專(zhuān)利名稱(chēng)：核黃素在治療高血壓中的用途的制作方法
核黃素在治療高血壓中的用途本發(fā)明涉及核黃素在治療基因型特異的人群的高血壓中的用途。
高血壓(hypertension,也通常稱(chēng)為high blood pressure),是一種其中血壓升高(通常為慢性升高)的醫(yī)學(xué)癥狀。任何病原的高血壓是心血管疾病(CVD)(包括心臟病和中風(fēng))的主要風(fēng)險(xiǎn)因素之一。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在對(duì)于酶5,10-亞曱基四氫葉酸還原酶(MTHFR)編碼的基因中常見(jiàn)的C677T多態(tài)性是純合型(homozygous)的個(gè)體，CVD的風(fēng)險(xiǎn)增高。MTHFR是形成5-曱基四氫葉酸所需要的，而后者又參與將高半胱氨酸轉(zhuǎn)化為蛋氨酸。認(rèn)為MTHFR C677T多態(tài)性是純合型的個(gè)體(TT基因型)患有心臟病和中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)比野生型基因的個(gè)體(CC基因型)的風(fēng)險(xiǎn)明顯更高。對(duì)于該多態(tài)性是雜合型(heterozygous)的人們(CT基因型)也具有相對(duì)較高的心臟病和中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)。許多抗高血壓藥(如ACE抑制劑、(3阻斷劑和利尿劑)可用于降低那些臨床認(rèn)為患有高血壓的人們的血壓。然而，這些藥物可產(chǎn)生不希望的副作用，且一些受試者盡管?chē)L試1種以上的抗高血壓藥但仍保持高血壓。
現(xiàn)在出人意料地發(fā)現(xiàn)核黃素(維生素B2)具有顯著的收縮壓和舒張壓降低作用，尤其是對(duì)于MTHFR C677T多態(tài)性是純合型的CVD患者。
根據(jù)本發(fā)明的第 一 方方面，提供了核黃素在制備用于治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是純合型或雜合型的受試者的血壓升高(elevated bloodpressure)的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了藥物產(chǎn)品，其用于治療或預(yù)防MTHFRC677T多態(tài)性是純合型或雜合型的受試者的血壓升高，其包含藥學(xué)有效量的抗高血壓藥和核黃素，二者同時(shí)(simultaneous)、分開(kāi)(separate)或依次(sequential)給藥。
適合的抗高血壓藥包括ACE抑制劑，如喹那普利(quinapril)、卡托普利(captopril)、賴(lài)i若普利(lisinopril)、貝那普利(benazepril)、；咅口朵普利(perindopril)、馬來(lái)酸依那普利(enalapril maleate)、群多普利(trandolapril)、雷米普利(ramipril)和西拉普利(cilazapril);卩阻斷劑，如阿替洛爾(atenolol),特他洛爾(tertatolol)、酒石酸美托洛爾(metoprolol tartrate)、富馬酸比索洛爾(bisoprolol fumarate)、奈比洛爾(nebbibolol)、塞利洛爾(celiprolol)和卩引哚洛爾(pindolol); Ca—拮抗劑，如硝苯地平(nifedipine)、地爾硫卓(diltiazem)、氨氯地平(amlodipine)、維拉帕米(verapamil)和非洛地平(felodipine); a阻斷劑，如曱基多巴(methyldopa)、多沙哇。秦(doxazosin)、可樂(lè)定(clonidine)和派峻。秦(prazosin);血管緊張素II拮抗劑，如厄貝沙坦(irbesartan)、坎地沙坦酯(candesartan cilextil)、奧美沙坦酯(olmesartan medoxomil)、 纈沙坦(valsartan)、 氯沙坦(losartan)、 替米沙坦(telmisartan)和曱磺酸依普羅沙坦(eprosartan mesylate); a/(3阻斷劑，如卡維地洛(carbedilol)和拉貝洛爾(labetalol); 和利尿劑，如千氟噻。秦(bendroflumethiazide)、 p比p各J也尼(piretanide)、氯p塞酮(chlorthalidone)和氫氯p塞^(hydrochlorothiazide) (HCTZ)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)包括下述內(nèi)容
