專利名稱：飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺及其合成方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及飽和脂肪鏈胺三肽酯，尤其涉及一系列具有免疫抑制活性的飽和脂肪 鏈胺HiS-Gly-AA三肽酰胺，還涉及這些飽和脂肪鏈胺三肽酯的制備方法以及它們作為免 疫抑制劑的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
據(jù)統(tǒng)計(jì)，截至2002年底，全球共進(jìn)行各種器官移植935792例次，其中腎移植 585877例次、肝臟移植112153例次、心臟移植66559例次。此外，胰、肺、小腸等器官移植 及心_肺、胰-腎、肝-腎、肝-腸等多臟器聯(lián)合移植也都獲得成功并應(yīng)用于臨床。目前，腎 移植1年人/腎存活率達(dá)90 % 95 %，5年存活率超過(guò)70 %。臟器移植要形成移植耐受， 這就要求患者終身服用免疫抑制劑。器官移植的進(jìn)展在很大程度上取決于免疫抑制劑的進(jìn) 展。近幾十年，雖然新免疫抑制藥物使得器官移植在臨床取突飛猛進(jìn)發(fā)展，但它們的毒副作 用，例如腎毒性和骨髓抑制作用仍然是器官移植造必須面對(duì)的嚴(yán)重問(wèn)題。環(huán)孢菌素A是目前臨床常用的免疫抑制劑。由于環(huán)孢菌素A的水溶性極差以及腎 毒性很強(qiáng)，所以無(wú)論是劑型還是療效都不盡人意。提高環(huán)孢菌素A制劑的水溶性，降低環(huán)孢 菌素A的腎毒性，一直是環(huán)孢菌素A研究的熱點(diǎn)。尿毒素肽具有免疫抑制活性。發(fā)明人認(rèn) 識(shí)到，把尿毒素肽與脂肪鏈胺綴合生成的酰胺具有自組裝性能，因而可以用作具有免疫抑 制活性的載藥材料。例如可以用來(lái)包裹環(huán)孢菌素A，達(dá)到提高環(huán)孢菌素A的水溶性和降低環(huán) 孢菌素A腎毒性的雙重目的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是，將尿毒素三肽與脂肪鏈胺綴合，得到具有免疫抑制活性的 飽和脂肪鏈胺三肽酰胺綴合物。本發(fā)明的目的之一是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺His-Gly-AA-NH-CH2- (CH2) nCH3 I其中，通式I 中的 AA 為 Glu 或 Lys，n 為 6、8、10、12、14 或 16。本發(fā)明的目的之二是，提供一種制備上述具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺 His-Gly-AA三肽酰胺的方法。本發(fā)明的目的之二是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種制備通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺 的方法，該方法包括(1)按照現(xiàn)有液相合成技術(shù)，將飽和脂肪胺依次與谷氨酸或賴氨酸的保護(hù)中間體、 甘氨酸的保護(hù)中間體、組氨酸的保護(hù)中間體逐步接肽合成保護(hù)基保護(hù)的飽和脂肪胺三肽綴 合物，所述飽和脂肪胺為 CH3(CH2)nCH2NH2, η = 6、8、10、12、14 或 16 ；(2)依次脫去保護(hù)基保護(hù)的飽和脂肪胺三肽綴合物的N端保護(hù)基和C端保護(hù)基得到目標(biāo)化合物。其中所述N端保護(hù)基是對(duì)多肽的N端進(jìn)行保護(hù)時(shí)常用的保護(hù)基團(tuán)，例如可以是叔 丁氧羰基(Boc)，芐氧羰基(Z)；所述C端保護(hù)基是對(duì)多肽的C端進(jìn)行保護(hù)時(shí)常用的保護(hù)基 團(tuán)，例如可以是芐氧基(OBzl)；所述液相合成技術(shù)及所述保護(hù)、脫保護(hù)的過(guò)程是本領(lǐng)域的 常規(guī)并公知的技術(shù)。當(dāng)AA為Glu時(shí)，所述飽和脂肪鏈胺三肽綴合物的制備方法可以用圖1的路線概 括，具體的，所述方法包括(1)在(Boc)2O和NaOH存在下將甘氨酸轉(zhuǎn)化為N-叔丁氧羰基甘氨酸；(2)在(Boc)2O和三乙胺存在下將組氨酸轉(zhuǎn)化為N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰 基_組氨酸；(3)在DCC、HOBt、無(wú)水THF存在下將N-叔丁氧羰基-谷氨酸-Y -芐酯與飽和脂 肪胺縮合，生成飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基_ Y _芐酯-谷氨酸酰胺；(4)在氯化氫_乙酸乙酯中將飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基_ Y _節(jié)酯-谷氨酸酰胺 脫除叔丁氧羰保護(hù)基，生成飽和脂肪胺Y _芐酯-谷氨酸酰胺；(5)在無(wú)水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪胺Y _芐酯-谷氨酸酰胺與 N-叔丁氧羰基甘氨酸縮合，生成飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基甘氨酰Y _芐酯-谷氨酸酰胺；(6)在氯化氫-乙酸乙酯存在下將飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基甘氨酰Y-芐酯-谷 氨酸酰胺脫除叔丁氧羰基生成飽和脂肪胺甘氨酰Y _芐酯-谷氨酸酰胺；(7)在無(wú)水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪胺甘氨酰Y -芐酯-谷氨酸酰 胺與N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基_組氨酸縮合，生成飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基-Nim-叔 丁氧羰基組氨酰甘氨酰Y _芐酯-谷氨酸酰胺；(8)在氯化氫-乙酸乙酯中將飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基組氨酰 甘氨酰Y-芐酯-谷氨酸酰胺脫除叔丁氧羰基，生成飽和脂肪胺組氨酰甘氨酰Y-芐酯-谷 氨酸酰胺；(9)在無(wú)水乙胺中，在Pd/C存在下將飽和脂肪胺組氨酰甘氨酰Y-芐酯-谷氨酸 酰胺氫解，生成飽和脂肪胺組氨酰甘氨酰谷氨酸酰胺。當(dāng)AA為L(zhǎng)ys時(shí)，所述飽和脂肪鏈胺三肽綴合物的制備方法可以用圖2的路線概 括，具體的，所述方法包括(1)在(Boc) 20和NaOH存在下將甘氨酸轉(zhuǎn)化為N-叔丁氧羰基甘氨酸；(2)在(Boc)2O和三乙胺存在下將組氨酸轉(zhuǎn)化為N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰 基_組氨酸；(3)在DCC、HOBt、無(wú)水THF存在下將Na-叔丁氧羰基-Ne-芐氧羰基賴氨酸與飽 和脂肪胺縮合，生成飽和脂肪胺Na -叔丁氧羰基-N、芐氧羰基賴氨酸酰胺；(4)在氯化氫-乙酸乙酰胺中將飽和脂肪胺Na-叔丁氧羰基-N、芐氧羰基賴氨 酸酰胺脫除叔丁氧羰保護(hù)基，生成飽和脂肪胺N、芐氧羰基賴氨酸酰胺；(5)在無(wú)水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪胺Nε -芐氧羰基賴氨酸酰胺 與N-叔丁氧羰基甘氨酸縮合，生成飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸 酰胺；(6)在氯化氫-乙酸乙酰胺存在下將飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基甘氨酰Ne -芐氧
4羰基賴氨酸酰胺脫除叔丁氧羰基生成飽和脂肪胺甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸酰胺；(7)在無(wú)水THF中，在DCC和HOBt存在下將飽和脂肪胺甘氨酰Ne-芐氧羰基賴 氨酸酰胺與N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基-組氨酸縮合，生成飽和脂肪胺N-叔丁氧羰 基-Nim-叔丁氧羰基組氨酰甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸酰胺；(8)在氯化氫-乙酸乙酰胺中將飽和脂肪胺N-叔丁氧羰基-Nim-叔丁氧羰基組氨 酰甘氨酰N、芐氧羰基賴氨酸酰胺脫除叔丁氧羰基，生成飽和脂肪胺組氨酰甘氨酰Ne -芐 氧羰基賴氨酸酰胺；(9)在無(wú)水乙醇中，在Pd/C存在下將飽和脂肪胺組氨酰甘氨酰Νε -芐氧羰基賴氨 酸酰胺氫解，生成飽和脂肪胺組氨酰甘氨酰賴氨酸酰胺。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽 酰胺具有優(yōu)秀的免疫抑制作用，臨床上可作為免疫抑制劑應(yīng)用。并且本發(fā)明的飽和脂肪鏈 胺His-Gly-AA三肽酰胺水溶液中均能自組裝成粒經(jīng)穩(wěn)定在101-2280nm的納米球，可作為 制備微乳或脂質(zhì)體藥物載體的制劑材料，另外可作為制備微乳、脂質(zhì)體藥物載體的靶向制 劑材料。


