專利名稱：：一種藥物及其制備方法與應用的制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及一種藥物及其制備方法與應用，特別是涉及一種以人參和丹參為原料的藥物及其制備方法與應用。
背景技術(shù)：
：心腦血管疾病是嚴重危害人類健康的一類疾病，隨著社會壓力的增加和我國人口老齡化的加劇，心血管疾病在我國的發(fā)病率居高不下。因此，開發(fā)治療心血管疾病的藥物具有重要的社會意義。中藥材人參是五加科人參屬植物人參(Panax.ginsengC.A.Mey)的根。人參的根味甘、微苦、性溫，具有調(diào)氣養(yǎng)血、安神益智、生津止咳、滋補強身之功效。人參中主要含有皂苷、揮發(fā)油(人參炔醇、人參倍半萜烯、甾醇、脂肪酸)、糖、氨基酸、肽和維生素類等成分，到目前為止，已從紅參、生曬參和白參中共分離得到40種人參皂苷，即人參皂苷RO、Ral、Ra2、Ra3、Rbl、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、20-glc-Rf、Rgl、Rg2、20(R)-人參皂苷-Rg2、Rg3、20(S)-人參皂苷-Rg3、Rg5、Rhl、20(R)-人參皂苷-Rhl、Rh2、20(S)-人參皂苷-Rh2、Rh4、Ri、Rsl、Rs2、丙二?；藚⒃碥誖bl、Rb2、Rc、Rd、三七人參苷R1、西洋參皂苷R1、20(R)-人參皇苷-La、F4、25-hydroxy-ginsenoside-Rg2、25-hydroxy-ginsenoside-Rg2、Ia、Ib、koryoginsenoside-Rgl和-Rg2。人參的莖、葉和花也含有人參皂苷類成分，亦可代替人參入藥。此外，將人參的根經(jīng)過加工、炮制，制備成生曬參、紅參，亦可入藥。中藥材丹參是唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBunge.)的干燥的根及根莖。丹參在心血管疾病方面具有廣泛的藥理作用，其中丹參酚酸是一類含有酚羥基的有機酸類化合物，是丹參水溶性成分中重要的組成部分，可減輕缺血缺氧所致血管內(nèi)皮損傷、促進血管內(nèi)皮增生，具有改善缺血缺氧所致的心肌細胞損傷、抗動脈粥樣硬化、抑制血小板聚集和抗血栓形成的作用。丹參酚酸A、B、C、D、E、F、G、H、I和異丹參酚酸C等都具有很強的抗脂質(zhì)過氧化和清除自由基的作用，其中含量最高的兩個成分丹參酚酸A(SalA)和丹參酚酸B(SalB)的活性最強，對脂質(zhì)過氧化引起的細胞膜損傷有明顯的保護及抗動脈粥樣硬化等作用。機體代謝過程中產(chǎn)生的氧自由基不能被清除時，可對機體產(chǎn)生有害損傷，其中心肌細胞受害尤為顯著。氧自由基具有明顯的抑制鉀離子通道活動的作用，SalA則具有促進鉀離子通道開放的作用，并能逆轉(zhuǎn)被氧自由基抑制的鉀離子通道的活動，從而起到保護作用。目前，人參中皂苷的提取方法一般多采用乙醇提取后再用正丁醇萃取處理的方法，該方法的缺點是萃取操作繁瑣，容易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，給操作帶來不便。此外，正丁醇的沸點較高(117.7°C)，難以揮發(fā)去除，因而其在提取物里易于殘留。亦有采用水提醇沉的提取方法，但工藝繁瑣、能耗大。丹參的水溶性酚酸類組分多采用水提醇沉、水提后過樹脂再醇沉(中國專利CN1129572A)、水提醇沉后過大孔樹脂(中國專利CN1384090A)或聚酰胺柱(中國專利CN1242364A)、水提后先后用聚酰胺柱和大孔樹脂層析(中國專利CN1459448A)，然后減壓或冷凍干燥等方法來獲得。'但以上提取丹參總酚酸的方法存在以下缺點1、所制得的丹參提取物中，丹參總酚酸的含量不高，產(chǎn)率較低，一般在24%;2、采用高濃度乙醇醇沉，使產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)安全性大大降低，乙醇消耗量大，生產(chǎn)成本高；3、高濃度乙醇醇沉步驟，影響丹參提取物中丹參總酚酸的產(chǎn)率；4、需要大量濃縮水，不便于工業(yè)化大生產(chǎn)，操作較為復雜；5、一般選取丹參素和原兒茶醛作為控制丹參制劑質(zhì)量的指標成分，但原兒茶醛有毒副作用，用丹參素代表丹參的活性不甚合理。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種藥物及其制備方法與應用，該藥物可治療和/或預防血管疾病、促進骨髓間充質(zhì)干細胞分化和誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化成心肌樣細胞。所述血管疾病可為心血管疾病、腦血管疾病或周圍血管疾病；所述心血管疾病可為冠心病、心絞痛、心肌缺血或缺氧或心肌梗塞，所述腦血管疾病可為缺血性腦血管病或血管性癡呆，所述周圍血管疾病可為血栓閉塞性腦血管炎或靜脈血栓。本發(fā)明所提供的藥物，它的活性成分由人參和丹參組成的原料制成；所述人參為植物人參的根、莖、葉和花中的至少一種；所述丹參為植物丹參的根；所述人參和丹參的重量份數(shù)比為l:(0.08-20)。其中，人參和丹參可以為炮制后人參和丹參，也可以為人參和丹參的鮮藥材。該藥物的活性成分具體可為人參提取物和丹參提取物，所述人參提取物和丹參提取物的重量份數(shù)比為l:(0.1-20);所述人參提取物中，人參總皂苷的質(zhì)量百分含量大于50%，優(yōu)選為大于等于80%，如80—83%;其中，人參總皂苷包括人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl和人參皂苷Rf，所述人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2%，人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含8量大于等于2.5%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2X;所述丹參提取物中，丹參酚酸的質(zhì)量百分含量大于50%，優(yōu)選為大于等于80%，如89—95%。本發(fā)明的藥物，在需要時，可以加入藥學上可接受的載體，制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑、口腔崩解片、注射劑、輸液劑、緩控釋片劑、緩控釋微丸、氣霧劑或吸入劑；所述載體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑等，還可以加入香味劑或甜味劑等。本發(fā)明藥物中的人參提取物和丹參提取物可按照如下方法制備1)用乙醇水溶液或水對人參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到人參皂苷提取液；用乙醇水溶液或水對丹參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到丹參酚酸提取液；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的人參皂苷提取液進行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的丹參酚酸提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到丹參酚酸洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的人參總皂苷洗脫液進行干燥，得到人參提取物；對上述步驟2)獲得的丹參酚酸洗脫液進行干燥，得到丹參提取物。