專利名稱：改性殼聚糖靶向載藥納米微球及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物納米材料在生物醫(yī)藥領域的應用，公開了一種具有主動靶向腫瘤
細胞能力的改性殼聚糖靶向載藥納米微球及其制備方法。
背景技術：
抗腫瘤藥物的主動靶向性和低毒副作用對疾病的臨床治療十分重要，而作為藥物 的載體，如何最大程度發(fā)揮藥物藥效，減少用藥次數與劑量，提高藥物的利用率及其療效， 是其中一個十分關鍵的問題。研究認為理想的抗腫瘤藥物載藥系統(tǒng)能將抗腫瘤藥物選擇性 蓄積于體內癌變部位，降低藥物對正常組織的毒副作用，提高藥物的生物利用度，從而提高 藥效，這是當前抗腫瘤藥物研發(fā)領域的熱點。 殼聚糖是唯一一種天然存在的親水陽離子可生物降解多糖，其分解產物是可被人 體完全吸收的氨基糖，具有良好的生物相容性。殼聚糖分子中富含游離的氨基和羥基，既可 以和抗腫瘤藥物以酰鍵或酰胺鍵偶連，也可以與腫瘤細胞表面特異表達的受體或配體進行 連接。但現有的以殼聚糖為基礎的納米微球有易離解，控釋性能不好，載藥量和藥物包封率 不高，靶向性不強等缺點。
發(fā)明內容
針對現有的以殼聚糖為基礎的納米微球的缺點，本發(fā)明的目的旨在提供一種粒徑 小、藥物包封率高、載藥量大、靶向生物分子偶聯(lián)效率高、制備條件溫和、靶向性強的改性殼 聚糖靶向載藥納米微球。 本發(fā)明另一 目的旨在提供上述靶向載藥納米微球的制備方法。
具體通過以下的技術方案實現本發(fā)明的目的 本發(fā)明首先提供了一種改性殼聚糖耙向載藥納米微球，是先將殼聚糖改性為羧甲 基殼聚糖，然后用生物交聯(lián)劑將藥物分子上的活性氨基和羧甲基殼聚糖上的活性羧基交 聯(lián)，制成載藥納米微球；最后通過化學修飾方法將靶向性生物分子連接在載藥微球的表面， 得到改性殼聚糖耙向載藥納米微球。
生物交聯(lián)劑常用如碳二亞胺等。 優(yōu)選地，所述羧甲基殼聚糖(CMCS)通過以下方法制備將5-15g殼聚糖(CS)溶解 于50-150ml異丙醇溶液中，在攪拌條件下加入質量濃度為50 %的NaOH溶液20-100ml，讓 殼聚糖在堿性條件下膨脹，在O-l(TC下存放6-18h使其堿化完全；在30-5(TC下，將2-10g 固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出羧甲基殼聚糖粗成品；利用冰醋酸調節(jié)溶液pH至7.0， 然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜質，干燥，得到白色粉狀羧甲基殼聚 糖。 優(yōu)選地，所述靶向性生物分子是為能與腫瘤細胞表面的特異性受體分子結合的生 物分子，如轉鐵蛋白或葉酸等。優(yōu)選地，所述改性殼聚糖耙向載藥納米微球的平均粒徑為80-160nm。
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本發(fā)明還提供了上述改性殼聚糖靶向載藥納米微球的制備方法，是將羧甲基殼聚 糖(CMCS)、碳二亞胺(EDAC)和藥物加入醋酸緩沖溶液，反應完全后，離心收集，干燥，制得 納米載藥微球；再在其表面通過化學修飾的方法與具靶向作用的生物分子結合。需要根據 不同的藥物類型調整各組分的加入比例。 本發(fā)明以阿霉素(ADR)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)為典型，提供了兩種載藥納米微球 優(yōu)選的制備方法。 —種轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球(Tf-ADR/CMCS)，是由以下方 法制備的 (1)羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球(ADR/CMCS)的制備在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按(1. 0-5. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 2-0. 8)
的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和阿霉素，攪拌反應5-40min，離心收集載藥微球，干 燥，制得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球； (2)步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球用轉鐵蛋白修飾。
所述用轉鐵蛋白修飾又優(yōu)選使用如下的方法 將l-3mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶解于l-3ml水中， 制得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶液；將l-10mg轉鐵蛋白溶解在l-3ml，30mmol/L， pH 5. 0的醋酸鈉溶液中，將20-120 ii g的高碘酸鈉與其混合，冰浴下反應20-160min ;在 50-100 iU，O. lmol/L的碳二亞胺存在下，將氧化后的轉鐵蛋白80-100 y g加入l_2ml的羧 甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶液中，反應10-60min，得到轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載 阿霉素納米微球。 —種轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球(Tf-5-Fu/CMCS)，是由 以下方法制備的 (1)羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球(Tf-5-Fu/CMCS)的制備 在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按(1. 0-7. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 5-2. 5)
