專利名稱：：藍萼香茶菜中二萜類化合物在制備抗肝炎病毒藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，是藍萼香茶菜中二萜類化合物藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素用于制備抗肝炎藥物的用途。
背景技術：
：藍萼乙素(GlaucocalyxinB)、藍萼丙素(GlaucocalyxinC)、藍萼丁素(GlaucocalyxinD)、藍萼戊素(GlaucocalyxinE)和藍萼己素(GlaucocalyxinF)是從唇形科香茶菜屬植物藍萼香茶菜iaZ^os/ay";om'ca(Burm.f.)Haravar.g7awcoc一x(Maxim.)Hara的全草中分離得到的貝殼杉烷型二萜類化合物桂明玉，等。藍萼香茶菜化學成分研究II，中國藥學雜志，2000;35(6):375;ZhaoBaoXiang(項昭保)，HaiShengChen(陳海生)，etal.Twonewditerpenoidsfromi"Mos7'a力/om'cavar.g7awcoca/yx，ChineseChemicalLetter2008;19:852-854。它們的化學結(jié)構(gòu)通式如下其中，基團R,選自H、COCH3;R2選自COCH3、H;113選自H、0;R4選自OH、O;Rs選自CH2、H;R6選自CH2、CH3;117選自O、H;R8選自0、OH;各化合物的基團搭配分別為藍萼乙素RpHRfCOCH3;R3,R4-0;R5，R6-CH2;R7，Rs-0藍萼丁素R!-COCH3R2=H;R3，R4-0;R5，R6=CH2;R7，R8=0藍萼丙素R!-R2-H;R3，R4=0;R5，R6=CH2;R7，=H，Rs=OH藍萼戊素R!-R2-H;R3，R^0;R5，-H，R^CH3;R7，R80藍萼己素Rt-R2-H;R3-H;R4-0H;R5，-H，R^-CH3;R7，Rs-O至今未見有關上述化合物具有抗肝炎病毒作用的相關報道。發(fā)明內(nèi)#本發(fā)明為二萜類化合物藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素提供一種制備抗肝炎藥物的用途。本發(fā)明采用乙肝表面抗原(HBsAg)診斷試劑盒和乙肝核心抗原(HBeAg)診斷試劑盒對二萜類化合物藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素進行了抗乙肝表面抗原和乙肝核心抗原試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，它們具有顯著的抗乙肝病毒活性，因此可用于制備抗乙肝病毒的藥物。本發(fā)明為尋求抗乙肝病毒藥物提供了新的來源。具體實施例方式現(xiàn)結(jié)合體外實驗，對本發(fā)明作詳細描述。藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素抗乙肝病毒試驗一、實驗藥物、試劑及材料1.化合物藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素從藍萼香茶菜中提取分離方法見桂明玉，等。藍萼香茶菜化學成分研究II，中國藥學雜志，2000;35(6):375;ZhaoBaoXiang(項昭保)，HaiShengChen(陳海生)，etal.TwonewditerpenoidsfromiaWos7'a_/"/ow/cavar.g/awcoca/yx，ChineseChemicalLetter2008;19:852-854;ZhaoBaoXiang(項昭保)，HaiShengChen(陳海生)，etal.Diterpenoidsfrom及a6^w/"_/<3/om'caAsianJournalofChemistry2009;21:3;。2.立可讀HBsAg診斷試劑盒(上?？迫A生物技術有限公司)3.立可讀HBeAg診斷試劑盒(上海科華生物技術有限公司)4.細胞培養(yǎng)液，配制，其含10%胎牛血清，0.03%谷氨酰胺，G418390jig/ml，卡那霉素50U/ml，調(diào)pH至7.2;5.細胞消化液，配制，其含0.25%胰蛋白酶，用磷酸緩沖液配制；6.細胞系HepG2215，由提供，其為HBV-DNA克隆轉(zhuǎn)染人肝癌細胞的2.2.15細胞系。二、實驗方法按試劑盒的說明書操作。取處于對數(shù)生長期的H鄰G2215細亂調(diào)整細胞濃度為2X105個/ml，取100lU種96孔板；藥物不同濃度稀釋培養(yǎng)24小時后加藥，8天后取上清測表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBeAg)。(1)每孔加入待測標本50lU，設陰、陽性對照各2孔，每孔加入陰性對照(或陽性對照)各一滴，并設空白對照一孔。(2)每孔加入酶結(jié)合物1滴(空白對照孔除外)，充分混勻，封板，置37C孵育30分鐘；(3)棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復五次后拍干；(4)每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37C輝育15分鐘；(5)每孔加入終止液1滴，混勻；(6)用酶標儀讀數(shù)，取波長450nm，參考波長630nm，讀取各孔讀數(shù)。三.實驗結(jié)果結(jié)果見表l、表2。表1藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素對乙肝表面抗原<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由表1可見，藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素具有顯著抑制乙肝表面抗原作用，說明它們具有抗肝炎病毒和保肝作用。表2藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素對乙肝核心抗原(HBeAg)抑制活'it(0/。)HBeAg10ug/ml20ug/ml50Pg/ml100ug/ml藍萼乙素22.0838.2646.0649.70藍萼丙素011.3823.1542.86藍萼丁素15.2435.5645.7848.56藍萼戊素24.0736.2444.0749.70藍萼己素010.3520.1040.82由表2可見，藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素具有顯著抑制乙肝核心抗原作用，說明它們具有抗肝炎病毒和保肝作用。上述實驗結(jié)果表明，藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素具有顯著的抗乙肝病毒活性，因此可用于制備抗肝炎病毒和保肝的藥物。權利要求1、二萜類化合物藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素在制備抗肝炎藥物的應用，所說二萜類化合物的化學結(jié)構(gòu)通式如下其中，基團R1選自H、COCH3；R2選自COCH3、H；R3選自H、O；R4選自OH、O；R5選自CH2、H；R6選自CH2、CH3；R7選自O、H；R8選自O、OH；各化合物的基團搭配分別為藍萼乙素R1＝HR2＝COCH3；R3，R4＝O；R5，R6＝CH2；R7，R8＝O；藍萼丁素R1＝COCH3R2＝H；R3，R4＝O；R5，R6＝CH2；R7，R8＝O；藍萼丙素R1＝R2＝H；R3，R4＝O；R5，R6＝CH2；R7，＝H，R8＝OH；藍萼戊素R1＝R2＝H；R3，R4＝O；R5，＝H，R6＝CH3；R7，R8＝O；藍萼己素R1＝R2＝H；R3＝H；R4＝OH；R5，＝H，R6＝CH3；R7，R8＝O。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術領域：
，是藍萼香茶菜中二萜類化合物藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素用于制備抗肝炎藥物的用途。本發(fā)明采用乙肝表面抗原(HBsAg)診斷試劑盒和乙肝核心抗原(HBeAg)診斷試劑盒對二萜類化合物藍萼乙素、藍萼丙素、藍萼丁素、藍萼戊素和藍萼己素進行了抗乙肝表面抗原和乙肝核心抗原試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，它們具有顯著的抗乙肝病毒活性，因此可用于制備抗乙肝病毒的藥物。文檔編號A61P31/12GK101548965SQ20091004488公開日2009年10月7日申請日期2009年1月5日優(yōu)先權日2009年1月5日發(fā)明者劉建國,趙衛(wèi)權,金永生,陳海生,項昭保申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學