專利名稱：：丹紅化瘀方在制備預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種丹紅化瘀方的新用途，特別是涉及一種丹紅化癡方在制備預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一個發(fā)病過程復(fù)雜，難于控制的代謝性疾病，其發(fā)展到一定程度，會并發(fā)多種合并癥也叫并發(fā)癥，常見的有糖尿病微血管并發(fā)癥，如糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病等，動脈硬化疾病，如局部缺血性心臟病、腦血管疾病、閉塞性動脈-更4匕等。目前，治療糖尿病并發(fā)癥，尤其是微血管合并癥尚沒有理想的藥物。目前學(xué)術(shù)界公認(rèn)，防治糖尿病慢性并發(fā)癥主要通過抑制醛糖還原酶活性和降低糖基化終末產(chǎn)物這兩條經(jīng)典途徑(參閱《糖尿病慢性并發(fā)癥》，沈稚舟、吳松華、邵福源、陳國輝主編，上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1999年1月第1版；《臨床糖尿病學(xué)》，葉山東、朱禧星編著，安徽科學(xué)技術(shù)出版社，2005年10月第l版)。近年來亦有大量動物實(shí)驗(yàn)顯示應(yīng)用醛糖還原酶(AR)抑制劑對防治糖尿病多種慢性并發(fā)癥如糖尿病性白內(nèi)障、糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變及神經(jīng)病變的發(fā)生發(fā)展有重要意義。丹紅化癡口服液收載于國家新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第27冊，由丹參、當(dāng)歸、川芎、桃仁、紅花、柴胡和枳殼七味中藥組方而成，具有活血化瘀，行氣通絡(luò)功效，臨床上過去主要用于氣滯血瘀引起的視物模糊，視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞癥的吸收期。
發(fā)明內(nèi)容針對于此，本發(fā)明的目的在于，提供一種丹紅化瘀方在制備預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的新用途，能有效地抑制醛糖還原酶活性，同時抑制糖基化終末產(chǎn)物的形成。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為丹紅化瘀方在3制備預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述糖尿病并發(fā)癥為糖尿病高血壓、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病^L網(wǎng)膜病變、^唐尿病冠心病、糖尿病腎病、并唐尿病腦梗塞或壽唐尿病足壞疽。優(yōu)選地，所述丹紅化痂方為口服液、丸劑、片劑、膠嚢或顆粒劑。優(yōu)選地，所述丹紅化瘓方由重量份數(shù)如下的原料制作而成丹參25~35份當(dāng)歸8~15份川芎8~17份桃仁9~16份紅花7~14份柴胡10~15份枳殼5~13份。優(yōu)選地，所述丹紅化痂方由重量份數(shù)如下的原料制作而成丹參29份當(dāng)歸11.5份川考15份桃仁11.5份紅花11.5份柴胡11.5份枳殼10份。優(yōu)選地，所述丹紅化瘀方是采用下述過程制作的(1)將柴胡和枳殼加水進(jìn)行蒸餾提取，收集蒸餾出的芳香水，冷藏，備用；分離得到藥渣和藥液；(2)藥渣與丹參、當(dāng)歸、川穹、桃仁和紅花混合，加水煎煮3小時；(3)合并步驟(2)得到的煎煮液與步驟(1)得到的藥液，濾過，濾液減壓濃縮至60。C下相對密度為1.15~1.20,自然冷卻；(4)往濾液中加無水乙醇，至含醇量達(dá)60%;靜置12小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至6(TC下相對密度為1.13~1.15;(5)然后在不斷攪拌下加入步驟(1)中得到的芳香水，以及500ml~5000ml的水，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0，濾過，濾液即為丹紅化疳方。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明丹紅化瘀方不僅具有抑制醛糖還原酶活性，而且可以抑制糖基化終末產(chǎn)物的形成，此外還具有提高SOD活性、降低血清脂蛋白的新藥理作用?