專利名稱：鹽酸阿比多爾在制備預(yù)防和治療犬瘟熱病毒藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開(kāi)一種鹽酸阿比多爾在制備預(yù)防和治療犬瘟熱病毒藥物中的用途，提供 了鹽酸阿比多爾的一種新用途，屬于獸醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
技術(shù)領(lǐng)域
鹽酸阿比朵爾(Arbidol hydrochloride)是一種新的抗病毒藥物和免疫刺激劑，為 非核苷類(lèi)抗病毒新藥，化學(xué)名為6-漠-4-(二甲氨甲基)-5-羥基-1-甲基-2-(苯硫甲 基)-1H-H引哚-3-羥酸乙酯鹽酸鹽水合物。由前蘇聯(lián)研制開(kāi)發(fā)，已被批準(zhǔn)在俄聯(lián)邦內(nèi)使 用，用于預(yù)防和治療流行性感冒及其它呼吸道病毒感染。1993年第九屆國(guó)際病毒學(xué)會(huì) 議上報(bào)告了其抗流感病毒的活性，是一種新的抗病毒藥物和免疫刺激劑。在流感和其 它嚴(yán)重呼吸道病毒感染病流行期間，服用藥物可減少7. 5倍被傳染的風(fēng)險(xiǎn)，可減輕流感 和嚴(yán)重呼吸道病毒感染的疾病過(guò)程并防止其并發(fā)癥的發(fā)生或發(fā)展。阿比朵爾對(duì)A、 B型 抗原的流感病毒的抗病毒活性最為顯著，其作用與2， 5-寡腺苷酸合成酶的活化有關(guān)， 它通過(guò)激活2， 5—寡聚腺苷酸合成酶，特異性抑制病毒囊膜與宿主細(xì)胞膜的融合，從 而，阻斷病毒的復(fù)制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)一種鹽酸阿比多爾在制備預(yù)防和治療犬瘟熱病毒藥物中的用途，提供 了鹽酸阿比多爾的一種新用途。
通過(guò)以下實(shí)驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明鹽酸阿比朵爾對(duì)預(yù)防和治療犬瘟熱病毒的作用-實(shí)例l、鹽酸阿比朵爾體外抗犬瘟熱病毒試驗(yàn) 1實(shí)驗(yàn)材料
1. 1藥品鹽酸阿比朵爾利巴韋林 1. 2病毒和細(xì)胞
犬瘟熱病毒(CDV-TH)本室分離和保存；非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)本室保存。
31. 3主要試劑
營(yíng)養(yǎng)液為DMEM(含10X小牛血清)，維持液為DMEM(含2W小牛血清)。
2病毒擴(kuò)增及毒力測(cè)定
Vero細(xì)胞接種于96孔板，每孔100pl，含細(xì)胞2Xl(T個(gè)/孑L，37。C 5%〇02培養(yǎng)2牝， 細(xì)胞長(zhǎng)成單層。將病毒原液用培養(yǎng)液依次10倍稀釋，即10—'、 l(T2、 10—''、 10—4 、 10—5、 10-6、 l(T 、 10-8和10—9共9個(gè)濃度，分別加至細(xì)胞培養(yǎng)板孔內(nèi)，每濃度4孔，37°C， 5% C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞病變(CPE)。細(xì)胞病變數(shù)在25%以下為+， 26%-50%病變數(shù)為++， 51%-75%病變數(shù)為+++， 76%-100%病變數(shù)為++++。記錄細(xì)胞 病變程度，用Reed-Muench法計(jì)算病毒半數(shù)毒性濃度(TCID5。)
3 MTT法測(cè)定藥物對(duì)細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度(TC。)
