專利名稱：：玉米須多糖在制備治療高血脂癥的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，尤其是指玉米須多糖的新藥物用途。
背景技術：
：玉米須多糖的藥理作用1、調節(jié)免疫功能的作用魯彥等研究表明，玉米須多糖具有調節(jié)免疫功能的作用，多種多糖具有刺激巨噬細胞、B細胞、T細胞、自然殺傷細胞,增強其活性的作用；同時促進巨噬細胞分泌IL1、TNF、T淋巴細胞產生IL2;激活白細胞產生干擾素，調節(jié)抗體和補體生成等。鄭鴻雁、閔偉紅等也通過試驗得出玉米須中具有免疫調節(jié)作用的成分為多糖。湯魯宏等經(jīng)過系統(tǒng)的篩選從玉米須中分離提取了具有免疫增強作用的生物活性成分。運用離子交換、分級沉淀、Sephrose柱層析等手段對成分進行了進一步的分離和純化。初步的結構研究表明為多糖類化合物。Namba在小鼠被動皮膚過敏性反應試驗中，證實玉米須提取物中分離出的糖蛋白于二硝基酚卵清蛋白(DVA)抗原對IgE的形成有抑制作用，說明此蛋白對I型過敏性疾病有效。魯彥等研究玉米須水煎劑及其粗多糖對環(huán)磷酰胺所致免疫功能低下小鼠胸腺指數(shù)及胸腺DNA含量的影響，結果顯示能提高免疫功能低下小鼠的胸腺指數(shù)及胸腺DNA含量;兩者對小鼠胸腺指數(shù)及胸腺DNA含量的提高作用無差別。2、抗腫瘤作用呂冬霞等將玉米須多糖以不同濃度和時間作用于肝癌SMMC-7721細胞，采用MTT比色法觀察細胞毒性，結果顯示，玉米須多糖對SMMC-7721細胞的生長抑制具有劑量和時間依賴性，且凋亡細胞形態(tài)改變，說明玉米須多糖能抑制肝癌SMMC-7721細胞的增殖,誘導肝癌細胞凋亡。范曉艷等也將玉米須多糖以不同濃度和時間作用于肝癌SMMC-7721細胞，采用免疫組化法檢測Caspase-3和p53的表達；分別觀察制片后的Caspase-3和p53表達，發(fā)現(xiàn)經(jīng)玉米須多糖(2080mg/L)作用于SMMC-7721細胞，隨著作用時間和劑量的增加，Caspase-3及p53的表達增高，表明玉米須多糖能誘導肝癌SMMC-7721細胞凋亡。3、保肝作用3昌友權等研究了玉米須多糖對CCL4肝損傷小鼠的保護作用，表明玉米須多糖可增加肝臟GSH含量，提高GST活性；具有淬滅自由基、抗氧化、抑制腫瘤及護肝的作用；玉米須多糖對CYP450具有選擇性抑制作用，阻止CCL4在肝微粒體內的代謝活化。4、降糖作用劉娟等研究了玉米須多糖對四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖的影響，發(fā)現(xiàn)玉米須多糖能夠降低糖尿病小鼠血糖，促進肝糖元合成，加快糖異生；對糖尿病小鼠糖代謝器官損傷有修復作用。同時發(fā)現(xiàn)玉米須多糖對正常小鼠也有一定降糖作用。5、利尿作用竇傳斌等采用代謝籠法和濾紙法測大、小鼠的排尿量及尿中n^、k+、cr的含量；采用甘油致大鼠腎衰竭模型觀察玉米須多糖對腎衰竭大鼠排尿的影響，發(fā)現(xiàn)玉米須多糖可明顯增加大、小鼠的排尿量,增加尿液中K+、cr的含量，增加腎衰竭大鼠的排尿量，提示玉米須多糖具有明顯的利尿作用。6、解熱作用杜娟采用干酵母和2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的模型觀察玉米須多糖對大鼠發(fā)熱的影響，發(fā)現(xiàn)玉米須多糖對大鼠干酵母混懸液致熱和2，4-二硝基苯酚致熱均有明顯的解熱作用，作用強度呈劑量依賴性。7、利膽作用杜娟采用膽管引流法分別收集并計量給藥后0.5，1，1.5，2，2.5h后的膽汁量來觀察玉米須多糖對肝臟分泌膽汁的影響，發(fā)現(xiàn)對大鼠膽囊分泌有明顯的促進作用；采用測定小鼠膽囊重量的方法觀察玉米須多糖對膽囊的影響，發(fā)現(xiàn)玉米須多糖能減輕膽囊重量，并推測其可能有加速小鼠膽囊收縮排空的作用。