專利名稱：Trpm5抑制劑用于調(diào)節(jié)胰島素和glp-1釋放的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及TRPM5抑制劑用于增強胰島素分泌的應(yīng)用。另外，根據(jù)本發(fā)明，TRPM5抑制劑可用于治療諸如糖尿病和對胰島素增加有積極應(yīng)答的其它病況的病況。
在一個實施方案中，公開了通過對受試者給予本文的式I化合物來治療糖尿病的方法。
還提供了在哺乳動物中治療、預(yù)防或控制高血糖癥和/或胰島素抵抗的方法，包括對有需要的受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物。
在該實施方案的一個方面，糖尿病是2型糖尿病或年輕人的成年型糖尿病，在另一方面，TRPM5抑制劑增強胰島素釋放，諸如增強由葡萄糖刺激的胰島素釋放。在其它方面，該化合物增強由超生理(supraphysiological)葡萄糖濃度刺激的胰島素釋放，并且不增強在生理葡萄糖濃度存在的條件下的胰島素釋放。
還提供了用于治療糖尿病、胰島素抵抗綜合征和高血糖癥的藥物組合物，其包含TRPM5抑制劑諸如式I化合物。本發(fā)明的這些和其它方面在本文被更詳細地描述。
本發(fā)明還涉及增強GLP-1從細胞釋放的方法，包括使所述細胞接觸有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。在某些實施方案中，TRPM5抑制劑是式I化合物。
本發(fā)明還涉及在哺乳動物中降低胃液分泌和排空的方法，抑制食物攝取的方法，降低胰高血糖素分泌的方法，增強胰島素敏感性的方法，增加胰島素基因表達的方法，和治療肥胖癥的方法，包括對所述有需要的哺乳動物給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。在某些實施方案中，TRPM5抑制劑是式I化合物。



圖1A表示在不同條件(A-H)下在β-TC6細胞中對胰島素合成和釋放的刺激。所述不同條件(A-H)如下所示A)KRBB緩沖液；B)KRBB和DMSO(媒介物)；C)KRBB、DMSO和LG化合物A(100μM，一種已知增強TRPM5的化合物)；D)KRBB、DMSO和實施例4(100μM)；E)KRBB和2mM葡萄糖；F)KRBB、2mM葡萄糖和DMSO；G)KRBB、DMSO、2mM葡萄糖和LG化合物A(100μM)；H)KRBB、DMSO、2mM葡萄糖和實施例4。圖1B表示用于KRBB(緩沖液)應(yīng)答的被減去的相同結(jié)果。
圖2提供了在β-TC6細胞中在葡萄糖(2mM)存在的條件下由實施例4的化合物刺激的胰島素分泌的劑量-應(yīng)答曲線。
圖3比較了葡萄糖濃度對由實施例3的化合物和甲苯磺丁脲刺激的胰島素釋放的影響。如圖3所示，實施例3的化合物與甲苯磺丁脲相反地以葡萄糖依賴性方式增加胰島素分泌，甲苯磺丁脲對葡萄糖水平不敏感。
圖4表示實施例3的化合物、甲苯磺丁脲和二氮嗪對小鼠β-細胞胰島瘤系TC6的胰島素分泌的影響。
圖5說明某些TRPM5增強劑在刺激胰島素分泌中是無效的并且還說明實施例3的化合物增加胰島素分泌。
圖6說明實施例4和甲苯磺丁脲對胰島素分泌的加合效應(yīng)。
圖7表示實施例4的化合物與甲苯磺丁脲相反地以葡萄糖依賴性方式增加胰島素分泌。
圖8表示格列本脲對于胰島素分泌的劑量-應(yīng)答。
圖9表示在100μM甲苯磺丁脲存在的條件下各種化合物的劑量應(yīng)答。
圖10表示在300μM二氮嗪存在的條件下各種化合物的劑量應(yīng)答。
圖11提供了被繪成圖的實驗結(jié)果，其表示在βTC-6細胞中和用TRPM5克隆的HEK細胞中，在鈣激活的離子通道電流之間的類似性。
圖12說明了在βTC-6細胞中和根據(jù)Talavera等人，Nature4381022-1025(2005)的報道在TRPM5通道中在鈣激活的電流之間的溫度依賴性的相似性。
圖13提供了在βTC6細胞中鈣激活的電流的電流-時間曲線并顯示了由實施例4的化合物的脈沖劑量所導(dǎo)致的電流抑制。
圖14提供了一份凝膠電泳圖，其顯示了根據(jù)RT-PCR測定在小鼠βTC-6細胞中存在mTRPM5。
圖15提供了實施例4化合物的對映體的HPLC分離的結(jié)果。
圖16表示在GLUTag細胞中，TRPM5抑制劑(實施例3的化合物)在10mM葡萄糖存在的條件下增強GLP-1分泌，而在GLUTag細胞中，TRPM5增強劑在10mM葡萄糖存在的條件下降低GLP-1分泌。
圖17表示在GLUTag細胞中實施例3和實施例23的化合物在12.5mM葡萄糖存在的條件下增加GLP-1分泌。實施例3的化合物增加GLP-1分泌的效力，而實施例23的化合物比實施例3的化合物的效力更強。為了比較顯示了用于GLP-1釋放的葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
圖18表示在GLUTag細胞中，實施例3和實施例23的化合物在中等高濃度的葡萄糖(3.3mM)存在的條件下增加GLP-1釋放。
圖19表示在GLUTag細胞中實施例3和實施例23的化合物在低葡萄糖(0.1mM)存在的條件下增加GLP-1釋放。這兩個實施例的IC50值(分別是600nM和111nM)與在FLIPR膜電位試驗中獲得的IC50值相似。
發(fā)明詳述 本發(fā)明提供了可用于增加胰島素釋放、GLP-1釋放、胰島素敏感性和胰島素基因表達的方法和組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明的其它方面在本文中被詳細描述。
使用方法 本發(fā)明的第一方面涉及增強胰島素分泌的方法，包括給予有效量的作為TRPM5抑制劑的化合物。該化合物可被給予到細胞或整個有機體，以便獲得增強的胰島素分泌。另外，TRPM5抑制劑可單獨地或與已知引起胰島素分泌釋放的藥劑諸如葡萄糖一起被給予。例如，本發(fā)明所用的TRPM5可以是IC50為1微摩爾或更低、優(yōu)選100納摩爾或更低的TRPM5抑制劑。在另一個實施方案中，本方法所用的TRPM5抑制劑在5微摩爾或更低的濃度下抑制TRPM5受體至少75％，優(yōu)選90％。
TRPM5抑制劑可以采用本文公開的試驗和方法進行鑒定。另外，在2006年11月3日提交的美國專利申請11/592,180(其全文被并入本文)中所公開的試驗可用于鑒定作為TRPM5抑制劑的化合物。另外，在全文被并入本文的美國專利申請公報20050019830中公開的試驗可用于鑒定作為TRPM5抑制劑的化合物。
在某些實施方案中，TRPM5抑制劑可為蛋白質(zhì)，肽，小分子或天然產(chǎn)物。在優(yōu)選情況中，在本發(fā)明方法中使用小分子TRPM5抑制劑來抑制味覺。例如，TRPM5抑制劑可為分子量小于或等于約500質(zhì)量單位的小分子化合物。在另一個實施方案中，TRPM5抑制劑可為分子量為約50到約500質(zhì)量單位的小分子。作為替代，TRPM5抑制劑可為分子量為約100、200、300或400質(zhì)量單位的小分子。這些化合物可選自本文所述的任何具體化合物或組。
可用于本發(fā)明的TRPM5抑制劑可包括許多化學(xué)官能團。在本方法的某些實施方案中，優(yōu)選的TRPM5抑制劑包括一種或多種選自以下優(yōu)選基團的官能團。例如，在優(yōu)選情況中，本方法所用的TRPM5抑制劑包含約5個或更少的氫鍵供體(例如OH和NH基)。在其它實施方案中，本方法所用的TRPM5抑制劑將包含約10個或更少的氫鍵受體(例如N和O)。這些化合物可選自本文所述的任何具體化合物或組。在優(yōu)選方案中，本方法所用的TRPM5抑制劑將包含1到5個氫鍵供體和1到5個氫鍵受體。
TRPM5抑制劑在其結(jié)構(gòu)中可包括例如一種或多種以下官能團吡啶基，高吡啶基，氨基哌啶基氨甲酸酯，苯基氨甲酸酯，環(huán)己基，環(huán)戊基，哌啶基，哌嗪基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，吡唑基，咪唑基，噻唑基，異噻唑基，噁唑基，異噁唑基，噁二唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，苯并咪唑基，萘基，吲哚基，異吲哚基，苯并呋喃基，異苯并呋喃基，苯并[b]噻吩基，苯并[d]異噁唑基，喹啉基，異喹啉基，噌啉基，喹唑啉基和喹喔啉基。
在另一實施方案中，TRPM5抑制劑在其化學(xué)結(jié)構(gòu)中可包括但不限于以下官能團吡啶基，高吡啶基，氨基哌啶基氨甲酸酯，苯基氨甲酸酯，環(huán)己基，環(huán)戊基，哌啶基，哌嗪基，吡咯基，呋喃基噻吩基，吡唑基，咪唑基，噻唑基，異噻唑基，噁唑基，異噁唑基，噁二唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，苯并咪唑基，萘基，吲哚基，異吲哚基，苯并呋喃基，異苯并呋喃基，苯并[b]噻吩基，苯并[d]異噁唑基，喹啉基，異喹啉基，噌啉基，喹唑啉基和喹喔啉基，它們?nèi)芜x地被苯、鹵化物、胺、羥基和/或烷基取代。這些化合物可選自本文所述的任何具體化合物或組。
在其它實施方案中，本方法所用的TRPM5抑制劑具有的分配系數(shù)(log P)為約0到約5，優(yōu)選為約1到約5，或為約2到約4。這些化合物可選自本文所述的任何具體化合物或組。
在又一實施方案中，適當(dāng)?shù)腡RPM5抑制劑是分子量為100到500質(zhì)量單位并且在其化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含一個或多個、優(yōu)選1-3個以下官能團的TRPM5抑制劑吡啶基，高吡啶基，氨基哌啶基氨甲酸酯，苯基氨甲酸酯，環(huán)己基，環(huán)戊基，哌啶基，哌嗪基，吡咯基，呋喃基噻吩基，吡唑基，咪唑基，噻唑基，異噻唑基，噁唑基，異噁唑基，噁二唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，苯并咪唑基，萘基，吲哚基，異吲哚基，苯并呋喃基，異苯并呋喃基，苯并[b]噻吩基，苯并[d]異噁唑基，喹啉基，異喹啉基，噌啉基，喹唑啉基和喹喔啉基，它們?nèi)芜x地被苯、鹵化物、胺、羥基和/或烷基取代。這些化合物可選自本文所述的任何具體化合物或組。
在一個實施方案中，本方法包括對需要胰島素釋放增加的受試者給予式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中 R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選地被取代； R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基； R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基； R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選地被取代，或者是氰基； L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代； L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或 R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選地被取代。
在一個實施方案中，R1是任選被取代的C6-10芳基，諸如苯基或萘基。在另一個實施方案中，R1是任選被取代的5-10元雜芳基，或優(yōu)選5-7元雜芳基，諸如但不限于吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯并咪唑基和苯并噻唑基，其各自任選地被取代。在其它情況中，雜芳基是含氮的雜芳基或含氧的雜芳基。
在另一個實施方案中，R1是任選被取代的10-14元雜芳基，諸如咔唑基例如9-咔唑基，或喹啉基例如2-喹啉基。
R1的另一子集包括具有1-3個獨立地選自以下的取代基的被取代的芳基或雜芳基氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。適當(dāng)?shù)腞1基團包括4，8-二甲基喹啉-2-基。
在另一個實施方案中，R1是任選被取代的C3-10環(huán)烷基或任選被取代的C3-10環(huán)烯基。在另一個實施方案中，R1是任選被取代的3-10元環(huán)雜烷基或任選被取代的3-10元環(huán)雜烯基。適當(dāng)?shù)腞1基團包括但不限于環(huán)丙基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基等。環(huán)烷基還包括二環(huán)烷基和多環(huán)烷基，優(yōu)選含7-10個碳原子，諸如二環(huán)并[4.1.0]庚烷基和金剛烷基。
R1的另一子集包括具有1-3個獨立地選自以下的取代基的被取代的C3-10環(huán)烷基或C3-10環(huán)烯基氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在又一個實施方案中，R1是任選被取代的C1-6烷基，諸如甲基，乙基和丙基。R1可為直鏈或支鏈烷基。適當(dāng)?shù)谋蝗〈耐榛u代烷基，羥基烷基，氨基烷基等。
在另一個實施方案中，R2是H。作為替代，R2是C1-6烷基，諸如甲基，乙基或丙基。R2可為直鏈或支鏈烷基。在其它實施方案中，R2是C6-10芳基(C1-6)烷基，諸如芐基，苯乙基或苯基丙基。優(yōu)選地，R2是C6-10芳基(C1-4)烷基。
在另外的實施方案中，R3是H。作為替代，R3是C1-6烷基，諸如甲基，乙基或丙基。R3可為直鏈或支鏈烷基。在又一個實施方案中，R3是氰基(-CN)。
在另一個實施方案中，R4是任選被取代的C6-10芳基，諸如苯基或萘基。在另一個實施方案中，R4是任選被取代的5-10元雜芳基，或優(yōu)選5-7元雜芳基，諸如包括但不限于吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯并咪唑基和苯并噻唑基，其各自任選地被取代。在其它情況中，雜芳基是含氮的雜芳基。在其它情況中，雜芳基是含氧的雜芳基。
R4的另一子集包括具有1-3個獨立地選自以下的取代基的被取代的芳基或雜芳基氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。適當(dāng)?shù)腞4基團包括3，4-二甲氧基苯基。
在另一個實施方案中，R4是任選被取代的C3-10環(huán)烷基或任選被取代的C3-10環(huán)烯基。在另一個實施方案中，R4是任選被取代的3-10元環(huán)雜烷基或任選被取代的3-10元環(huán)雜烯基。適當(dāng)?shù)腞4基團包括但不限于環(huán)丙基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基等。環(huán)烷基還包括二環(huán)烷基，諸如二環(huán)并[4.1.0]庚烷基。
在又一個實施方案中，R4是任選被取代的C1-6烷基，諸如甲基，乙基和丙基。R4可為直鏈或支鏈烷基。適當(dāng)?shù)谋蝗〈耐榛u代烷基，羥基烷基，氨基烷基等。
在一個實施方案中，L1不存在。因此，根據(jù)該實施方案，R1直接通過單一鍵連接于氮原子。
在另一個實施方案中，L1是包含1-10個、優(yōu)選1-7個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。連接基是將R1與氮連接的二價部分。連接基可以是包含1-10個碳原子和/或雜原子的任何適當(dāng)?shù)亩r部分。適當(dāng)?shù)倪B接基包含例如1、2、3、4、5或6個碳原子和/或雜原子。
例如，連接基可以是含1-10個、優(yōu)選1-7個碳原子的二價碳連接基，諸如但不限于亞甲基(-CH2-)，亞乙基(-CH2-CH2-)，亞丙基(例如，-CH2-CH2-CH2-)，亞丁基等。作為替代，L1可以是C3-10亞環(huán)烷基連接基，諸如亞甲基亞環(huán)丙基。二價碳連接基可以被本文所述的適當(dāng)?shù)娜〈〈Ｔ诹硪粋€子集中，取代基的優(yōu)選基團包括氨基，羥基，鹵素，氰基，硫醇，氧代，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，氨基羰基和C2-6羧基烷基。
L1還可為含2-10個、優(yōu)選含2-6個碳原子和雜原子的二價連接基。適當(dāng)?shù)倪B接基包括例如以下的非限制性實例亞烷基氧基，亞烷基氨基，亞烷基硫基，亞烷基二氧基。其它適當(dāng)?shù)膶嵗?OCH2-，-SCH2-，-NHCH2-，-OCH2CH2-，-NHCH2CH2-和-OCH2CH2CH2-?？衫斫?，既包含碳原子又包含雜原子的優(yōu)選的連接基是其中雜原子不直接連接于式I的氮原子的連接基。
連接基L1還可包含1-10個雜原子，優(yōu)選包含1、2或3個雜原子。適當(dāng)?shù)碾s原子連接基包括-O-，-S-，-NH-，-N＝N-等。
在其它實施方案中，連接基L1是1-6元亞烷基，亞烯基或亞炔基部分。在其它實施方案中，連接基L1是1-6元雜亞烷基，雜亞烯基或雜亞炔基部分。
連接基L1可以如本文所述被取代。在一個實施方案中，連接基L1是包含1-6個碳原子并且被1、2或3個選自以下的取代基取代的二價部分氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，氧代，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一個實施方案中，L1是選自以下的連接基
在另一個實施方案中，L1是選自以下的連接基-(O)CCH2S-。
在另外的實施方案中，R1和L1一起形成選自以下的基團
在一個實施方案中，L2不存在。因此，根據(jù)該實施方案，R4直接連接于通過雙鍵與氮原子連接的碳原子上。
L2還可為含2-10個、優(yōu)選含2-6個碳原子和雜原子的二價連接基。適當(dāng)?shù)倪B接基包括例如以下的非限制性實例亞烷基氧基，亞烷基氨基，亞烷基硫基，亞烷基二氧基。其它適當(dāng)?shù)膶嵗?OCH2-，-NHCH2-，-OCH2CH2-，-NHCH2CH2-和-OCH2CH2CH2-?？衫斫?，既包含碳原子又包含雜原子的優(yōu)選的連接基是其中雜原子不直接連接于式I的氮原子的連接基。在一些情況中，L2不包含環(huán)系統(tǒng)。
連接基L2還可為含1-10個雜原子、優(yōu)選含1、2或3個雜原子的連接基。適當(dāng)?shù)碾s原子連接基包括-O-，-S-，-NH-，-N＝N-等。
在另外的實施方案中，R4和L2-起形成選自以下的基團-N＝N-芳基和-N＝N-雜芳基。-N＝N-芳基的適當(dāng)實例包括但不限于其中苯基任選被取代的-N＝N-苯基和其中萘基任選被取代的-N＝N-萘基。
在另外的實施方案中，R4和L2一起形成選自以下的基團