的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和5-氟尿嘧啶，攪拌反應5-60min，離心收集，干燥， 制備出羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球； (2)步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球用轉鐵蛋白修飾。
所述用轉鐵蛋白修飾又優(yōu)選使用如下的方法 將2-4mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載5_氟尿嘧啶納米微球溶解于2_5ml 水中，制得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液；將2-12mg轉鐵蛋白溶解在 2-5ml，30mmol/L， pH 5. 0的醋酸鈉溶液中，然后加入10-140 y g的高碘酸鈉，冰浴下反應 10-150min ;在60-120 yl， 0. lmol/L碳二亞胺存在下，將90-120 y g氧化后的轉鐵蛋白加入 到l-3ml的羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液中，反應5-50min，得到轉鐵蛋白靶向 羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球。 本發(fā)明的基本技術原理為是采用改性的羧甲基殼聚糖為藥物運輸載體來制備納 米載藥微球；將靶向性生物分子修飾在載藥微球的表面，利用靶向性生物分子和腫瘤細胞 表面高度表達的受體分子間特異性結合來實現載藥納米微球的主動靶向作用。將殼聚糖選 擇性的改性成羧甲基殼聚糖，增加殼聚糖上的活性羧基，提高納米微球的載藥量、藥物包封 率和靶向生物分子偶聯(lián)效率。以抗腫瘤藥物為模型藥物，采用羧甲基殼聚糖為藥物運輸載
5體制備載藥納米微球，將靶向生物分子修飾在載藥納米微球表面，有助于提高載藥納米藥 物的"主動"靶向作用。 相對于現有技術，本發(fā)明具有如下有益效果 本發(fā)明將殼聚糖上的活性羥基進行選擇性改性生成羧甲基殼聚糖，采用生物交聯(lián) 劑將藥物(如ADR、5-Fu)上的活性氨基和CMCS上的活性羧基交聯(lián)生成載藥納米微球；并通 過化學修飾方法將具有靶向作用的生物分子(如轉鐵蛋白)連接在載藥微球的表面，從而 實現載藥微球的主動靶向性能。CMCS靶向載藥微球的平均粒徑約為100-150nm，具有載藥 量大、藥物包封率高、靶向生物分子偶聯(lián)效率高等特點，有助于提高藥物的靶向性，實現藥 物緩釋和具有較強的腫瘤細胞殺傷效應。 體外釋放實驗結果表明本發(fā)明的靶向載藥納米微球能明顯延緩藥物的釋放，具有 良好的緩釋效果。本發(fā)明的載藥納米微球對腫瘤細胞的殺傷率在量效和時效上明顯比同劑 量的單獨藥物的殺傷率高，載藥微球表面修飾上靶向生物分子后能進一步增強載藥納米藥 物的靶向殺傷性。
圖1為本發(fā)明所制備的ADR/CMCS納米微球的原子力顯微鏡圖片，顆粒的平均粒徑 為110nm。 圖2為ADR/CMCS納米微球體外釋放曲線，溶出介質分別為模擬胃液(pH 4. 0醋酸 緩沖液)、模擬體液(PH7. 4磷酸鹽緩沖液)。體外釋放實驗結果表明ADR/CMCS載藥微球能 明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。 圖3為Tf-ADR/CMCS納米微球對人喉腫瘤細胞的生長抑制圖，與單獨ADR相比，載 藥納米微球修飾上靶向性生物分子后對腫瘤細胞的殺傷率在量效上有了明顯的提高。
圖4為本發(fā)明所制得的5-Fu/CMCS納米微球的原子力顯微鏡圖片，微球平均粒徑 為100nm。 圖5為5-Fu/CMCS納米微球體外釋放曲線，溶出介質分別為模擬胃液(pH 4. 0醋 酸緩沖液)、模擬體液(PH7. 4磷酸鹽緩沖液)。體外釋放實驗結果表明5-Fu/CMCS納米微 球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。 圖6為Tf-5-Fu/CMCS納米微球對人喉腫瘤細胞的生長抑制圖，與單獨5_Fu相比， 載藥納米微球修飾上靶向生物分子后對腫瘤細胞的殺傷率在量效上有了明顯的提高。
具體實施例方式
下面結合實施例，對本發(fā)明做進一步地詳細說明，但本發(fā)明的實現方式并不局限 于此。 實施例1 :Tf-ADR/CMCS納米微球的制備方法和應用 (1)羧甲基殼聚糖(CMCS)的制備將5g殼聚糖(CS)溶解于50ml異丙醇溶液中， 在攪拌條件下加入質量濃度為50%的NaOH溶液20ml，使殼聚糖在堿性條件下膨脹，在0°C 下存放6h使其堿化完全；在3(TC下，將2g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS粗成 品；利用冰醋酸調節(jié)溶液pH至7. 0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜 質，干燥，得到白色粉狀CMCS。