圖1為當(dāng)通式I中AA為Glu時(shí)6種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺 His-Gly-Glu三肽酰胺的合成路線。i)無(wú)水THF、DCC、H0Bt和NMM ;ii)4N氯化氫-乙酸乙 酯溶液；iii)無(wú)水乙胺、PdA^PH2 ；7a η = 6,7b η = 8,7c η = 10，7d η = 12，7e η = 14， 7f η = 16。圖2為當(dāng)通式I中AA為L(zhǎng)ys時(shí)6種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺 His-Gly-Lys三肽酰胺的合成路線。i)無(wú)水THF、DCC、H0Bt和NMM ;ii)4N氯化氫-乙酸乙 酯溶液；iii)無(wú)水乙醇、Pd/C 禾口 H2 ； 14a η = 6，14b η = 8，14c η = 10，14d η = 12，14e η =14，14f η = 16。為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實(shí)施例。這些實(shí)施例完全是例證性的，它 們僅用來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述，不應(yīng)當(dāng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 制備 Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3將1. OOg (2. 96mmol) Boc-Glu (OBzl)溶于 20ml 無(wú)水 THF，冰浴下往得到的溶 液中加入0. 39g(2.96mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。10分鐘后加入 0. 74g(3. 55mmol) 二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)。得到反應(yīng)液(I)。冰浴下把0. 39g(2. 96mmol) 脂肪胺CH3(CH2)6CH2NH2懸浮于20ml無(wú)水THF中，然后加入Iml N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH 8-9。攪拌35分鐘，得到反應(yīng)液(II)。冰浴下把反應(yīng)液⑴加入反應(yīng)液(II)中，先冰浴下攪 拌lh，再室溫?cái)嚢?2h，TLC (氯仿/甲胺，10 1)顯示Boc-Glu (Z)消失。濾除二環(huán)己基脲 (D⑶)，減壓除去THF。殘留物用50ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶 液洗、飽和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和飽和NaCl水溶液洗。有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4 干燥、過(guò)濾、濾液減壓濃縮至干，得到1. 35g(93% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。ESI-MS(m/ ζ) 449 [Μ+Η]+, [α ]20d = -13. 7 (c = 1. 0，CH3OH)。
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實(shí)施例 2 制備 Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例1 的方法由由 1. OOg(2. 96mmol)Boc-Glu (OBzl)和 0. 46g(2. 96mmol) CH3(CH2)8CH2NH2 制得 1. 35g(96% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI_MS(m/z) :477[M+H]+， [α ]20d = -4. l(c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例3 制備 Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例1 的方法由 1. OOg(2. 96mmol)Boc-Glu(OBzl)和 0. 55g(2. 96mmol) CH3(CH2)ltlCH2NH2 制得 1. 45g(97% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :505[M+H]+， [α ]20d = -3. 4(c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例4 制備 Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例1 的方法由 1. OOg(2. 96mmol)Boc-Glu(OBzl)和 0. 63g(2. 96mmol) CH3(CH2)12CH2NH2 制得 1. 48g(94% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :533[M+H]+， [α ]20d = -5. 6(c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例5 制備 Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例1 的方法由 1. OOg(2. 96mmol)Boc-Glu(OBzl)和 0. 72g(2. 96mmol) CH3(CH2)14CH2NH2 制得 1. 55g(93% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :561[M+H]+， [α ]20d = -5. 7(c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例6 制備 Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例1 的方法由 1. OOg(2. 96mmol)Boc-Glu(OBzl)和 0. 69g(2. 96mmol) CH3(CH2)16CH2NH2 制得 1. 59g(91 % )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :589[M+H]+， [α ]20d = -1· 6 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例 7 制備 HCl · Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3將1. 35g(3. Olmmol) Boc-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)6CH3 溶解在 25ml 4N 氯化氫-乙酸 乙酯溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC (氯仿甲胺，5 1)顯示Boc-Glu (OBzl)-OCH2 (CH2)6CH3 消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓濃縮以除去氯化氫。最后 加少量乙醚將殘留物研磨成1. 15g(99% )標(biāo)題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 349 [Μ+Η]+, [α ]20d = -4. 6 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例8 制備 HCl · Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例7 的方法從 1. 35g (2. 84mmol) Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3 制得 1. 16g(99% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 377 [Μ+Η]+, [ α J20d = -4. 8 (c = 1. 0， CH3OH)。實(shí)施例9 制備 HCl · Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 45g(2. 87讓ol) Boc-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2) 10CH3 制得 1. 22g(96% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 405 [Μ+Η]+, [ α J20d = -8. 1 (c = 1. 0， CH3OH)。實(shí)施例10 制備 HCl · Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例7 的方法從 1. 48g (2. 78mmol) Boc-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3 制得 1. 24g(95% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 433 [Μ+Η]+, [ α J20d = -3. 6 (c = 1. 0， CH3OH)。實(shí)施例11 制備 HCl · Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 14CH3