上述步驟l)中制備人參皂苷提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為50-95%，優(yōu)選為90%;所述人參和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為1:(6-15)，優(yōu)選為l:10;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為60min;所述步驟l)中制備丹參酚酸提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為10-60%,優(yōu)選為50%;所述丹參和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為1:(5-15)，優(yōu)選為l:10;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為30min;所述步驟2)中制備人參皂苷洗脫液時，洗脫水溶性雜質(zhì)時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量小于10%;洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為50-90%，優(yōu)選為60-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟2)中制備丹參酚酸洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為40-60%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對人參總皂苷洗脫液和丹參酚酸洗脫液進行干燥的溫度為50-60°C。本發(fā)明藥物中的人參提取物和丹參提取物還可以按照如下方法制備1)將人參和丹參按照l:(0.08-20)的重量份數(shù)比混合，用乙醇水溶液或水對人參和丹參的混合物進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到含有人參皂苷和丹參酚酸的混合提取液；所述人參為植物人參的根、莖、葉和花中的至少一種；所述丹參為植物丹參的根；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的混合提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到含有人參總皂苷和丹參酚酸的混合洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的混合洗脫液進行干燥，得到人參提取物和丹參提取物的混合提取物。所述步驟l)中制備混合提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為30-90%%，優(yōu)選為60%;所述人參和丹參混合物與乙醇水溶液的重量份數(shù)比為l:(6-15)，優(yōu)選為l:10;所述回流時間為30-120min，優(yōu)選為45min;所述步驟2)中制備混合洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為50-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對混合洗脫液進行干燥的溫度為50-6(TC。本發(fā)明的另一個目的是提供上述藥物的制備方法。本發(fā)明所提供的藥物可以采用以下兩種方法中的任意一種方法制備得到。其中一種制備方法包括以下步驟1)用乙醇水溶液或水對人參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到人參皂苷提取液；用乙醇水溶液或水對丹參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到丹參酚酸提取液；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的人參皂苷提取液進行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的丹參酚酸提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到丹參酚酸洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的人參總皂苷洗脫液進行干燥，得到人參提取物粉末;對上述步驟2)獲得的丹參酚酸洗脫液進行干燥，得到丹參提取物粉末；4)將上述步驟3)獲得的人參提取物粉末與丹參提取物粉末混合，得到本發(fā)明的藥物。所述步驟l)中制備人參皂苷提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為50-95%，優(yōu)選為90%;所述人參和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為1:(6-15)，優(yōu)選為l:10;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為60min;所述步驟l)中制備丹參酚酸提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為10-60%，優(yōu)選為50%;所述丹參和乙醇水溶液的重量份數(shù)比為1:(5-15)，優(yōu)選為l:10;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為30min;所述步驟2)中制備人參皂苷洗脫液時，洗脫水溶性雜質(zhì)時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量小于10%;洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為50-90%，優(yōu)選為60-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹11脂；所述步驟2)中制備丹參酚酸洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為40-60%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對人參總皂苷洗脫液和丹參酚酸洗脫液進行干燥的溫度為50-60°C。本發(fā)明所提供的藥物的另外一種制備方法包括以下步驟1)將人參和丹參按照l:(0.08-20)的重量份數(shù)比混合，用乙醇水溶液或水對人參和丹參的混合物進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到含有人參皂苷和丹參酚酸的混合提取液；所述人參為植物人參的根、莖、葉和花中的至少一種；所述丹參為植物丹參的根；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的混合提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到含有人參總皂苷和丹參酚酸的混合洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的混合洗脫液進行濃縮、干燥，得到人參和丹參的混合提取物粉末，得到本發(fā)明的藥物。所述步驟l)中制備混合提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為60%;所述人參和丹參混合物與乙醇水溶液的重量份數(shù)比為l:(6-15)，優(yōu)選為l:10;所述回流時間為30-120min，優(yōu)選為45min;所述步驟2)中制備混合洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為50-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對混合洗脫液進行干燥的溫度為50-6(TC。本發(fā)明的藥物及其制備方法，具有以下優(yōu)點1、本發(fā)明的藥物藥效物質(zhì)基礎明確，包括配伍比例明確的人參總皂苷與丹參總酚酸；通過大鼠急性心肌梗塞實驗和心肌缺血實驗，結(jié)果表明，采用人參總皂苷與丹參總酚酸相配伍具有最佳的藥效作用，能夠有效抑制大鼠心肌梗塞面積，改善心肌缺血情況，而且保持了與原藥材配伍方相同的療效，本發(fā)明的藥物組分清楚，質(zhì)量容易控制。2、在提取丹參總酚酸的步驟中，采取直接醇提的方法，克服了現(xiàn)有技術(shù)中需要大量濃縮水的缺陷，簡化了生產(chǎn)步驟，優(yōu)化了生產(chǎn)條件，不污染環(huán)境，具有步驟簡單、操作方便、易于產(chǎn)業(yè)化的優(yōu)點；3、本發(fā)明方法避免了現(xiàn)有技術(shù)中因醇沉造成丹參酚酸類有效組分損失的問題，具有有效組分損失少、成品產(chǎn)率高的優(yōu)點；4、本發(fā)明方法避免了現(xiàn)有技術(shù)中滲漉提取耗費時間長的缺點，具有提取效率高的優(yōu)點；5、采用本發(fā)明方法得到的丹參提取物中的丹參總酚酸含量高，大大提高了丹參藥材的利用率；6、采用本發(fā)明方法制備治療心血管疾病的藥物進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)時，較目前采用的其它方法可以使生產(chǎn)成本大大降低；7、本發(fā)明方法工藝穩(wěn)定，所制備出的藥物各批次之間質(zhì)量差異小，同時可通過色譜指紋圖譜，對藥物中的人參總皂苷與丹參總酚酸的組分進行含量測定，能有效控制本發(fā)明藥物的質(zhì)量。