8、延長胃排空時間和降低體重杜娟等以黑色炭末為指示劑，以正常小鼠小腸炭末推進百分率、小鼠首次排黑便時間和數(shù)量為指標，觀察玉米須多糖對小鼠腸運動的影響；以甲基橙為指示劑，以甲基橙殘留率為指標，觀察玉米須多糖對小鼠胃排空的影響；以美藍為指示劑，以胃排空時間、腸內容物移動速度為指標，觀察玉米須多糖對大鼠胃腸運動的影響，發(fā)現(xiàn)玉米須多糖能延長胃排空時間。杜娟等報道玉米須多糖具有降低動物體重的作用，并指出其可能的機制是增加血漿膽囊收縮素(CCK)含量，使胃排空時間延長，食欲降低，腸蠕動加速，排便數(shù)量增加有關。4玉米須水提取物有降血脂作用MiuraT報道玉米須水提物能夠明顯降低正常小鼠和實驗小鼠血中膽固醇含量。對正常小鼠血中甘油三酯能夠顯著降低。對實驗小鼠血中甘油三酯含量未影響。結果提示,玉米須水提物降膽固醇作用是由于阻止膽固醇在肝臟合成。王大為觀察玉米花絲飲品(CFB)對高脂血癥鼠的降血脂作用，予末次給藥16h除空白對照組外,所有各組小鼠每只均腹腔注射75%蛋黃生理鹽水溶液0.5mL，并且開始饑餓;末次給藥后lh測定血清TCHO及TG含量，取肝臟測MDA含量。結果:與模型組比較，CFB7.00mL.kg"組大鼠血清TCHO和TG含量有明顯降低趨勢(PO.OOl)，CFB各劑量組大鼠肝組織MDA含量明顯降低(PO.OOl,PO.OOl,PO.05)，并呈現(xiàn)出一定的量效關系。與四氧嘧啶模型組比較，CFB10.0mL.kg"組小鼠血清TCHO和TG含量有明顯降低趨勢(PO.Ol)，CFB各劑量組小鼠肝臟組織MDA水平明顯降低(PO.001,PO.001,PO.05),并呈現(xiàn)出一定的量效關系。與蛋黃性模型組比較，CFB10.0mL.kg-l組小鼠血清TCHO含量有明顯降低趨勢(PO.Ol),CFB10.0和5.0mL.kg-l組小鼠血清TG含量有明顯降低趨勢(PO.01,P〈0.05),CFB10.0和5.0mL.kg"組小鼠肝臟組織MDA水平明顯降低(PO.OO1，PO.01)。在降低TCHO和TG含量及小鼠肝臟MDA水平方面CFB7.0mL.kg"組優(yōu)于康立舒膠囊組,CFBlO.OmL.kg"組優(yōu)于排毒清脂膠囊組。結論CFB對高脂血癥鼠有明顯的降血脂作用。急性毒性玉米須多糖小鼠急性毒性毒性太低,無法測得LD50;最大耐受量為45g/kg。
發(fā)明內容本發(fā)明提供一種玉米須多糖在制備治療高血脂癥的藥物中的應用，目的在于提供一種新型的降血脂藥物，滿足人們對該類藥物的需要。玉米須多糖在制備治療高血脂癥的藥物中的應用玉米須多糖在制備治療糖尿病伴高血脂癥的藥物中的應用。本發(fā)明玉米須多糖可采取常規(guī)方法或文獻中記載的方法獲得，優(yōu)選為包括下列步驟①備料選取無蟲蛀、無霉變、新鮮的青玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過40目篩，待用；②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過夜，以除去脂溶性雜質，真空過濾，5濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇；③水提將脫脂后的藥材分料投入浸提器中，加入1020倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于8090'C加熱30min，提取3次，合并提取清液，待用；④濃縮把浸提清夜投入真空旋轉蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5,得濃縮液，待用；⑤脫色把濃縮液投入脫色釜中，在攪拌下加入濃度為20~30%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時間2h，加熱溫度50'C，趁熱過濾，得脫色液，加熱回去殘留雙氧水，待用；⑥醇析把脫色液投入醇析釜中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為70%~75%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑦除雜把玉米須多糖加適量去離子水或蒸餾水溶解，加木瓜蛋白酶，酶底比1.0%、pH值5.5、體系在水浴中水解1.5h,溫度為4(TC，反應完后沸水浴滅酶IOmin;離心，除沉淀，待用；⑧透析把玉米須多糖澄清液裝入透析袋中，用去離子水或蒸餾水透析48h，以去除無機鹽、低分子量雜質，透析處理后，取出透析內液，待用；⑨醇析把脫透析液投入醇析釜中，加入95%乙醇、使料液中乙醇濃度為75%~85%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑩干燥把玉米須多糖沉析物至真空干燥箱中，干燥，過100目篩，得玉米須多糖。所得干燥物用a-萘酚、茚三酮鑒定為多糖、用苯酚硫酸法進行含量測定。每克玉米須純化多糖(含量40~50%以上)相當于玉米須80100g。本發(fā)明藥物可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)內服制劑、注射劑。本發(fā)明專利的有益效果是1、多糖的提取方法很多，但在提取過程中都有蛋白質伴隨產生。傳統(tǒng)的除蛋白方法有機溶劑的消耗量大，多糖損失嚴重，并存在廢液處理等問題。應用蛋白酶除多糖中的雜蛋白是一種反應溫和，操作相對簡單且對多糖活性影響較小的方法,使多糖的純化過程高效、安全。2、玉米須多糖為純天然藥物，在降低血糖的同時，還能夠降低血脂，說明其降血糖機制不是單一環(huán)節(jié)，而是多方面、多靶點綜合作用的結果，將其作為防治糖尿病及其并發(fā)癥的藥物開發(fā)具有重要的現(xiàn)實意義。3、增加植物資源的新用途玉米須現(xiàn)階段作為廢棄物被白白扔掉，作為藥用資源對其研究亦甚少，屬未開發(fā)利用品種。將玉米須總多糖開發(fā)成糖尿病伴有高血脂的降糖制劑是對中草藥資源的有效利用。4、帶動區(qū)域經(jīng)濟的發(fā)展吉林省是玉米的主產區(qū)之一，可年產玉米須90萬噸，現(xiàn)階段還未進行有效的利用，由于降糖降脂藥物臨床需求量較大，必將帶動區(qū)域產業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展。本發(fā)明制成的藥物降血脂作用顯著。服用劑量可以根據(jù)服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴重程度和其它類似的因素而改變，口服量為1.530g/日'人，每日分一三次服用。具體實施例方式下面通過藥效學實驗進一步驗證本發(fā)明。(一)玉米須多糖對單純高血脂大鼠降血脂作用1材料與儀器1.1動物Wistar大鼠，雄性，體重120160g(吉林大學實驗動物中心提供合格證號醫(yī)動字第10-5112)。1.2實驗儀器1.DY89-I型電動玻璃勻漿機寧波新芝科器研究所2.LG16-W低溫高速離心機北京醫(yī)用離心機廠3.LDZ5-2型普通離心機北京醫(yī)用離心機廠4.754型紫外分光光度計山東高密彩虹分析儀器廠5.DR-HW-1電熱恒溫水溫箱北京西城區(qū)醫(yī)療器械廠6.YKH-II型液體快速混合器江西醫(yī)療器械廠7.LBY-N6A自清洗旋轉式粘度計北京普利生8.GAMMAmaticII型r計數(shù)器瑞士KONTRON公司1.3主要試劑與藥品1.玉米須多糖按本發(fā)明實施例2方法所得。2.膽固醇上海新興化工研究所批號090108德國SIGMA產品上海復星朝輝藥業(yè)江蘇大洋制藥解放軍總院科技放免所解放軍總院科技放免所中國上海批號081009批號090715批號090101批號090128批號091021批號0806123.膽酸鈉4.丙硫氧嘧啶片5.洛伐他汀(膠囊)6.6-Keto-PGFla藥盒7.TXB2放免藥盒8.戊巴比妥鈉2.實驗方法2.1高脂血癥模型的復制方法2丄1高脂飼料的配方1%膽固醇、0.2%丙硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉、2%豬油、5%黃豆、0.5%蛋清、0.5%魚粉、2%蛋黃粉、88.3%基礎飼料2丄2給食方法高脂飲食組于給藥前15天開始，每晚67時給予高脂詞料，每只鼠平均20g，白天補充足量的普通詞料。