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按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 55g(2. 77讓ol) Boc-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2) 14CH3 制得 1. 27g(92% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 461 [Μ+Η]+, [ α J20d = -2. 8 (c = 1. 0， CH3OH)。實(shí)施例12 制備 HCl · Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 59g(2. 7(kimol) Boc-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2) 16CH3 制得 1. 29g(91% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 489 [Μ+Η]+, [ α J20d = -3. 3 (c = 1. 0， CH3OH)。實(shí)施例13 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 50g (2. 86mmol) Boc-Gly 和 1. IOg (2. 86mmol) HCl · Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2)6CH3 制得 1. 23g(85% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/ ζ) :506[Μ+Η]+, [α ]20d = -13. 2 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例14 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 47g (2. 67mmol) Boc-Gly 和 1. IOg (2. 67mmol) HCl · Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2)8CH3 制得 1. 07g(83% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/ ζ) :534[Μ+Η]+, [α ]20d = -9. O (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例15 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 48g (2. 72mmol) Boc-Gly 和 1. 20g(2. 72mmol) HCl · Glu(OBzl)-NHCH2(CH2)10CH3 制得 1. 39g(91% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/ ζ) :562[Μ+Η]+, [α ]20d = -11. 4(c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例16 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 45g (2. 56mmol) Boc-Gly 和 1. 20g(2. 56mmol) HCl · Glu(OBzl)-NHCH2(CH2)12CH3 制得 1. 28g(85% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/ ζ) :590[Μ+Η]+, [α ]20d = -4. 3 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例17 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 43g (2. 42mmol) Boc-Gly 和 1. 20g(2. 42mmol) HCl · Glu(OBzl)-NHCH2(CH2)14CH3 制得 1. 42g(95% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/ ζ) :618[Μ+Η]+, [α ]20d = -6. 2 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例18 制備 Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 40g(l. 92mmol) Boc-Gly 和 1. 20g(2. 29mmol) HCl 'Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3 制得 1. 37g(93% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。ESI-MS (m/ ζ) 646 [Μ+Η]+, [α ]20d = -8. 2 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例19 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 20g (2. 38mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3 制 得 1. 03g(95% )標(biāo)題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 406[Μ+Η]+, [ α J20d = -4. 6 (c =1. 0，CH3OH)。實(shí)施例20 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. OOg (1. 87mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2)8CH3 制 得 0. 92g(99% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS (m/z) :434[Μ+Η]+，[ α ]2°D = -4. 8 (c = 1. O, CH3OH)。
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實(shí)施例21 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 30g (2. 32mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3 制 得 1. 07g(93% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) 462[Μ+Η]+, [ α J20d = -8. 1 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例22 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 20g (2. 04mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3 制 得 1. 02g(95% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS (m/z) 490 [Μ+Η]+, [ α J20d = -3. 6 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例23 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 40g (2. 27mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 14CH3 制 得 1. 13g(90%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS (m/z) 518 [Μ+Η]+, [ α J20d =-5. 8 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例24 制備 HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例7 的方法，從 1. 30g (2. 02mmol) Boc-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3 制 得 1. 14g(97% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS (m/z) 546 [Μ+Η]+, [ α J20d = -3. 3 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例25 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 830g (2. 33mmol) Boc-His (Boc)和 1. 03g (2. 33mmol) HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體 1.06g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 61%。ESI-MS(m/z) :743[Μ+Η]+，[α ]20D =-18. 9 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ. ρ. :52· 1-52. 9°C。實(shí)施例26 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 70g(l. 95mmol)Boc-His (Boc)和 0. 92g(l. 95mmol) HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體 l.Olg，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 67%。