；谶@些新發(fā)現(xiàn)的藥理作用，丹紅化癡方完全可以用于預(yù)防和治療糖尿病之慢性并發(fā)癥，這些慢性并發(fā)癥包括糖尿病高血壓、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病一見網(wǎng)膜病變、糖尿病腎病、糖尿病腦梗塞、糖尿病足壞疽等。并且，該復(fù)、療效確切，其副作用少，安全性高，資源豐富，制作工藝簡易，質(zhì)量穩(wěn)定可控，其市場前景十分廣闊。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，本部分的描述僅是示范性和解釋性，不應(yīng)對本發(fā)明的保護(hù)范圍有任何的限制作用。實(shí)施例1對糖尿病大鼠腎醛糖還原酶活性的影響1、材料與方法1.1藥物及其制備丹紅化瘀方的制備方法如下丹參29份、當(dāng)歸11.5份、川芎15份、桃仁11.5份、紅花11.5份、柴胡11.5份、枳殼10份。以上七味藥材，柴胡和枳殼蒸餾提取芳香水；分離得到藥液和藥渣，藥液用另外的容器保存；藥渣與其余丹參等五味合并，加水煎煮，合并煎液與上述藥液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15~1.20(60。C)，放冷，加乙醇使含醇量達(dá)60%,放置12小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.13~1.15(60。C),在不斷攪拌下加入濃芳香水及500ml水，混勻，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0,冷藏，濾過。加適量防腐劑，攪勻，加水定容，混勻，分裝，滅菌，即得。本處方還可采用部分濃縮處理，按照常規(guī)制作工藝可制成片劑、膠嚢、顆粒劑或口服液等劑型。1.2實(shí)一驗(yàn)動物及分組48只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分出12只為正常對照組(以下稱正常組)；另36只用四氧嘧啶(100mg/kg)資發(fā)糖尿病，血糖值〉11.0mmol/L,隨機(jī)分為糖尿病才莫型組、陽性對照sorbinil治療組、丹紅化痂口服液(DHgroup)治療組。sorbinil用法為10mg.kg-1.cT1;丹紅化癡口服液，制成每毫升溶液中含生藥l.Og,每日灌服溶液2.0g.kg—1.cT1。1.3實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)開始第4、8周各測定血糖，第16周時將大鼠斷頭處死，取腎臟剔除附著物，搗碎取勻漿，供測定AR活性用。本研究使用兩種反應(yīng)體系，第一種反應(yīng)體系包括67mmol/L、pH6.2的Na+-K+磷酸緩沖液，10mmol/L的DL-甘油醛，5mmol/L的2-巰基5乙醇，O.lmmol/L的NADPH和酶適量；實(shí)-瞼杯包括全部試劑，對照杯以雙蒸水代替底物DL-甘油醛。第二種反應(yīng)體系以O(shè).lmmol/L的NADH代替NADPH，其余試劑同第一種反應(yīng)體系。測定組織勻漿酶活性。腎臟AR活性測定一單位AR酶活性規(guī)定為lminl消耗l[imolNADPH(或NADH)的酶量，即記錄NADPH及NADH在340nm處吸收光值的變化。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料值以亍士s表示，各配伍組樣本均數(shù)比較，采用方差分析。2、結(jié)果腎臟AR活性分別以測定還原型輔酶(NADPH)和還原型輔酶(NADH)含量來評價腎臟的AR活性，結(jié)果見表。各組腎臟的腎醛糖還原酶活性(AR)比較(7±s)_腎醛糖還原酶活性組別nNADPH(0.1mmol/L)NADH(0.1mmol/L)正常對照組122.87±0.98才莫型對照組1211.34±3.78"陽性對照組123.65±0.93▲▲丹紅化癡組123.35±0.76""0.82±0.173.76±1.692.13±0.56'1,02±0.23'"P<0.01,*P<0.05vs正常對照組；"PO.01,4P<0.05vs模型對照組結(jié)果顯示，與空白組比較，糖尿病鼠模型組組織勻漿NADPH、NADH的含量比較高(PO.Ol),提糸其腎醛糖還原酶活性顯著高于正常組；sorbinil、復(fù)方丹參片治療組組織勻漿NADPH、NADH量高于正常組，但與正常組相比較無顯著性差異(PX).05)，提示sorbinil、丹紅化瘓口服液治療組腎醛糖還原酶活性接近正常組。