圖l為本發(fā)明藥物顆粒劑對異丙腎上腺素所致急性心肌缺血大鼠心電圖的影響曲線圖圖2為本發(fā)明藥物顆粒劑干預中國小型豬骨髓間充質(zhì)干細胞體外分化過程實驗的具體流程圖3為含藥血清誘導30d時，干預MSCs細胞形態(tài)變化的情況圖4為含藥血清誘導30d時，各組細胞的2-DE電泳檢測結(jié)果圖5為含藥血清誘導30d時，部分蛋白的變化情況圖6為蛋白LaminA/C在MSCs分化過程中的表達情況圖7為含藥血清干預MSCs定向分化過程中蛋白的2-DE圖譜圖8為含藥血清干預MSCS定向分化過程中蛋白的差異變化趨勢具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例和附圖，對本發(fā)明做進一步說明。實施例l、治療心血管疾病的藥物的制備本實施例的治療心血管疾病的藥物由人參提取物和丹參提取物組成，其中，人參提取物和丹參提取物的制備方法如下一、人參提取物的制備取人參(Panax.ginsengC.A.Mey)的根粉碎過篩后得到10目的人參粗粉。準確稱取人參粗粉10kg，加入80L體積百分含量為90y。的乙醇進行回流提取，提取時間為45min;收集提取液，然后再向殘渣中加入80L體積百分含量為90%的乙醇進行回流提取，提取時間為45min;再重復上述提取過程一次。將三次的提取液混合，冷卻至室溫，過濾，取濾液減壓濃縮至無醇味，得到2.3kg提取物浸膏；取2.3kg提取物浸膏加入14L水稀釋至2(TC時溶液的密度為1.06g/ml，得到15L人參皂苷提取液。采用預處理好的弱極性大孔吸附樹脂柱(在樹脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙烯苯為骨架的型號為HPD100的樹脂填料，該弱極性大孔吸附樹脂柱和HPD100樹脂填料購自河北滄州寶恩化工有限公司)，對上述獲得的15L人參皂苷提取液進行分離純化，填料后柱床體積為21L。人參皂苷提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹脂柱床體積的水以2bv/h(lbv/h即每小時按l倍柱床體積的流量)的流速沖洗樹脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液；再用4倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為70y。的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；將人參總皂苷洗脫液減壓濃縮為稠清膏，將稠清膏再經(jīng)6(TC恒溫常壓干燥，得到500g人參提取物粉末。采用HPLC法檢測人參提取物粉末中人參總皂苷的含量，具體的色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以水為流動相B，梯度洗脫。流速lml/min，檢測波長為203nm。理論塔板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計算，不低于6000。具體的梯度洗脫條件如下<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>結(jié)果表明，上述得到的人參提取物粉末中，人參總皂苷的質(zhì)量百分含量為80%，人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為3.4X，人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為3.7%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為4.1%;人參皂苷Rf在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為0.12%。二、丹參提取物的制備取丹參(SalviamiltiorrhizaBunge.)的根10kg，切成飲片，加入100L體積百分含量為50%的乙醇浸泡處后進行回流提取，提取時間為30rain;收集提取液，然后再向殘渣中加入IOOL體積百分含量為50%的乙醇進行回流提取，提取時間為30min。將兩次的提取液混合，得到150L丹參提取液，再將該150L丹參提取液進行抽濾、濃縮至50L。采用大孔吸附樹脂柱(以型號為HPD700的苯乙烯型樹脂為填料，購自河北滄州寶恩化工有限公司)，對上述獲得的50L丹參提取液進行分離純化，填料后柱床體積為65L。丹參提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹脂柱床體積的水以2bv/h(lbv/h即每小時按l倍柱床體積的流量)的流速沖洗樹脂柱，棄去洗脫液，然后再用3倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為60%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到丹參酚酸洗脫液；將丹參酚酸洗脫液進行減壓濃縮，得到775g為比重為1.2(60°C)的稠清膏；對稠清膏再經(jīng)6(TC恒溫常壓干燥，得到620g丹參提取物粉末。采用HPLC法檢測丹參提取物粉末中丹參總酚酸的含量，具體的色譜條件為以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以按以下體積比混合的溶液作為流動相甲醇乙腈甲酸水=30:10:1:59;檢測波長286nm。理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計算，不低于2000。精確稱取2.5g上述獲得的丹參提取物粉末，加入40ml水，浸泡lh后用超聲處理0.5h，取上清液；向剩余殘渣中再加入40ml水，超聲處理0.5h，取上清液；再重復過程一次。將三次收集的上清液混合并用水定容至250ml，作為供試樣品。將供試樣品稀釋5倍，取2ml置于50ml的量瓶中，加無水乙醇至10ml，再加入4ml質(zhì)量百分含量為0.3%的十二烷基磺酸鈉和2ml按照1:0.9的體積比混合的由三氯化鐵溶液和鐵氰化鉀溶液組成的混合液(其中，三氯化鐵溶液的質(zhì)量百分含量為0.6%，鐵氰化鉀溶液的質(zhì)量百分含量為0.9%),將混合后的溶液搖勻，暗處放置5min后，用0.1mo卜L"鹽酸溶液定容，搖勻，暗處放置20min后，分光光度計720nm處進行檢測。取配制好的1mg/mL的丹酚酸B標準溶液分別稀釋2、5、10、20、50和100倍，用上述方法檢測，記錄結(jié)果。以濃度mg.mL"為橫坐標，以吸光度Abs值為縱坐標，經(jīng)excel軟件處理得到回歸方程。根據(jù)丹酚酸B標準溶液的回歸方程計算出總酚酸的含量與產(chǎn)率。結(jié)果表明，上述得到的丹參提取物粉末中，丹參總酚酸的質(zhì)量百分含量為89.8%，丹參總酚酸的產(chǎn)率為6.6%。三、治療心血管疾病的藥物的制備將210g上述步驟一制備的人參提取物粉末與90g上述步驟二制備的丹參提取物粉末混合，得到本發(fā)明的藥物。實施例2、治療心血管疾病的藥物的制備人參提取物和丹參提取物的制備方法同實施例1。將200g按照上述實施例1步驟一的方法制備的人參提取物粉末與20g按照上述實施例1步驟二的方法制備的丹參提取物粉末混合，得到本發(fā)明的藥物。實施例3、治療心血管疾病的藥物的制備人參提取物和丹參提取物的制備方法同實施例1。將20g按照上述實施例1步驟一的方法制備的人參提取物粉末與400g按照上述實施例1步驟二的方法制備的丹參提取物粉末混合，得到本發(fā)明的藥物。實施例4、治療心血管疾病藥物的藥效實驗1、大鼠急性心肌缺血與心肌梗塞藥效實驗分別取上述實施例1、2和3制備的藥物，用生理鹽水配為lg/ml的藥液進行藥效實驗。取SD大鼠(購自北京瑪斯實驗動物公司)75只，隨機分為5組，分別為正常組、模型組、陽性對照組、高劑量藥物組和低劑量藥物組，每組15只。