ESI-MS(m/z) :771[Μ+Η]+，[α ]20D =-10. 1 (c = 1· 0，CH3OH)，Μ. ρ. :47· 4-48. 7°C。實(shí)施例2 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 76g(2. 15mmol) Boc-His (Boc)和 1. 07g(2. 15mmol)HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體1. 20g,純 化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 70%。ESI-MS(m/z) :799[Μ+Η]+，[α ]20D = -15. 1 (c =1.0，CH3OH)，Μ. ρ. 47. 4-48. 7°C。實(shí)施例28 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 69g(l. 94mmol)Boc-His (Boc)和 1. 02g(l. 94mmol)HCl · Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體834mg，純 化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 52%。ESI-MS(m/z) :827[M+H]+，[a]20D = -16. 6 (c =1.0，CH3OH)，Μ. p. 47. 2-48. 4°C。實(shí)施例29 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 73g(2. 04mmol)Boc-His (Boc)禾Π 1. 13g(2. 04mmol) HCl · Gly-Glu (OBzl) -OCH2 (CH2) 14CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體
81.08g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 62%。ESI-MS(m/z) :855[Μ+Η]+，[α ]20D =-13. 2 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ. ρ. :45· 9-47. 1°C。實(shí)施例30 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例1 的方法由 0. 69g(l. 96mmol)Boc-His (Boc)和 1. 14g(l. 96mmol)HC 1 · Gly-Glu(OBzl)-NHCH2(CH2)l6CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色透明油狀物 1. 19g，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 69%。ESI-MS (m/z) :883[Μ+Η]+，[α ]20D =-10. 9 (c = 1· 0，CH30H)，Μ. ρ. :48· 1-49. 9°C。實(shí)施例31 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例7的方法從1. OOmg (1. 34mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 6CH3 制得 0. 74g(95% )標(biāo)題化合物，為 無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :543[M+H] + 0實(shí)施例32 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例7的方法，從1. OOmg (1. 29mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2)8CH3 制得 0. 71g(91% )標(biāo)題化合物，為 無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :571[M+H] +。實(shí)施例33 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例7的方法，從1. 20g(l. 50mmol)Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2)ltlCH3 制得 0. 85g(90% )標(biāo)題化合物，為 無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :599[M+H] + 0實(shí)施例34 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例7的方法，從800mg(0. 97mmol)Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2)12CH3 制得 0. 59g(92% )標(biāo)題化合物，為 無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :627[M+H] +。實(shí)施例35 制備 HCl · HiS-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例7的方法，從1. 08g(l. 26mmol)Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2)14CH3 制得 0. 79g(91% )標(biāo)題化合物，為 無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :655[M+H] +。實(shí)施例36 制備 HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例7的方法，從1. IOg (1. 25mmol)Boc-His (Boc)-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2)16CH3 制得 0. 84g(93% )標(biāo)題化合物，為 無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :683[M+H] + 0實(shí)施例37 制備 His-Gly-Glu-NHCH2 (CH2) 6CH3 (7a)將740mg(l. 27mmol)HCl .His-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2) 6CH3 用乙醇溶解、加入適 量Pd/C(約5% )、通吐(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干， 制得 518mg(89% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。ESI-MS (m/z) 451 [Μ_Η]_，[a J20d = -18. 9 (c =1. 0，CH3OH)，Μ· ρ· 108. 6-109. 3°C。實(shí)施例38 制備 His-Gly-Glu-NHCH2 (CH2)8CH3 (7b)將710mg(l. 17mmol)HCl .His-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2) 8CH3 用乙醇溶解、加入適 量Pd/C(約5% )、通吐(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。
9制得 634mg(91%)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。ESI-MS(m/z) :479 [Μ_Η]_，[ α ]2°D =-14. 8 (c =1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 115. 8-116. 8°C。實(shí)施例39 制備 His-Gly-Glu-NHCH2 (CH2) 10CH3 (7c)將850mg(l. 35mmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl)-NHCH2 (CH2) 1(ICH3 用乙醇溶解、加入 適量Pd/C(約5% )、通H2(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮 至干。制得634mg(92% )標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。ESI_MS(m/Z) 507[M-H]", [a J20d =-12. 3 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ. p. 109. 4—110. 7°C。實(shí)施例40 制備 His-Gly-Glu-NHCH2 (CH2) 12CH3(7d)將590mg(0. 89mmol)HCl .His-Gly-Glu (OBl)-NHCH2 (CH2) 12CH3 用乙醇溶解、加入適 量Pd/C(約5% )、通吐(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。 制得 462mg(96% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI_MS(m/z) 535 [M-H]", [a J20d = -17. 3 (c =1. 0，CH3OH)，Μ· ρ· 113. 7-115. 3°C。