在不使用任何其它抗高血壓藥的情況下，核黃素可用于降低血壓。*當(dāng)其它抗高血壓藥和核黃素同時(shí)、分開(kāi)或依次給藥時(shí)，實(shí)現(xiàn)所需效果的其它抗高血壓藥的量可有利地降低，即需要更少量的藥物用于有效治療或預(yù)防受試者的血壓升高，由此降低了常規(guī)抗高血壓藥的任何不希望的副作用。
根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供了一種治療或預(yù)防MTHFRC677T多態(tài)性是純合型或雜合型的受試者的血壓升高的方法，該方法包括向受試者給藥核黃素。
本發(fā)明的藥物或產(chǎn)品優(yōu)選為適于口服或胃腸外給藥的劑型。適合口服的劑型包括片劑、膠嚢(包括緩釋膠囊)、丸劑、粉末劑、顆粒劑等。胃腸外給藥包括，例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、膀胱內(nèi)(如，到達(dá)膀胱)、皮內(nèi)、局部或皮下給藥。適合的胃腸外劑型包括無(wú)菌注射水溶液或分散劑，和用于制備無(wú)菌注射溶液或分散劑的無(wú)菌粉末。優(yōu)選的給藥途徑為口服。
核黃素可以與對(duì)于口服或胃腸外給藥是藥學(xué)相容的或可接受的載體一起給藥，這根據(jù)所使用的具體給藥類(lèi)型進(jìn)行選擇。對(duì)于口服給藥，核黃素可與 一種或多種對(duì)于制備適合口服劑型為固體非活性的成分一起給藥。例如，核黃素可與至少一種賦形劑一起給藥，所述賦形劑如填充劑、粘合劑、保濕劑、崩解劑、溶解遲緩劑、吸收促進(jìn)劑、潤(rùn)濕劑、吸收劑或潤(rùn)滑劑。對(duì)于胃腸外給藥，核黃素可與適當(dāng)?shù)妮d體或稀釋劑一起給藥，所述載體或稀釋劑如水、乙醇、鹽水溶液、右旋糖(葡萄糖)水溶液和相關(guān)的糖溶液、甘油或二醇如丙二醇或聚乙二醇。
在所有情況中，核黃素的劑量在飲食參考水平直到且包括認(rèn)為是安全的最大水平的范圍內(nèi)。雖然，與許多其它營(yíng)養(yǎng)素不同，對(duì)于核黃素沒(méi)有建立法定的上限耐受水平，但是通常認(rèn)為即使非常高的劑量也是安全的，證據(jù)表明
高達(dá)500mg/天的水平是可接受的，沒(méi)有副作用。與之相比，對(duì)于成人推薦的核黃素的飲食水平的范圍為1.1-1.8mg/天。藥物或產(chǎn)品最優(yōu)選地配制成向受試者給予大約1.6 mg/天的核黃素。然而，藥物或產(chǎn)品也可以配制成向受試者給予多于或少于1.6 mg/天的核黃素。例如，適合的劑量可以為約0.5 mg/天至50 mg/天，優(yōu)選為約0.75 mg/天至20 mg/天，更優(yōu)選為約1 mg/天至10mg/天，更優(yōu)選為約1.2 mg/天至5 mg/天，甚至更優(yōu)選為約1.4 mg/天至約5 mg/天。
本發(fā)明也用于個(gè)體化營(yíng)養(yǎng)領(lǐng)域。人們?cè)絹?lái)越關(guān)注基因-營(yíng)養(yǎng)素的相互作用，且更關(guān)注基因因素，近幾年來(lái)出現(xiàn)了個(gè)體化營(yíng)養(yǎng)市場(chǎng)。這種基于飲食需要的方法應(yīng)該不僅考慮通常的因素，如年齡和性別，還應(yīng)考慮對(duì)于受試者特異性的遺傳因素。例如，受試者可檢測(cè)它們的MTHFR基因型，然后進(jìn)一步選擇低劑量的核黃素，特別是如果他們被發(fā)現(xiàn)具有TT或CT基因型。
本發(fā)明也應(yīng)用于臨床藥物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，如檢測(cè)新的抗高血壓藥物。為了成功地進(jìn)行和正確地解釋這些實(shí)驗(yàn)，將MTHFR C677T多態(tài)性是TT基因型的那些與低劑量核黃素的組合分組且隨機(jī)對(duì)待不同治療組是重要的。
實(shí)施例1: CVD患者
才才并十禾口方法招募受試者
由 University of Ulster 和 Altnagelvin Hospital Trust, Londonderry,Northern Ireland的研究倫理委員會(huì)都批準(zhǔn)了本發(fā)明的倫理標(biāo)準(zhǔn)。從Altnagelvin醫(yī)院心臟科招募早發(fā)的CVD患者，發(fā)病時(shí)男性年齡《55歲，且女性年齡《65歲。通過(guò)ECG變化診斷，表明患者先前患有心肌梗塞(MI)或心絞痛?；诳谇皇米訕颖?buccal swab sample)，根據(jù)MTHFR基因型篩選可能的參與者(11 = 404)。鑒定TT基因型的那些參與者(n二54);他們?cè)谀挲g和性別上與相似數(shù)量的CC或CT基因型的患者匹配，得到總共197名患者，它們被邀請(qǐng)參與到當(dāng)前的干預(yù)性研究中(參見(jiàn)圖1)。對(duì)于所有受試者的淘汰標(biāo)準(zhǔn)是肝或腎的疾病史，B-維生素補(bǔ)充劑使用者，服用已知干擾葉酸代謝的