在第一小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是任選被取代的C6-10芳基； R2是H或C1-6烷基，優(yōu)選C1-4烷基； R3是H或C1-6烷基，優(yōu)選C1-4烷基；和 R4是任選被取代的C6-10芳基。
在該第一小類的一個實施方案中，R1是未被取代的苯基。在其它情況中，C6-10芳基，諸如苯基，被1、2或3個獨立地選自以下的基團所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6鹵代烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺?；珻2-6炔基磺?；?，C1-6烷基亞磺?；?，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲酰基亞氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情況中，芳基的取代基選自氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一個實施方案中，R1上的取代基獨立地選自硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在該第一小類的另一個實施方案中，L1是含1-6個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
在該第一小類的另一個實施方案中，L2是含1-6個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
在另一個實施方案中，L2不包含環(huán)系統(tǒng)。
在該第一小類的另一個實施方案中，R4是任選被1-3個選自以下的取代基取代的苯基硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在第二小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是任選被取代的5-10元雜芳基； R2是H或C1-6烷基； R3是H或C1-6烷基；和 R4是任選被取代的C6-10芳基。
在該第二小類的一個實施方案中，R1是未被取代的5-10元雜芳基，諸如吲哚基，吡啶基，苯并噻唑基，苯并咪唑基或喹啉基。作為替代，R1是被一個或多個獨立地選自以下的取代基取代的5-10元雜芳基氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6鹵代烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺?；珻2-6炔基磺?；?，C1-6烷基亞磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲?；鶃啺被被珻2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情況中，雜芳基的取代基選自氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一個實施方案中，R1上的取代基獨立地選自硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在該第一小類的另一個實施方案中，L1是含1-10個、優(yōu)選含1-4個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
在該第一小類的另一個實施方案中，L2是含1-10個、優(yōu)選含1-4個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。在另外的實施方案中，L2不包含環(huán)系統(tǒng)。
在第三小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是任選被取代的C6-10芳基； R2是H或C1-6烷基； R3是H或C1-6烷基；和 R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
在該第三小類的一個實施方案中，R1是未被取代的苯基。在其它情況中，C6-10芳基，諸如苯基，被1、2或3個獨立地選自以下的基團所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6鹵代烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C1-6環(huán)雜烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺?；珻2-6炔基磺?；?，C1-6烷基亞磺?；珻1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲?；鶃啺被被?，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情況中，芳基的取代基選自氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一個實施方案中，R1上的取代基獨立地選自硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在該第一小類的另一個實施方案中，L1是含1-10個、優(yōu)選含1-4個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
在該第一小類的另一個實施方案中，L2是含1-10個、優(yōu)選含1-4個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。在另外的實施方案中，L2不包含環(huán)系統(tǒng)。
在該第三小類的一個實施方案中，R4是未被取代的5-10元雜芳基，諸如吲哚基，吡啶基，苯并噻唑基，苯并咪唑基或喹啉基。作為替代，R1是被一個或多個獨立地選自以下的取代基取代的5-10元雜芳基硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在第四小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是任選被取代的5-10元雜芳基； R2是H或C1-6烷基； R3是H或C1-6烷基；和 R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
在該第四小類的一個實施方案中，R1是未被取代的5-10元雜芳基，諸如吲哚基，吡啶基或喹啉基。作為替代，R1是被一個或多個獨立地選自以下的取代基取代的5-10元雜芳基氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6鹵代烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺?；?，C1-6烷基亞磺?；?，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲酰基亞氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情況中，雜芳基的取代基選自氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一個實施方案中，R1上的取代基獨立地選自硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在該第四小類的一個實施方案中，R4是未被取代的5-10元雜芳基，諸如吲哚基，吡啶基，苯并噻唑基，苯并咪唑基或喹啉基。作為替代，R1是被一個或多個獨立地選自以下的取代基取代的5-10元雜芳基氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6鹵代烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺?；珻2-6炔基磺?；?，C1-6烷基亞磺?；?，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲?；鶃啺被被?，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情況中，雜芳基的取代基選自氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一個實施方案中，R4上的取代基獨立地選自硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在第五小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是任選被取代的C6-10芳基； R2是H或C1-6烷基； R3是H或C1-6烷基；和 R4是任選被取代的C3-10環(huán)烷基。
在該第五小類的一個實施方案中，R1是未被取代的苯基。在其它情況中，C6-10芳基，諸如苯基，被1、2或3個獨立地選自以下的基團所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6鹵代烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺?；?，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基亞磺?；珻1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲?；鶃啺被被?，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情況中，芳基的取代基選自氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一個實施方案中，R1上的取代基獨立地選自硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在第六小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是任選被取代的5-10元雜芳基； R2是H或C1-6烷基； R3是H或C1-6烷基；和 R4和L2一起形成-N＝N-芳基。
在該第六小類的一個實施方案中，R1是未被取代的5-10元雜芳基，諸如吲哚基，吡啶基或喹啉基。作為替代，R1是被一個或多個獨立地選自以下的取代基取代的5-10元雜芳基氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6鹵代烷基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺?；珻1-6烷基亞磺?；?，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲?；鶃啺被被?，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。在另一個實施方案中，R1上的取代基獨立地選自硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在該第六小類中，R4和L2一起形成-N＝N-芳基，其中芳基是任選被取代的C6-10芳基，諸如苯基或萘基。芳基上的適當(dāng)?shù)娜〈ǖ幌抻谙趸?，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羥基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羥基，三氟甲基，嗎啉基和吡咯烷基。
在第七小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是任選被取代的5-10元雜芳基，諸如吡啶基，喹啉基，苯并噻唑基，苯并咪唑基和吲哚基； R4是任選被取代的C6-10芳基，諸如苯基和萘基；和 L1和L2不存在。
在第八小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中 R1是C6-10芳基，5-10元雜芳基，C3-10環(huán)烷基，C3-10環(huán)烯基，3-10元環(huán)雜烷基，3-10元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代； R2是H，C1-6烷基或C6-10芳基(C1-6)烷基； L1不存在，或者是含1-10個、優(yōu)選含1-6個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代； R3，R4和L2與碳原子一起形成選自以下的基團C6-10芳基，5-10元雜芳基，C3-10環(huán)烷基，C3-10環(huán)烯基，3-10元環(huán)雜烷基，3-10元環(huán)雜烯基，其各自任選地被取代。
在其它小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中R1是雜芳基；R2是H；R4是雜芳基；L1不存在；和L2是N＝N。
在另外的小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，其中所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中R1是任選被取代的含氮的雜芳基；和R2是任選被取代的苯基。
在其它小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中R1是二環(huán)烷基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1不存在；和L2不存在。
在其它小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中R1是芳基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1是任選被取代的含2-4個碳原子或雜原子的連接基；和L2不存在。
在其它小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中R1是環(huán)烯基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1是任選被取代的含2-4個碳原子或雜原子的連接基；和L2不存在。
在其它小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中R1是任選被取代的芳基；R2是H；R3是H；R4是任選被取代的芳基或任選被取代的雜芳基；L1是-(CH2)1-6-C(O)-；和L2不存在。
在其它小類中，本發(fā)明涉及增加胰島素釋放的方法，所述方法包括對受試者給予式I化合物，其中R1是任選被取代的萘基；R2是H；R3是H；R4是任選被取代的芳基；L1是-(CH2)-C(O)-；和L2不存在。
在其它小類中，本發(fā)明的方法包括給予式I化合物，其中R1是任選被一個或多個C1-6烷基取代的喹啉基；L1是任選被取代的C1-4連接基；和R2是任選被取代的苯基，諸如被一個或多個C1-6烷氧基所取代。
在其它小類中，本發(fā)明的方法包括給予式I化合物，其中R1是任選被取代的咔唑基；L1是含1個硫原子并進一步任選被取代的C1-6連接基；和R2是任選被取代的苯基，諸如被一個或多個C1-6烷氧基所取代。
用于本發(fā)明方法的適當(dāng)?shù)幕衔锏膶嵗? 4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-基)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯； (E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)-乙酸； (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)-乙酰肼； (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼(carbohydrazide)； (E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼； (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼； 2-((Z)-2-(苯基((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸； (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼； (E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼； (E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼； (Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚； (E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼； (4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物(carbonohydrazonoyldicyanide)； N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺； (Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸； (E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶； (Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼； (Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮； (E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚； (E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′(4-嗎啉代-3-硝基苯亞甲基)乙酰肼； (Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)； (E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚； 及其生理學(xué)可接受的鹽。