其中模型組、陽性對照組、高劑量藥物組和低劑量藥物組大鼠均腹腔多點注射異丙腎上腺素(ISO)，每日l次，每次10rag.kg—'體重，連續(xù)注射2d，構(gòu)建急性心肌缺血模型大鼠，正常組給予相同劑量的生理鹽水。建模成功后，高劑量藥物組大鼠按照320mgkg—M本重的劑量分別灌胃給予上述實施例1、2和3制備的治療心血管疾病的藥物提取物;低劑量藥物組大鼠按照64mgkg—1體重的劑量分別灌胃給予上述實施例l、2和3制備的治療心血管疾病的藥物提取物；陽性對照組大鼠按照200mgkg—'體重的劑量灌胃給予復方丹參滴丸(購自天津天士力公司)；模型組大鼠和正常組大鼠按照7.5mlkg—'體重的劑量灌胃給予同體積的生理鹽水。以上各組每天給藥一次，共給藥7天。最后l次給藥lh后，用烏拉坦按照l.3gkg—'體重的劑量對上述各組大鼠進行腹腔注射麻醉。將各組大鼠仰臥位固定，接MPA2000多道生物信號分析系統(tǒng)(II導16聯(lián))，記錄各組大鼠5min內(nèi)的正常心電圖，將發(fā)生異常的大鼠棄去不用。待穩(wěn)定后，除正常組大鼠給予以生理鹽水外，其余各組大鼠均腹腔多點注射異丙腎上腺素(ISO)，注射計量為10mgkg—'體重。分別記錄注射ISO后O.5、1、2、5、10、15和20min時各組大鼠的心電圖，觀察J點(QRS波群的終點與T波交接處)的變化。以其降低的mV數(shù)作為指標，AJ(心電圖J點變化值)二腹腔注射ISO后各時間點心電圖J點值(mV)—腹腔注射ISO前心電圖丄點值(mV)。具備以下條件之一者判斷為大鼠心肌缺血陽性標準1)J點向下或向上偏移》0.lmV;2)T波高鷙，超過同導聯(lián)R波的l/2;3)T波高聳伴J點移位。以QRS復合波起點的連線作等電線，以J點的偏移程度為診斷依據(jù)，并選擇2秒內(nèi)心跳計算J點改變的毫伏平均數(shù)作為心肌缺血程度的指標。實施例l的治療心血管疾病的藥物提取物對異丙腎上腺素(ISO)所致的急性心肌缺血大鼠心電圖的影響結(jié)果如圖l所示。從圖中可以看出，各組大鼠腹腔注射IS0后，心電圖J點均發(fā)生明顯變化，短暫升高后，隨著時間的延長，逐漸下降；對抗ISO誘導的大鼠心電圖J點升高作用以給藥組最優(yōu)，給藥組大鼠各時間點AJ與模型組大鼠相比，差異較顯著(P<0.05)。測完心電圖以后，給予實施例l的藥物的各組SD大鼠在ipIS0后lh，開腹腔自下腔靜脈取血，分離血清冷凍保存，測量其中LDH、CK、SOD和MDA的含量。結(jié)果如表1所示。表l急性心肌缺血大鼠血清中LDH、CK、SOD以及MDA值(x士s，n=9)17<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>于S0D與MDA，三者效果相近。取血結(jié)束后，迅速取出各組SD大鼠的心臟，以生理鹽水清洗干凈后，剔除非心肌組織，用濾紙吸干，稱重，在冰箱里冷凍30分鐘，取出后將心室切成O.lcra厚的心肌片，置于硝基四氮唑藍(NBT)溶液中，在37"C水浴中溫孵染色15min，將心肌非蘭染區(qū)(梗塞區(qū))切下，稱濕重，計算心肌非蘭染區(qū)重量與總心臟重量之比即為心肌梗塞面積(心肌梗塞面積=(梗塞區(qū)心臟重/總心臟重量)X100%)。結(jié)果如表2所示。表2急性心肌缺血大鼠心臟梗塞面積(x±s，n=9)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>與模型組比較，*P<0.05承承承P<0.001。結(jié)果表明，與正常組相比，模型組大鼠的心臟梗塞面積顯著升高(P<0.001);與模型組相比，高劑量藥物組大鼠心肌梗塞面積明顯減少，具有顯著性差異(P<0.05)。-2、治療心血管疾病的藥物提取物促進中國小型豬骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)體外分化過程實驗具體實驗流程如圖2所示。分別將上述實施例1、2和3的藥物溶液以10mlkg—'體重的劑量對SD大鼠進行灌胃給藥，每日灌胃2次，連續(xù)給藥3d，最后一次給藥lh后，取大鼠的血清，加入培養(yǎng)基中，制成4%的含藥血清。中國小型豬的骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)(購自北京協(xié)和醫(yī)院動物室)經(jīng)提取、純化后培養(yǎng)于DMEM/F12培養(yǎng)基中，使細胞密度達100個/100pL。將中國小型豬MSCs分為A、B、C三組，A組為MSCs增殖組；B組為5-aza誘導組，即在培養(yǎng)過程中加入5-氮胞苷(5-aza)(購自上海生工生物工程技術(shù)服務有限公司)，使其在培養(yǎng)基中的終濃度為10pmol/L;C組為含藥血清組，即在培養(yǎng)過程中加入5-aza，使其在培養(yǎng)基中的終濃度為10pmol/L，同時加入上述制備的4%含藥血清。給予實施例1的藥物的各組細胞培養(yǎng)30d時的細胞形態(tài)如圖3所示。其中，圖3A、3B和3C分別表示上述A、B、C三個實驗組。結(jié)果表明，在培養(yǎng)基中加入上述制備的含藥血清，可以使細胞形態(tài)發(fā)生變化，結(jié)合單用5-aza誘導MSCs定向分化時細胞形態(tài)變化的情況，初步表明含藥血清在5-aza誘導MSCs定向分化過程中起到抑制細胞增殖、促進細胞分化的作用。用實施例2或3的藥物制備的含藥血清在5-aza誘導MSCs定向分化過程中也能起到抑制細胞增殖、促進細胞分化的作用。給予實施例1的藥物的上述各組細胞培養(yǎng)30d時，分別提取蛋白，進行2-DE電泳，進行蛋白質(zhì)組學分析2-DE電泳的具體條件如下蛋白上樣量150嗎；2-DE電泳條件和參數(shù)pH5-8IPG線性膠條(17cm);10kV下聚焦60kVh;12%PAGE用于分離蛋白，恒流電泳(30mA/gel)運行約8h。銀染檢測凝膠蛋白點，結(jié)果如圖4所示。其中，圖4A、4B和4C分別表示上述A、B、C三個實驗組。結(jié)果表明，含藥血清能夠干預MSCs分化過程中蛋白的表達。上述各組細胞培養(yǎng)30d時，部分蛋白的變化情況如圖5所示。實驗設兩次重復。圖5中，橫坐標表示不同的蛋白，表3中僅列出顯著性變化蛋白；縱坐標表示各蛋白的表達情況。表3含藥血清干預MSCs分化過程中差異蛋白鑒定情況1類似核纖層蛋白A/C(70kDa)3類似果糖-二磷酸醛縮酶4磷酸丙糖異構(gòu)酶(Tpil)10肽酰脯氨酰異構(gòu)酶A(Ppia)11a烯醇化酶(Enol)14肌丙酮酸激酶(Pkm2)25抗氧化酶2(Prdx2)35微管定位蛋白，抗氧化蛋白質(zhì)從圖5中可以看出，類似核纖層蛋白A/C在MSCs分化前沒有表達，分化后可以檢測出該蛋白的表達，在含藥血清的作用下，該蛋白表達呈現(xiàn)約5.7倍的上調(diào)趨勢，表明含藥血清可以促進MSCs的分化過程；抗氧化酶2在MSCs分化過程中呈現(xiàn)遞增趨勢，而含藥血清作用于MSCS分化過程后，抑制了抗氧化酶2的表達。核纖層蛋白A7C在MSCs分化過程中的表達情況如圖6所示。從圖6中也可以看出，類似核纖層蛋白A/C在MSCs分化前沒有表達，分化后可以檢測出該蛋白的表達，在含藥血清的作用下，該蛋白表達呈現(xiàn)出上調(diào)趨勢，表明含藥血清可以促進MSCs的分化過程。用實施例1的藥物制備的含藥血清干預MSCs定向分化過程中不同時間點(6d和30d)的蛋白2-DE圖譜如圖7所示。其中，圖7A為含藥血清干預MSCs定向分化6d時蛋白的2-DE圖譜，圖7B為含藥血清干預MSCs定向分化30d時蛋白的2-DE圖譜。通過對這兩個時伺點的2-DE圖譜的比較，可以分析在含藥血清干預分化過程中蛋白的變化趨勢。圖8中列出了兩次重復實驗中，含藥血清干預誘導MSCs分化前后一些顯著性變化蛋白的表達情況。圖8中，橫坐標表示不同的蛋白，各蛋白的編號及名稱如表4所示；縱坐標表示各蛋白的表達情況。6C1表示第一次實驗，含藥血清組6d時的表達情況，6C2表示第二次實驗，含藥血清組6d時的表達情況，30Cl表示第一次實驗，含藥血清組30d時的表達情況，30C2表示第二次實驗，含藥血清組30d時的表達情況。_表4定向分化過程蛋白鑒定結(jié)果_蛋白編號蛋白名稱1類似P5微管蛋白2心臟a肌球蛋白5非肌性肌球蛋白重鏈6a烯醇化酶7類似KIAA0098蛋白8微管定位蛋白，抗氧化蛋白12熱休克27kDa蛋白113a烯醇酶15肌丙酮酸激酶21以上實驗結(jié)果表明，在含藥血清干預MSCS定向分化過程中，部分蛋白根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)特點及其在細胞內(nèi)的分布情況，通過不同的信號途徑參與細胞增殖或分化過程，并由此導致上述多種蛋白表達上呈現(xiàn)差異。