專利名稱：提取自棕櫚油榨油廢液的用于癌癥治療的化合物、其混合物及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用酚類預(yù)防和治療癌癥的混合物和方法,所述酚類包括但不限于源于植物材料的酚酸和類黃酮。更具體地說，本發(fā)明涉及包含提取自棕櫚油榨油廢液(palm oil mill effluent)的化合物的混合物。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，在某些情況下，癌癥的治療一般求助于通常在殺死或破壞惡性腫瘤 細(xì)胞方面很有效的化療。目前，人們利用多種方法對抗癌癥,其中多數(shù)方法涉及保守療法、放射療法或手術(shù) 療法。然而,這些療法也損傷了正常細(xì)胞。認(rèn)識到前段中提到的重大缺陷后，有關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)家和發(fā)明家開發(fā)出了用于癌癥 預(yù)防和治療的低損技術(shù)或方法，包括利用來源于植物的化合物,所述化合物可通過它們作 為抗氧劑的能力給出積極的藥理學(xué)作用。一般地,抗氧劑具有多種有益的藥學(xué)應(yīng)用,包括對 抗癌細(xì)胞。酚類是功效強(qiáng)大的抗氧劑,其能提供對抗自由基的有效防御機(jī)制。維生素E用 作抗氧劑通過破壞或“中和”被稱為自由基的具有潛在破壞性的氧分子來保護(hù)細(xì)胞。自由 基是細(xì)胞正?；顒拥母碑a(chǎn)物。粗制棕櫚油含有的組分包括類胡蘿卜素、生育酚、生育三烯酚、留醇、三萜烯醇、 醇、磷脂、糖脂、萜烯和飽和鏈烷烴。生育酚和生育三烯酚是屬于維生素E的重要營養(yǎng)成分， 在為細(xì)胞成分提供免受氧化破壞的保護(hù)中發(fā)揮了主要作用。這些混合物的一個例子如US20040023894-炎癥、癌癥和血栓癥的治療 (EL-Naggar等)公開的，其中公開了用于癌癥治療的混合物由生育三烯酚組成，生育三烯 酚是維生素E家族的抗氧劑,是棕櫚油和柑橘的富含成分。在此文件中,本發(fā)明涉及治療炎 癥、癌癥和血栓癥的混合物，更具體地說，是C0X-2抑制劑、低劑量阿斯匹林和抗氧劑或異 黃酮(isoflavones)的組合物，所述組合物提供抗癌療效。然而，這個發(fā)明優(yōu)選主要包含 C0X-2抑制劑和低劑量阿斯匹林的組合物,其中，所述阿斯匹林可能作為抗炎劑起作用。本 發(fā)明與US20040023894中所描述的不同是因?yàn)?，本發(fā)明提供--種預(yù)防和治療癌癥的方法， 涉及使用添加/不添加維生素E的有效劑量的酚類的混合物，所述酚類包括提取自棕櫚油 榨油廢液的酚酸和類黃酮，同時輔以/不輔以保守療法、放射療法或手術(shù)療法。富含酚類和 類黃酮的抗氧劑復(fù)合物的主要成分在提供強(qiáng)抗癌效果中發(fā)揮重要作用。因此,本發(fā)明的目的在于提供含有酚類的混合物,所述酚類包括提取自棕櫚油榨 油廢液的酚酸和類黃酮，所述混合物包含酚酸和類黃酮中的至少一種或所述酚酸和類黃酮 中的至少一種與維生素E的組合，所述混合物用于預(yù)防和治療癌細(xì)胞。本發(fā)明的另一個目的在于,提供給需要的哺乳動物用藥所述混合物的方法。進(jìn)--步地,本發(fā)明的目的在于,提供一種天然源混合物,所述天然源混合物在給需 要的哺乳動物準(zhǔn)備用藥方面具有性價比高、操作簡單的特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及含有添加/不添加維生素E的酚類的混合物，用于制備預(yù)防或抑制癌癥惡化的藥物,其中,所述酚類從棕櫚油榨油廢液得到。本發(fā)明進(jìn)--步地提供添加/不添加維生素E的治療有效量的所述混合物在制備藥 物中的應(yīng)用，通過將所述藥物用藥給需要的個體來預(yù)防或抑制個體的癌癥惡化。齡趣描貨本發(fā)明涉及含有酚類的混合物,及所述混合物在預(yù)防和治療癌癥的藥物中的應(yīng) 用,所述酚類包括酚酸和類黃酮。所述術(shù)語“酚類”是指一類由植物產(chǎn)生的化合物，因其化學(xué)結(jié)構(gòu)歸類到一起。相應(yīng)地,本發(fā)明的方法涉及將添加/不添加維生素E的有效劑量的酚類用藥給確 認(rèn)易患癌癥和/或已患癌癥的個體，以便預(yù)防和/或治療癌癥。由于榨油過程中多酚氧化 酶的熱失活,包括酚酸和類黃酮在內(nèi)的酚類殘留在棕櫚油榨油廢液中。維生素E包括生育 三烯酚和生育酚，其中，所述生育三烯酚和生育酚可以是α、β、γ或δ-異構(gòu)體。