第16天起，按照組別給予藥物，同時按上述方法給予高脂飼料，繼續(xù)飼養(yǎng)21天。2.2動物分組、給藥方法Wistar雄性大白鼠72只，體重120160g，隨機分成6組，每組12只。其中1組為空白對照組，其余為高脂飲食組，分別給予普通飼料和高脂飼料15天，第15天采血測血脂，再按血脂水平將高脂飲食組隨機分為5組。1.空白對照組普通詞料蒸餾水10ml/kg/d蒸餾水10ml/kg/d玉米須多糖0.5g/kg/d玉米須多糖lg/kg/d玉米須多糖2g/kg/d洛伐他汀30mg/kg/d每天上午8:009:00灌胃給藥1次，共21天。殺鼠前一晚，動物禁食不禁水。殺鼠當日上午，將動物用3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔麻醉，腹主動脈采血，并取肝臟。2.3血樣與組織樣的采集與制備(1)腹主動脈采血2ml，靜置分離血清，湖!l定TC、TG、HDL、LDL。2.模型對照組3.小劑量組4.中劑量組5.大劑量組6.陽性對照組高脂飼料高脂飼料高脂飼料高脂飼料高脂飼料8(2)腹主動脈采血lml用1%肝素抗凝測定全血粘度。(3)腹主動脈采血1.5ml用EDTA'2Na抗凝3000r/min離心10min分離血漿，用放免法測定PGI2和TXA2。(4)取部分肝臟，置12%甲醛溶液中固定，病理切片觀察肝組織中脂肪沉積情況。2.4觀測指標及測定方法(O測定血清TG、HDL—c、LDL—c、TC，計算動脈硬化指數(shù)(AI)。用酶學法測定分析TC、TG等的原理是通過特殊氧化酶使底物生成過氧化氫，然后經(jīng)過過氧化酶使它們結合成生色團。因生色團生成量可用比色法進行測定，所以產生的顏色與分析物的量成正比例。據(jù)此先繪已知分析物量的標準曲線，然后進行待測分析物的測定。測定TG、HDL-c、LDL—c、TC后，通過TC及HDL-c計算AI，AI=(TC-HDL-c)/HDL-c。(2)全血粘度測定取經(jīng)1%肝素抗凝的全血lml，加入EBY-N6A自清洗旋轉式粘度計測定全血低切(10/S)、中切(80/S)、高切(160/S)粘度。(3)PGl2及TXA2的測定取用EDTA.Na2抗凝分離出的血漿，根據(jù)解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供的6-Keto-PGFia及TXB2放免盒說明書用放免法測定6-Keto-PGFia(代表PGl2)及TXB2(代表TXA2)的含量。(4)取1/2肝臟置12%甲醛液中固定，進行病理觀察。2.5統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以均值士標準差(X±S)表示，采用組間差異比較的差異性t檢驗進行統(tǒng)計分析。2.6實驗結果2.6.1玉米須多糖對實驗性高脂血癥大鼠血脂代謝的影響與空白對照組比較,模型對照組可見血清TC、TG、LDL-c及AI含量明顯升高(p〈0.00D，HDL-c含量明顯下降(p〈0.01)，表明大鼠高脂血癥模型復制成功。與模型對照組相比，玉米須多糖中劑量組和大劑量組可明顯降低血清TC、TG、LDL-c及AI(p〈0.05或p〈0.01)，升高HDL-c(p〈0.05或p〈0.01)，見表l、2<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3.玉米須多糖對高血脂大鼠PGl2、TXB2及PGI2/TXA2的影響(x±s，n=10)GroupPGl2(pg/ml)TXB2(pg/m！1)PGI2/TXA2NCMC玉米須多糖0.5g/kglg/kg2g/kg洛伐他汀30mg/kg499.69±98.64"331.32±98.48386.29±102.11447.75±72.65**455.89±68.46**415.45±73.37*46.63±8.67**63.32±12.1753.08±14.3350.61±11.24*48.98±9.29**49.13±10.32*11.04±2.