另外的適當(dāng)?shù)幕衔锇? 3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼； (4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼； 及其生理學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明的方法還包括式I化合物的生理學(xué)可接受的鹽的應(yīng)用。術(shù)語生理學(xué)可接受的鹽是指式I化合物的酸加成鹽和/或堿加成鹽。酸加成鹽可通過將適當(dāng)?shù)乃峒尤氲绞絀化合物中形成。堿加成鹽可通過將適當(dāng)?shù)膲A加入到式I化合物中形成。所述酸或堿不使所述式I化合物發(fā)生實質(zhì)上的降解、分解或破壞。生理學(xué)可接受的鹽的實例包括鹽酸鹽，氫溴酸鹽，乙酸鹽，富馬酸鹽，馬來酸鹽，草酸鹽和琥珀酸鹽。其它適當(dāng)?shù)柠}包括鈉、鉀的鹽，碳酸鹽和氨丁三醇鹽。
還可理解的是，本發(fā)明被認為涵蓋了立體異構(gòu)體以及光學(xué)異構(gòu)體，例如對映體的混合物以及單獨的對映體和非對映體的應(yīng)用，這些異構(gòu)體由于在被選擇的本發(fā)明系列的化合物中的結(jié)構(gòu)不對稱而存在。還可理解的是，本發(fā)明涵蓋了式I化合物的互變異構(gòu)體的應(yīng)用。互變異構(gòu)體是本領(lǐng)域公知的并且包括酮-烯醇互變異構(gòu)體。
還可理解的是，式I化合物包括腙的以可變比率存在的E和Z異構(gòu)體。正如本領(lǐng)域已知的，腙部分可在E異構(gòu)體和Z異構(gòu)體之間發(fā)生異構(gòu)化，如以下圖解所示
盡管上面列出的具體化合物可表示腙部分的特定立體化學(xué)，即E或Z，但是本發(fā)明明確地包括異構(gòu)體二者。
式I化合物還可進行溶合，包括水合。水合可發(fā)生在化合物或包含該化合物的組合物制造期間，或者水合可由于化合物的吸水性而隨著時間發(fā)生。
在式I范圍內(nèi)的某些化合物可為被稱為“前體藥物”的衍生物。術(shù)語“前體藥物”表示已知直接起效藥劑的衍生物，其中該衍生物具有的治療價值可能類似于、大于或小于該藥劑的治療價值。一般地，前體藥物當(dāng)被遞送至受試者、細胞或試驗介質(zhì)時通過酶促或化學(xué)過程被轉(zhuǎn)化為活性劑。在某些情況中，前體藥物是本發(fā)明化合物的衍生物，其具有可被代謝裂解的基團并且通過溶劑分解或在生理條件下變?yōu)榫哂畜w內(nèi)藥學(xué)活性的本發(fā)明化合物。例如，本發(fā)明化合物的酯衍生物通常具有體內(nèi)活性，而不具有體外活性。本發(fā)明化合物的其它衍生物在其酸和酸衍生物形式二者中都具有活性，但是酸衍生物形式通常提供溶解性、組織相容性或在哺乳動物有機體中延遲釋放的優(yōu)點(參見Bundgard，H.，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Blsevier，Amsterdam 1985)。前體藥物包括本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的酸衍生物，諸如，例如，通過將母體酸與適當(dāng)?shù)拇挤磻?yīng)制備的酯，或者通過母體酸化合物與胺反應(yīng)制備的酰胺。從本發(fā)明化合物的側(cè)鏈酸基團得到的簡單脂族酯或芳族酯是優(yōu)選的前體藥物。在一些情況中，希望制備雙酯類型的前體藥物，諸如(?；趸?烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。
在任何構(gòu)成中或在式I中當(dāng)任何變量出現(xiàn)超過一次時，其在每次出現(xiàn)時的定義與其在所有其它次出現(xiàn)時的定義無關(guān)，除非另有陳述。另外，取代基和/或變量的組合只有當(dāng)這種組合產(chǎn)生穩(wěn)定化合物時才是被允許的。
術(shù)語″烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，除非對其鏈長有所限定，否則是指含最多10個碳的直鏈和支鏈基團，諸如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙基，戊基，1-甲基丁基，異丁基，戊基，叔戊基(CH3CH2(CH3)2C-)，己基，異己基，庚基，辛基或癸基。
術(shù)語″烯基″，本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，除非對其鏈長有所限定，否則是指含2-10個碳原子的直鏈或支鏈基團，包括但不限于乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基，2-甲基-1-丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，戊烯基，1-己烯基和2-己烯基。
術(shù)語″炔基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，除非對其鏈長有所限定，否則是指含2-10個碳原子的直鏈或支鏈基團，其中在鏈中的兩個碳原子之間存在至少一個三鍵，包括但不限于乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，1-甲基-2-丁炔基，1-甲基-3-丁炔基，2-甲基-3-戊炔基，己炔基和庚炔基。
在其中存在烯基部分或炔基部分作為取代基團的情況中，優(yōu)選不飽和鍵不直接連接于氮、氧或硫部分。
術(shù)語″環(huán)烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指含3-14個、優(yōu)選含3-10個碳原子的環(huán)烷基。典型實例是環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基和環(huán)己基。環(huán)烷基還包括二環(huán)烷基、多環(huán)烷基和其它橋連的環(huán)烷基。
術(shù)語″環(huán)烯基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指含3-10個碳原子和1-3個碳-碳雙鍵的環(huán)烯基。典型實例包括環(huán)丙烯基，環(huán)丁烯基，環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基，環(huán)庚烯基和環(huán)己二烯基。環(huán)烯基還包括二環(huán)烯基，多環(huán)烯基和其它橋連的環(huán)烯基。
術(shù)語″環(huán)雜烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指含碳原子和1、2、3或4個氧、氮或硫雜原子的、包含3到14環(huán)原子的基團。典型實例包括但不限于2-四氫呋喃基，2-四氫噻吩基，2-吡咯烷基，3-異噁唑烷基，3-異噻唑烷基，1，3，4-噁唑烷-2-基，2，3-二氫噻吩-2-基，4，5-異噁唑啉-3-基，3-哌啶基，1，3-二噁烷-5-基，4-哌啶基，2-四氫吡喃基，4-四氫吡喃基，吡咯烷基，咪唑烷基，吡唑烷基(pirazolidinyl)，四氫呋喃基，四氫吡喃基，哌啶基，哌嗪基，奎寧環(huán)基和嗎啉基。
術(shù)語″環(huán)雜烯基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指含碳原子和1、2、3或4個氧、氮或硫原子及1、2或3個雙鍵的、包含3到14個環(huán)原子的基團。典型實例優(yōu)選包括如上所述并經(jīng)過修飾以包含1或2個雙鍵的環(huán)雜烷基，特別是吡咯烷基，咪唑烷基，吡唑烷基，四氫呋喃基，四氫吡喃基，哌啶基，哌嗪基，奎寧環(huán)基和嗎啉基。
術(shù)語″亞烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指除非另有陳述否則含1-15個碳原子、優(yōu)選含1-10個碳原子、更優(yōu)選含1-6個碳原子的非支鏈飽和烴鏈的二價基。該術(shù)語的示例性基團是亞甲基(-CH2-)，亞乙基(-CH2CH2-)，亞丙基(-CH2CH2CH2-)，亞丁基等。
術(shù)語″亞烯基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指除非另有陳述否則含2-15個碳原子、優(yōu)選含1-10個碳原子、更優(yōu)選含1-6個碳原子并具有至少一個乙烯基不飽和度、優(yōu)選具有1-6個乙烯基不飽和度的非支鏈不飽和烴鏈的二價基。該術(shù)語的示例性基團是亞乙烯基(-CH＝CH-)，亞丙烯基(-CH2CH＝CH-，-CH＝CHCH2-)等。
術(shù)語″亞炔基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指除非另有陳述否則含2-15個碳原子、優(yōu)選含1-10個碳原子、更優(yōu)選含1-6個碳原子并具有至少一個乙炔(三鍵)不飽和度、優(yōu)選具有1-6個乙炔(三鍵)不飽和度的非支鏈不飽和烴鏈的二價基。實例包括諸如亞乙炔基(-C≡C-)，亞炔丙基(-CH2-C≡C-)等的亞炔基。
術(shù)語″雜亞烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5個被選自N、O或S的雜原子(例如氨基，氧基，硫基，氨基亞甲基(-NHCH2-)，氧基亞甲基(-OCH2-)等)替換的亞烷基。實例包括亞烷基氧基，亞烷基氨基和亞烷基硫基。優(yōu)選地，其中所含的氧、氮和硫原子不與其它雜原子成鍵。適當(dāng)?shù)幕鶊F包括亞乙基氧基，亞丙基氧基，亞丁基氧基，亞戊基氧基，亞庚基氧基，亞乙基氨基，亞丙基氨基，亞丁基氨基，亞戊基氨基，亞己基氨基，亞庚基氨基和亞辛基氨基。其它實例包括-CH2CH2-S-CH2CH2-和-CH2-S-CH2CH2-NH-CH2-。在雜亞烷基的一個實施方案中，雜原子還可占據(jù)鏈末端中任一個而非兩個。
術(shù)語″雜亞烯基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5個被選自N、O或S的雜原子替換的亞烯基。實例包括亞烯基氧基，亞烯基氨基和亞烯基硫基。優(yōu)選地，其中所含的氧、氮和硫原子不與其它雜原子成鍵。適當(dāng)?shù)幕鶊F包括亞乙烯基氧基，亞丙烯基氧基，亞丁烯基氧基，亞戊烯基氧基，亞己烯基氧基，亞乙烯基氨基，亞丙烯基氨基，亞丁烯基氨基，亞戊烯基氨基和亞己烯基氨基。在雜亞烯基的一個實施方案中，雜原子還可占據(jù)鏈末端中任一個而非兩個。另外，在另一個實施方案中，雜原子不構(gòu)成乙烯鍵的一部分。
術(shù)語″雜亞炔基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5個被選自N、O或S的雜原子替換的亞炔基。實例包括亞炔基氧基，亞炔基氨基和亞炔基硫基。優(yōu)選地，其中所含的氧、氮和硫原子不與其它雜原子成鍵。在雜亞炔基的一個實施方案中，雜原子可占據(jù)鏈末端中任一個而非兩個。另外，雜原子不構(gòu)成乙烯鍵的一部分。
術(shù)語″亞環(huán)烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指含3-15個碳原子、優(yōu)選含3-10個碳原子的非芳香的脂環(huán)二價烴基。本文使用的″亞環(huán)烷基″的實例包括但不限于環(huán)丙基-1，1-二基，環(huán)丙基-1，2-二基，環(huán)丁基-1，2-二基，環(huán)戊基-1，3-二基，環(huán)己基-1，4-二基等。另外的實例包括還包含亞烷基的二價基，諸如亞甲基亞環(huán)丙基(即，-CH2-亞環(huán)丙基-)，亞乙基亞環(huán)丙基(即，-CH2CH2-亞環(huán)丙基-)和亞甲基亞環(huán)己基(即，-CH2-亞環(huán)己基-)。
術(shù)語″亞環(huán)烯基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指含3-15個碳原子、優(yōu)選含3-10個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵的被取代的脂環(huán)二價烴基。本文使用的″亞環(huán)烯基″的實例包括但不限于4，5-環(huán)戊烯-1，3-二基，3，4-環(huán)己烯-1，1-二基等。亞環(huán)烯基另外是指如上關(guān)于亞環(huán)烷基所述的并且至少一個單鍵用雙鍵代替的二價烴基。雙鍵可被包含在環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)。作為替代，當(dāng)可能時，雙鍵可位于亞環(huán)烯基的非環(huán)部分上。
術(shù)語″亞環(huán)雜烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5個被選自N、O或S的雜原子替換的亞環(huán)烷基。在一個實施方案中，其中所含的氧、氮和硫原子不與其它雜原子成鍵。適當(dāng)?shù)膶嵗ㄟ哙?、哌嗪、嗎啉和吡咯烷的二價基。其它適當(dāng)?shù)膶嵗▉喖谆哙せ?，亞乙基哌啶基，亞甲基哌嗪基，亞乙基哌嗪基和亞甲基嗎啉基?br> 術(shù)語″亞環(huán)雜烯基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5個被選自N、O或S的雜原子替換的亞環(huán)烯基。在一個實施方案中，其中所含的氧、氮和硫原子不與其它雜原子成鍵。
術(shù)語″烷氧基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指與氧原子連接的任何上述烷基。典型實例是甲氧基，乙氧基，異丙基氧基，仲-丁基氧基和叔-丁基氧基。
術(shù)語″烯基氧基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指與氧原子連接的任何上述烯基。典型實例包括乙烯基氧基，丙烯基氧基，丁烯基氧基，戊烯基氧基和己烯基氧基。
術(shù)語″芳基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指在環(huán)部分中含6-14個碳、優(yōu)選在環(huán)部分中含6-10個碳的單環(huán)或二環(huán)的芳族基團。典型實例包括苯基，萘基，蒽基或芴基。
術(shù)語″芳烷基″或″芳基烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指如上所述并具有芳基取代基的C1-6烷基，諸如芐基，苯基乙基或2-萘基甲基。
術(shù)語″雜芳基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指含5-14個環(huán)原子；在環(huán)排列中共享6、10或14個π電子并且包含碳原子和1、2、3或4個氧、氮或硫原子的基團；雜芳基的實例是噻吩基，苯并[b]噻吩基，萘并[2，3-b]噻吩基，噻蒽基，呋喃基，吡喃基，異苯并呋喃基，苯并噁唑基，苯并吡喃基，呫噸基，吩噻噁基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基，酞嗪基，萘啶基，喹唑啉基，噌啉基，喋啶基，4αH-咔唑基，咔唑基，β-咔啉基，菲啶基，吖啶基，萘嵌二氮雜苯，菲咯啉基，吩嗪基，異噻唑基，酚噻嗪基，異噁唑基，呋咱基，酚噁嗪基和四唑基。另外的雜芳基描述于A.R.Katritzky and C.W.Rees，編，Comprehensive HeterocyclicChemistryThe Structure，Reactions，Synthesis and Use ofHeterocyclic Compounds，Vol.1-8，Pergamon Press，NY(1984)中。
術(shù)語″亞烷基二氧基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，涉及環(huán)并且特別是指C1-4亞烷基二氧基。亞烷基二氧基可任選被鹵素(特別是氟)取代。典型實例包括亞甲基二氧基(-OCH2O-)或二氟亞甲基二氧基(-OCF2O-)。
術(shù)語″鹵素″或″鹵代″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指氯、溴、氟或碘。
術(shù)語″一烷基胺″或″一烷基氨基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指其中一個氫用如上所述的烷基取代的基團NH2。
術(shù)語″二烷基胺″或″二烷基氨基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指其中兩個氫都被如上所述的烷基取代的基團NH2。
術(shù)語″羥基烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用是指任何如上所述并且其一個或多個氫被一個或多個羥基部分取代的烷基。
本文使用的術(shù)語″?；被迨侵甘?NRaC(O)Rb所示部分，其中Ra和Rb獨立地是氫或如上所述的烷基。
術(shù)語″鹵代烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指任何如上所述并且其一個或多個氫被一個或多個鹵代部分取代的烷基。典型實例包括氟甲基，三氟甲基，三氯乙基和三氟乙基。
術(shù)語″鹵代烯基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指任何如上所述并且其一個或多個氫被一個或多個鹵代部分取代的烯基。典型實例包括氟乙烯基，二氟乙烯基和三氯乙烯基。
術(shù)語″羧基烷基″，在本文中單獨被使用或作為其它基團的一部分被使用，是指任何如上所述并且其一個或多個氫被一個或多個羧酸部分取代的烷基。
本文使用的術(shù)語″雜原子″是指氧原子(″O″)，硫原子(″S″)或氮原子(″N″)?？衫斫獾氖?，當(dāng)雜原子是氮時，其可形成NRaRb部分，其中Ra和Rb彼此獨立地是氫或烷基，或者與它們所連接的氮一起形成飽和的或不飽和的5、6或7元環(huán)。
術(shù)語″氧基″是指氧(O)原子。
術(shù)語″硫基″是指硫(S)原子。