藥物的人們，取血前至少在MI之后3個(gè)月。所有志愿者提供書(shū)面同意，且完成健康和醫(yī)藥/生活方式問(wèn)巻調(diào)查，問(wèn)巻中包括涉及CVD的家族史和吸煙習(xí)慣的問(wèn)題。
研究設(shè)計(jì)
該研究為16-周安慰劑對(duì)照干預(yù)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)在每個(gè)基因型組中患者最初篩選的血漿高半胱氨酸，將患者分組，且隨后使每組隨機(jī)接受核黃素(1.6mg/天)或安慰劑，如圖l所示。為了產(chǎn)生最大化的順應(yīng)性，以7-天藥丸盒，每4周向患者提供核黃素，并要回任何未使用的藥丸，做記錄。在Altnagelvin醫(yī)院、他們的工作間或家中，收集篩選時(shí)和干預(yù)后的未禁食的血液樣品。
血壓和人體測(cè)量的檢測(cè)
血壓檢測(cè)使用Omcron 705CP電子血壓監(jiān)測(cè)儀(Medisave, Dorset, UK)以2次檢測(cè)(間隔15分鐘)的平均值記錄。體重(kg)和身高(m)用于計(jì)算BMI (體重(kg)/身高2(m))。也測(cè)量腰圍(cm)。所有檢測(cè)使用Seca批準(zhǔn)的儀器(BroschDirect, Ltd， Peterborough, UK)進(jìn)4亍。
收集樣品
從每個(gè)患者收集1份30ml的血樣，1個(gè)用于血漿和洗過(guò)的紅細(xì)胞的9mlEDTA管，1個(gè)用于制備血紅細(xì)胞溶胞產(chǎn)物和檢測(cè)血紅蛋白(HB)以及血細(xì)胞壓積(PCV)的4mlEDTA管；1個(gè)用于血清提取的8ml血清分離管，1個(gè)用于脂質(zhì)概況分析的5ml血清分離管和1個(gè)用于凝結(jié)篩選(coagulation screening)的4ml檸檬酸鈉管。將9mlEDTA迅速用錫紙包起來(lái)并置于冰上。在取樣的2小時(shí)內(nèi)，將樣品于3000rpm離心15分鐘。移出血漿并儲(chǔ)存于-80。C以用于血漿高半胱氨酸和PLP分析。移出棕黃層(buffy layer)以用于確定MTHFR基因型并儲(chǔ)存于-20。C。剩余血紅細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌3次，每次洗滌后棄去上清液和剩余的棕黃層。移出洗過(guò)的紅細(xì)胞并儲(chǔ)存于-80。C以用于EGRac分析(核黃素狀況的功能指示劑)。移出血清并儲(chǔ)存于-80。C以用于分析血清葉酸。生化分析
使用Abbott Imx分析儀通過(guò)免疫測(cè)定檢測(cè)血漿高半胱氨酸(Leino A.， 1999, "Fully automated measurement of total homocysteine in plasma and serum on the Abbott IMx analyzer." C7/". CTzew, 45， 569-71)。使用冷藏保存的，微量 滴定板方法，通過(guò)微生物學(xué)測(cè)試檢測(cè)血清葉酸和血紅細(xì)胞葉酸濃度(Molloy 等人,1997， "Microbiological assay for serum， plasma, and red cell folate using cryopreserved, microliter plate method." A/e^zoofe五"zymo/, 281 ， 43-53)。 通過(guò)具 有熒光檢測(cè)的反相高壓液相色譜(HPLC)測(cè)定血漿PLP (Bates等人，1999, "Plasma pyridoxal phosphate and pyridoxic acid and their relationship to plasma homocysteine in a representative sample of British men and women aged 65 years and over." Jow72a/ o/iVw/nWo", 1， 191-201)。 MTHFR C677T基因
