基碳二亞胺與CE)-4-((3-溴乙烯基)苯酚摩爾比為1: 1-1.2: 1。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的含(￡)-4-(p-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的IDO抑制劑的制備 方法，其特征在于所述羧酸為2-吡咯酸、2-呋喃酸或異煙酸中任一種。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的含(A-4-(p-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的IDO抑制劑的制備 方法，其特征在于所述淋洗液中，乙酸乙酯與石油醚的體積比為1: l-h 20。
全文摘要
本發(fā)明屬于新藥合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含(E)-4-(β-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的IDO抑制劑及其制備方法，步驟為向燒瓶中分別加入溶劑苯、(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚、羧酸、對-二甲氨基吡啶，在室溫下磁力攪拌5-20分鐘，然后加入N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺，室溫下反應(yīng)2-24小時反應(yīng)即完成。減壓蒸去溶劑苯，殘留物以乙酸乙酯/石油醚為淋洗液進(jìn)行柱層析分離提純，即得所需產(chǎn)品；其中，溶劑苯與(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚摩爾比為50-200∶1，羧酸與(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚摩爾比為1-1.5∶1，對-二甲氨基吡啶與(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚摩爾比為0.1-1.5∶1，N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺與(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚摩爾比為1-1.2∶1。本發(fā)明以(E)-4-(β-溴乙烯基)苯酚為合成砌塊，通過酯化反應(yīng)獲得一系列含(E)-4-(2-溴乙烯基)苯氧?；Y(jié)構(gòu)的新型IDO抑制劑，可用于治療具有IDO介導(dǎo)的色氨酸代謝途徑病理學(xué)特征的疾病。
文檔編號A61P43/00GK101429151SQ20081020404
公開日2009年5月13日 申請日期2008年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月4日
發(fā)明者匡春香, 青 楊, 江玉波 申請人:同濟(jì)大學(xué)