一般地并且除非另有定義，本文使用的術(shù)語“任選被取代”是指一個或多個基團任選被一個或多個獨立地選自以下的取代基取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C6-10芳基，5-10元雜芳基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C2-6)烯基，C6-10芳基(C1-6)烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C6-14芳基(C1-6)烷氧基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺?；珻2-6炔基磺?；?，C6-10芳基磺?；?，C6-10芳基(C1-6)烷基磺?；珻1-6烷基亞磺?；?，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲酰基亞氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
當(dāng)術(shù)語“任選被取代”在涉及烷基、烯基或炔基被使用時，本文中的術(shù)語“任選被取代”是指所述一個或多個基團任選被一個或多個獨立地選自以下的取代基所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C3-6環(huán)烷基，C3-6環(huán)烯基，C3-6環(huán)雜烷基，C3-6環(huán)雜烯基，C6-10芳基，5-10元雜芳基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C2-6)烯基，C6-10芳基(C1-6)烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，C6-14芳基(C1-6)烷氧基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺?；?，C6-10芳基磺?；珻6-10芳基(C1-6)烷基磺?；珻1-6烷基亞磺?；?，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰胺基，C1-6烷基亞氨基氨基，甲?；鶃啺被被?，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
盡管沒有為以上所用的每個術(shù)語都提供詳細定義，但是每個術(shù)語可被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解。
正如上面某些實施方案中所定義的，連接基L1和L2可為含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。這可被理解為是指所述連接基可包含碳原子和雜原子的任何組合，從而使得碳原子和雜原子的總數(shù)，不包括任何任選的取代基，等于1-10的整數(shù)。因此，根據(jù)本發(fā)明，適當(dāng)?shù)倪B接基可包括但不必限于含1個碳原子的連接基(例如CH2)；含1個雜原子的連接基(例如O)；含5個碳原子的連接基(例如CH2CH2CH2CH2CH2)；含3個碳原子和2個雜原子的連接基(例如OCH2CH2NHCH2)；含10個碳原子的連接基；或含9個碳原子和1個雜原子的連接基。
術(shù)語“抑制劑”是指部分地改變或削弱TRPM5的功能和/或性質(zhì)的分子?！耙种苿卑?，蛋白質(zhì)或其片段，肽模擬物，有機化合物和抗體。在本發(fā)明的某些實施方案中，該抑制劑可完全阻斷TRPM5的功能。在其它實施方案中，該抑制劑可以一定的百分?jǐn)?shù)(例如用IC50值表示)阻斷或抑制TRPM5的活性。
術(shù)語“糖尿病”是指其中存在誘導(dǎo)高血糖的葡萄糖利用受損的一種代謝疾病。關(guān)于糖尿病的發(fā)病機理和形態(tài)學(xué)及其后期并發(fā)癥綜述可由本領(lǐng)域技術(shù)人員了解，例如，參見Robins′Pathologic Basis ofDisease(5th Ed.pp.910-922)。
術(shù)語“有效量”的TRPM5抑制劑是指抑制TRPM5受體或賦予對TRPM5受體的抑制效果的量。該量單獨地或與其它TRPM5抑制劑相組合地足以賦予其所被給予的細胞或整個有機體以TRPM5抑制效果。在一些實施方案中，有效量是不引起過度毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或其它可能的并發(fā)癥并與合理的益處/風(fēng)險比率相稱的量。
術(shù)語“胰島素抵抗綜合征”(IRS)是指一組包括以下的表現(xiàn)形式胰島素抵抗；高胰島素血癥；非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)；高動脈壓；中央(內(nèi)臟型)肥胖癥；和脂質(zhì)異常血癥。除了NIDDM的主要的晚期并發(fā)癥(糖尿病性血管病，動脈粥樣硬化，糖尿病性腎病，糖尿病性神經(jīng)病變，和糖尿病性眼并發(fā)癥諸如視網(wǎng)膜病、白內(nèi)障形成和青光眼)之外，許多其它病況也與NIDDM有關(guān)，這些病況包括脂質(zhì)異常血癥糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的胰島素抵抗，脂質(zhì)異常血癥，多囊卵巢綜合征，肥胖癥，高血糖癥，高脂血癥，高膽固醇血癥，高甘油三酯血癥，高胰島素血癥和高血壓。這些病況的簡要定義可在任何醫(yī)藥詞典例如Stedman′s Medical Dictionary中被獲得。
如上所述，上述化合物可被用來刺激胰島素釋放。該活性可為體外活性或體內(nèi)活性。用于刺激胰島素釋放的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物的量當(dāng)在體內(nèi)使用時不必與體外使用量相同。當(dāng)在體內(nèi)增加胰島素釋放時，具體化合物的因素諸如藥物代謝動力學(xué)和藥效學(xué)可能要求使用更大量或更小量的TRPM5抑制劑，諸如式I的化合物，或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。
本發(fā)明包括在有需要的動物、優(yōu)選哺乳動物中治療糖尿病的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。該方法還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中預(yù)防糖尿病的方法，包括對受試者給予胰島素分泌增強量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中治療胰島素抵抗綜合征的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明還包括在哺乳動物中治療或預(yù)防胰島素抵抗的方法，包括對所述哺乳動物給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何特定的小組、小類或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中治療高血糖癥的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。該方法還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中預(yù)防高血糖癥的方法，包括對受試者給予胰島素分泌增強量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明還涉及增強GLP-1從細胞釋放的方法，包括給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。如上所討論的，GLP-1在食物攝取后刺激胰島素合成和從胰島β-細胞的分泌，從而降低血糖水平。GLP-1是37個氨基酸的肽并且是高血糖素原的產(chǎn)物。隨后在第6位和第7位之間的內(nèi)源性分裂產(chǎn)生具有生物學(xué)活性的GLP-1(7-37)肽。當(dāng)攝入葡萄糖時，GLP-1從內(nèi)臟的腔表面中的L-型腸內(nèi)分泌細胞被分泌。GLP-1還響應(yīng)其它刺激而被釋放。GLP-1通過G蛋白偶聯(lián)的細胞表面受體、特別是GLP-1R起作用，并且由T1R味覺受體和味蛋白進行調(diào)節(jié)。參見Kokrashvili等人，AChemS XXIX Abstract，246(2007)。研究已顯示，在由糖和甜味劑刺激的GLP-1從L型腸內(nèi)分泌細胞的分泌中，α-味蛋白結(jié)合甜味受體T1R3。參見Jang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，104(38)15069-15074(2007)。
GLP-1具有幾種生理功能1)其以葡萄糖依賴性方式刺激胰島素從胰島細胞的合成，從而降低血糖水平；2)其降低高血糖素從胰腺的分泌；3)其增加β-細胞量和胰島素基因表達；4)其抑制胃液分泌和排空；5)其通過增加飽腹感而劑量依賴性抑制食物攝??；和6)其促進體重減輕。GLP-1的幾種作用描述于美國專利6,583,118、美國專利7,211,557；美國專利申請公報2005/0244810；Deacon，RegulatoryPeptides 128117-124(2005)；Turton等人Nature，37969-72(1996)。
已進行一些研究以鑒定GLP-1受體的非天然肽和小分子激動劑。這些化合物可用于治療2型糖尿病以及其它應(yīng)用。這些化合物模仿GLP-1的效果，因為它們加強由葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素從胰島細胞的釋放。例如艾塞那肽是exendin-4的合成變體，exendin-4是最初從毒蜥唾液中分離的天然肽。艾塞那肽目前被美國食品與藥物管理局批準(zhǔn)用于輔助性治療，以改善攝入二甲雙胍、磺酰脲類或二甲雙胍與磺酰脲類的組合但未實現(xiàn)足夠的血糖控制的2型糖尿病患者的血糖控制。正在開發(fā)其它可能的模仿GLP-1效果的藥劑。例如，參見，Knudsen等人，Small-molecule agonists for the glucagon-like peptide1 receptor，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 104(3)937-942(2007)。
因此，本發(fā)明的另一個方面是通過給予TRPM5抑制劑來刺激GLP-1釋放的方法。現(xiàn)有技術(shù)未暗示TRPM5抑制劑，諸如本文示例的那些，可被用于增強GLP-1的釋放，從而增加GLP-1的有益效果。因此，在某些實施方案中，本發(fā)明提供了增強GLP-1從腸細胞諸如小腸細胞釋放并隨后具有增強胰島素從胰腺細胞釋放的效果的方法。
TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何具體實施例可被給予至細胞或整個有機體，以獲得增強的GLP-1釋放。另外，TRPM5抑制劑可單獨地或與已知引起GLP-1分泌釋放的藥劑諸如葡萄糖一起被給予。例如，本發(fā)明所用的TRPM5可以是IC50為約1微摩爾或更低、優(yōu)選約100納摩爾或更低的TRPM5抑制劑。在一些實施方案中，本方法所用的TRPM5抑制劑在5微摩爾或更低的濃度下抑制TRPM5受體至少75％，優(yōu)選90％。
本文使用的“GLP-1”或胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)是胃腸道蛋白質(zhì)激素，其增強通過給予營養(yǎng)物諸如葡萄糖、碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)或混合氨基酸引起的胰島素分泌。GLP-1的生理作用和在攝取營養(yǎng)物后GLP-1釋放的各種被提出的機制例如由Kreymann等人描述于Lancet 21300-1304(1987)和由Deacon描述于RegulatoryPeptides 128117-124(2005)。除非另有說明，否則“GLP-1”是指GLP-1(7-37)。根據(jù)本領(lǐng)域的常識，GLP-1(7-37)的氨基末端用數(shù)字7指定并且羧基末端用數(shù)字37指定。GLP-1(7-37)的氨基酸序列是本領(lǐng)域公知的，但是如下表示NH2-His-Als-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-COOH。
在某些實施方案中，TRPM5抑制劑使GLP-1釋放增加約5％到約50％，或約10％到約70％，或約25％到約100％。在其它實施方案中，TRPM5抑制劑使從腸細胞釋放的GLP-1的量增加約25％、50％、75％或100％。
優(yōu)選地，增加GLP-1釋放的方法被用于哺乳動物，諸如人其它靈長類動物。在其它情況中，所述方法的受試者可以是寵物，諸如狗或貓。
GLP-1釋放的檢測可根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法(包括本文所述的那些方法在內(nèi))進行。例如，參見，F(xiàn).Reinmann等人，Diabetes，55(Supp.2)S78-S-85(2006)。
本發(fā)明還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中降低胃液分泌和排空的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中抑制食物攝取的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。已知GLP-1在調(diào)節(jié)對食物攝取的生理應(yīng)答中起顯著作用。GLP-1響應(yīng)食物的攝入從高血糖素原被加工得到并且從主要位于小腸和結(jié)腸末梢內(nèi)的內(nèi)分泌L-細胞被釋放進血液中。GLP-1通過G蛋白質(zhì)偶聯(lián)的細胞表面受體(GLP-1R)起作用并且增強由營養(yǎng)物所誘導(dǎo)的胰島素合成和釋放。GLP-1刺激胰島素分泌(促胰島素作用)和cAMP形成。GLP-1(7-36)酰胺刺激胰島素釋放劑降低胰高血糖素分泌，并抑制胃液分泌和排空。GLP-1的這些胃腸道效果在切斷迷走神經(jīng)的受試者中未被測得，顯示了由中樞介導(dǎo)的效果。GLP-1以高親合性與被分離的大鼠脂肪細胞結(jié)合，激活cAMP產(chǎn)生(Valverde等人，1993)并刺激脂肪生成或脂肪分解。GLP-1刺激大鼠骨骼肌中的糖原合成，葡萄糖氧化和乳酸形成。因此，基于本發(fā)明人的觀察結(jié)果，本文所述的TRPM5抑制劑可用于抑制食物攝取，因為TRPM5抑制劑增加GLP-1的釋放。
本發(fā)明還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中降低胰高血糖素分泌的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
高血糖素是由具有29個氨基酸殘基的直鏈多肽構(gòu)成的激素，從胰腺α-細胞中被提取。其生理作用，諸如升高血糖濃度和激活肝臟磷酸化酶，可由本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解，并且例如，參見Stedman′sMedical Dictionary，26th Ed.(1990)，第729頁。
本發(fā)明還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中增強胰島素敏感性的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明還包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中增加胰島的β-細胞量和胰島素基因表達的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明包括在有需要的動物、優(yōu)選人或其它哺乳動物中治療或預(yù)防肥胖癥的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。
本文使用的“肥胖癥”是指脂肪在皮下結(jié)締組織中的異常增加。Stedman′s Medical Dictionary，26th Ed.(1990)，第1235頁。
在上述方法的每個實施方案中，方法的受試者，除非另有限制，否則可為任何需要該方法的特定治療或效果的動物。這些動物包括但不限于牛、馬、羊、豬、雞、火雞、鵪鶉、貓、狗、小鼠、大鼠、兔、猴或豚鼠的胰島素分泌細胞。在其它實施方案中，動物是家畜動物，馴養(yǎng)動物或?qū)櫸飫游?。在具體實施方案中，要求保護的方法的受試者是人。
然而，通常，適當(dāng)?shù)膭┝繛榧s0.005到約100毫克/千克，例如為約0.1到約75毫克/千克體重/天，諸如0.03到約50毫克/千克接受者體重/天，優(yōu)選為0.06到90毫克/千克/天，最優(yōu)選為0.15到60毫克/千克/天。在其它實施方案中，適當(dāng)?shù)膭┝吭谝徽靸?nèi)為約0.1毫克/天到約2000毫克/天，作為單一劑量或多劑量被給予。
化合物可方便地以單位劑型被給予；例如，每單位劑型包含0.05到1000毫克、方便地包含0.1到750毫克、最方便地包含0.5到500毫克的活性成分。
TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物可典型地以約0.1重量％到約100重量％、優(yōu)選約1重量％到約80重量％的量存在于劑型中。本發(fā)明還考慮了占劑型重量的約1％到約50％，優(yōu)選約5％到約20％，約8％、15％或18％的量。
理想地，TRPM5抑制劑，諸如式I化合物，應(yīng)被給予以實現(xiàn)活性化合物的血漿峰濃度為約0.005到約75μM，優(yōu)選約0.01到50μM，最優(yōu)選約0.02到約30μM。這例如可通過靜脈內(nèi)注射活性成分任選地在鹽水中的0.0005到5％的溶液實現(xiàn)，或口服給予含約0.01-1毫克的活性成分的丸劑實現(xiàn)。所需的血液水平可通過提供約0.0001-5毫克/千克/小時的連續(xù)輸注或通過間歇輸注約0.004-15毫克/千克的活性成分得以保持。