型的鑒定使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增然后HinFl進(jìn)行(Frosst等人，1995， "A candidate genetic risk factor for vascular disease: A common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase." Gew"c， 10， 111-113)。核黃素狀況根 據(jù)EGRac測(cè)定，所述EGRac為一種功能測(cè)試，其在添加和不添加FAD下檢 測(cè)谷胱甘肽還原酶的活性。然后以FAD-刺激與未刺激的酶活性的比計(jì)算 EGRac (Powers等人，1983， "The relative effectiveness of iron and iron with riboflavin in correcting a microcytic anaemia in men and children in rural Gambia." i/wm C//" A^r, 37, 413-425),且通常認(rèn)為值^1.3反應(yīng)欠佳的核 黃素狀況。凝結(jié)篩選由ACI Instrumentation Laboratories檢測(cè)。HB和PCV使 用Sysmex XE-2100 (Sysmex, UK Ltd. Milton Keynes UK)分析儀檢測(cè)，且脂質(zhì) 概況使用Abbott Architect CI 8200分析儀(Abbott Laboratories, USA)檢測(cè)。對(duì) 于所有測(cè)試，樣品進(jìn)行雙盲分析， 一式兩份，且在收集的l年內(nèi)進(jìn)行。通過(guò) 重復(fù)分析各批儲(chǔ)存的收集的洗過(guò)的血紅細(xì)胞(對(duì)于EGRac),對(duì)于高半胱氨酸 和PLP的血漿和對(duì)于葉酸的血清(覆蓋大范圍值)提供品質(zhì)控制。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
所有統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用社會(huì)科學(xué)使用的SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行(version 11.0, SPSS UK Ltd., Chersey, United Kingdom)。出于標(biāo)準(zhǔn)化的目的，統(tǒng)計(jì)分析前視 需要將變量進(jìn)行l(wèi)og-轉(zhuǎn)化。使用具有Tukey，s post hoc測(cè)試的單因素ANOVA檢測(cè)基因型組之間基線(xiàn)特征的差異。使用f分析評(píng)估分類(lèi)數(shù)據(jù)。相關(guān)性分析
使用雙變量Pearson相關(guān)系數(shù)進(jìn)行。每個(gè)基因型組中核黃素干預(yù)的效果使用 配對(duì)t-檢驗(yàn)檢測(cè)。尸值< 0.05認(rèn)為具有顯著性差異。
結(jié)果


圖l表示研究設(shè)計(jì)的流程圖。
圖2(i)表示在健康對(duì)照中MTHFR基因型組的高半胱氨酸濃度(iamol/l); 圖2(ii)表示在健康對(duì)照中MTHFR基因型組的收縮壓(mmHg);且圖2(iii)表 示在健康對(duì)照中MTHFR基因型組的舒張壓(mmHg)。圖2(i)、 2(ii)和2(iii) 中的值為平均值(標(biāo)準(zhǔn)誤差柱)。不同的字母表示MTHFR基因型組之間的統(tǒng) 計(jì)學(xué)明顯差異，使用Tukey post-hoc測(cè)試的ANOVA, P〈0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)明 顯差異。在圖2(i)-2(iii)中，字母"a"表示值與其它"a"值沒(méi)有明顯差異；且字 母"b"表示值與其它"b"值沒(méi)有明顯差異，但與"a，，表示的值具有差異。
圖3(i)表示在早發(fā)CVD患者中MTHFR基因型組的高半胱氨酸濃度 (pmol/l);圖3(ii)表示在早發(fā)CVD患者中MTHFR基因型組的收縮壓(mmHg); 且圖3(iii)表示在早發(fā)CVD患者中MTHFR基因型組的舒張壓(mmHg)。圖 3(i)、 3(ii)和3(iii)中的值為平均值(標(biāo)準(zhǔn)誤差柱)。不同的字母表示MTHFR基 因型組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯差異，使用Tukey post-hoc測(cè)試的ANOVA， P < 0.05 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯差異。在圖3(i)-3(iii)中，字母"a"表示值與其它"a"值沒(méi)有明 顯差異；且字母"b"表示值與其它"b"值沒(méi)有明顯差異，但與"a"表示的值具有 差異。字母"ab"表示值與"a"或"b"表示的值沒(méi)有明顯差異。