具體實(shí)施例方式接下來的具體實(shí)施例將為依據(jù)本發(fā)明的生產(chǎn)藥物和相關(guān)藥學(xué)制劑的方法提供詳 細(xì)的說明。油棕酚類的用藥能預(yù)防皮膚黑色素瘤?？赡艿挠盟幇ㄓ妥胤宇惖目诜?、藥 學(xué)制劑形式或其局部應(yīng)用。大體上,酚類的純提取物可以任何適于口服吸收、藥學(xué)制劑形式或局部應(yīng)用的形 式生產(chǎn)。這些形式包括溶液、膠體分散系、水包油或油包水懸浮液、乳霜、凝膠、搽劑、粉末 等。不同載體類型的配制方法是本領(lǐng)域公知的，可在任何相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)中找到。油棕酚類預(yù)防人乳腺癌人乳腺癌細(xì)胞在多種劑量(重量百分比)的油棕酚類存在或缺失的情況下進(jìn)行體 外培養(yǎng)。油棕酚類以劑量依賴方式抑制人乳腺癌細(xì)胞的生長，然而，沒有添加油棕酚類的乳 腺癌細(xì)胞持續(xù)增生。油棕酚類預(yù)防人前列腺癌人前列腺癌細(xì)胞在多種劑量(重量百分比)的油棕酚類存在或缺失的情況下進(jìn)行 體外培養(yǎng)。油棕酚類以劑量依賴方式抑制人前列腺癌細(xì)胞的生長，然而，沒有添加油棕酚類 的前列腺癌細(xì)胞持續(xù)增生。油棕酚類預(yù)防結(jié)腸癌使用大鼠作為動物模型,并使用二甲基胼(DMH)作為化學(xué)致癌劑,通過多劑量DMH 灌胃法在大鼠中誘導(dǎo)結(jié)腸癌的發(fā)病。實(shí)驗(yàn)動物組在飲用水中補(bǔ)充油棕酚類，而對照動物組 只提供水，不補(bǔ)充油棕酚類。在整個實(shí)驗(yàn)過程中，所有的大鼠均隨意以普通大鼠食物喂養(yǎng)維 持。與沒有補(bǔ)充這些油棕酚類的對照組相比,補(bǔ)充油棕酚類的大鼠顯示出了明顯更少的結(jié) 腸息肉和腫瘤。對補(bǔ)充油棕酚類的腫瘤小鼠的微陣列研究表明抑制癌細(xì)胞生長效應(yīng)大約6周齡的雄性近交系balb/c小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后在頸部背側(cè)皮下注射200 μ 1的J558骨髓瘤細(xì)胞(2 3 X IO6個/200 μ 1),然后將小鼠分成兩組,一組提供蒸餾 水(η = 6)，另外一組提供油棕酚類(1500ppm沒食子酸當(dāng)量)(η = 6)。待4周后殺死小 鼠，當(dāng)通過頸部觸診觀察到腫瘤存在時，切下腫瘤，放入液氮迅速冷凍并且在整個RNA離析 處理過程中一直貯存于 80°C。待確定離析獲得的RNA的產(chǎn)量、純度和完整性后,選出4個 在各種條件下具有最高完整性的總RNA樣品進(jìn)行微陣列研究,研究采用Illumina小鼠全基 因組表達(dá)譜微珠芯片MouseRef-8 (Illumina, Inc.，圣迭戈，加利福尼亞)，按照制造商的說 明書進(jìn)行。采用I ！lumina BeadStudio軟件(11 luraina, Inc.，圣迭戈，加利福尼亞)進(jìn)行雜 交質(zhì)量控制、微陣列數(shù)據(jù)提取和初始分析。離群樣本通過Illumina BeadStudio軟件提供 的聚類分析移除，同時也利用TIGR MeV軟件[1]通過不同長度測量移除。每種情況F的 至少3個樣本(移除離群樣本后)用作進(jìn)一步分析。