與才莫型組比較，sorbinil、丹紅化癡口服液治療組組織勻漿的NADPH、NADH含量比模型組低(P值均<0.01)，提示sorbinil、丹紅化癡口服液給藥組的AR活性較模型組均有明顯下降(PX).05)。實(shí)施例2丹紅化瘀方的制備方法如下丹參25份、當(dāng)歸8份、川芎17份、桃仁9份、紅花14份、柴胡10份、枳殼13份。以上七味藥材，柴胡和枳殼蒸餾提取芳香水；分離得到藥液和藥渣，藥液用另外的容器保存；藥渣與其余丹參等五味合并，加水煎煮，合并煎液與上述藥液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15~1.20(60°C),放冷，加乙醇使含醇量達(dá)60%,放置12小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.13~1.15(60。C),在不斷攪拌下加入濃芳香水及5000ml水，混勻，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0,冷藏，濾過。加適量防腐劑，攪勻，加水定容，混勻，分裝，滅菌，即得。實(shí)施例3丹紅化癡方的制備方法如下丹參35份、當(dāng)歸15份、川芎8份、桃仁16份、紅花7份、柴胡15份、枳殼5份。以上七味藥材，柴胡和枳殼蒸餾提取芳香水；分離得到藥液和藥渣，藥液用另外的容器保存；藥渣與其余丹參等五味合并，加水煎煮，合并煎液與上述藥液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15~1.20(60。C),放冷，加乙醇使含醇量達(dá)60%,放置12小時，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.13~1.15(60。C)，在不斷攪拌下加入濃芳香水及3000ml7K，混勻，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0,冷藏，濾過。加適量防腐劑，攪勻，加水定容，混勻，分裝，滅菌，即得。實(shí)施例4對糖尿病大鼠主動脈糖基化終產(chǎn)物的形成的影響1材料與方法1.1藥物及試劑丹紅化瘀口服液(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供)，每毫升溶液中含生藥2.0g;氨基胍(aminoguanidine，AG)，鏈脲佐菌素(str印tozotocin,STZ)，Sigma乂>司，臨用前用檸檬酸li沖液配成濃度為1%的STZ溶液，Trizollsolationreagent、型膠原酶(typecollagenase):美國Sigma公司，焦碳酸二乙酯(DEPC)購于美國Gibco公司；血糖測定試劑盒衛(wèi)生部上海生物制品研究所，果糖胺測定試劑盒上海名典生物工程有限公司，羥脯氨酸檢測試劑盒南京建成生物工程研究所。1.2儀器紫分光光度計(jì)，日本島津；熒光分光光度計(jì)日本日立公司。1.3動物清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。1.4實(shí)馬全方法1.4.1糖尿病大鼠模型的建立與分組采用健康雌性SD大鼠60只，體重為180~220g,禁食12h后，一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg.kg—、空白對照組僅腹腔注射等量的檸檬酸緩沖液，72h后眼底靜脈叢取血用葡萄糖氧化酶法測定血糖，若血糖值》11.Ommol/L者，確定為糖尿病大鼠。將糖尿病大鼠隨機(jī)分為5組丹紅化瘀口服液高劑量組(DH1):4.0g.kg—1.cT1、中劑量組(DH2):2.0g,kg".cT1、低劑量組(DH3):l.Og.kg—1.d_1，模型組(Modelgroup),陽性對照組氨基胍治療組(AG):O.lg.kg_1cT1,另取12只大鼠作為正常對照組(Controlgroup)。在注射STZ4d后，各組大鼠分別每日灌胃給予相應(yīng)的藥物1次，連續(xù)給藥12wk。實(shí)驗(yàn)期間，大鼠自由飲水進(jìn)食。1.4.2取材與方法給藥12wk后，大鼠禁食15h以20%烏拉坦腹腔注射麻醉各組大鼠，腹主動脈取血收集血標(biāo)本，分離血清以葡萄糖氧化酶法測定血糖、NBT法測定果糖胺；并立即分離主動力永，置于液氮中保存，用于測定AGEs含量。1.4.3主動^K羥脯氨酸(AGEs)熒光產(chǎn)物的測定將主動脈剪碎，經(jīng)過處理后，用熒光分光光度計(jì)在370/440nm(發(fā)射波長/激發(fā)波長)處測定其熒光強(qiáng)度。消化液中羥脯氨酸含量。用氯胺T法測定。