在5-aza誘導下，MSCs體外定向分化為心肌細胞過程中，表達呈現(xiàn)差異的蛋白參與了MSCs的分化過程，而含藥血清與5-aza協(xié)同作用可以誘導MSCs的分化，在相關(guān)蛋白的表達上有所體現(xiàn)。用實施例2或3的藥物制備的含藥血清與5-aza協(xié)同作用也可以誘導MSCs的分化。3、誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化成心肌樣細胞的基因表達檢測己有許多文獻報道5-aza可以誘導BMMSCs向心肌細胞分化，其分化的機制可能是由于5-aza能夠使細胞DNA中某些胞嘧啶去甲基化而引起的。取上述步驟2中經(jīng)5-aza誘導后的MSCs細胞(即B組細胞)和經(jīng)5-aza和實施例l的藥物制備的含藥血清誘導30天后的MSCs細胞(即C組細胞)，分別提取其總RNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以該cDNA為模板，分別設計引物PCR擴增以下10個基因Illa、Pla2g2a、Ccl20、Ccl2、Mmp9、IL6、Sncg、2'5，-AS、Pem、3aHSD。具體引物如下細雄引物位詈引物序列P「R淺碰IL6ILlaCcl2Ccl20PemMmp9Pla2g2aSncg3aHSD2'5'陽ASUpperCAAGAAAGACAAAGCCAGAGLowerCTTAGCCACTCCTTCTGTGAUpperGGGAGGAGACGACTCTAAALowerATGAGGTCGGTCTCACTACUpperCTCAGCCAGATGCAGTTAALowerTCTCTCTTGAGCTTGGTGAUpperTGGGTTTCACAACACAGATGLowerCTTGGTTCTTAGGCTGAGGAUpperATCAGTGTGTCCAGAGTGCALowerCATCTTACTCCCCATCTTGCUpperTTGAAGTCTCAGAAGGTGGALowerACTCACACGCCAGAAGTATTUpperTGGTGCTGTGTGACTCATGLowerAGCTTTATCGCACTGGCACUpperGTCAGCAGCGTCAACACAGTLowerCTCCACTCTTGGCCTCTTCUpperAAGCGGATCAAAGAGCTAALowerGTAAATGGATGATTGGGATGUpperGGTGGGAACCAAGAAGGCTLowerGGGTTCACAGCAGGATGCA156bp147bp151bp143bp147bp141bp159bp154bp137bp148bp根據(jù)基因表達的上調(diào)、下調(diào)，以及含藥血清誘導作用的時間點、作用持續(xù)時間和基因的生理功能將含藥血清誘導作用方式分為五種作用模式組分長時間誘導方式、組分全程上調(diào)誘導方式、促進MSCs代謝發(fā)育的作用方式、抑制MSCS癌變的作用方式和增強細胞生命基礎指征的作用方式。1)組分長時間誘導方式基因Illa、Ccl20、Ccl2、Pla2g2a和Mmp9對含藥血清的敏感方式類似，以10天、20天時間點為活躍期。以lO天時間點基因Illa、Ccl20、Ccl2、Pla2g2a和Mmp9的變化量進行對比，整體趨勢是5-aza組近似或強于含藥血清組；但以連續(xù)作用時間長短進行比對，含藥血清組在10天、20天時，基因Illa、Ccl20、Ccl2、Pla2g2a和Mmp9都有表達上升趨勢，明顯強于5-aza誘導組。說明上述步驟三制備的藥物有更緩慢、更穩(wěn)定的功效。2)組分全程上調(diào)誘導方式Mmp9(基質(zhì)金屬肽酶9)是一種蛋白水解酶，有實驗證實，在人動脈粥樣硬化不穩(wěn)定性斑塊中MMP9過度表達，活性增強，并能夠分解動脈粥樣硬化斑塊中的膠原片段。含藥血清誘導刺激作用下，Mmp9基因在10天至40天的時間內(nèi)均呈上調(diào)表達，表明上述步驟三制備的藥物用于急性心肌梗塞治療時，會持續(xù)性的刺激Mmp9基因表達上調(diào)，作用在心肌梗塞產(chǎn)生的動脈粥樣硬化斑塊處，使斑塊的基質(zhì)降解，從而為新生的心肌細胞替代斑塊處壞死的心肌細胞創(chuàng)造有利的條件。3)促進MSCs代謝發(fā)育的作用方式116(白細胞介素6)基因定量檢測結(jié)果顯示，只有含藥血清組10天時間點時I16基因表達明顯升高。說明含藥血清對I16基因有明顯的干預作用，而且發(fā)揮作用的最佳時間為IO天。20天、30天和40天時，所有樣本中I16基因表達均呈現(xiàn)下調(diào)，30天時下調(diào)最為明顯，考慮此時細胞凋亡已經(jīng)開始。4)抑制MSCs癌變的作用方式Sncg(同型核蛋白Y)基因定量檢測結(jié)果顯示，5-aza誘導組和含藥血清組中Sncg基因均在30天時有明顯的表達下降。Sncg基因變異是多種癌癥惡化關(guān)鍵因素，與癌細胞的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移和預后有關(guān)。5)增強細胞生命基礎指征的作用方式Pem(多態(tài)上皮黏液素)基因是胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導分子，在成體細胞中沒有表達，但在生殖細胞中有表達，與胚胎細胞分化和性腺發(fā)育有關(guān)；2'5，-AS(2'5'寡聚腺苷酸合成酶)基因是干擾素發(fā)揮作用的一個媒介，具有抗病毒、抑制DNA合成和細胞生長、調(diào)節(jié)免疫反應等生物功能；3aHSD(3a-羥-類固醇脫氫酶)是類固醇代謝途徑中最初的酶之一，血清中的總膽汁酸(TBA)是一類具有3a-羥基的類固醇衍生物，在3aHSD催化下，脫氫生成相應的3-酮類固醇，在此過程中將輔酶NAD+還原為NADH+H+，進一步調(diào)節(jié)6-磷酸葡萄糖脫氫酶的活性，參與糖的代謝循環(huán)。23分析以上各基因的功能發(fā)現(xiàn)，與生物體生命維持的IO大類基本基因功能均有涉及。結(jié)果分析表明，Illa、Pla2g2a、Ccl20、Ccl2、Mmp9這5個基因可能在誘導分化MSCs成為心肌樣細胞的作用機制上發(fā)揮了主要功能，而其它5個基因又分別在促進MSCs代謝發(fā)育、抑制MSCs的癌變過程、增強細胞生命基礎指征方面發(fā)揮了輔助性的功能。因此認為上述步驟三制備的藥物誘導MSCs分化成心肌樣細胞的過程是多功能、多網(wǎng)絡、多基因的協(xié)調(diào)作用的結(jié)果。免疫熒光結(jié)果表明，5-aza誘導組誘導MSCs分化成心肌樣細胞的誘導轉(zhuǎn)化率高于含藥血清組，但基因定量檢測結(jié)果表明，含藥血清組的關(guān)鍵基因的表達改變持續(xù)時間長于5-aza誘導組，考慮5-aza誘導作用顯效快，能夠在短時間內(nèi)發(fā)揮其作用，而含藥血清組恰恰相反，表明上述實施例l、2或3制備的藥物可能對遺傳表達的物質(zhì)基礎-基因發(fā)揮范圍更大、程度更深的誘導作用，這種作用由量到質(zhì)達到顯效所需的時間更長。所以，認為上述實施例l、2或3制備的藥物誘導MSCs分化成心肌樣細胞的作用，表觀現(xiàn)象不如5-aza明顯，但作用的本質(zhì)基礎的改善效率要優(yōu)于5-aza。實施例5、治療心血管疾病的藥物顆粒劑的制備一、治療心血管疾病的藥物顆粒劑的制備取上述實施例1步驟一制備的人參提取物粉末100g和上述實施例1步驟二制備的丹參提取物粉末10g,將二者混合均勻，再加入360g糊精(加入糊精的重量是人參提取物粉末與丹參提取物粉末重量之和的3倍)和240g蔗糖粉(加入蔗糖粉的重量是人參提取物粉末與丹參提取物粉末重量之和的2倍)，混合均勻，制成為粒度為16目的藥物顆粒，6(TC條件下對藥物顆粒進行干燥，得到治療心血管疾病的藥物顆粒劑。二、動物實驗具體實驗方法同實施例4。結(jié)果表明，本實施例的藥物顆粒劑對大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治療效果與實施例1、2和3的藥物的效果相同。實施例6、治療心血管疾病的藥物注射劑的制備一、人參提取物的制備取人參(Panax.ginsengC.A.Mey的花粉碎過篩后得到10目的人參花粗粉。