基因表達(dá)值利用恒量分組方法(rank invariant method)標(biāo)準(zhǔn)化，不管是對照樣本還是治療樣本,檢測水平高于0. 99的基因均 認(rèn)為是顯著性檢測。為了濾去統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著的基因數(shù)據(jù),使用了 Illumina的慣用錯 誤模型(Custom errormodel)，當(dāng)微分值(Differential Score)大于13，相當(dāng)于P值小于 0. 05時，基因被認(rèn)為具有顯著性差異?；蚣捌鋵?yīng)數(shù)據(jù)輸出到微軟Excel軟件作進(jìn)一步的分析。為了計(jì)算倍數(shù)變化 (fold change),表達(dá)值小于任意值10的使之為10,然后，如果基因是上調(diào)，則倍數(shù)變化均 通過信號Y的平均值(治療)除以信號X的平均值(對照)進(jìn)行計(jì)算，如果基因是下調(diào)，則 反之亦然。利用TIGR MeV[l]軟件進(jìn)行有意義的基因的雙向(基因和樣本)聚類分析，以 保證每種情況下的樣本彼此聚類。歐氏距離度量法(Euclidean distance metric)和均連 法(average linkage method)用來進(jìn)行聚類分析。生物通路和基因本體的變化可利用GenMAPP軟件[2]和MAPPFinder軟件[3]通 過功能分析的方法評估。MAPPFinder軟件基于超幾何分布對GenMAPPs (通路)和基因本 體(gene ontologies)進(jìn)行分級。關(guān)于MAPPFinder中使用的術(shù)語的進(jìn)一步的解釋,讀者 可向[3]中查找。調(diào)整P值(Permuted P Value)小于0. 05、基因改變數(shù)大于或等于2和 Z值大于2的GenMAPPs和基因本體認(rèn)為是顯著的。黃色方框表示上調(diào)基因，天藍(lán)色方框表 示下調(diào)基因。內(nèi)有不同陰影的方框表示一個基因上存在多個探針(拼接轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(splice transcripts))0使用小于0. 05的P值,我們發(fā)現(xiàn)添加油棕酚類的小鼠腫瘤中有815個基因差異表 達(dá)，其中391個被上調(diào)，424個被下調(diào)。對這些基因的功能分析表明，與細(xì)胞周期有關(guān)(

圖1) 的基因差異表達(dá)。Ccnd2、Ccne2、Cdk4、Cdk2 等基因被上調(diào)，而 Ccna2、Ccnb 1、Plkl、Mad211、 Cdc20、HdaC6、Mcm6等基因被下調(diào)。這些基因調(diào)節(jié)表明油棕酚類可通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期中的 G1/S階段阻滯來抑制腫瘤生長。<image>image see original document page 6</image>圖1 腫瘤細(xì)胞周期途徑中的顯著差異基因制劑和配制除了直接使用提取物外，使用油棕酚類化合物的不同部分也是可行的。構(gòu)成提取 物的有效量或有效成分取決于提取物的純度。例如,如果使用純度約為10%的含有酚類的 粗提取物，通常就需要使用更多的量。純度越高，達(dá)到相同的效果需要的量越少。依據(jù)本發(fā)明，所述酚類或維生素E可以制成用于哺乳動物用藥的制藥學(xué)和/或營 養(yǎng)學(xué)混合物。同樣地,它們也以帶有制藥學(xué)可接受載體的化合物形式提供。制藥學(xué)和/或 營養(yǎng)混合物中的治療性化合物可以口服用藥,或者也可以作為食品添加劑用藥。這時,使用 量優(yōu)選在不影響食品原味的前提下可產(chǎn)生最大效果。適于口服用藥的制劑包括湯劑，該湯劑是將活性化合物溶于合適的溶劑，如鹽溶 液、水；膠囊或片劑,其中含有預(yù)定量的固體顆?