恥"5.30±1.447.75±2.789.24士2.6r9.57±2.16"8.84±2.51**與模型組比T〈0.05，**p〈0.01,***p〈0.001，2.6.3玉米須多糖對高血脂大鼠血粘度的影響高脂對照組與正常對照組比較，全血低切、中切及高切粘度均明顯增加(P0.05)，表明高脂血癥大鼠伴有血液流變學的改變。與高脂對照組比較，中劑量組和大劑量組明顯降低高脂血癥大鼠全血低、中、高切粘度(PO.05或PO.01)。小劑量組能明顯降低高脂血癥大鼠全血低切粘度(PO.05)，見表4。表4.玉米須多糖對高血脂大鼠血粘度的影響(x±s,n=10)BloodviscosityGroup10/s80/s160/s(mPas)(mPa*s)(mPas)NC9.82±1.48"4.09土0.64'3.51±0.38材MC12.28±1.695.25±0.354.20±0.47玉米須多糖0.5g/kg11.56±2.124.71±0.35*4.11±0.66lg/kg10.55±1.57'4.42±0.54*3.68±0.44*2g/kg10.29±1.12"4.35士0.41'3.60±0.55*洛伐他汀30mg/kg10.48±1.29*4.43±0.35*3.81±0.19*與模型組比承P〈0.05,**p〈0.01，2.6.4玉米須多糖對實驗性高脂血癥大鼠肝臟的保護作用對各組大鼠肝臟進行病理觀察，結果如下(1)空白對照組肝小葉結構清楚，肝細胞圍繞小葉中央靜脈呈放射狀，匯管區(qū)見少許淋巴細胞。個別動物匯管區(qū)炎細胞浸潤明顯，肝小葉偶見壞死灶及炎細胞浸潤，有的肝細胞內淤血。(2)模型對照組肝細胞可見灶狀分布的肝細胞變性、壞死區(qū)。肝細胞呈明顯的水樣變性及脂變。壞死區(qū)炎細胞浸潤明顯，并見出血及纖維蛋白的滲出(3)小劑量組肝小葉中央?yún)^(qū)肝細胞脂變明顯，部分肝細胞胞漿疏松化。炎細胞浸潤灶，多數(shù)肝細胞變性及壞死明顯(4)中劑量組肝小葉近中央?yún)^(qū)肝細胞脂變，亦見肝細胞胞漿呈現(xiàn)疏松化。部分動物肝臟可見有明顯炎細胞浸潤及壞死灶。(5)大劑量組僅少數(shù)動物肝細胞脂變明顯，并見胞漿疏松化及炎細胞浸潤。多數(shù)動物肝細胞脂變程度輕，炎癥反應不甚明顯。個別動物肝臟內有壞死灶。(6)陽性藥組部分肝細胞表現(xiàn)為彌漫脂肪變性及胞漿疏松化，并見肝細胞灶狀壞死及炎細胞浸潤。通過形態(tài)學觀察，可見給ACE藥物組肝細胞脂變程度有所減輕，且有隨劑量的增大而作用效果更明顯的趨勢。由此可見，ACE可降低大鼠肝脂肪蓄積，對減輕和防止肝臟的脂肪性具有一定作用。(二)玉米須多糖對糖尿病伴高血脂小鼠作用l實驗材料u動物昆明小鼠100只，雌雄各半，體重1822g，由長春高新醫(yī)學動物研究中心提供，生產許可證號SCXK-(吉)2003-0004。實驗前適應性飼養(yǎng)至少7d,所有動物均自由取食和飲水。1.2試劑格列吡嗪(揚子江藥業(yè)有限公司，批號20070712)臨用時用0.5。/。CMC配成0.030/0混懸液；四氧嘧啶(sigma公司，批號A7413)臨用時用生理鹽水配成0.4。/。的溶液；正丁醇(北京化工廠，化學純，批號20080214);乙醇(吉林市龍?zhí)对噭S，醫(yī)藥用，批號20080407);蒽酮(國藥集團化學試劑有限公司，批號20071127);硫脲(沈陽試劑廠，批號930208)。1.3供試藥物玉米須，2007年10月在吉林省吉林市郊區(qū)采集，經(jīng)吉林大學藥學院王廣樹教授鑒定為玉蜀黍玉米(ZeamaysL)甜粘l號的干燥花柱和柱頭。玉米須多糖制備同前。臨用前用去離子水配成2g(干膏)/100mL的溶液，置冰箱內IC藏，臨用前搖勻。121.4儀器血糖儀長沙三諾生物傳感技術有限公司，三諾SXT-1型；血糖試紙20080210;分析天平上海精密科學儀器有限公司FA2004N;紫外分光光度法山東高密彩虹分析儀器有限公司752N;Olympus顯微鏡BX51。