該方法可被實施從而使得胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性被TRPM5抑制劑諸如式I化合物增強至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％、或約60％到約99％、或約20％到約50％。因此，在更具體的實施方案中，該方法包括給予包含一種或多種TRPM5抑制劑，諸如式I化合物的劑型，其中一種或多種式I化合物以足夠使胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性增強至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％、或約60％到約99％、或約30％到約70％的量存在。當(dāng)然，在其它實施方案中，胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性可被增強到不同程度。
所需劑量可方便地以單一劑量存在或者以在適當(dāng)間隔被給予的分劑量存在，諸如每天2、3、4次或更多次的亞劑量。亞劑量自身可再被細分，例如，被分成許多離散的、寬松間隔的給藥；諸如從吹入器被多次吸入或者被多次滴入眼中。
在另一個實施方案中，上述化合物可被用來增強胰島素或GLP-1從細胞分泌或增強細胞的胰島素敏感性。這些增強可為體外增強或體內(nèi)增強。用于增強胰島素分泌、胰島素敏感性或GLP-1分泌的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物的量當(dāng)在體內(nèi)使用時不必與體外使用量相同。當(dāng)在體內(nèi)作用于胰腺細胞時，具體化合物的因素諸如藥物代謝動力學(xué)和藥效學(xué)可能要求使用更大量或更小量的TRPM5抑制劑，諸如式I的化合物，或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。因此，本發(fā)明的一個方面是增強胰島素從細胞釋放和GLP-1從細胞分泌或增強細胞的胰島素敏感性的方法，包括使細胞接觸TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。
在本發(fā)明這方面的一個實施方案中，該方法包括使細胞、優(yōu)選胰腺細胞接觸TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物，其中所述細胞分泌胰島素。
在本發(fā)明這方面的一個實施方案中，該方法包括使細胞、優(yōu)選L型腸內(nèi)分泌細胞接觸TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物，其中所述細胞分泌GLP-1。
本發(fā)明還涉及增強胰島素和GLP-1從細胞釋放或增強細胞的胰島素敏感性的方法，包括使所述細胞接觸TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小類和具體化合物，并且使細胞的胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性增強至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％、或約50％到約99％。在另一個實施方案中，該方法包括使所述細胞接觸TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小類和具體化合物，并使細胞的胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性增強約10％到約50％。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及增強胰島素從細胞分泌或增強GLP-1從細胞分泌或增強細胞的胰島素敏感性的方法，包括使所述細胞接觸TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小類和具體化合物，并使胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性增強至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％、或50％到約99％/或約10％到約50％，并且其中所述細胞是天然存在的細胞。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及增強胰島素從細胞分泌或增強GLP-1從細胞分泌或增強細胞的胰島素敏感性的方法，包括使所述細胞接觸TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小類和具體化合物，并使胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性增強至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％、或50％到約99％，或約10％到約50％，并且其中所述細胞是天然存在的人胰島素分泌細胞或GLP-1分泌細胞。
可使用任何量的提供所需增強程度的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物。例如，基于每天每千克體重約0.001到100毫克、優(yōu)選每天每千克體重約0.01到約25毫克所提供的單一劑量或2-4個分劑量是適當(dāng)?shù)?。所述物質(zhì)優(yōu)選口服給藥，但是還可使用非腸道途徑，諸如皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或腹腔內(nèi)途徑或任何其它適當(dāng)?shù)倪f送系統(tǒng)諸如鼻內(nèi)或透皮途徑。
本文使用的術(shù)語“增強”及其語法變體是指量或程度的增加。例如，增強胰島素從細胞釋放或增強GLP-1從細胞釋放是指增加由細胞所釋放的胰島素或GLP-1的量。類似地，增強細胞的胰島素敏感性是指增加細胞的胰島素敏感性的程度。增強包括但不必限于調(diào)節(jié)、修飾、激活等。
組合物 本發(fā)明還涉及各種可用于治療糖尿病、胰島素抵抗綜合征、高血糖癥和肥胖癥的的組合物，其包含TRPM5，諸如式I化合物或其生理學(xué)可接受的鹽。
本發(fā)明還涉及各種可用于增加胰島的β-細胞量和胰島素基因表達、降低胃液分泌和排空和胰高血糖素分泌并抑制食物攝取的組合物，其包含TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或其生理學(xué)可接受的鹽。
在一個方面，本發(fā)明涉及包含TRPM5抑制劑以及一種或多種藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物，其中TRPM5抑制劑是諸如以上定義的式I化合物，包括任何上述的特定實施方案、小類或物質(zhì)在內(nèi)。本發(fā)明的優(yōu)選組合物是包含選自以上所列的一個或多個實施方案的化合物以及一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物可為任何適于實現(xiàn)其預(yù)定目的的形式。然而，優(yōu)選地，組合物為可經(jīng)頰或經(jīng)口給藥的形式。作為替代，藥物組合物可為口或鼻噴霧劑。
本發(fā)明的藥物組合物可為任何適于對可以經(jīng)歷一種或多種TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物的有益效果的動物給藥的形式。在這些動物中優(yōu)選人，盡管本發(fā)明并不僅限于人。其它適當(dāng)?shù)膭游锇ㄈ苿游铩⒇埧苿游?、狗、貓、家畜、馬、牛、羊等。本文使用的獸用組合物是指適用于非人動物的藥物組合物。這些獸用組合物是本領(lǐng)域已知的。
本發(fā)明的藥物制劑可采用已知的方法制造，例如借助于傳統(tǒng)的混合、造粒、包糖衣、溶解或凍干方法制造。因此，用于口服應(yīng)用的藥物制劑可通過將活性化合物與固體賦形劑混合、任選地研磨所得混合物并將混合物加工為顆粒，如果需要或必要的話，在加入適當(dāng)?shù)闹鷦┖螅@得片劑或糖衣核心而被獲得。
藥物賦形劑是本領(lǐng)域公知的。適當(dāng)?shù)馁x形劑包括填充劑諸如糖類，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇，纖維素制劑和/或磷酸鈣，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑諸如淀粉糊，例如使用玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧基甲基纖維素鈉和/或聚乙烯基吡咯烷酮。如果需要，可加入崩解劑，諸如上述的淀粉以及羧基甲基淀粉、交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽諸如藻酸鈉。首先，助劑是流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，例如，是二氧化硅，滑石，硬脂酸或其鹽諸如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。糖衣核心被提供有適當(dāng)?shù)陌?，如果需要，該包衣耐胃液。為了這一目的，可使用濃的糖溶液，其可任選包含阿拉伯樹膠，滑石，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化鈦，漆溶液和適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑或溶劑混合物。為了產(chǎn)生耐胃液的包衣，使用適當(dāng)?shù)睦w維素制劑諸鄰苯二甲酸乙酰纖維素或鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素酯的溶液?？上蚱瑒┗蛱且峦璋轮屑尤肴玖匣蝾伭希?，用于區(qū)別或者用于表征活性化合物劑量的組合。
用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)可接受的乳劑、溶液、懸浮劑、糖漿劑和酏劑。除了活性化合物之外，液體劑型還包含本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，諸如，例如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑諸如乙醇，異丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，芐醇，苯甲酸芐酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氫糠醇，聚乙二醇和山梨糖醇酐的脂肪酸酯，及其混合物。
除了活性化合物之外，懸浮劑可包含助懸劑，諸如，例如，乙氧基化異硬脂醇，聚氧乙烯山梨醇和山梨糖醇酐酯，微晶纖維素，偏氫氧化鋁(aluminum metahydroxide)，膨潤土，瓊脂和黃蓍膠，及其混合物。
在另外的實施方案中，本發(fā)明涉及包含醫(yī)藥有效量的TRPM5抑制劑諸如一種或多種式I化合物以及一種或多種生物學(xué)活性劑的咀嚼片。咀嚼片是本領(lǐng)域已知的。例如，參見，美國專利4,684,534和6,060,078，其各自全文并入本文作為參考。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及口服崩解組合物，其中所述口服崩解組合物另外包含TRPM5抑制劑，諸如一種或多種上述的式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物?？诜澜馄瑒┦潜绢I(lǐng)域已知的。例如，參見，美國專利6,368,625和6,316,029，其各自全文并入本文作為參考。
在另一個實施方案中，本發(fā)明進一步涉及鼻用組合物，其另外包含醫(yī)學(xué)有效量的TRPM5抑制劑，諸如一種或多種上述的式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。鼻噴霧劑是本領(lǐng)域已知的。例如，參見，美國專利6,187,332。作為非限制性實例，本發(fā)明的鼻噴霧組合物包含水(諸如95-98重量％)、檸檬酸鹽(諸如0.02M檸檬酸根陰離子到0.06M檸檬酸根陰離子)、式I化合物和任選的磷酸鹽(諸如0.03M的磷酸鹽到0.09M磷酸鹽)。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及固體劑型，其包含由水和/或唾液活化的泡騰顆粒諸如具有可控泡騰速率的顆粒以及TRPM5抑制劑諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。泡騰藥物組合物是本領(lǐng)域已知的。例如，參見，美國專利6,649,186，其全文并入本文作為參考。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及薄膜成形或薄片成形的藥物組合物，其包含TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物，并且能夠崩解。這些薄膜成形或薄片成形的藥物組合物可被構(gòu)建為例如迅速崩解的給藥形式，例如，在1秒到最多3分鐘的時段內(nèi)崩解的給藥形式，或者可被構(gòu)建為緩慢崩解的給藥形式，例如在3-15分鐘的時段內(nèi)崩解的給藥形式。
通過使用例如具有不同崩解或溶出特征的基質(zhì)形成聚合物，上述崩解時間可被設(shè)定在上述范圍內(nèi)。因此，通過混合相應(yīng)的聚合物組分，可以調(diào)節(jié)崩解時間。另外，崩解劑已知其從基質(zhì)“汲取”水并引起基質(zhì)從內(nèi)部進裂。因此，本發(fā)明的某些實施方案包括用于調(diào)節(jié)崩解時間目的的這些崩解劑。
用于薄膜成形或薄片成形的藥物組合物的適當(dāng)?shù)木酆衔锇ɡw維素衍生物，聚乙烯醇(例如MOWIOLTM)，聚丙烯酸酯，聚乙烯基吡咯烷酮，纖維素醚，諸如乙基纖維素，以及聚乙烯醇，聚氨酯，聚甲基丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸甲酯和上述聚合物的衍生物和共聚合物。
在某些實施方案中，本發(fā)明的薄膜成形或薄片成形的藥物組合物的總厚度優(yōu)選為5微米到最多10毫米，優(yōu)選30微米到2毫米，特別優(yōu)選0.1毫米到1毫米。藥物制劑可為圓形、卵形、橢圓形、三角形、四邊形或多邊形，但是它們還可具有任何的圓形。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及組合物，其包含被包含在包圍膠基制劑的包衣內(nèi)中的藥學(xué)活性量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或上述任何的特定小組、小類或具體化合物。優(yōu)選地，包衣占整個產(chǎn)品重量的至少50％。當(dāng)核心被咀嚼時，藥物或藥劑被釋放進入唾液。例如，美國專利6,773,716，其全文并入本文作為參考，公開了被包含在包圍膠基制劑的包衣中的合適的藥物或藥劑。一種或多種上述的式I化合物或任何特定的小組、小類或具體化合物可用于制備包衣。上述的式I化合物或任何特定的小組、小類或具體化合物可以不同的量存在，諸如約30％、50％、75％或90％。在另一個實施方案中，式I化合物以約30％到約99％存在。在其它實施方案中，式I化合物以約1％到約30％存在。
在另外的實施方案中，本發(fā)明涉及適用于氣霧劑給藥的藥物組合物，其包含醫(yī)學(xué)有效量的TRPM5抑制劑諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物以及適當(dāng)?shù)妮d體。氣霧劑組合物是本領(lǐng)域已知的。例如，參見，美國專利5,011,678，其全文并入本文作為參考。作為非限制性實例，本發(fā)明的氣霧劑組合物可包含TRPM5抑制劑，諸如一種或多種式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物以及生物相容性推進劑，諸如(氫/氟)碳推進劑。
在另外的實施方案中，本發(fā)明涉及透皮藥物遞送組合物，其包含醫(yī)學(xué)有效量的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。透皮藥物遞送組合物，諸如裝置被設(shè)計用于遞送治療有效量的藥物穿過患者的皮膚。本領(lǐng)域已知的裝置包括涉及控制藥物向皮膚釋放的速率的膜的儲庫型裝置和涉及藥物在基質(zhì)中的分散體的裝置。透皮藥物遞送組合物，諸如透皮貼劑是本領(lǐng)域已知的。
在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含約0.001毫克到約1000毫克的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。在某些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含約0.01毫克到約10毫克的TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物。
TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物的活性可通過采用本領(lǐng)域已知的許多方法測試所述化合物來測定。例如，可以通過使用體內(nèi)試驗來評價化合物增強胰島素分泌、GLP-1分泌或胰島素敏感性的能力。該體內(nèi)試驗鑒定了在TRPM5抑制劑諸如式I化合物存在的條件下由胰腺細胞釋放的胰島素的量或由L型腸內(nèi)分泌細胞釋放的GLP-1的量。
TRPM5抑制劑，諸如式I化合物或任何上述的特定小組、小類或具體化合物的活性還可借助于在實施例23中所述的試驗來測定。
化合物的制備方法 TRPM5抑制劑可以采用本文所公開的試驗和方法進行鑒定。另外，在全文并入本文作為參考的美國專利申請公報20050019830中公開的試驗可用于鑒定作為TRPM5抑制劑的化合物。這些化合物可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)來制備。
式I化合物可根據(jù)下文所述方法被合成。用于本發(fā)明的化合物可使用本領(lǐng)域已知的過程被合成。
以下一般反應(yīng)路線說明了用于制備本發(fā)明化合物的合成方法。在一個方法中，式I化合物可通過將適當(dāng)?；孽ｋ屡c適當(dāng)?shù)耐蛉┰谶m當(dāng)?shù)挠袡C溶劑諸如乙醇、2-丙醇、四氫呋喃、甲苯等及其混合物中進行縮合來制備，如反應(yīng)路線1所示(其中R1、R2、R3、R4、L1和L2的定義同上)。水淬滅劑諸如分子篩或干燥碳酸鉀的存在可用于該方法中?？墒褂盟峄驂A催化來促進縮合。酸催化劑包括但不限于對甲苯磺酸、甲磺酸、磷酸和硫酸。堿催化劑包括但不限于三乙胺、二異丙基乙基胺、吡啶、N-甲基嗎啉、碳酸鈉、碳酸鉀和碳酸鈉。
反應(yīng)路線1.