準確稱取人參花粗粉150g，加入1500ml體積百分含量為90%的乙醇進行回流提取，提取時間為45min;收集提取液，然后再向殘渣中加入1500ml體積百分含量為90%的乙醇進行回流提取，提取時間為45min。將兩次提取液混合，冷卻至室溫，過濾，取濾液減壓濃縮至無醇味，得到32g提取物浸膏；取32g提取物浸膏加入90ml水稀釋至20。C時溶液的密度為1.06g/ml，得到96ml人參皂苷提取液。采用預處理好的弱極性大孔吸附樹脂柱(在樹脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙烯苯為骨架型號為HPD700的樹脂填料，該弱極性大孔吸附樹脂柱和HPD700樹脂填料購自河北滄州寶恩化工有限公司)，對上述獲得的96ml人參皂苷提取液進行分離純化，填料后柱床體積為117ml。人參皂苷提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹脂柱床體積的水以2bv/h(lbv/h即每小時按l倍柱床體積的流量)的流速沖洗樹脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液；再用4倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為60y。的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；將人參總皂苷洗脫液減壓濃縮為稠清膏，將稠清膏再經(jīng)60t恒溫常壓干燥，得到9g人參花提取物粉末(其中人參總皂苷的含量達83%(測定方法同實施例l))，人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為2.3X,人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為2.6%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為3.1%;人參皂苷Rf在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為0.015%。二、丹參提取物的制備取丹參(SalviamiltiorrhizaBunge.)的根10kg，切成飲片，將飲片粉碎過10目篩制成丹參粗粉，加入100L體積百分含量為50。/。的乙醇浸泡4h后進行回流提取，提取時間為30min;收集提取液，然后再向殘渣中加入100L體積百分含量為50%的乙醇進行回流提取，提取時間為30rain。將兩次的提取液混合，得到150L丹參提取液，再將該150L丹參提取液進行抽濾、濃縮至50L。釆用大孔吸附樹脂柱(以型號為HPD300的苯乙烯型樹脂為填料，購自河北滄州寶恩化工有限公司)，對上述獲得的50L丹參提取液進行分離純化，填料后柱床體積為65L。丹參提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹脂柱床體積的水以2bv/h(lbv/h即每小時按l倍柱床體積的流量)的流速沖洗樹脂柱，棄去洗脫液，然后再用3倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為40%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到丹參酚酸洗脫液；將丹參酚酸洗脫液進行減壓濃縮，得到820g為比重為1.2(6(TC)的稠清膏；對稠清膏再經(jīng)60。C恒溫常壓干燥，得到660g丹參提取物粉末(其中丹參總酚酸的產(chǎn)率為6.6%)。經(jīng)檢測，丹參提取物粉末中，丹參總酚酸的含量為94.7%(測定方法同實施例l)。三、治療心血管疾病的注射劑的制備取上述步驟一制備的人參提取物粉末10g和上述步驟二制備的丹參提取物粉末200g，再加入630ml注射用水，攪拌均勻，于4。C條件下靜置24h。吸取上清液，按0.05g注射劑用活性炭/100ml上清液的比例在上清液中加入注射劑用活性炭，4(TC條件下保溫30min，用0.22|im微孔濾膜過濾；取濾液，再加入注射用水使混合液的總重量為840g，攪拌均勻，安瓿灌封，115'C條件下熱壓滅菌30分鐘，包裝，得到治療心血管疾病的藥物注射劑。四、動物實驗具體實驗方法同實施例4。結(jié)果表明，本實施例的藥物注射劑對大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治療效果與實施例1、2和3的藥物的效果相同。實施例7、治療心血管疾病的藥物緩釋片的制備一、人參提取物的制備準確稱取取人參(Panax.ginsengC.A.Mey)的葉片8kg，加入64L體積百分含量為90%的乙醇進行回流提取，提取時間為45min;收集提取液，然后再向殘渣中加入64Lml體積百分含量為90%的乙醇進行回流提取，提取時間為45min;再重復上述提取過程一次。將三次的提取液混合，冷卻至室溫，過濾，取濾液減壓濃縮至無醇味，得到1.15kg提取物浸膏；取l.15kg提取物浸膏加入4.1L水稀釋至20。C時溶液的密度為1.06g/ml，得到4.4L人參皂苷提取液。采用預處理好的弱極性大孔吸附樹脂柱(以聚苯乙烯或聚二乙烯苯為骨架，在樹脂柱中填充型號為S-8的樹脂填料，購自河北滄州寶恩化工有限公司)，對上述獲得的4.4L人參皂苷提取液進行分離純化，填料后柱床體積為5.7L。人參皂苷提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為5%的乙醇以2bv/h(lbv/h即每小時按l倍柱床體積的流量)的流速沖洗樹脂柱，除去多糖等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液；再用4倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為70%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；將人參總皂苷洗脫液減壓濃縮為稠清膏，將得到的450g稠清膏再經(jīng)6(TC恒溫常壓干燥，得到320g人參提取物粉末(其中人參總皂苷的含量達81%(測定方法同實施例l))，人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為2.1%，人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為2.6%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為2.5%;人參皂苷Rf在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為0.03%。二、丹參提取物的制備取丹參(SalviamiltiorrhizaBunge.)的根10kg，切成飲片，將飲片粉碎過10目篩制成丹參粗粉，加入IOOL體積百分含量為50%的乙醇浸泡處后進行回流提取，提取時間為30min;收集提取液，然后再向殘渣中加入100L體積百分含量為50%的乙醇進行回流提取，提取時間為30min。將兩次的提取液混合，得到150L丹參提取液，再將該150L丹參提取液進行抽濾、濃縮至50L。采用大孔吸附樹脂柱(以型號為HPD300的苯乙烯型樹脂為填料，購自河北滄州寶恩化工有限公司)，對上述獲得的50L丹參提取液進行分離純化，填料后柱床體積為63L。丹參提取液經(jīng)色譜柱吸附后，用3倍于樹脂柱床體積的水以2bv/h(lbv/h即每小時按l倍柱床體積的流量)的流速沖洗樹脂柱，棄去洗脫液，然后再用3倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為50%的乙醇以lbv/h的流速洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到丹參酚酸洗脫液；將丹參酚酸洗脫液進行減壓濃縮，得到812g為比重為L2(6(TC)的稠清膏；對稠清膏再經(jīng)60'C恒溫常壓干燥，得到640g丹參提取物粉末(其中丹參總酚酸的產(chǎn)率為6.4%)。經(jīng)檢測，丹參提取物粉末中，丹參總酚酸的含量為91.6%(測定方法同實施例l)。