實(shí)施例41 制備 His-Gly-Glu-NHCH2 (CH2) 14CH3(7e)將640mg(0. 92mmol)HCl .His-Gly-Glu (OBl)-NHCH2 (CH2) 14CH3 用乙醇溶解、加入適 量Pd/C(約5% )、通吐(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。 制得 563mg(87% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI_MS(m/z) 563 [M-H]", [a J20d = -11. 9 (c =1. 0，CH3OH)，Μ· ρ· 113. 9-115. 2°C。實(shí)施例42 制備 His-Gly-Glu-NHCH2 (CH2) 16CH3 (7f)將590mg (0. 82mmol)HCl · His-Gly-Glu (OBzl) -NHCH2 (CH2) 16CH3 用乙醇溶解、加 入適量Pd/C(約5% )、通H2(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃 縮至干。制得598mg(87%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI_MS(m/Z) :591[Μ_ΗΓ，[a]20D =-13. 8 (c = 1. 0，CH3OH)，Μ. ρ. :110· 5-111. 1°C。實(shí)施例43 制備 Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3將1. OOg (2. 6mmol) Boc-Lys (Z)溶于20ml無(wú)水THF，冰浴下往得到的溶液中加入 0. 35g(2. 6mmol)N-羥基苯并三氮唑(HOBt)，并使完全溶解。10分鐘后加入0. 65g(3. Immo 1) 二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)。得到反應(yīng)液(III)。冰浴下把0.34g(2.6mmol)脂肪胺 CH3(CH2)6CH2NH2懸浮于20ml無(wú)水THF中，然后加入Iml N-甲基嗎啉(NMM)，調(diào)pH 8_9。攪 拌35分鐘，得到反應(yīng)液(IV)。冰浴下把反應(yīng)液(III)加入反應(yīng)液(IV)中，先冰浴下攪拌 lh，再室溫?cái)嚢?2h，TLC(氯仿/甲醇，10 1)顯示Boc-Lys(Z)消失。濾除二環(huán)己基脲 (D⑶)，減壓除去THF。殘留物用50ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用飽和NaHCO3水溶 液洗、飽和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和飽和NaCl水溶液洗。有機(jī)相用無(wú)水Na2SO4 干燥、過(guò)濾、濾液減壓濃縮至干，得到1. 21g(95% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。ESI-MS(m/ z) :492[M+H]+, [a ]20d = -5. 8 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例 44 制備 Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例43 的方法由 1. OOg (2. 6mmo) Boc-Lys (Z)和 0. 42g(2. 6mmol) CH3(CH2)8CH2NH2 制得 1. 33g(99% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。ESI-MS(m/z) :520[M+H]+， [a ]20d = -7. 5(c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例45 制備 Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例43 的方法 1. OOg (2. 60mmol) Boc-Lys (Z)和 0. 48g(2. 60mmol)
10CH3(CH2)10CH2NH2制得1. 28g(90% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m [a J20d = -6. 6 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例46 制備 Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例43 的方法由 1.00g(2.60mmol)Boc-Lys(Z)-0H*0. CH3(CH2)12CH2NH2制得1. 31g(90% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m [a J20d = -12. 7 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例47 制備 Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例43 的方法由 1. OOg (2. 60mmol) Boc-Lys (Z)和 0. CH3(CH2)14CH2NH2制得1. 55g(99% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m [a J20d = -1. 8 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例48 制備 Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例43 的方法由 1. OOg (2. 60mmol) Boc-Lys (Z)和 0. CH3(CH2)16CH2NH2制得1. 48g(90% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m [a J20d = -3. 5 (c = 1. 0，CH3OH)。
實(shí)施例 49 制備 HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3將1. 21g(2. 46mmol) Boc-Lys (Z)-NHCH2 (CH2)6CH3 溶解在 25ml 4N 氯化氫-乙酸 乙酯溶液中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC(氯仿甲醇，5 1)顯示Boc-Lys (Z)-NHCH2 (CH2)6CH3 消失，減壓濃縮除去乙酸乙酯，殘留物反復(fù)加少量乙醚進(jìn)行減壓濃縮以除去氯化氫。最后 加少量乙醚將殘留物研磨成1.04g(99% )標(biāo)題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 392[Μ+Η]+, [α ]20d = 17. 2 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例50 制備 HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例49 的方法 1. 33g(2. 55mmol) Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3 制得 1. 05g(90% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) :420[Μ+Η]+, [ α J20d = 14. 9 (c = 1.0， CH3OH)。實(shí)施例51 制備 HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例49 的方法，從 1. 28g (2. 34mmol) Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3 制得 1. 09g(96% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) 448[Μ+Η]+, [ α J20d = 21. 7(c = 1. 0， CH3OH)。實(shí)施例52 制備 HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例49 的方法，從 1. 31g (2. 27mmol) Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3 制得 1. 08g(93% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 476 [Μ+Η]+, [ α J20d = 10. 3 (c = 1. 0， CH3OH)。實(shí)施例53 制備 HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例49 的方法，從 1. 55g (2. 57mmol) Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3 制得 1. 27g(95% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) :504[Μ+Η]+，[ α ]2°D = 9. 5 (c = 1.0， CH3OH)。實(shí)施例 54 制備 HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例 49 的方法，從 1. 48g (2. 35mmol) Boc-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3 制得 1. 23g(94% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :532[M+H]+，[ α ]2°D = 3. 8 (c = 1.0，