在可供選擇的方法中，其中R2是H的某些式I化合物可以如反應(yīng)路線2所示被制備(其中R1、R2、R3、R4、L1和L2的定義同上)。根據(jù)該方法，適當(dāng)?shù)聂人嵊眠m當(dāng)?shù)娜┗蛲碾赀M行處理，以提供式I化合物。羰基二咪唑和三乙胺在該反應(yīng)中可作為縮合劑被使用，盡管也可使用其它適當(dāng)?shù)目s合劑。
反應(yīng)路線2.
作為另一個實施例，其中R1和R2是芳基的式I化合物可以通過將?；孽ｋ?諸如化合物1)與醛(諸如化合物2)在適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑諸如乙醇、2-丙醇、四氫呋喃、甲苯等及其混合物中，并在水淬滅劑諸如分子篩或干燥碳酸鉀存在的條件下進行縮合被制備(反應(yīng)路線1)?？墒褂盟峄驂A催化來促進縮合。酸催化劑包括但不限于對甲苯磺酸、甲磺酸、磷酸和硫酸。堿催化劑包括但不限于三乙胺、二異丙基乙基胺、吡啶、N-甲基嗎啉、碳酸鈉、碳酸鉀和碳酸鈉。該方法的一個實例如反應(yīng)路線3所示。
反應(yīng)路線3
該方法的變體可包括用適當(dāng)?shù)娜┑碾?諸如化合物4)處理適當(dāng)?shù)聂人?諸如化合物3)以提供化合物I。羰基二咪唑和三乙胺在該反應(yīng)中通常作為縮合劑被使用。該方法的一個實例如反應(yīng)路線4所示。
反應(yīng)路線4
該反應(yīng)還可在無摻雜(例如無溶劑)的條件下進行。在反應(yīng)完全后，通過從溶劑諸如乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯等中結(jié)晶來分離產(chǎn)品。
類似地，本發(fā)明的其它化合物可從市售來源獲得或者可由本領(lǐng)域技術(shù)人員制備。起始材料是市售的或者它們可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員制備。例如，上述的化合物1可如下被制備使羧酸(諸如化合物3)與被保護的肼(諸如化合物5)在羰基二咪唑/三乙胺存在的條件下反應(yīng)以提供被保護的酰肼(諸如化合物6)。在反應(yīng)完全后，在標(biāo)準(zhǔn)條件(諸如酸性條件，例如三氟乙酸)下可以從酰肼(諸如化合物6)中除去保護基，以提供式1化合物。該方法的一個實例如反應(yīng)路線5所示。
反應(yīng)路線5
本發(fā)明的其它化合物可通過本文所述方法的微小變體被制備。這些方法和其它方法描述于文獻中，諸如Wyrzykiewicz和Prukala，Polish J.Chem.72694-702(1998)；和Elderfield和Wood，J.Org.Chem.272463-2465(1962)，其各自全文并入本文作為參考。
另外的式I化合物(其中L2是N＝N)可通過使重氮鹽與腙反應(yīng)被制備。用于該縮合的反應(yīng)條件是有機合成領(lǐng)域技術(shù)人員已知的(例如，參見，Synthesis，577-581(1995)；Chemical and PharmaceuticalBulletin 42(11)2363-2364(1994)；Tetrahedron 38(12)1793-1796(1982))。起始材料可為市售來源或者可通過常用的有機反應(yīng)條件被制備。

其中L2不存在、R3和R4是氰基和R2是H的另外的式I化合物可通過將丙二腈與重氮鹽縮合被制備。該反應(yīng)和條件是有機合成領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。(例如，參見，Archiv.der Pharmazie 337(3)140-147(2004)；Monatshefte fuer Chemie 130(11)1409-1418(1999))。

其中L1-R1是下式的另外的式I化合物
可通過用肼在醇性溶劑(例如甲醇、乙醇、異丙醇)或其它溶劑中處理內(nèi)酯A被制備(參見Zhurnal Organischeskoi Khimii17(3)481-486(1981))
以提供可如本文所述被使用的?；闎。
其中L1-R1是下式的另外的式I化合物
可從酮酸C被制備(參見Org.Syn.Coll.Vol.9，530)。酮酸C用重氮甲烷、三甲基甲硅烷基二偶氮甲烷或其它試劑組合進行酯化，得到的酯用選擇性還原劑諸如硼氫化鈉在甲醇或乙醇中還原，以提供中間體D和/或其內(nèi)酯。中間體D(或其內(nèi)酯)用過量的肼在醇性溶劑(例如甲醇、乙醇、異丙醇)或其它溶劑中進行處理，以提供中間體E。該中間體可如本文所述被用于制備式I化合物。

其中L1不存在并且R1是下式的另外的式I化合物
可從中間體G被制備。中間體G通過用氯化錫(例如，參見，Journal of Heterocyclic Chemistry 24(4)1041-3(1987))等還原市售的重氮鹽F被制備。

其中L1-R1是下式的另外的式I化合物
可從中間體K被制備。中間體K如以下反應(yīng)路線所示被制備。苯胺(H)用堿諸如碳酸鉀、另一種碳酸鹽堿或更強的堿諸如六甲基二硅氮化鈉(sodium hexamethyldisilazide)或氫化鈉；和溴乙酸乙酯處理，以提供J。中間體J用過量的肼在醇性溶劑或其它溶劑中進行處理，以提供如本文所述被使用的K。

其中L1不存在并且R1是下式的另外的式I化合物
可從中間體M被制備。中間體M可如JCS Perkin 1，2216-2221(1976)所述用吡咯烷處理市售的鹵化物L(fēng)被獲得。

當(dāng)然，可使用本領(lǐng)域已知的其它方法和過程來制備某些式I化合物。
以下實施例非限制性地說明了本發(fā)明的方法、化合物和組合物。以下所列的每一化合物從市售的目錄公司獲得，諸如AldrichRarechemLib，Aldrich Sigma，AlsInEx，Biotech Corp.，Brandon/Berlex，Calbiochem，ChemBridge，Comgenex West，F(xiàn)oksH，G.&J.Research，IBS，ICN Biochemicals，Institute forChemotherapy，Kodak，Lederle Labs，Ligand-CGX，Maybridge PRI，Menai Organics，Menai/Neurocrine，MicroSource，MPA Chemists，Mybrgd/ONYX，PRI-Peakdale，RADIAN，Receptor Research，RGI，Rhone-Poulenc，SPECS/BioSPECS/SYNTHESIA，T.Glinka，TriposModern，VWR，Zaleska，Zelinksy/Berlex，Aeros和Chemica?；衔锸褂脗鹘y(tǒng)的純化過程諸如HPLC進行純化?；衔锟墒褂肏PLC和質(zhì)譜法來確認。正如本領(lǐng)域已知的和如上所述的，腙部分可以E或Z構(gòu)型存在。因此，盡管對于本文所述的具體化合物用具體立體化學(xué)表示，可以理解，本發(fā)明包括所有的立體異構(gòu)體，特別是所有的E和Z異構(gòu)體。通常遇到的和對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的對不同條件和參數(shù)進行其它適當(dāng)?shù)母淖兒托薷奶幵诒景l(fā)明的精神和范圍內(nèi)。
實施例 實施例1 4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯
分子式C19H19N5O2S；分子量381.5(計算值)。
實施例2 (E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸
分子式C18H14BrN3O3；分子量400(計算值)。
實施例3 (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼
分子式C21H20N2O3；分子量348(計算值)，348(實測值)。
實施例4 (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼
分子式C19H20N2O3；分子量324(計算值)，324(實測值)。
實施例4的對映體(R，R，R，S，S，S和S，R)通過超臨界流體色譜法使用20％甲醇(流速為5mL/min，100巴，35℃)在4.6×250mmDiacel ODH柱上被分離。分離的HPLC色譜如圖15所示。
實施例5 (E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)丁酰肼
分子式C18H24N2O3；分子量316.40(計算值)。
實施例6 (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼
分子式C20H30N2O4；分子量364.5(計算值)，364(實測值)。
實施例7 2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)-亞甲基)肼基)苯甲酸
分子式C20H16N4O2；分子量344.7(計算值)。
實施例8 (E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼
分子式C18H20N2O4；分子量328(計算值)，328(實測值)。
實施例9 (E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)乙酰肼
分子式C20H21BrN2O3S；分子量449(計算值)，447.9(實測值)。
實施例10 (E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼
分子式C18H24N2O；分子量284(計算值)，284(實測值)。
實施例11 (Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)亞乙基)二氫吲哚
分子式C19H20N4O2；分子量336(計算值)，336(實測值)。
實施例12 (E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼
分子式C21H25N3O2；分子量351(計算值)，351(實測值)。
實施例13 (4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物(carbonohydrazonoyldicyanide)
分子式C10H5F3N4S；分子量270.24(計算值)。
實施例14 N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺
分子式C26H22N4O3；分子量438.5(計算值)。
實施例15 (Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸
分子式C20H21N3O2；分子量335.4(計算值)。
實施例16 (E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶
分子式C19H17N3；分子量287(計算值)，287.2(實測值)。
實施例17 (Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼
分子式C16H21N3O；分子量271(計算值)。
實施例18 (Z)-1-(2-(4-(乙基-(2-羥基乙基)-氨基)苯基)肼叉基)萘-2(1H)-酮
分子式C20H21N3O2；分子量335(計算值)，333.2(實測值)。
實施例19 (E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚
分子式C14H11ClF3N3O；分子量345.7(計算值)，344.9(實測值)。
實施例20 (E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基苯亞甲基)乙酰肼
分子式C21H25N5O4；分子量411.4(計算值)，411.3(實測值)。
實施例21 (Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)
分子式C17H23N5O2；分子量329.4(計算值)。
實施例22 (E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚
分子式C18H21N5O；分子量323.4(計算值)。
實施例23 3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼
分子式C24H23N3O3。
實施例24 (4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼
分子式C22H22N3O3。
實施例25 用于測定TRPM5抑制劑對胰島素釋放的增強效果的試驗 如Poitout等人，Diabetes，44306-313(1995)所述，β-TC-6細胞，是從在胰腺β-細胞中表達猿猴病毒40(SV40)的大T-抗原的轉(zhuǎn)基因小鼠中得到的胰島素分泌細胞系。該細胞系從ATCC細胞庫CAT#CRL-11506獲得并在含15％胎牛血清(FBS)、4mM谷氨酰胺、4.5mM葡萄糖、1500mg/L碳酸氫鈉和1X青霉素/鏈霉素抗生素混合物的Dulbecco氏改性伊格爾培養(yǎng)基(DMEM)中，在含5％CO2的37℃的保溫箱中進行生長。培養(yǎng)物按照慣例在胰蛋白酶的幫助下每周以1∶2分裂兩次。
在試驗前一天，將0.1×106個β-TC-6細胞在96孔板的每個孔中鋪板，并將細胞在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。
第二天，從板中取出生長培養(yǎng)基，將單層用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)漂洗并在37℃在由118.5mM NaCl、2.54mM CaCl2、1.19mMKH2PO4、4.74mM KCl、25mM NaHCO3、1.19mM MgSO4、10mM HEPES緩沖液和0.1％牛血清白蛋白組成的Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液(KRBB)(pH 7.4)中預(yù)培養(yǎng)30分鐘。將該緩沖液取出并替換為100μL的包含各種胰島素釋放調(diào)節(jié)劑的相同緩沖液包括最高為12mM的各種濃度的葡萄糖，高至100μM的化合物。將化合物儲備溶液例如10-20mM在DMSO中稀釋。在培養(yǎng)緩沖液中的最終DMSO濃度是0.5％或更低。包括了媒介物對照。然后在37℃靜止培養(yǎng)2小時。在2小時培養(yǎng)后收集全部培養(yǎng)體積用于胰島素試驗。
ELISA規(guī)程用于胰島素測定。使用得自Linco Research，Inc.的大鼠/小鼠胰島素ELISA試劑盒CAT# EZRMI-13K和

Red過氧化氫/過氧化物酶試驗試劑盒CAT# A22188和

Red試劑(10-乙?；?3，7-二羥基酚噁嗪)CAT# A12222，使用以下規(guī)程實施ELISA。
所有試劑在進行實驗之前被預(yù)溫?zé)岬绞覝亍?br> 1.將10X洗滌緩沖液稀釋成1X洗滌緩沖液。50mL+450mL去離子水。對細胞培養(yǎng)上清液(β-TC-6細胞培養(yǎng))進行1∶10稀釋。
2.使用一列(8個孔)孔用于標(biāo)準(zhǔn)樣品和QC1和QC2，典型地是0和5ng/mL的胰島素。在一些板上，如下所示獲得胰島素的完全標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.覆蓋未用的孔。用每次300μL的1X洗滌緩沖液將每個孔洗滌三次(在振蕩器上每次洗滌步驟為2分鐘)。將洗滌緩沖液傾析掉并通過將板反轉(zhuǎn)從所有孔中除去殘余量并進行若干次劇烈敲擊以將其敲到吸收毛巾上。在進行下一步之前不讓孔干燥。
4.將20μL試驗緩沖液加入到空白孔中，將10μL標(biāo)準(zhǔn)樣品和樣品加入到那些孔中。
5.將10μL大鼠胰島素標(biāo)準(zhǔn)樣品和樣品加入到適當(dāng)?shù)目字小?br> 6.將80μL檢測抗體加入到全部孔中。將板覆蓋并在室溫下培養(yǎng)2小時。
7.扯掉板覆蓋物并從板傾析掉溶液。輕敲以除去孔中的殘余溶液。
8.用每次300μL的稀的洗滌緩沖液將每個孔洗滌3次(在振蕩器上每次洗滌步驟為2分鐘)。如前所述輕敲以除去殘余溶液。
9.將100μL酶溶液加入到各個孔中。用密封物覆蓋板并在微量滴定板振蕩器上在輕度搖動下在室溫下培養(yǎng)30分鐘。
10.除去密封物，從板傾析掉溶液并輕敲板以除去殘余流體。
11.用每次300μL的稀的洗滌緩沖液將每孔洗滌6次。在每次洗滌后進行傾析和輕敲以除去殘余緩沖液。
12.制備100μL Amolex Red試劑的5mL工作溶液，其包含2.0mM H2O2，4.45mL的1x反應(yīng)緩沖液+50μL的10mM的Amplex試劑+500μL的20mM的H2O2。
13.向各孔中加入100μL的Amplex Red試劑/H2O2。
14.將反應(yīng)物進行培養(yǎng)。在室溫下培養(yǎng)30分鐘，避光保存(使用箔紙包裹板)。然后在Molecular Devices FlexStation中在多個時間點測量在590nm的熒光(激發(fā)波長范圍為530-560nm)。
上述過程或其微小變化用于測定TRPM5抑制劑對胰島素分泌的增強。
實施例26 對包含TRPM5的細胞進行的電生理學(xué)研究 從急性胰蛋白酶化βTC-6細胞和表達TRPM5的HEK細胞獲得TRP通道電流的全細胞記錄。浴溶液是Hank氏平衡鹽液，組成為(mM)1.2 CaCl2，0.5 MgCl2-6H2O，0.4 MgS4-7H2O，5.3 KCl，0.4KH2PO4，137.9 NaCl，0.3 Na2HPO4-7H2O和5.5D-葡萄糖，含20mMHEPES(Invitrogen)，pH 7.4(NaOH)。內(nèi)部移液管溶液包含(以mM表示)135谷氨酸，8NaCl，9CaCl2，10HEPES和10EGTA，pH7.2(CsOH)(Sigma)。在內(nèi)部溶液中游離鈣的計算濃度是1.5μM(http://www.stanford.edu/～cpatton/webmaxc/webmaxcS.htm)。使用Flaming/Brown微量吸液管拉拔器(Sutter Instruments)從火焰拋光硼硅玻璃拉出記錄移液管至大約2MΩ。