三、治療心血管疾病的藥物緩釋片的制備取上述步驟一制備的人參提取物粉末50g和上述步驟二制備的丹參提取物粉末50g，將二者混合均勻，再加入100g羥丙基甲基纖維素(規(guī)格為SH4000)(加入羥丙基甲基纖維素的重量是人參提取物粉末與丹參提取物粉末的重量之和)和100g乳糖(加入乳糖的重量是人參提取物粉末與丹參提取物粉末的重量之和)，混合均勻，制成為粒度為20目的顆粒，6(TC條件下對顆粒進行干燥，再加入1.5g硬脂酸鎂，使硬脂酸鎂覆于已制成的顆粒表面(硬脂酸鎂的重量占緩釋片總重量的0.5%)，最后再進行壓片，得到治療心血管疾病的藥物緩釋片，每片重lg。四、動物實驗具體實驗方法同實施例4。結(jié)果表明，本實施例的藥物緩釋片對大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治療效果與實施例1、2和3的藥物的效果相同。實施例8、一種治療心血管疾病的藥物片劑的制備一、人參和丹參混合提取物的制備將250g紅參飲片與250g丹參飲片混合，加入4000ml體積百分含量為50%的乙醇進行回流提取，提取時間為45min，收集提取液，然后再向殘渣中加入3500ml體積百分含量為50%的乙醇進行回流提取，提取時間為45min;再重復上述提取過程一次。將三次的提取液混合，冷卻至室溫，過濾，取濾液減壓濃縮至無醇味，得到127g提取物浸膏；取127g提取物浸膏加入600ml水進行稀釋，得到640ml混合提取液。采用預處理好的弱極性大孔吸附樹脂柱(在樹脂柱中填充以聚苯乙烯或聚二乙烯苯為骨架的型號為HPD100的樹脂填料，購自河北滄州寶恩化工有限公司)，對上述獲得的640ml混合提取液進行分離純化，填料后柱床體積為790ml?；旌咸崛∫航?jīng)色譜柱吸附后，用7倍于樹脂柱床體積的水以2bv/h(lbv/h即每小時按l倍柱床體積的流量)的流速沖洗樹脂柱，除去水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液；再用3倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為40%的乙醇以2bv/h的流速洗脫樹脂柱一次，用3倍于樹脂柱床體積的體積百分含量為65%的乙醇以2bv/h的流速洗脫樹脂柱一次，收集兩次的洗脫液并將其合并，得到人參總皂苷和丹參酚酸的混合洗脫液；將人參總皂苷和丹參總酚酸的混合洗脫液進行干燥，得到22g人參和丹參的混合提取物粉末。其中，人參總皂苷的含量為31.3%，人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為4.1%，人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為4.3%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為3.9%，人參皂苷Rf在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量為0.4%;丹參總酚酸的含量為33.7%(測定方法同實施例1)。二、治療心血管疾病的藥物片劑的制備稱取22g上述步驟一制備的人參和丹參的混合提取物粉末，加入22g淀粉(加入淀粉的重量和混合提取物粉末的重量相等)和llg乳糖(加入乳糖的重量是混合提取物粉末重量的一半)，混合均勻，制成粒度為16目的顆粒，經(jīng)干燥，壓片，得到治療心血管疾病的藥物片劑。四、動物實驗具體實驗方法同實施例4。結(jié)果表明，本實施例的藥物片劑對大鼠急性心肌梗塞和心肌缺血的治療效果與實施例1、2和3的藥物的效果相同。實施例9、一種治療心血管疾病的藥物湯劑的制備及其藥效實驗一、治療心血管疾病的藥物湯劑的制備取生曬參飲片與丹參飲片按7:3的重量比混合，在得到的100g混合物中加入800ml水煎煮l小時，過濾，分別取煎煮液和濾渣，在濾渣中再加入600ml水煎煮l小時，將兩次的煎煮液合并，過濾、濃縮，得到1100ml濾液，該濾液即為治療心血管疾病的藥物湯劑。該湯劑中，人參總皂苷的含量為3.4mg/ml，人參皂苷Rgl的含量為Rgl的含量O.18mg/ml，人參皂苷Re在人參總皂苷中的含量為O.23mg/ml，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的含量為O.14mg/ml;丹參總酚酸的含量為l.1mg/ral(測定方法同實施例l)。二、治療心血管疾病的藥物湯劑的藥效實驗按照上述實施例4的方法構(gòu)建急性心肌缺血模型大鼠，并分為模型組和給藥組，給藥組大鼠按照5.Oml/kg體重的劑量灌胃給予上述步驟一制備的治療心血管疾病的藥物湯劑，模型組給予相同劑量的生理鹽水，考察該藥物對異丙腎上腺素(ISO)所致急性心肌缺血大鼠心臟梗死面積的影響(x士s，n=9)。結(jié)果如表5所示。28表5治療心血管疾病的藥物湯劑對急性心肌缺血大鼠心臟梗死面積的影響組別<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>與模型組比較，*P<0.05**P<0.01結(jié)果表明，給藥組在一定程度上可以有效抑制心臟梗死面積權(quán)利要求1、一種藥物，它的活性成分由人參和丹參組成的原料制成；所述人參為人參植株的根、莖、葉和花中的至少一種；所述丹參為丹參植株的根；所述人參和丹參的重量份數(shù)比為1∶(0.08-20)。2、一種藥物，它的活性成分為人參提取物和丹參提取物；所述人參提取物和丹參提取物的重量份數(shù)比為l:(0.1-20);所述人參提取物中，人參總皂苷的質(zhì)量百分含量大于50%，優(yōu)選為大于等于80%;所述丹參提取物中，丹參酚酸的質(zhì)量百分含量大于50%，優(yōu)選為大于等于80%。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物，其特征在于所述人參總皂苷中，人參皂苷Rgl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2%，人參皂苷Re在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2.5%，人參皂苷Rbl在人參總皂苷中的質(zhì)量百分含量大于等于2%。4、根據(jù)權(quán)利要求l-3中任一所述的藥物，其特征在于所述藥物為以下三種藥物中的任意一種治療和/或預防血管疾病的藥物、促進骨髓間充質(zhì)干細胞分化的藥物和誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化成心肌樣細胞的藥物。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于所述血管疾病為心血管疾病、腦血管疾病或周圍血管疾??；所述心血管疾病為冠心病、心絞痛、心肌缺血或缺氧或心肌梗塞；所述腦血管疾病為缺血性腦血管病或血管性癡呆；所述周圍血管疾病為血栓閉塞性腦血管炎或靜脈血栓。6、根據(jù)權(quán)利要求1一5中任一所述的藥物，其特征在于所述藥物的劑型為片劑、顆粒劑、膠囊劑、滴丸劑、栓劑、口腔崩解片、注射劑、輸液劑、緩控釋片劑、緩控釋微丸、氣霧劑或吸入劑。7、根據(jù)權(quán)利要求2—6中任一所述的藥物，其特征在于所述人參提取物和丹參提取物按照如下方法制備1)用乙醇水溶液或水對人參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到人參皂苷提取液；用乙醇水溶液對丹參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到丹參酚酸提取液；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的人參皂苷提取液進行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的丹參酚酸提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到丹參酚酸洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的人參總皂苷洗脫液進行干燥，得到人參提取物；對上述步驟2)獲得的丹參酚酸洗脫液進行干燥，得到丹參提取物。