健康個(gè)體中的基線(xiàn)數(shù)據(jù)
參見(jiàn)圖2,關(guān)于血高半胱氨酸水平，與CT或CC基因型相比，對(duì)于 MTHFRC677T多態(tài)性為純合型的健康個(gè)體(即，TT基因型)的表型觀察到血 高半胱氨酸濃度升高。對(duì)于相應(yīng)的血壓水平，發(fā)現(xiàn)與CT或CC基因型中的 值相比，TT基因型的健康個(gè)體的收縮壓或舒張壓沒(méi)有升高，如圖2所示。
早發(fā)CVD患者的基線(xiàn)數(shù)據(jù)
早發(fā)CVD患者通常定義為對(duì)于男性55歲以前，對(duì)于女性65歲以前發(fā)展成為CVD的受試者。參見(jiàn)圖3,與CC和CT患者相比，具有早發(fā)CVD 且具有TT基因型的患者的血高半胱氨酸濃度升高。也關(guān)注到，與CC患者 相比，發(fā)現(xiàn)TT患者的收縮壓和舒張壓明顯升高，如圖3所示。與CC和TT 患者相比，發(fā)現(xiàn)CT個(gè)體具有中等水平的舒張壓(如圖3所示)。由于健康TT 受試者相對(duì)于其它基因型組血壓沒(méi)有顯示出升高，因此上述結(jié)果是意想不 到。所有患者在取樣時(shí)正在服用一種或多種抗高血壓藥，如下表l所示，但 從圖3中清楚地看出藥物在TT基因型組中相對(duì)無(wú)效。
表1
在取樣時(shí)，患者(『161)服用的抗高血壓藥
抗高血壓藥%患者
卩阻斷劑38
Ace抑制劑18
4丐通道阻斷劑6
利尿劑3
Ace抑制劑+|3阻斷劑18
Ace抑制劑+利尿劑4
Ace抑制劑+鈣通道阻斷劑1
p阻斷劑+ 4丐通道阻斷劑2
卩阻斷劑+利尿劑6
4丐通道阻斷劑+利尿劑0.6
Ace抑制劑+鈣通道阻斷劑+利尿劑0.6
(3阻斷劑+釣通道阻斷劑+利尿劑0.6
根據(jù)MTHFR基因型(TT、 CT或CC)分類(lèi)的早發(fā)CVD患者的基線(xiàn)特征 示于下表2中。參見(jiàn)表2，與CC患者相比，觀察到TT患者的收縮壓和舒 張壓顯著地升高。發(fā)現(xiàn)CT患者具有中等值的舒張壓。也關(guān)注到，TT患者的 血壓升高水平強(qiáng)烈地受核黃素狀況的影響；出人意料地發(fā)現(xiàn)TT基因型和低 核黃素狀況組合的患者的血壓明顯升高。表2'.通過(guò)MTHFR677C —T基因型分組的早發(fā)心血管疾病患者的基線(xiàn)特征
所有CCCTTT.
大體特征(n=197)(n = 67)(ti-76)(n-54)
現(xiàn)在年齡(y)53.2 (5.8)53.4(6.1)52,6 (5.0)54.0 (6.4)
發(fā)病年齡(y)46.9(6.1)47.1 (5.6)46.9 (5.4)47.1(7.5)
男性(％)75.178.169.778,2
CVD家3矣史(％)68.068.765.870.4
早發(fā)CVD家族史(°/。)41.640.350.031.5
現(xiàn)在吸煙者(％)32.031.327.638.9
體重指數(shù)(kg/m2)29.1 (4.6)29.3 (4.8)28.7 (4.5)29.3 (4.5)
腰圍(cm)95.1 (12.1)96.3(11.9)94.2 (11.4)95.0(13.4)
凝血時(shí)間(秒)13.9 (3.1)13,7 (2.8)14.1 (3.4)13.6(2.3)
纖維蛋白原濃度(g/1) 總月旦固醇(mmo1/1)3.93 (0.92)3.93 (0.84)3.97 (1.05)3.88 (0.83)
4.5 (0.9)4.4(0.81)4.5 (0.8)4.5 (1.0)
B-維生素狀況10.5 (3.9)'b
血漿高半胱氨酸(HmolA)10.9 (5.3)9.8(3.3)'12.8 (8.0)k
EGRac1.38 (0.20)U7(0.17)1.39 (0.22)1.37 (0.19)
紅細(xì)胞葉酸(nmo1/1)959(455)1030(518)'1011(400)*796(408)b
磷酸吡。多醛(nmo1/1) (B-6)61.0(37.0)68.0(35.0),63.2(40.4)"49.4(32.0)h
血壓
收縮壓(mmHg) 通過(guò)下列核黃素狀況:
低核黃素狀況
高核黃素狀況
舒張壓(mmHg)
通過(guò)下列核黃素狀況: 低核黃素狀況 高核黃素狀況
137.1 (20.5) 132.5 (18.5)
83.0 (12.2)
84.1 (12.8) 81.7(11.4)
131.1 (18.0)'
131.2(20.4)， 131.0 (14.8)
肌3 (12.5)'
肌8 (13.5) 79.6(11.2)
133.0(19.7)，142.8 (19.5)b
135.8(19.0)' 129.6 (20.4)
84.6(11.8) 81.9(11.1)