使用在Clampex 9.2軟件(Axon Instruments)上運行的MultiClamp 700B擴增器和Digidata 1322A轉(zhuǎn)換器以全細胞方式獲得了電壓鉗記錄。記錄在室溫下進行。記錄規(guī)程包括從-80mV電位上升到+80mV電位的斜線，然后階躍到-80mV。在以下三個不同的電壓測量峰電流-80mV，在斜線上升到+80mV，然后返回到-80mV。在坡度變化(break-in)后立即自動補償串聯(lián)電阻，并且將得到的電容測量值用于電流密度的計算。在5kHz下采集數(shù)據(jù)并在1kHz下進行過濾。
將化合物制備成DMSO儲液。在實驗當(dāng)天，將它們?nèi)苡谠∪芤褐羞_到0.1％的最終DMSO濃度。使用多管實施器(SF-72，Warner)實現(xiàn)迅速的溶液交換(～100ms)。
實施例27 在小鼠βTC6細胞中mTRPM5的存在 使βTC-6細胞生長然后旋轉(zhuǎn)減慢，并使用得自Qiagen RNA的RNeasy迷你試劑盒(Cat #74104)制備了制備物。將該制備物第二次使用Invitrogen脫氧核糖核酸酶I(Cat #18068-015)進行脫氧核糖核酸酶化處理。使用用于RT-PCR的Invitrogen Superscript First-Strand Synthesis System(Cat #12731-019)制備第一鏈cDNA合成物。制備了RT(+)和RT(-)cDNA以檢查基因組污染的可能性。
使用得自Invitrogen的鉑Taq DNA聚合酶(Cat #10966-018)和mtrpM5特異性的正向引物和反向引物，使RT(+)和RT(-)cDNA都發(fā)生聚合酶鏈反應(yīng)。觀察到適合尺寸帶的RT(+)產(chǎn)物并且從RT(-)cDNA的帶的缺乏可看出沒有基因組污染。結(jié)果如圖14所示。
實施例28 被選擇的化合物的活性 檢驗了被選擇的本發(fā)明的化合物增加胰島素分泌的能力。結(jié)果如下表所示。對濃度為10μM的化合物進行試驗。數(shù)據(jù)顯示，相對于葡萄糖依賴性胰島素生成，由供試化合物引起的胰島素分泌的增強百分?jǐn)?shù)。在下表中還提供了甲苯磺丁脲的活性，甲苯磺丁脲在30μM進行試驗。
實施例29 使用GLUTag細胞測定TRPM5抑制劑對GLP-1釋放的影響的試驗 小鼠GLUTag細胞是表達TRPM5的原初腸細胞系。該細胞系從多倫多大學(xué)的醫(yī)學(xué)系的內(nèi)分泌學(xué)科的Daniel J.Drucker醫(yī)生處獲得，并在含有10％胎牛血清(FBS)和1X青霉素/鏈霉素抗生素混合物的高葡萄糖Invitrogen Dulbecco氏伊格爾培養(yǎng)基(DMEM)(Cat #11995)中在含5％CO2的37℃培養(yǎng)箱中進行生長。在開始實驗之前將所有試劑和培養(yǎng)基預(yù)溫?zé)岬绞覝亍Ｔ诩磳⑹褂弥皩⒌孜锵♂屛锖凸饷舻孜锝鈨觥?br> 細胞板的接種 使用100μL的鋪板培養(yǎng)基(Invitrogen的(Cat #31985)OPTI-改性伊格爾培養(yǎng)基(MEM)，含10％FBS和1X青霉素/鏈霉素抗生素混合物)將含GLUTag細胞的BD 96孔Matrigel覆層板(Fisher，Cat #08-774-166)進行再水合處理，并在含5％CO2的37℃保溫箱中培養(yǎng)30分鐘。然后對GLUTag細胞進行胰蛋白酶化并計數(shù)。制備了具有接種密度為7.5×105個細胞/毫升的GLUTag細胞的細胞稀釋物。將再水合培養(yǎng)基從Matrigel覆層板中吸出。將100μL的細胞稀釋物鋪板在板的各個孔內(nèi)。然后將該板在含5％CO2的37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
以下規(guī)程采用Millipore GLP-1酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(Cat. #EGLP-35K)來分析在TRPM5抑制劑/增強劑和葡萄糖存在的條件下GLP-1從GLUTag細胞的分泌。
酶聯(lián)免疫吸附測定試驗第一天 制備了TRPM5抑制劑或增強劑的儲備溶液板和稀釋物板。在即將使用前將1％的牛血清清蛋白(BSA)加入到Krebb′s Ringer碳酸氫鹽緩沖液(KRBB)中。KRBB組成118.5mM NaCl，2.54mM CaCl2·2H2O，1.19mM KH2PO4，4.74mM KCl，25mM NaHCO3，1.19mM MgSO4·7H2O和10mM HEPES緩沖液，pH 7.4。將細胞板與100μL的KRBB培養(yǎng)30分鐘。然后將KRBB緩沖液吸出。將該培養(yǎng)步驟重復(fù)一次。將KRBB緩沖液吸出并替換為包含各種濃度的TRPM5抑制劑或增強劑和葡萄糖即12.5mM葡萄糖和1.5μM TRPM5抑制劑的150μL同樣的緩沖液。還一式三份檢測了不含TRPM5抑制劑/增強劑和葡萄糖的KRBB緩沖液。然后在含5％CO2的37℃培養(yǎng)箱中將經(jīng)過處理的細胞進行靜態(tài)培養(yǎng)2小時。
在2小時培養(yǎng)的最后30分鐘期間，如下制備96孔酶聯(lián)免疫吸附測定板。將涂有抗GLP-1單克隆抗體的GLP-1(活性)酶聯(lián)免疫吸附測定板用300μL/孔的洗滌緩沖液(洗滌緩沖液濃縮物(10mM的含吐溫20和疊氮化鈉的PBS緩沖液)的1∶10稀釋物)洗滌三次。然后將200μL的試驗緩沖液(0.05M的包含蛋白酶抑制劑的PBS(pH 6.8)，含吐溫20、0.08％疊氮化鈉和1％BSA)加入到非特異性結(jié)合孔A10-A12中。將以100μL總量的試驗緩沖液加入到GLP-1標(biāo)準(zhǔn)孔中。將試驗緩沖液(98μL)和二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制劑(Linco Cat# DPP4)(2μL)的組合以100μL加入到所有的細胞樣品孔中。將100μL的在試驗緩沖液中的GLP-1酰胺酶聯(lián)免疫吸附測定標(biāo)準(zhǔn)樣品(GLP-1(7-36個酰胺)2、5、10、20、50和100pM)一式兩份以遞增順序加入到適當(dāng)?shù)目字小Ｈ缓髮?00μL的樣品加入到細胞板的剩余孔中。將酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)板輕輕振搖用于適當(dāng)混合。
然后用粘封物將酶聯(lián)免疫吸附測定板覆蓋并在4℃培養(yǎng)過夜(20-24小時)。
然后從ELISA板中傾淅掉液體，并通過敲擊將過量流體敲到吸收毛巾上。使用300μL的洗滌緩沖液將ELISA板的每孔洗滌5次，在第4次洗滌時將ELISA板在洗滌緩沖液中在室溫下培養(yǎng)5分鐘。在第5次洗滌后，通過敲擊將過量的緩沖液敲到吸收毛巾上。然后立刻將200μL的檢測結(jié)合物(抗GLP-1堿磷酸鹽結(jié)合物)加入到每個孔內(nèi)，然后在室溫下培養(yǎng)2小時。然后將檢測結(jié)合物傾淅掉，然后用300μL的洗滌緩沖液將每個孔洗滌3次。通過敲擊將過量流體敲到紙巾上。將200μL的被稀釋底物加入到每個孔內(nèi)并在黑暗中在室溫下培養(yǎng)至少20分鐘。將10mg光敏感底物MUP(甲基傘形酮磷酸鹽(MethylUmbelliferyl Phosphate))加入到Millipore′s GLP-1酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒中并在即將使用前在1mL去離子水中進行水合。在底物稀釋物中制備1∶200的稀釋物(例如100μL水合的底物在20mL底物稀釋物中)。每一次在即將使用前制備新鮮的稀釋物。在20分鐘后，在355nm/460nm讀板。當(dāng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點內(nèi)具有足夠的信噪比(即2pM)以及在讀板器的最大相對熒光裝置(RFU)讀數(shù)內(nèi)有最高標(biāo)準(zhǔn)點(即，100pM)時，不要求額外的培養(yǎng)期。否則的話，需要另外的培養(yǎng)期。
當(dāng)信號充分時，將50μL的終止溶液按照與底物加入順序是相同的順序加入到每個孔內(nèi)，然后在黑暗中在室溫下培養(yǎng)5分鐘以取得磷酸酶活度。然后在熒光讀板器上使用355nm的激發(fā)波長/460nm的發(fā)射波長對ELI SA板進行讀數(shù)。結(jié)果如圖16-19所示。
目前已經(jīng)充分描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可理解，在不影響本發(fā)明或其任何實施方案的范圍的條件下，可以在條件、制劑和其它參數(shù)的較寬的但等價的范圍內(nèi)進行同樣的實施。本文引用的所有的專利和公報以全文并入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.增強胰島素從細胞釋放的方法，包括使所述細胞接觸有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選地被取代。
3.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基。
4.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的5-14元雜芳基。
5.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的C3-10環(huán)烷基或任選被取代的C3-10環(huán)烯基。
6.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的3-10元環(huán)雜烷基或任選被取代的3-10元環(huán)雜烯基。
7.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的C1-6烷基。
8.權(quán)利要求2的方法，其中R2是H。
9.權(quán)利要求2的方法，其中R2是C1-6烷基。
10.權(quán)利要求2的方法，其中R2是C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基。
11.權(quán)利要求2的方法，其中R3是H。
12.權(quán)利要求2的方法，其中R3是C1-6烷基。
13.權(quán)利要求2的方法，其中R3是C6-10芳基。
14.權(quán)利要求2的方法，其中R3是氰基。
15.權(quán)利要求2的方法，其中R4是任選被取代的C1-6烷基。
16.權(quán)利要求2的方法，其中R4是任選被取代的C6-10芳基。
17.權(quán)利要求2的方法，其中R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
18.權(quán)利要求2的方法，其中R4是任選被取代的C3-10環(huán)烷基或任選被取代的C3-10環(huán)烯基。
19.權(quán)利要求2的方法，其中R4是任選被取代的3-10元環(huán)雜烷基或任選被取代的3-10元環(huán)雜烯基。
20.權(quán)利要求2的方法，其中L1不存在。
21.權(quán)利要求2的方法，其中L1是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
22.權(quán)利要求2的方法，其中L2不存在。
23.權(quán)利要求2的方法，其中L2是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
24.權(quán)利要求2的方法，其中R1是未被取代的苯基。
25.權(quán)利要求2的方法，其中R1是苯基或萘基，其各自被1、2或3個獨立地選自以下的取代基所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
26.權(quán)利要求2的方法，其中R1是含氮的雜芳基。
27.權(quán)利要求2的方法，其中R1選自吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯并咪唑基和苯并噻唑基，其各自任選地被取代。
28.權(quán)利要求2的方法，其中R4是未被取代的苯基。
29.權(quán)利要求2的方法，其中R4是苯基或萘基，其各自被1、2或3個獨立地選自以下的取代基所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
30.權(quán)利要求2的方法，其中R4是含氮的雜芳基。
31.權(quán)利要求2的方法，其中R4選自吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯并咪唑基和苯并噻唑基，其各自任選地被取代。
32.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的C6-10芳基。
33.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的C6-10芳基。
34.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
35.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
36.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的C3-10環(huán)烷基。
37.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4和L2一起形成-N＝N-芳基。
38.權(quán)利要求2的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R4是任選被取代的C6-10芳基，諸如苯基和萘基；和L1和L2不存在。
39.權(quán)利要求2的方法，其中R1是C6-10芳基，5-10元雜芳基，C3-10環(huán)烷基，C3-10環(huán)烯基，3-10元環(huán)雜烷基，3-10元環(huán)雜烯基或C1-6烷基，其各自任選被取代；R2是H，C1-6烷基或C6-10芳基(C1-6)烷基；L1不存在，或者是含1-6個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代；和R3，R4和L2與碳原子一起形成選自以下的基團C6-10芳基，5-10元雜芳基，C3-10環(huán)烷基，C3-10環(huán)烯基，3-10元環(huán)雜烷基，3-10元環(huán)雜烯基，其各自任選地被取代。
40.權(quán)利要求2的方法，其中R1是雜芳基；R2是H；R4是雜芳基；L1不存在；和L2是N＝N。
41.權(quán)利要求2的方法，其中R1是二環(huán)烷基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1不存在；和L2不存在。
42.權(quán)利要求2的方法，其中R1是芳基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1是任選被取代的含2-4個碳原子或雜原子的連接基；和L2不存在。
43.權(quán)利要求2的方法，其中R1是環(huán)烯基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1是任選被取代的含2-4個碳原子或雜原子的連接基；和L2不存在。
44.權(quán)利要求2的方法，其中所述式I的化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
45.權(quán)利要求1的方法，其中細胞是非人胰腺細胞。
46.權(quán)利要求45的方法，其中非人胰腺細胞是牛、馬、羊、豬、貓、狗、兔或猴的胰腺細胞。
47.權(quán)利要求1的方法，其中細胞是人胰腺細胞。
48.權(quán)利要求2的方法，其中式I化合物作為藥物組合物被給予。
49.權(quán)利要求2的方法，其中式I化合物作為獸用組合物被給予。
50.權(quán)利要求2的方法，其中式I化合物基于重量百分?jǐn)?shù)以約1％到約10％的濃度被給予。
51.權(quán)利要求2的方法，其中式I化合物以約0.01毫克到約10毫克的量被給予。
52.權(quán)利要求1的方法，其中所述細胞位于體外。
53.在哺乳動物中增強胰島素釋放的方法，包括對需要所述胰島素釋放增強的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
54.權(quán)利要求53根據(jù)方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強胰島素釋放的量被給予。
55.權(quán)利要求54的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
56.權(quán)利要求53的方法，其中所述受試者是人。
57.權(quán)利要求54的方法，其中化合物以約0.01毫克到約100毫克的量被給予。
58.權(quán)利要求54的方法，其中化合物作為藥物產(chǎn)品的組分被給予。
59.權(quán)利要求54的方法，其中化合物以約0.01重量％到50重量％的量存在于藥物產(chǎn)品中。
60.在哺乳動物中治療糖尿病的方法，包括對需要所述胰島素釋放增強的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
61.權(quán)利要求60的方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強胰島素釋放的量被給予。
62.權(quán)利要求61的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(m-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
63.權(quán)利要求60的方法，其中所述受試者是人。
64.權(quán)利要求61的方法，其中化合物以約0.01毫克到約100毫克的量被給予。
65.權(quán)利要求61的方法，其中化合物作為藥物產(chǎn)品的組分被給予。
66.權(quán)利要求61的方法，其中化合物以約0.01重量％到50重量％的量存在于藥物產(chǎn)品中。
67.在哺乳動物中治療胰島素抵抗綜合征的方法，包括對有需要的受試者給予一種或多種式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強胰島素釋放的量被給予。
68.權(quán)利要求67的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
69.權(quán)利要求67的方法，其中所述受試者是人。
70.權(quán)利要求67的方法，其中化合物以約0.01毫克到約100毫克的量被給予。