/ζ) 548 [Μ+Η]+,
.55g(2. 60mmol) /ζ) 576 [M+H]
.63g(2. 60mmol) /z) 603 [M+H]
.69g(2. 60mmol) /z) :631[M+H]+,
11CH3OH)。實(shí)施例55 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例43 的方法 0. 41g(2. 34mmol)Boc-Gly 和 1. OOg (2. 34mmol) HCl · Lys (Z)-NHCH2 (CH2)6CH3 制得 1. 19g(93% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 549 [Μ+Η]+, [α ]20d = -6. 6 (c = 1. 0, CH3OH)。實(shí)施例56 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 34g(l. 95mmol) Boc-Gly 和 1. OOg (1. 95mmol) HCl · Lys (Z)-NHCH2 (CH2)8CH3 制得 1. 07g(95% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 577 [M+H]+，[a J20d = -7. 0 (c = 1. 0, CH3OH)。實(shí)施例57 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 33g(l. 85mmol) Boc-Gly 和 1. OOg (1. 85mmol) HCl · Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 1(1CH3 制得 1. 07g(96% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 605 [M+H]+，[a J20d = -5. 7 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例58 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 31g(l. 75mmol) Boc-Gly 和 1. OOg (1. 75mmol) HCl · Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 12CH3 制得 1. 07g(97% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 633 [M+H]+，[a J20d = -4. 5 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例 59 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 36g (2. 04mmol) Boc-Gly 和 1. IOg (2. 04mmol) HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3 制得 1. 31g(97% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 661 [M+H]+，[a J20d = -8. 8 (c = 1. 0，CH3OH)。實(shí)施例60 制備 Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 34g(l. 92mmol)Boc-Gly 和 1. 20g(l. 92mmol) HCl · Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3 制得 1. 22g(93% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) 689[Μ+Η]+, [α ]20d = -14. 1 (c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例61 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例49 的方法，從 1. 19g(2. 16mmol) Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3 制得 1. OOg(95% )標(biāo)題化合物，為米黃色油狀物。ESI-MS(m/z) 449[Μ+Η]+, [ α J20d = -6.4(c = 1. O, CH3OH)。實(shí)施例62 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例49 的方法，從 1. 07g(l. 85mmol)Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2)8CH3 制得
0.93g(98%)標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) :477[Μ+Η]+，[ α ]2°D =-4· 8 (c =
1.O, CH3OH)。實(shí)施例63 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例49 的方法，從 1. 07g(l. 77mmol)Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3 制得
0.88g(92% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) 505[M+H][α ]20D = -4. 1 (c =
1.O, CH3OH)。實(shí)施例 64 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例 49 的方法，從 1. 07g(l. 69mmol)Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3 制得0.91g(95% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) :533[Μ+Η]+，[α ]20D = -24. 2 (c = 1· 0，CH3OH)。實(shí)施例65 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例49 的方法，1. 17g(l. 77匪ol)Boc-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 14CH3 制得
0.99g(94% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) :561[Μ+Η]+，[α ]20D = -29. 9 (c = 1· 0，CH3OH)。實(shí)施例66 制備 HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例49 的方法，從 1. 22g(l. 77mmol)Boc-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3 制得 1.04g(94% )標(biāo)題化合物，為米黃色固體。ESI-MS(m/z) :589[Μ+Η]+，[α ]20D = -3. 3 (c = 1· 0，CH3OH)。實(shí)施例67 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 73g(2. 06mmol) Boc-His (Boc)和 1. Og (2. 06mmol) HCl -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體1. 02g,純 化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 63%。ESI-MS(m/z) :786[Μ+Η]+，[α ]20D = -11. l(c =1.0，CH3OH)，Μ. p. 67. 2-68. 7°C。實(shí)施例68 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 65g(l. 81mmol) Boc-His (Boc)和 0. 93g(l. 81mmol) HCl -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體809mg，純 化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 55%。ESI-MS(m/z) :814[M+H]+，[a]20D = -22. 6 (c =1.0，CH3OH)，Μ. p. 96. 1-97. 2°C。實(shí)施例69 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 53g(l. 47mmol) Boc-His (Boc)和 0. 80g(l. 47mmol) HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體718mg， 純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 58%。ESI-MS (m/z) 842 [M+H][ a J20d =-10. O (c =1.0，CH3OH)，Μ. p. 67. 8-68. 9°C。實(shí)施例70 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 56g(l. 58mmol) Boc-His (Boc)和 0. 90g(l. 58mmol) HCl · Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)無(wú)色固體 688mg，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 50%。ESI_MS(m/z) :870[M+H]+，[a ]20D =-10. O (c = 1· 0，CH3OH)，Μ. ρ. :61· 4-62. 5°C。實(shí)施例71 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 54g(l. 51mmol) Boc-His (Boc)和 0. 90g(l. 51mmol) HCl ·Gly-Lys (Z) -OCH2 (CH2) 14CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色固體827mg，純 化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 61%。ESI-MS (m/z) 898 [M+H]+, [ a J20d = -9. 3 (c =