AGEs含量以每mg羥脯氨酸所含的熒光強(qiáng)度為一個任意單位(Arbitraryunit),用AU表示。2結(jié)果主動脈內(nèi)羥脯氨酸(AGEs)含量的測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)果顯示，造模12w的DM大鼠，才莫型組動物主動脈內(nèi)AGEs(熒光產(chǎn)物)水平較正常組明顯上調(diào)，提示造模成功。與模型組比較，氨基胍能顯著降低模型大鼠主動脈內(nèi)AGEs的含量(PO.01);丹紅化瘀口服液高、中、低劑量組亦均能表現(xiàn)出較好的抑制AGE形成的作用(P<0.01,P<0.05)。與陽性對照藥氨基胍給藥組比較，丹紅化瘀口服液組AGEs的含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，提示丹紅化瘀口服液抑制AGE形成的作用與氨基胍相似。實(shí)施例5丹紅化瘀口服液對糖尿病腎病和糖尿病高血壓病大鼠保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組，即空白對照組，模型組，丹紅化瘀口服液低劑量組(l.Og.kg—1)，高劑量組(4.0g.kg_1)和卡托普利組(50mgkg")。釆用左腎切除、尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)的方法誘導(dǎo)DN模型，依不同劑量分別給藥共6周。于第6周末檢測DN大鼠空腹血糖(GLU)、糖化血紅蛋白(GHb)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)，光鏡觀察腎臟病理組織學(xué)變化。結(jié)果如下表3丹紅化癡口服液對DN大鼠GLU、GHb、BUN、Scr含量的影響(n=12)組另寸GLU(mmol丄-1)GHb(OD.10gHb")BUN(mmol丄-1)Scr(mmol丄-1)空白對照組13.76±1.86*6.13±1.64*30.43±4.76*模型組19.25±2.1229.23士2.8623.22±3.26135.21士14.32丹紅低劑量15.67士2.64*25.61±3.73*16.45±2.98*87.76±9.43*丹紅高劑量12.12±1.19**20.10±2.21**13.26±2.76**76.54土8.45峙卡托普利組17.75±2.3227.23±3,8622.67±3.26134.54土18.5結(jié)果表明丹紅化瘀口服液能夠降低DN大鼠血糖、糖化血紅蛋白(GHb)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)含量，與^f莫型對照組比較有顯著性差異(P〈0.01)。表4.丹紅化瘀口服液對DN大鼠血清ET、NO含量的影響(n^12)組另'JET(pg/ml)NO(U/iiig)TGTCHDL-C空白對照組235.23±23.29.22±2.08*2.98±1.02*2.14±1.12*1.62±0.66*模型組304.67±25.5818.54±5.45*5.88±1.533.54±1.040.56±0.34丹紅低劑量278.34±21.45*23.22±6.56*4.80±1.00*3.01±1.421.34±0.32*丹紅高劑量257.±27.3426.56±7.66**4.37±1.66**2.67±1,63*1.53±0.34**卡托普利組266.73±30.25"27.76±5.65**5.02±1.873.35±1.651.07±0.98結(jié)果表明丹紅化瘀口服液能夠降低DN大鼠血清內(nèi)皮素(ET)水平、升高血清一氧化氮(NO)含量,與模型對照組比較有顯著性差異(PO.01)。對DN大鼠具有腎臟保護(hù)作用，同時通過降低模型組大鼠血清內(nèi)皮素水平和升高一氧化氮含量，對糖尿病大鼠并發(fā)的血壓升高和高血脂具有保護(hù)作用，并能降低TC,升高高密度脂蛋白的含量。實(shí)施例6丹紅化癡口月艮液對糖尿病高血壓病的療效觀察10將76例符合糖尿病并發(fā)癥高血壓病的患者隨機(jī)分為兩組，治療組40例，對照組36例。對照組釆用單純西藥治療，控制血糖及々欠食，治療組在西藥控制血糖及飲食的基礎(chǔ)上加服丹紅化瘀口服液，結(jié)果治療組40例中，顯效16例，有效17例，無效7例，總有效率為82.5%。對照組36例中顯效11例，有效6例，無效19例，總有效率為47.2%，兩組療效比較有顯著性差異(P<0.05)。實(shí)施例7丹紅化痂口服液對糖尿病一見網(wǎng)膜病變的療效)現(xiàn)察將98例符合糖尿病視網(wǎng)膜病變的患者隨機(jī)分為兩組，治療組48例，對照組50例。