2方法與結果2.1實驗方法2丄1建立小鼠高血糖模型本實驗采用以尾靜脈注射四氧嘧啶的方法造小鼠高血糖模型。造模前，小鼠常規(guī)飼養(yǎng)3d后，測量小鼠空腹血糖值，即為小鼠給藥前血糖值；禁食不禁水12h后，以給藥體積為20mL/kg尾靜脈注射(iv)0.4。/。的四氧嘧啶生理鹽水溶液，艮卩80mg/kg。造模后常規(guī)飼養(yǎng)72h，尾靜脈取血，測定造模后小鼠的血糖值(測量前禁食不禁水12h)。選擇血糖值高于11.1mmol/L的小鼠為高血糖模型小鼠。2丄2分組給藥取70只造模成功的小鼠，根據(jù)血糖值和體重隨機分組，g卩模型組、陽性藥組、玉米須純化多糖低、中、高劑量組，每組10只，另隨機取10只小鼠(未造模)作為空白組，給藥方案如表5:表5給藥方案組別藥品給藥劑量以上各組均灌胃(ig)給藥，給藥體積為20mL/kg,每天一次，連續(xù)給藥30d。2丄3相關指標的測定給藥第10d、20d時，尾靜脈取血，測定藥后lh空腹血糖值，即為給藥第10d、20d給藥后空腹血糖值；末次藥后lh尾靜脈取血，測定空腹血糖值，即為給藥第30d的藥后空腹血糖值；摘眼球取血，離心取血清，測定血清中CHO、TG含量(在吉化總醫(yī)院用半自動生化分析儀測定)。2.2實驗結果蒸餾水20mL/kg蒸餾水20mL/kg玉米須純化多糖200mg/kg玉米須純化多糖400mg/kg玉米須純化多糖800mg/kgrTT1rTTjTTT^自對經(jīng)組組遣遣遣白塾劑劑劑空模低中高以下所有結果均采用Excel進行組間差異性t檢驗，結果以均值士標準差(i士s)表示。2.2.1玉米須多糖對小鼠血糖的影響與空白組比較，模型組第0d、10d、20d和30d的血糖均顯著升高(P<0.05)，表明小鼠高血糖模型成功；與模型組比較，陽性藥組第20d和30d血糖值降低(PO.05)，純化多糖中劑量組和大劑量組第30d血糖值降低(P<0.05)，結果見表6。表6玉米須多糖對小鼠血糖的影響(3f士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與空白組比較，*P<0.05;與模型組比較，#P<0.052.2.2玉米須多糖對小鼠血清膽固醇和甘油三酯的影響與空白組比較，模型組小鼠血TG水平顯著升高(P<0.05)，表明高血糖小鼠伴有明顯血脂異常；與模型組比較，純化多糖大劑量組高血糖小鼠血中CHO和TG水平顯著降低(PO.05),結果見表7。表7玉米須多糖對小鼠膽固醇和甘油三酯的影響(3f±S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與空白組比較，*P<0.05;與模型組比較，#P<0.05實施例1本發(fā)明的制備方法①備料選取無蟲蛀、無霉變、新鮮的青玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過40目篩，待用；②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過夜，以除去脂溶性雜質，真空過濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇；③水提將脫脂后的藥材分料投入浸提器中，加入10倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于8(TC加熱30min，提取3次，合并提取清液，待用；④濃縮把浸提清夜投入真空旋轉蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5，得濃縮液，待用；⑤脫色把濃縮液投入脫色釜中，在攪拌下加入濃度為20%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時間2h，加熱溫度50'C，趁熱過濾，得脫色液，加熱回去殘留雙氧水，待用；⑥醇析把脫色液投入醇析釜中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