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物，其特征在于所述步驟l)中制備人參皂苷提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為50-95%,優(yōu)選為90%;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為60min;所述步驟l)中制備丹參酚酸提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為10-60%，優(yōu)選為50%;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為30min;所述步驟2)中制備人參皂苷洗脫液時，洗脫水溶性雜質(zhì)時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量小于10%;洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為50-90%，優(yōu)選為60-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟2)中制備丹參酚酸洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%,優(yōu)選為40-60%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對人參總皂苷洗脫液和丹參酚酸洗脫液進行干燥的溫度為50-60°C。9、根據(jù)權(quán)利要求2—6中任一所述的藥物，其特征在于所述人參提取物和丹參提取物按照如下方法制備1)將人參和丹參按照l:(0.08-20)的重量份數(shù)比混合，用乙醇水溶液或水對人參和丹參的混合物進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到含有人參皂苷和丹參酚酸的混合提取液；所述人參為人參植株的根、莖、葉和花中的至少一種；所述丹參為丹參植株的根；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的混合提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到含有人參總皂苷和丹參酚酸的混合洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的混合洗脫液進行干燥，得到人參提取物和丹參提取物的混合提取物。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物，其特征在于所述步驟l)中制備混合提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為60%;所述回流時間為30-120min，優(yōu)選為45min;所述步驟2)中制備混合洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為50-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對混合洗脫液進行干燥的溫度為50-6(TC。11、一種制備權(quán)利要求2、3、4、5和7中任一所述藥物的方法，包括以下步驟1)用乙醇水溶液或水對人參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到人參皂苷提取液；用乙醇水溶液對丹參進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到丹參酚酸提取液；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的人參皂苷提取液進行吸附，先用水或乙醇水溶液洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到人參總皂苷洗脫液；采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的丹參酚酸提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到丹參酚酸洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的人參總皂苷洗脫液進行干燥，得到人參提取物粉末;對上述步驟2)獲得的丹參酚酸洗脫液進行干燥，得到丹參提取物粉末；4)將上述步驟3)獲得的人參提取物粉末與丹參提取物粉末混合，得到權(quán)利要求2、3、4、5和7中任一所述的藥物。12、根據(jù)權(quán)利要求ll所述的方法，其特征在于所述步驟l)中制備人參皂苷提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為50-90%;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為60rain;所述步驟1)中制備丹參酚酸提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為10-60%，優(yōu)選為50%;所述回流時間為30min-120min，優(yōu)選為30min;所述步驟2)中制備人參皂苷洗脫液時，洗脫水溶性雜質(zhì)時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量小于10%;洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為50-90%，優(yōu)選為60-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟2)中制備丹參酚酸洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為40-60%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對人參總皂苷洗脫液和丹參酚酸洗脫液進行干燥的溫度為50-60。C。13、一種制備權(quán)利要求2、3、4、5和9中任一所述藥物的方法，包括以下步驟1)將人參和丹參按照l:(0.08-20)的重量份數(shù)比混合，用乙醇水溶液或水對人參和丹參的混合物進行回流提取，將得到的提取液離心，取上清液，得到含有人參皂苷和丹參酚酸的混合提取液；所述人參為植物人參的根、莖、葉和花中的至少一種；所述丹參為植物丹參的根；2)采用大孔吸附樹脂柱對上述步驟l)獲得的混合提取液進行吸附，先用水洗脫水溶性雜質(zhì)，然后再用乙醇水溶液洗脫樹脂柱，收集洗脫液，得到含有人參總皂苷和丹參酚酸的混合洗脫液；3)對上述步驟2)獲得的混合洗脫液進行干燥，得到人參和丹參的混合提取物粉末，即為權(quán)利要求2、3、4、5和9中任一所述的藥物。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于所述步驟l)中制備混合提取液時，所述乙醇水溶液中，乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為50—70%;所述回流時間為30-120min，優(yōu)選為45min;所述步驟2)中制備混合洗脫液時，洗脫樹脂柱時，所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分含量為30-90%，優(yōu)選為50-70%;所述大孔吸附樹脂柱中的樹脂填料為下述A)或B):A)下述三種樹脂中的任意一種HPD100型樹脂、HPD700型樹脂和S-8型樹脂；B)由HPD100型、HPD700型、S-8型和AB-8型這四種樹脂中的任意一種與S印hadexLH-20凝膠、C18鍵合相和C8鍵合相這三種中的至少一種組成的復合樹脂；所述步驟3)中，對混合洗脫液進行干燥的溫度為50-6(TC。全文摘要本發(fā)明公開了一種藥物及其制備方法及應用。本發(fā)明所提供的藥物，它的活性成分為人參提取物和丹參提取物；所述人參提取物和丹參提取物的重量份數(shù)比為1∶(0.1-20)；所述人參提取物中，人參總皂苷的質(zhì)量百分含量大于50％；所述丹參提取物中，丹參酚酸的質(zhì)量百分含量大于50％。通過大鼠急性心肌梗塞實驗和心肌缺血實驗，結(jié)果表明，采用人參總皂苷與丹參總酚酸相配伍具有最佳的藥效作用，能夠有效抑制大鼠心肌梗塞面積，改善心肌缺血情況，而且保持了與原藥材配伍方相同的療效，本發(fā)明的藥物組分清楚，質(zhì)量容易控制。文檔編號A61K36/537GK101683387SQ200810223440公開日2010年3月31日申請日期2008年9月27日優(yōu)先權(quán)日2008年9月27日發(fā)明者李連達,王義明,羅國安申請人:廣州市香雪制藥股份有限公司