Vero細(xì)胞接種于96孔板，每孔100ul，含細(xì)胞2Xl(^個(gè)/孑L,37X: 5XC02培養(yǎng)24h， 細(xì)胞長(zhǎng)成單層。吸去上清，鹽酸阿比多爾濃度分別為40、 20、 10、 5、 2.5ug/ml，利 巴韋林濃度分別為400、 200、 100、 50ug/ml。每濃度4孔，并設(shè)細(xì)胞對(duì)照。觀察5d后 加MTT染色4h,吸去液體加DMSO溶解O. 5h，酶聯(lián)檢測(cè)儀在570nm測(cè)定吸收值，試驗(yàn)重復(fù) 三次，找出藥物的最大無(wú)毒濃度，Reed-Muench法計(jì)算半數(shù)毒性濃度(TC5。)。
4藥物體外抗病毒試驗(yàn)
Vero細(xì)胞接種于96孔板，每孔10"1，含細(xì)胞2Xl(T個(gè)/孔，37°C 5%0)2培養(yǎng)2牝， 細(xì)胞長(zhǎng)成單層。每孔加入1001^105,)病毒100"1，吸附2h后，棄去病毒。藥物以最大無(wú) 毒濃度為起點(diǎn)對(duì)倍稀釋5個(gè)濃度，每濃度4個(gè)復(fù)孔。同時(shí)，設(shè)病毒對(duì)照(細(xì)胞+病毒+培養(yǎng) 液)、細(xì)胞對(duì)照(細(xì)胞+培養(yǎng)液)、藥物對(duì)照(最高濃度的藥物+細(xì)胞+培養(yǎng)液)。當(dāng)病毒對(duì) 照孔細(xì)胞病變?yōu)? + + +時(shí)，記錄細(xì)胞病變結(jié)果，MTT染色法測(cè)定細(xì)胞活性。試驗(yàn)重復(fù) 三次。用Reed—Muench法計(jì)算藥物對(duì)病毒的半數(shù)抑制濃度IC5。。
5結(jié)果
病毒毒力測(cè)定病毒半數(shù)毒性濃度(TCIDs。)為10—6; 鹽酸阿比朵爾對(duì)細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度(TC。)為20 ug/ml，見(jiàn)表l。
表l藥物對(duì)細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果
鹽酸阿比朵爾 (y g/ml)細(xì)胞病變利巴韋林 (U g/ml)細(xì)胞病變
40+柳一
20一200一
10一100一5 — 50
細(xì)胞對(duì)照
細(xì)胞對(duì)照 一
+ "細(xì)胞病變，"一"細(xì)胞正常
藥物的抗病毒作用鹽酸阿比朵爾對(duì)犬瘟熱病毒的IC50為16.97土1.22 ng/ml，遠(yuǎn)遠(yuǎn) 小于利巴韋林的IC50(77.31土9.42 u g/ml),表明鹽酸阿比朵爾對(duì)犬瘟熱病毒具有較 強(qiáng)的抑制作用，見(jiàn)表2。
表2藥物對(duì)犬瘟熱病毒的抑制作用
藥物
IC50(ug/ml)
1
2
3
x±s
鹽酸阿比朵爾 15.63 利巴韋林 76.23
16. 70 89. 35
18. 57 66. 36
16. 97±1. 22 77. 31土9. 42
結(jié)論
鑒于上述鹽酸阿比朵爾的抗病毒作用，通過(guò)體外篩選實(shí)驗(yàn)證明鹽酸阿比朵爾對(duì)犬 瘟熱病毒是否敏感，判定鹽酸阿比朵爾對(duì)犬瘟熱病毒的治療效果。從而獲得治療犬瘟 熱病毒感染的治療藥物。
具體實(shí)施例方式
鹽酸阿比朵爾可制成醫(yī)藥學(xué)中的任何藥物制劑。
權(quán)利要求
1、鹽酸阿比朵爾在治療和預(yù)防犬瘟熱病毒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了鹽酸阿比多爾在預(yù)防和治療犬瘟熱病毒中的應(yīng)用。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證明，鹽酸阿比朵爾對(duì)犬瘟熱病毒具有顯著的抑制作用，可作為預(yù)防和治療犬瘟熱病毒的藥物應(yīng)用于臨床。
文檔編號(hào)A61K31/404GK101564389SQ200910067068
公開(kāi)日2009年10月28日 申請(qǐng)日期2009年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月5日
發(fā)明者李乾學(xué) 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所