對照組采用單純西藥治療，控制血糖及飲食，治療組在西藥控制血糖及飲食的基礎(chǔ)上加服丹紅化瘀口服液，結(jié)果治療組48例中，顯效29例，有效15例，無效4例，總有效率為91.7%。對照組50例中顯效9例，有效16例，無效25例，總有效率為50%,兩組療效比較有顯著性差異(P<0.05)。實(shí)施例8丹紅化痂口服液對糖尿病腎病的療效觀察將79例患者隨機(jī)分為治療組與對照組。兩組給予相同的糖尿病基礎(chǔ)治療，治療組采用中藥丹紅化瘀口服液聯(lián)合依那普利治療，對照組單用依那普利治療，療程均為2個月。觀察兩組治療前后癥狀、體征、血糖、血壓、UAER及24h尿蛋白定量等情況。結(jié)果治療組治療前后癥狀及體征積分比較，差異均有顯著性意義(PO.05);治療組治療后UAER和24h尿蛋白定量均有下降，治療前后比較，差異均有顯著性意義(P0.05)。治療組在UAER及24h尿蛋白定量的改善方面均優(yōu)于對照組?？傆行手委熃M為88.37%,對照組為49.20%,兩組療效比較，差異有顯著性意義(PO.Ol)。表明丹紅化瘀口服液治療DN的臨床療凌文優(yōu)于基礎(chǔ)治療。以上對本發(fā)明所提供的丹紅化瘀方在防治糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在具體實(shí)施方式及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。權(quán)利要求1、丹紅化瘀方在制備預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述糖尿病并發(fā)癥為糖尿病高血壓、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病冠心病、糖尿病腎病、糖尿病腦梗塞或糖尿病足壞疽。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述丹紅化瘀方為口服液、丸劑、片劑、膠嚢或顆粒劑。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述丹紅化瘀方由重量份數(shù)如下的原料制作而成丹參25~35份當(dāng)歸8~15份川芎8~17份桃仁9~16份紅花7~14份柴胡10~154分枳殼5~13份。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述丹紅化瘀方由重量份數(shù)如下的原料制作而成丹參29份當(dāng)歸11.5份川穹15份桃仁11.5份紅花11.5份柴胡11.5份枳殼10份。6、根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)用，其特征在于所述丹紅化瘀方是采用下述過程制作的(1)將柴胡和枳殼加水進(jìn)行蒸餾提取，收集蒸餾出的芳香水，冷藏，備用；分離得到藥渣和藥液；(2)藥渣與丹參、當(dāng)歸、川芍、桃仁和紅花混合，加水煎煮3小時；(3)合并步驟(2)得到的煎煮液與步驟(1)得到的藥液，濾過，濾液減壓濃縮至60。C下相對密度為1.15-1.20，自然冷卻；(4)往濾液中加無水乙醇，至含醇量達(dá)60%;靜置12小時，濾過，回收濾液中的乙醇并濃縮濾液至60。C下相對密度為1.13~1.15;(5)然后在不斷攪拌下加入步驟(1)中得到的芳香水，以及500ml~5000ml的水，調(diào)節(jié)pH至6.0~7.0,濾過，濾液即為丹紅化癡方。全文摘要本發(fā)明公開一種丹紅化瘀方在制備防治糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明丹紅化瘀方不僅具有抑制醛糖還原酶活性，而且可以抑制糖基化終末產(chǎn)物的形成，能夠降低糖尿病腎病(DN)大鼠血糖、糖化血紅蛋白(GHb)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)含量，還能升高血清高密度脂蛋白的含量、降低甘油三酯和膽固醇的含量，并能提高血清一氧化氮水平，降低內(nèi)皮素含量等新的藥理作用?；谏鲜鏊幚碜饔?，丹紅化瘀方完全可以用于預(yù)防和治療糖尿病之慢性并發(fā)癥，并且，該復(fù)方療效確切，其副作用少，安全性高，資源豐富，制作工藝簡易，質(zhì)量穩(wěn)定可控，其市場前景十分廣闊。文檔編號A61K36/752GK101653499SQ20091017179公開日2010年2月24日申請日期2009年9月8日優(yōu)先權(quán)日2009年9月8日發(fā)明者李楚源,李淑如,覃仁安申請人:廣州白云山和記黃埔中藥有限公司