147.4 (19.8)1" 138.6(19.2)
86.0(12.3)b
88.1 (12.7) 84.1 (12.2)
P
0.382 0.891 0.303 0.763 0.127
0.002
0.005 0.172
0.038
0.076 0.38
值為平均值(SD)。使用具有tukey post hoc測(cè)試的單因素ANOVA比較各基因型組之間的值。
縮寫(xiě)MTHF艮亞曱基四氫葉酸還原酶；紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活化因子(核黃素狀況，較高的FGRac值表示
較低的維生素狀況)；"較高"和"較低"的核黃素狀況使用每個(gè)基因型組中的中間EGRac值定點(diǎn)(cut-off)測(cè)定。早發(fā)CVD患者的干預(yù)數(shù)據(jù)
參見(jiàn)下表3，在181名早發(fā)CVD患者中的安慰劑對(duì)照干預(yù)研究中，給 藥低劑量的核黃素16周后，TT基因型的患者的收縮壓和舒張壓明顯降低。 血壓響應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和臨床意義。對(duì)于核黃素響應(yīng)觀察到的血壓降低 (收縮壓降低了 11個(gè)單位且舒張壓降低了 8個(gè)單位)可以從薈萃分析 (meta-analyses)評(píng)估，心臟病風(fēng)險(xiǎn)降低了 29%,且中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)降低了 46%。結(jié) 果表明核黃素實(shí)現(xiàn)了明顯且臨床上重要的血壓降低，尤其是在TT基因型患 者中。參見(jiàn)表3，在給藥核黃素的CC患者中沒(méi)有觀察到血壓的顯著降低(收 縮壓和舒張壓均未降低)。表3:早發(fā)CVD患者中對(duì)于核黃素干預(yù)16周的響應(yīng)
MTHFR基因型
cc安慰劑 cc核黃素
Cn=32)_(n=32)
之前之后i>之前之后J°
高半胱氨酸(pmo1/1)9.5(2.8)9.3(2.9)0.47410.1 (3.9)9.8(3.6)0.271
EGRac1.40(0.19)1.42(0.20)0.5201.34(0.16)1.24(0.07)O.001
血清葉酸(Hg/1)12.1(8.5)14單6)0.05210.5(6.5)12.0(7.5)0.094
紅細(xì)胞葉酸(nmoW)1063(589)1139(561)0.2451021(557)1075(526)0.427
收縮壓CmmHg;)126.6(20.4)129.0(22.1)0.421134,3(14.9)133,4(15.3)0.733
舒張壓(mmHg)79.3(14.9)80.9(15.5)0.54680.1(8.9)80.4(12.0)0.881
CT安慰劑CT核黃素
(n=33)(n=35)
之前之后i 之前之后戶(hù)
高半胱氨酸(timo1/1)U .2(4.1)10.8(4.6)0.32710.5(3,8)10.6(6.3)0.881
EGRac1.律22)1.44(0.29)0.2091.38(0.24)1.25(0.13)<0.00i
血清葉酸Og/1)7.83(4.34)8.12(6.44)0.74410.41(6.61)11.80(11.01)0.342
紅細(xì)胞葉酸(nmo1/1)991(388)991(434)0.997廳(400)1022(460)0.759
收縮壓(mmHg)133.6(21.5)129,9(21.5)0.241136.2(16.9)135.4(15.4)0.708
舒張壓(mmHg)82.0(12.1)81.9(14.2)0.96286.0(10.8)84.2(9.2)0.336
TT安慰劑TT核黃素
(n-24)(n=25)
之前之后i>之前之后i
高半胱氨酸(Hmo1/1)11.8(6.7)11.8(7.8)0.91511.3(4.4)10.0(3.1)0.014
EGRac1.32(0.12)1.34(0.11)0.2981.41(0.20)1.27(0.09)<0加1
血清葉酸(Hg/1)7.7(6.6)8.9(7.5)0.1578.1(4.8)9.6(8.1)0.244
紅細(xì)胞葉酸(nmo1/1)808(488)卯3(5S0)(U64845(303)889(306)0.305
收縮壓(mraHg;)143.8(18.1)141.6(22.5)0.566142.8(22.1)131.6(20.9)0.005
舒張壓(mmHg)84.5(10.7)85.4(12.7)0.73988.1(14.2)80.2(14.2)0.002
值為平均值(SD)。各治療組中干預(yù)前和后的值使用配對(duì)t-檢驗(yàn)比較。