1.0，CH3OH)，Μ. p. 64. 1-64. 6°C。實(shí)施例72 制備 Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例43 的方法由 0. 56g(l. 60mmol) Boc-His (Boc)和 1. OOg (1. 60mmol) HCl · Gly-Lys(Z)-NHCH2(CH2)16CH3制得，所得化合物經(jīng)硅膠柱層析純化得無(wú)色透明油狀物 769mg，純化條件氯仿甲醇=50 1，收率為 52%。ESI_MS(m/z) :926[M+H]+，[a ]20D
13=-13. 9 (c = 1. 0，CH3OH)，65. 6-66. 7 °C。實(shí)施例73 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 6CH3按照實(shí)施例49的方法，從800mg(l. 02mmol)Boc-His (Boc)-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2)6CH3 制得 0. 57g(90% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色 固體。ESI-MS(m/z) :586[M+H] + 0實(shí)施例74 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 8CH3按照實(shí)施例49的方法，從700mg(0. 86mmol)Boc-His (Boc)-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2)8CH3 制得 0. 5Og (9O 標(biāo)題化合物，為無(wú)色 固體。ESI-MS(m/z) :614[M+H] + 0實(shí)施例75 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3按照實(shí)施例49的方法，從700mg(0. 83mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 10CH3 制得 0. 52g(92% )標(biāo)題化合物，為無(wú) 色固體。ESI-MS(m/z) :642[M+H] +。實(shí)施例76 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3按照實(shí)施例49的方法，從600mg(0. 69mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 12CH3 制得 0. 44g (91% )標(biāo)題化合物，為無(wú) 色固體。ESI-MS(m/z) :670[M+H] +。實(shí)施例 77 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3按照實(shí)施例49的方法，從800mg (0. 89mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3 制得 0. 62g (95 % )標(biāo)題化合物，為無(wú) 色固體。ESI-MS(m/z) :698[M+H] +。實(shí)施例78 制備 HCl · His-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3按照實(shí)施例49的方法，從700mg (0. 76mmol)Boc-His (Boc) -Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 16CH3 制得 0. 54g (94 % )標(biāo)題化合物，為無(wú) 色固體。ESI-MS(m/z) :726[M+H] +。實(shí)施例79 制備 His-Gly-Lys-NHCH2 (CH2) 6CH3 (14a)將571mg(0. 92mmol)HCl · His-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 6CH3 用乙醇溶解、加入適量 Pd/C(約5%)、通吐(0.021&幻，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。 制得 337mg(81% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色油狀物。ESI_MS(m/Z) :451 [Μ_Η]_，[ α ]2°D = -3. 1 (c =1· 0，CH3OH)，Μ· ρ· 106. 4-107. 8°C。實(shí)施例80 制備 His-Gly-Lys-NHCH2 (CH2) 8CH3 (14b)將500mg(0. 77mmol)HCl · His-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 8CH3 用乙醇溶解、加入適量 Pd/C(約5% )、通吐(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。制 得 330mg(89% )標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。ESI_MS(m/z) :479[Μ_Η]_，[ α ]2°D = -8. 5(cl, CH3OH), Μ. p. 118. 5-120. 4°C。實(shí)施例81 制備 His-Gly-Lys-NHCH2(CH2)iciCH3(Hc)將520mg(0. 77mmol)HCl .His-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 1(ICH3 用乙醇溶解，加入適量 Pd/C(約5% )、通氏(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。制 得 371mg(95%)標(biāo)題化合物，為淡黃色固體。ESI_MS(m/z) :507 [Μ_Η]_，[ α ]2°D =-3. 6 (cl，
14CH3OH)，Μ· ρ· 139. 6-140. 2°C。實(shí)施例82 制備 His-Gly-Lys-NHCH2 (CH2) 12CH3(14d)將440mg(0. 62mmol)HCl .His-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 12CH3 用乙醇溶解，加入適量 Pd/C(約5%)、通吐(0.021&幻，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。 制得 329mg(97%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS (m/z) :535 [Μ-ΗΓ，[ α ]2°D =-8. 8 (cl， CH3OH)，Μ. p. :127. 1-129. 1°C。實(shí)施例83 制備 His-Gly-Lys-NHCH2 (CH2) 14CH3(14e)將620mg (0. 85mmol) HCl ·His-Gly-Lys (Z) -NHCH2 (CH2) 14CH3 用乙醇溶解，加入適量 Pd/C(約5%)、通吐(0.021&幻，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。 制得 376mg(79% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI-MS(m/z) :563[Μ_Η]_，[ α ]2°D = -8. 7(cl, CH3OH) ；Μ. p. 120. 2-120. 8°C。實(shí)施例84 制備 His-Gly-Lys-NHCH2 (CH2) 16CH3(14f)將540mg(0. 71mmol)HCl .His-Gly-Lys (Z)-NHCH2 (CH2) 16CH3 用乙醇溶解，加入適量 Pd/C(約5% )、通氏(0. 02Mba)，室溫?cái)嚢柚猎宵c(diǎn)消失。濾除Pd/C、濾液減壓濃縮至干。制 得 369mg(87% )標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。ESI_MS(m/z) :591[Μ_ΗΓ，[α J20d = -16. 8(cl, CH3OH) ；Μ. p. 137. 8-140. 2°C。