為70%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑦除雜把玉米須多糖加適量去離子水或蒸餾水溶解，加木瓜蛋白酶，酶底比1.0%、pH值5.5、體系在水浴中水解1.5h,溫度為40'C，反應完后沸水浴滅酶IOmin;離心，除沉淀，待用；⑧透析把玉米須多糖澄清液裝入透析袋中，用去離子水或蒸餾水透析48h，以去除無機鹽、低分子量雜質，透析處理后，取出透析內液，待用；⑨醇析把脫透析液投入醇析釜中，加入95%乙醇、使料液中乙醇濃度為75%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑩干燥把玉米須多糖沉析物至真空干燥箱中，干燥，過100目篩，得玉米須多糖。實施例2本發(fā)明的制備方法-①備料選取無蟲蛀、無霉變、新鮮的青玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過40目篩，待用；②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過夜，以除去脂溶性雜質，真空過濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇；③水提將脫脂后的藥材分料投入浸提器中，加入15倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于85'C加熱30min，提取3次，合并提取清液，待用；④濃縮把浸提清夜投入真空旋轉蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5，得濃縮液，待用；⑤脫色把濃縮液投入脫色釜中，在攪拌下加入濃度為25%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時間2h，加熱溫度50'C，趁熱過濾，得脫色液，加熱回去殘留雙氧水，待用；⑥醇析把脫色液投入醇析釜中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為72%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑦除雜把玉米須多糖加適量去離子水或蒸餾水溶解，加木瓜蛋白酶，酶底比1.0%、pH值5.5、體系在水浴中水解1.5h,溫度為40'C，反應完后沸水浴滅酶IOmin;離心，除沉淀，待用；⑧透析把玉米須多糖澄清液裝入透析袋中，用去離子水或蒸餾水透析48h，以去除無機鹽、低分子量雜質，透析處理后，取出透析內液，待用；⑨醇析把脫透析液投入醇析釜中，加入95%乙醇、使料液中乙醇濃度為80%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；干燥把玉米須多糖沉析物至真空干燥箱中，干燥，過100目篩，得玉米須多糖。實施例3本發(fā)明的制備方法①備料選取無蟲蛀、無霉變、新鮮的青玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過40目篩，待用；②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過夜，以除去脂溶性雜質，真空過濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇；③水提將脫脂后的藥材分料投入浸提器中，加入20倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于90。