縮寫(xiě)MTHF民亞曱基四氫葉酸還原酶；EGRac,紅細(xì)胞谷胱甘肽還原酶活化因子(核黃素狀況，較高的值表示較低狀況)實(shí)施例2:健康對(duì)照
根據(jù)MTHFR C677T基因型，研究健康個(gè)體中核黃素和血壓之間的關(guān)系。 根據(jù)上述實(shí)施例1中所述的方法進(jìn)行檢測(cè)并記錄。所得結(jié)果，即對(duì)于MTHFR 基因型預(yù)篩和年齡匹配的健康受試者的基線(xiàn)特征(11=124)，如表4中所示。
表4
C677T基因型
ccCTTT
大體特征(n =46 )(n=34)(n = 44)尸
年齡(y)51.4 (4.0)51.4 (3.0)50.8 (5.1)0.718
男性(％)69.685.3750.264
BMI (kg/m2)28.1 (4.8)28.0 (4.2)28.6 (4.6)0.791
腰圍(cm)90.4(11.9)90.6(12.3)93.6(13.5)0,434
收縮BP (mmHg)132.9(16.5)134.8(15.8)137.4(19.8)0.473
舒張BP (mmHg)84.1 (13.2)86.4 (8.7)88.1 (13.9)0.315
生化檢測(cè)
血漿高半胱氨酸Omo1/1)9.3 (1.9)a8.9 (2.1)a14.1 (8.0)b<0.001
核黃素狀況(EGRac)1.34 (0.17)1.37(0.15)1.38 (0.16)0.492
紅細(xì)胞葉酸(nmo1/1)874 (357)955 (433)748(412)0.071
維生素B6狀況(PLP; nmo1/1)79.1 (47.4)79.7 (38.7)68.3 (35.5)0,370
值為平均值(SD)。使用ANOVA比較基因型組之間的值；總P值< 0.05表明在3個(gè)基因型組之間具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯的差異。字母表示存在差異不同的字母(a,b)表示在任何2個(gè)基因型之間具有顯著性差 異，相反相同的字母表示任何2個(gè)基因型之間的值沒(méi)有顯著性的差異(Tukeyposthoc測(cè)試)。因此，字 母"a"表示值與其它"a"值沒(méi)有顯著性差異；且字母"b"表示值與其它"b"值之間沒(méi)有顯著性差異，但與 "a"表示的值之間有顯著性差異。
如實(shí)施例2中所得的結(jié)果所示(表4),與CC或CT基因型組相比，TT 基因型個(gè)體沒(méi)有表現(xiàn)出明顯更高的收縮壓或舒張壓。然而，雖然它們確實(shí)證 明對(duì)于該TT基因型的典型表型具有明顯的升高的血漿高半胱氨酸和趨于降低的葉酸狀況，如表4所示，但是葉酸狀況的差異沒(méi)有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的程
度(因?yàn)镻值沒(méi)有〈0.05)。
健康個(gè)體中的干預(yù)數(shù)據(jù)
在81個(gè)健康個(gè)體中進(jìn)行安慰劑對(duì)照干預(yù)研究。研究健康個(gè)體中MTHFR 基因型中血壓對(duì)于核黃素干預(yù)(1.6mg/天，持續(xù)16周)的響應(yīng)，且結(jié)果示于表 5中。
參見(jiàn)P值，表5的結(jié)果表明核黃素在TT基因型健康組中沒(méi)有明顯降低 收縮壓或舒張壓。因此，上述實(shí)施例1中討論的具有TT基因型的CVD患 者中核黃素降低收縮壓和舒張壓是出人意料的，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床意義。
參見(jiàn)表5中所示的P值，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明基因型中對(duì)于核黃素或安慰劑 的響應(yīng)，血壓沒(méi)有明顯升高或降低，有l(wèi)個(gè)例外，即CC組中核黃素治療升 高了舒張壓。同樣，這是出人意料的，該結(jié)果可能是因?yàn)榕既换蛳鄬?duì)小的樣 本量。即使考慮在CC組中對(duì)于核黃素的該響應(yīng)，注意到發(fā)現(xiàn)核黃素升高了 健康CC個(gè)體的舒張壓，因此實(shí)施例1中所討論的核黃素降低具有TT基因 型的CVD患者的收縮壓和舒張壓更是出人意料的。表5健康受試者M(jìn)THFR基因型中血壓對(duì)于核黃素干預(yù)(1.6mg/天，16周)的響應(yīng)
MTHFR T基國(guó)型
CC —2S》CT —30)TT《薩3 )
之前之后P-值之前之后 P-值之前之后H盧
收縮壓(ra鵬Hg) 安慰劑 中值129.0(120,3,141.0)0.663147 0(136.5， 151.5)142,0(132.1， 156J)0鄰1146舉5,5,157,8)150.0(1".6.157.8)冊(cè)5