試驗(yàn)例1飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞絲裂原增殖的抑 制作用脫頸處死小鼠，無(wú)菌取脾，用200目鋼網(wǎng)和注射器芯研磨，用HANK’ S液洗兩次， 1500轉(zhuǎn)/分條件下離心10分鐘，計(jì)數(shù)后用完全RPMI-1640培養(yǎng)液配成5X106/ml個(gè)脾淋 巴細(xì)胞，加100 μ 1細(xì)胞懸液于96孔培養(yǎng)板中(每孔含5Χ106個(gè)細(xì)胞)。每孔加20 μ 1 ConA (ConA終濃度為5 μ g/ml)，該96孔培養(yǎng)板置于體積分?jǐn)?shù)為0. 05的CO2飽和濕度的培養(yǎng) 箱內(nèi)37°C培養(yǎng)4h。4h后分別加入不同濃度飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺(1X10_4M、 8X 1(Γ5Μ、5Χ 1(Γ5Μ、3Χ 1(Γ5Μ、1Χ 1(Γ5Μ、8Χ 1(Γ6Μ、5Χ ICT6M 和 IX I(T6M)，每個(gè)濃度 3 個(gè)復(fù)孔。 同時(shí)設(shè)不含化合物對(duì)照孔和只含同量培養(yǎng)液無(wú)ConA的細(xì)胞空白孔。各個(gè)孔均重復(fù)3次(η =3)。培養(yǎng)48h后用MTT法檢測(cè)化合物對(duì)脾淋巴細(xì)胞的抑制作用。按照公式“抑制率=(D對(duì)照-D含藥)/D對(duì)照X100%”計(jì)算不同濃度飽和脂肪 鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用，根據(jù)細(xì)胞相對(duì)生存率和化合物 的濃度繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，利用該生長(zhǎng)曲線求得半數(shù)抑制率(dxIC5ci)。結(jié)果列入表1。結(jié)果 表明本發(fā)明的飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖有明確的抑制作 用。表1飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞絲裂原增殖的抑制作 用
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化合物名稱IC50 ( I(T5M)化合物名稱IC50 ( I(T5M)CsA1.50±1.18CsA1.50±1.18HGE29.36±7.42HGK14.65±1.207a15.89±1.1914a45.50±4.877b47.35+ 12.5114b11.70±4.817c14.28 士 1.0514c2.97土 1.087d6.00+1.6414d2.30± 1.017e4.00 + 2.0114e1.83±0.497f6.70 + 2.7214f1.65±0.76試驗(yàn)例2飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬的抑制作用將生長(zhǎng)狀態(tài)良好、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Ana-I小鼠巨噬細(xì)胞以IXlO5個(gè)/mL的密度 接種于96孔板，每孔100μ 1，37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，按預(yù)設(shè)的濃度梯度加入 經(jīng)滅菌處理的飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺(1 X 10_4M、8 X 10_5M、5 X 10_5M、3 X 10_5M、 1 X 10_5M、8X 10_6M、5X ΙΟ—Μ和1 X I(T6M)，每個(gè)濃度3個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組加入等體積的溶解樣 品的溶媒。繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，吸棄上清液，每孔加入100 μ 10. 的中性紅溶液，置于 37°C孵育30分鐘。吸棄中性紅溶液，并用PBS緩沖溶液洗滌2-3次(除去未被巨噬細(xì)胞吞 噬的中性紅)，加入細(xì)胞溶解液(乙醇乙酸=1 1)100 μ 1，4°C過(guò)夜，酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度 值，波長(zhǎng)540nm。各個(gè)孔均重復(fù)3次(η = 3)。按照公式“抑制率=(D對(duì)照-D含藥)/D對(duì)照Χ100%”計(jì)算不同濃度的化合物 對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬能力的抑制作用，根據(jù)細(xì)胞相對(duì)生存率和化合物的濃度繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲 線，利用該生長(zhǎng)曲線求得半數(shù)抑制率(dxIC5ci)。結(jié)果列入表2。結(jié)果表明本發(fā)明的飽和脂肪 鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)Ana-I小鼠巨噬細(xì)胞吞噬有明確的抑制作用。表2飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)Ana-I小鼠巨噬細(xì)胞吞噬的抑制作用
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試驗(yàn)例3飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺在納米水平的自組裝將飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺配置成1 μ mol/ml的水溶液，在激光納米粒 度儀上25°C測(cè)定粒徑。連續(xù)測(cè)定8天，記錄其粒徑。結(jié)果列入表3。數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的飽 和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺水溶液中均能自組裝成粒經(jīng)穩(wěn)定在101-2280nm的納米 球。表3飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺在水中自組裝的納米球粒徑
權(quán)利要求
通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺His Gly AA三肽酰胺His Gly AA NH CH2 (CH2)nCH3 I通式I中的AA為Glu或Lys，n＝6、8、10、12、14或16。
2.一種制備權(quán)利要求1的飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺的方法，包括(1)按照現(xiàn)有液相合成技術(shù)，將飽和脂肪胺依次與谷氨酸或賴氨酸的保護(hù)中間體、甘 氨酸的保護(hù)中間體、組氨酸的保護(hù)中間體逐步接肽合成保護(hù)基保護(hù)的飽和脂肪胺三肽綴合 物，所述飽和脂肪胺為 CH3 (CH2)nCH2NH2, η = 6、8、10、12、14 或 16 ；(2)依次脫去保護(hù)基保護(hù)的飽和脂肪胺三肽綴合物的N端保護(hù)基和C端保護(hù)基得到目 標(biāo)化合物。
3.權(quán)利要求1的12種飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺在制備免疫抑制劑類藥物中 的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1的12種飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺作為制備微乳或脂質(zhì)體藥物 載體的制劑材料的用途。
5.權(quán)利要求1的12種飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺作為制備微乳、脂質(zhì)體藥物 載體的靶向制劑材料中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式I的12種具有免疫抑制活性的飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺綴合物，其中AA為Glu或Lys，飽和脂肪鏈胺中n＝6、8、10、12、14或16，涉及它們的制備方法以及作為免疫抑制劑的應(yīng)用。這些飽和脂肪鏈胺His-Gly-AA三肽酰胺對(duì)脾淋巴細(xì)胞絲裂原增殖反應(yīng)的抑制作用，以及對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬活性的抑制作用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有優(yōu)秀的免疫抑制作用，臨床上可作為免疫抑制劑應(yīng)用。His-Gly-AA-NH-CH2-(CH2)nCH3 I
文檔編號(hào)A61K47/42GK101899089SQ20091008532
公開(kāi)日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2009年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月26日
發(fā)明者彭師奇, 趙明, 趙淑銳 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)