；蚰z質(zhì)的活性成分；合適基質(zhì)和乳液中的 懸浮劑。酚類口服用藥的患者用量一般為15 1000nig/d，一般為200mg/d。按照患者體重 說，是平均體重60kg的成年人的常規(guī)劑量，平均值為3. 4mg/kg/d。類黃酮口服用藥的患者用量一般為15 100()mg/d,典型地200mg/d。按照患者體重說，是平均體重60kg的成年人的常規(guī)劑量,平均值為3. 4 6. 7mg/kg/d。生育三烯酚口服用藥的患者用量一般為20 1000mg/d,典型地200 400mg/d。按照患者體重說，是平均體重60kg的成年人的常規(guī)劑量，平均值為3. 4 6. 7mg/kg/d。本發(fā)明的化合物可以按照上述制劑形式單獨(dú)制備,也可以以組合化合物的形式制 備。 在此所用的所述術(shù)語“藥學(xué)和/或營養(yǎng)可接受制劑形式，，包括任何藥學(xué)和/或營 養(yǎng)行業(yè)所熟知的用于藥物用藥的合適載體，通過不同藥物濃度的如膠囊、片劑、糖漿、甘香 酒劑和用于非腸道注射的湯劑的形式。 在此所用的“有效量”包括足以破壞、減緩、控制或去除初生、區(qū)域或轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞或 組織的藥學(xué)可接受量；足以延緩或最小化癌擴(kuò)散的藥學(xué)可接受量；足以在癌癥治療或控制 中提供治療效果的藥學(xué)可接受量。但是,這些實(shí)施例并不是為了以任何方式限制或約束本 發(fā)明的范圍，也不應(yīng)理解成，為了實(shí)施本發(fā)明而提供的排它性使用的條件、參數(shù)、試劑或起 始原料。
權(quán)利要求
一種用于制備預(yù)防或抑制癌癥惡化的藥物的包含酚類的混合物，其特征在于，所述酚類包括酚酸和類黃酮，其中，所述酚類從棕櫚油榨油廢液得到。
2.如權(quán)利要求1所述的混合物，其特征在于，所述混合物還包含維生素E。
3.如權(quán)利要求1所述的混合物，其特征在于,所述混合物以帶有藥學(xué)可接受載體的化 合物的形式提供。
4.治療有效量的如權(quán)利要求1所述的混合物與維生素E—起或單獨(dú)在制備預(yù)防或抑制 癌癥惡化的藥物中的應(yīng)用，所述藥物通過用藥提供給單個個體。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于,所述混合物輔以或不輔以常規(guī)化學(xué)療法、放 射療法或手術(shù)療法。
6.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于,所述混合物可口服用藥或作為食品添加劑 用藥。
7.用于皮膚癌的如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用。
8.用于乳腺癌的如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用。
9.用于前列腺癌的如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用。
10.用于結(jié)腸癌的如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明描述了使用提取自棕櫚油榨油廢液的化合物的預(yù)防和治療癌癥的混合物和方法。本發(fā)明還描述了所述化合物及其組合物的治療有效量的制劑方法。本發(fā)明可單獨(dú)制備或作為組合物產(chǎn)品制備。
文檔編號A61K31/704GK101808654SQ200880019239
公開日2010年8月18日 申請日期2008年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月23日
發(fā)明者卡里亞納卡里亞納·桑德拉姆·P·馬尼卡姆, 廖順森, 拉維加德維·沙姆巴沙穆提, 莫哈末·巴斯利·瓦西德, 譚友愛 申請人:馬來西亞棕櫚油協(xié)會