核黃素治療中值137.0(121.9, WM)143.5(129.8,156.2)0.077150.0(135-5， 15")150.0037.2， 153.4)139.5(129.51,145.0f!33J, 151,1》0,970
舒張壓(加mH^ 安慰劑 中值87.0(83,7,闊0.97090,0(82,8,94,1)86卿A 95.5)O.柳
核黃素治療中值80.5《73.7,級(jí)3)86.5(78.7, 91.9)0鵬87.0(82.7,94.2)狄附3.3' 94.7)0.76788.5(81,1,91.6)S8.5歸,95.1》
值為中值(95。/。置信區(qū)間)
干預(yù)之前和之后的血壓使用配對(duì)t-檢驗(yàn)比較。P值〈0.05表明干預(yù)前后具有統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯的差異。
權(quán)利要求
1.核黃素在制備用于治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是純合型的受試者的血壓升高的藥物中的用途。
2. 核黃素在制備用于治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是雜合型的受試者的血壓升高的藥物中的用途。
3. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的核黃素的用途，其中所述藥物為適于口服或胃腸外給藥的劑型。
4. 藥物產(chǎn)品，其用于治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是純合型的受試者的血壓升高，其包含藥學(xué)有效量的抗高血壓藥和核黃素，二者同時(shí)、分開(kāi)或依次纟合藥。
5. 藥物產(chǎn)品，其用于治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是雜合型的受試者的血壓升高，其包含核黃素和藥學(xué)有效量的抗高血壓藥，二者同時(shí)、分開(kāi)或依次纟會(huì)藥。
6. 權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的藥物產(chǎn)品，其中所述抗高血壓藥選擇ACE抑制劑、卩阻斷劑、〇3++拮抗劑、a阻斷劑、血管緊張素II拮抗劑、a/p阻斷劑和利尿劑。
7. 權(quán)利要求6的藥物產(chǎn)品，其中所述ACE抑制劑選自喹那普利、卡托普利、賴(lài)諾普利、貝那普利、培哚普利、馬來(lái)酸依那普利、群多普利、雷米普利和西拉普利；所述P阻斷劑選自阿替洛爾、特他洛爾、酒石酸美托洛爾、富馬酸比索洛爾、奈比洛爾、塞利洛爾和口引哚洛爾；所述€3++拮抗劑選自硝苯地平、地爾硫卓、氨氯地平、維拉帕米和非洛地平；所述a阻斷劑選自曱基多巴、多沙唑溱、可樂(lè)定和哌唑溱；所述血管緊張素II拮抗劑選自厄貝沙坦、坎地沙坦酯、奧美沙坦酯、纈沙坦、氯沙坦、替米沙坦和曱磺酸依普羅沙坦；所述a/p阻斷劑選自卡維地洛和拉貝洛爾；且所述利尿劑選自千氟p塞,、吡咯他尼、氯噻酮和氫氯噻溱(HCTZ)。
8. 權(quán)利要求4-7中任一項(xiàng)的藥物產(chǎn)品，其中所述藥物產(chǎn)品為適于口服或胃腸外給藥的劑型。
9. 一種治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是純合型的受試者的血壓升 高的方法，所述方法包括向該受試者給藥核黃素。
10. —種治療或預(yù)防MTHFRC677T多態(tài)性是雜合型的受試者的血壓升 高的方法，所述方法包括向該受試者給藥核黃素。
全文摘要
本發(fā)明提供了核黃素在制備用于治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是純合型或雜合型的受試者的血壓升高的藥物中的用途。本發(fā)明也提供了用于治療或預(yù)防MTHFR C677T多態(tài)性是純合型或雜合型的受試者的血壓升高的藥物產(chǎn)品，其包含藥學(xué)有效量的抗高血壓藥和核黃素，且本發(fā)明進(jìn)一步提供了治療此類(lèi)受試者的方法，所述方法包括給藥核黃素。
文檔編號(hào)A61P9/12GK101678030SQ200880013520
公開(kāi)日2010年3月24日 申請(qǐng)日期2008年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月23日
發(fā)明者杰拉爾丁·霍里根, 海倫妮·麥克納爾蒂, 瑪麗·沃德, 約翰·斯科特, 約翰·珀維斯, 肖恩·斯特蘭 申請(qǐng)人:阿爾斯特大學(xué);西方衛(wèi)生及社會(huì)保健信托公司;都柏林伊麗莎白女皇神學(xué)院