C加熱30min，提取3次，合并提取清液，待用；濃縮把浸提清夜投入真空旋轉蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5，得濃縮液，待用；⑤脫色把濃縮液投入脫色釜中，在攪拌下加入濃度為30%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時間2h，加熱溫度50'C，趁熱過濾，得脫色液，加熱回去殘留雙氧水，待用；⑥醇析把脫色液投入醇析釜中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為75%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑦除雜把玉米須多糖加適量去離子水或蒸鎦水溶解，加木瓜蛋白酶，酶底比1.0%、pH值5.5、體系在水浴中水解1.5h,溫度為40。C，反應完后沸水浴滅酶IOmin;離心，除沉淀，待用；⑧透析把玉米須多糖澄清液裝入透析袋中，用去離子水或蒸餾水透析48h，以去除無機鹽、低分子量雜質，透析處理后，取出透析內液，待用；⑨醇析把脫透析液投入醇析釜中，加入95%乙醇、使料液中乙醇濃度為85%(v/v),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑩干燥把玉米須多糖沉析物至真空干燥箱中，干燥，過100目篩，得玉米須多糖。所得干燥物用a-萘酚、茚三酮鑒定為多糖、用苯酚硫酸法進行含量測定。每克玉米須純化多糖(含量40~50%以上)相當于玉米須80100g。17實施例4本發(fā)明膠囊劑的制備玉米須多糖10.0g，藥用淀粉240g,二者充分混合，裝膠囊，制成1000粒膠囊，每粒重0.25g,含玉米須多糖10mg。權利要求1、玉米須多糖在制備治療高血脂癥的藥物中的應用。2、玉米須多糖在制備治療糖尿病伴高血脂癥的藥物中的應用。3、如權利要求1或2所述的藥物中應用，其特征在于玉米須多糖的制備方法包括下列步驟①備料選取無蟲蛀、無霉變、新鮮的青玉米須為原料，洗凈、干燥、粉碎，過40目篩，待用；②脫脂玉米須粉料加入95%乙醇，浸泡過夜，以除去脂溶性雜質，真空過濾，濾餅再用相同濃度乙醇處理一次，待用；回收乙醇；③水提將脫脂后的藥材分料投入浸提器中，加入1020倍量的的去離子水，攪拌，浸泡24h后，于8090。C加熱30min,提取3次，合并提取清液，待用；④濃縮把浸提清夜投入真空旋轉蒸發(fā)儀中濃縮，減壓、低溫濃縮至料液原體積1/5，得濃縮液，待用；⑤脫色把濃縮液投入脫色釜中，在攪拌下加入濃度為2030%的雙氧水，混合均勻，加熱，脫色時間2h，加熱溫度50'C，趁熱過濾，得脫色液，加熱回去殘留雙氧水，待用；⑥醇析把脫色液投入醇析釜中，加入適量的95%乙醇，使料液中乙醇濃度為70%~75%(V/V),攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑦除雜把玉米須多糖加適量去離子水或蒸餾水溶解，加木瓜蛋白酶，酶底比·1.0%、pH值5.5、體系在水浴中水解1.5h,溫度為40'C，反應完后沸水浴滅酶IOmin;離心，除沉淀，待用；⑧透析把玉米須多糖澄清液裝入透析袋中，用去離子水或蒸餾水透析48h，以去除無機鹽、低分子量雜質，透析處理后，取出透析內液，待用；⑨醇析把脫透析液投入醇析釜中，加入95%乙醇、使料液中乙醇濃度為75%~85%(V/V)，攪拌、混合均勻，靜止于冰箱中，醇析過夜，離心分離，收集液相回收乙醇，得沉析物為玉米須多糖，待用；⑩干燥把玉米須多糖沉析物至真空干燥箱中，干燥，過100目篩，得玉米須多糖。全文摘要本發(fā)明涉及玉米須多糖在制備治療高血脂癥的藥物中的應用，屬于醫(yī)藥領域，尤其是指玉米須多糖的新藥物用途。玉米須多糖在制備治療高血脂癥或糖尿病伴高血脂癥的藥物中的應用。本發(fā)明的有益效果是玉米須多糖為純天然藥物，在降低血糖的同時，還能夠降低血脂，說明其降血糖機制不是單一環(huán)節(jié)，而是多方面、多靶點綜合作用的結果，將其作為防治糖尿病及其并發(fā)癥的藥物開發(fā)具有重要的現(xiàn)實意義。增加植物資源的新用途；帶動區(qū)域經(jīng)濟的發(fā)展。文檔編號A61K31/715GK101658528SQ200910067588公開日2010年3月3日申請日期2009年9月25日優(yōu)先權日2009年9月25日發(fā)明者周鴻立,艷張,楊英杰,王亞紅,俊邱,鐘方麗申請人:吉林化工學院