71.權(quán)利要求67的方法，其中化合物作為藥物產(chǎn)品的組分被給予。
72.權(quán)利要求67的方法，其中化合物以約0.01重量％到50重量％的量存在于藥物產(chǎn)品中。
73.權(quán)利要求67的方法，其中化合物以約1重量％到50重量％的量存在于藥物產(chǎn)品中。
74.在哺乳動物中治療高血糖癥的方法，包括對需要所述胰島素釋放增強的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
75.權(quán)利要求74的方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強胰島素釋放的量被給予。
76.權(quán)利要求75的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
77.權(quán)利要求74的方法，其中所述受試者是人。
78.權(quán)利要求75的方法，其中化合物以約0.01毫克到約195毫克的量被給予。
79.權(quán)利要求75的方法，其中化合物作為藥物產(chǎn)品的組分被給予。
80.權(quán)利要求75的方法，其中化合物以約0.01重量％到50重量％的量存在于藥物產(chǎn)品中。
81.權(quán)利要求75的方法，其中化合物以約1重量％到50重量％的量存在于藥物產(chǎn)品中。
82.在哺乳動物中增強GLP-1釋放的方法，包括對需要所述增強GLP-1釋放的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
83.權(quán)利要求82的方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的單元子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
84.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基。
85.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的5-14元雜芳基。
86.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的C3-10環(huán)烷基或任選被取代的C3-10環(huán)烯基。
87.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的3-10元環(huán)雜烷基或任選被取代的3-10元環(huán)雜烯基。
88.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的C1-6烷基。
89.權(quán)利要求83的方法，其中R2是H。
90.權(quán)利要求83的方法，其中R2是C1-6烷基。
91.權(quán)利要求83的方法，其中R2是C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基。
92.權(quán)利要求83的方法，其中R3是H。
93.權(quán)利要求83的方法，其中R3是C1-6烷基。
94.權(quán)利要求83的方法，其中R3是C6-10芳基。
95.權(quán)利要求83的方法，其中R3是氰基。
96.權(quán)利要求83的方法，其中R4是任選被取代的C1-6烷基。
97.權(quán)利要求83的方法，其中R4是任選被取代的C6-10。
98.權(quán)利要求83的方法，其中R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
99.權(quán)利要求83的方法，其中R4是任選被取代的C3-10環(huán)烷基或任選被取代的C3-10環(huán)烯基。
100.權(quán)利要求83的方法，其中R4是任選被取代的3-10元環(huán)雜烷基或任選被取代的3-10元環(huán)雜烯基。
101.權(quán)利要求83的方法，其中L1不存在。
102.權(quán)利要求83的方法，其中L1是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
103.權(quán)利要求83的方法，其中L2不存在。
104.權(quán)利要求83的方法，其中L2是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代。
105.權(quán)利要求83的方法，其中R1是未被取代的苯基。
106.權(quán)利要求83的方法，其中R1是苯基或萘基，其各自被1、2或3個獨立地選自以下的取代基所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
107.權(quán)利要求83的方法，其中R1是含氮的雜芳基。
108.權(quán)利要求83的方法，其中R1選自吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯并咪唑基和苯并噻唑基，其各自任選地被取代。
109.權(quán)利要求83的方法，其中R4是未被取代的苯基。
110.權(quán)利要求83的方法，其中R4是苯基或萘基，其各自被1、2或3個獨立地選自以下的取代基所取代氨基，羥基，硝基，鹵素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6鹵代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亞烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羥基烷基，C2-6羥基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
111.權(quán)利要求83的方法，其中R4是含氮的雜芳基。
112.權(quán)利要求83的方法，其中R4選自吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮雜吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯并咪唑基和苯并噻唑基，其各自任選地被取代。
113.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的C6-10芳基。
114.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的C6-10芳基。
115.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
116.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的5-10元雜芳基。
117.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的C6-10芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4是任選被取代的C3-10環(huán)烷基。
118.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R2是H或C1-6烷基；R3是H或C1-6烷基；和R4和L2一起形成-N＝N-芳基。
119.權(quán)利要求83的方法，其中R1是任選被取代的5-10元雜芳基；R4是任選被取代的C6-10芳基，諸如苯基和萘基；和L1和L2不存在。
120.權(quán)利要求83的方法，其中R1是C6-10芳基，5-10元雜芳基，C3-10環(huán)烷基，C3-10環(huán)烯基，3-10元環(huán)雜烷基，3-10元環(huán)雜烯基或C1-6烷基，其各自任選被取代；R2是H，C1-6烷基或C6-10芳基(C1-6)烷基；L1不存在，或者是含1-6個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選被取代；和R3，R4和L2與碳原子一起形成選自以下的基團C6-10芳基，5-10元雜芳基，C3-10環(huán)烷基，C3-10環(huán)烯基，3-10元環(huán)雜烷基，3-10元環(huán)雜烯基，其各自任選地被取代。
121.權(quán)利要求83的方法，其中R1是雜芳基；R2是H；R4是雜芳基；L1不存在；和L2是N＝N。
122.權(quán)利要求83的方法，其中R1是二環(huán)烷基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1不存在；和L2不存在。
123.權(quán)利要求83的方法，其中R1是芳基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1是任選被取代的含2-4個碳原子或雜原子的連接基；和L2不存在。
124.權(quán)利要求83的方法，其中R1是環(huán)烯基；R2是H；R3是H；R4是芳基或雜芳基；L1是任選被取代的含2-4個碳原子或雜原子的連接基；和L2不存在。
125.權(quán)利要求83的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
126.權(quán)利要求82的方法，其中所述受試者是人。
127.權(quán)利要求83的方法，其中化合物以約0.01毫克到約100毫克的量被給予。
128.權(quán)利要求83的方法，其中化合物作為藥物產(chǎn)品的組分被給予。
129.權(quán)利要求83的方法，其中化合物以約0.01重量％到50重量％的量存在于藥物產(chǎn)品中。
130.增強GLP-1從細胞釋放的方法，包括使所述細胞接觸有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
131.權(quán)利要求130的方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
132.權(quán)利要求131的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(m-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
133.權(quán)利要求130的方法，其中所述細胞是內(nèi)臟中的非人腸內(nèi)分泌細胞。
134.權(quán)利要求133的方法，其中非人腸內(nèi)分泌細胞是牛、馬、羊、豬、貓、狗、兔或猴的腸內(nèi)分泌細胞。
135.權(quán)利要求130的方法，其中細胞是人腸內(nèi)分泌細胞。
136.權(quán)利要求131的方法，其中式I化合物作為藥物組合物或獸用組合物被給予。
137.權(quán)利要求131的方法，其中式I化合物基于重量百分?jǐn)?shù)以約1％到約10％的濃度被給予。
138.權(quán)利要求131的方法，其中式I化合物以約0.01毫克到約10毫克的量被給予。
139.權(quán)利要求130的方法，其中所述細胞位于體外。
140.在哺乳動物中降低胃液分泌和排空的方法，包括對需要所述胃功能降低的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
141.權(quán)利要求140根據(jù)方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
142.權(quán)利要求141的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
143.在哺乳動物中抑制食物攝取的方法，包括對需要所述食物攝取抑制的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
144.權(quán)利要求143根據(jù)方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
145.權(quán)利要求144的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
146.在哺乳動物中降低胰高血糖素分泌的方法，包括對需要所述胰高血糖素分泌降低的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
147.權(quán)利要求146根據(jù)方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
148.權(quán)利要求147的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
149.在哺乳動物中增強胰島素敏感性的方法，包括對需要胰島素敏感性增強的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
150.權(quán)利要求149根據(jù)方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
151.權(quán)利要求150的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
152.在哺乳動物中增加胰島素基因表達的方法，包括對需要所述胰島素基因表達增加的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
153.權(quán)利要求152根據(jù)方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
154.權(quán)利要求153的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
155.在受試者中治療或預(yù)防肥胖癥的方法，包括對需要所述肥胖癥治療的受試者給予有效量的一種或多種TRPM5抑制劑。
156.權(quán)利要求155方法，其中所述TRPM5抑制劑是式I化合物
或其生理學(xué)可接受的鹽，其中
R1是C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基和C1-6烷基，其各自任選被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基或3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代，或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；
L2不存在，或者是含1-10個碳原子和/或雜原子的連接基并且其任選地被取代；或
R3，R4和L2，與L2和R3所連接的碳原子一起，形成選自以下的基團C6-14芳基，5-14元雜芳基，C3-14環(huán)烷基，C3-14環(huán)烯基，3-14元環(huán)雜烷基，3-14元環(huán)雜烯基，其各自任選被取代；
其中所述化合物以足夠增強GLP-1釋放的量被給予。
157.權(quán)利要求156的方法，其中式I化合物選自
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基-丙基)二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷-甲酰肼；
(E)-3-環(huán)己烯基-4-羥基-N′-(4-甲氧基苯亞甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-4-羥基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亞甲基)-2-(間-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亞甲基)-2-(3-溴芐基硫基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-異丙基苯亞甲基)二環(huán)并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亞乙基)二氫吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羥基苯亞甲基)-2-苯基環(huán)丙烷甲酰肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氫吲哚-3-基亞基)肼基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亞甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-芐基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亞甲基)三環(huán)并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羥基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2-(1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基)甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-嗎啉代-3-硝基-苯亞甲基)乙酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎寧環(huán)；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨基)苯酚；
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼；和
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亞甲基)酰肼。
全文摘要
本發(fā)明涉及增強胰島素釋放、GLP-1釋放和胰島素敏感性的方法，增加胰島素基因表達的方法，降低胃液分泌和排空以及胰高血糖素分泌的方法，和抑制食物攝取的方法，以及治療糖尿病、胰島素抵抗綜合征、高血糖癥和肥胖癥的方法，包括對受試者給予有效量的TRPM5抑制劑。
文檔編號A61K31/655GK101626770SQ200880007617
公開日2010年1月13日 申請日期2008年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月2日
發(fā)明者S·P·李, 周培宏, M·N·T·布博, R·瑟尼, R·布爾揚特, F·R·薩勒米, G·摩根 申請人:紅點生物公司