(2) ADR/CMCS納米微球的制備在pH 4. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按 1.0 : 0.5 : 0. 2的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和ADR，攪拌反應lOmin，離心收集， 干燥，制得ADR/CMCS納米微球。納米微球的平均粒徑為110nm(圖1)，平均載藥量為35%， 平均藥物包封率為55%。 (3) Tf-ADR/CMCS納米微球的制備將lmgADR/CMCS納米微球溶解于lml水中，制 備ADR/CMCS納米微球溶液；將lmg轉鐵蛋白(Tf)溶解在lml醋酸鈉溶液(30mmol/L， pH 5. 0)中，將20 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應20min ;在50 iU，O. lmol/ L碳二亞胺存在下，將80 ii g氧化后的Tf和lml ADR/CMCS納米微球溶液反應10min，制得 Tf-ADR/CMCS納米微球。 (4)Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的體外釋藥特性采用動力學透析法 進行體外穩(wěn)定性實驗，觀察載藥納米微球的體外釋藥特性。設定溫度為37±0. 5t:，將載藥 納米微球裝入透析袋中封嚴，放在恒溫箱中進行透析。溶出介質分別為模擬胃液(PH 4.0 醋酸緩沖液)、模擬體液(PH 7.4磷酸鹽緩沖液)，間隔一小時取出5ml透析液，測定透析 量，同時補充新鮮的介質。采用熒光標準曲線測定不同時間ADR的釋放量，繪制載藥納米微 球的體外釋放曲線。體外釋放實驗結果(如圖2)表明，當釋藥時間達到5天時還有40% ADR未釋放到溶液中，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。
(5)Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對腫瘤細胞的生長抑 制作用。MTT法測定上述靶向載藥納米微球對人喉腫瘤細胞的殺傷率，結果表明靶向載藥 微球對腫瘤細胞的殺傷率在量效和時效上明顯比同劑量的單獨ADR抗腫瘤藥物的殺傷率 高，載藥納米微球表面修飾上Tf后能顯著提高藥物對腫瘤細胞的靶向殺傷率(圖3)。
實施例2 :Tf-ADR/CMCS納米微球的制備方法和應用 (1)羧甲基殼聚糖(CMCS)的制備將15g殼聚糖(CS)溶解于150ml異丙醇溶液 中，在攪拌條件下加入質量濃度為50% NaOH溶液lOOml，使殼聚糖在堿性條件 下膨脹，在 l(TC下存放18h使其堿化完全；在5(TC下，將lOg固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS 粗成品；利用冰醋酸調節(jié)溶液PH至7. O，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子 雜質，干燥，得到白色粉狀CMCS 。 (2) ADR/CMCS納米微球的制備在pH 7. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按 5. 0 : 1.5 : 0. 8的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和ADR，攪拌反應40min，離心收集， 干燥，制得ADR/CMCS納米微球。載藥納米微球的平均粒徑為1 lOnm，平均載藥量為40% ，平 均藥物包封率為60%。 (3) Tf-ADR/CMCS納米微球的制備將3mgADR/CMCS納米微球溶解于3ml水中，制 備ADR/CMCS納米微球溶液。將10mg轉鐵蛋白(Tf)溶解在3ml醋酸鈉溶液(30mmol/L， pH 5. 0)中，將120 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應160min ;在100 yl， 0. lmol/L碳二亞胺存在下，將lOOii g氧化后的Tf和2ml ADR/CMCS納米微球溶液反應 60min，制得Tf-ADR/CMCS納米微球。 (4) Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的體外釋藥特性。體外釋放實驗的方法 同實施例1。體外釋放實驗結果表明，當釋藥時間達到5天時還有50% ADR未釋放到溶液 中，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效果。 (5)Tf-ADR/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對腫瘤細胞的生長抑制作用。MTT實驗的方法同實施例1。與實施例1的結果類似，耙向載藥微球對腫瘤細胞的 殺傷率在量效和時效上明顯比同劑量的單獨ADR抗腫瘤藥物的殺傷率高，載藥納米微球表 面修飾上Tf后能顯著提高藥物對腫瘤細胞的靶向殺傷率。
實施例3 :Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備方法和應用 (1)羧甲基殼聚糖(CMCS)的制備將6g殼聚糖(CS)溶解于60ml異丙醇溶液中， 在攪拌條件下加入質量濃度為50%的NaOH溶液30ml，讓殼聚糖在堿性條件下膨脹，在2°C 下存放7h使其堿化完全；在35t:下，將6g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS粗成 品；利用冰醋酸調節(jié)溶液PH至7.0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜 質，干燥，得到白色粉狀CMCS。 (2) 5-Fu/CMCS納米微球的制備在pH 4. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按 1. 0 : 0. 5 : 0. 5的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和5-Fu，攪拌反應10min，離心收集， 干燥，制得5-Fu/CMCS納米微球。該納米微球的平均粒徑為100nm(圖4)，平均載藥量為 40 % ，平均藥物包封率為60 % 。 (3)Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備將2mg5_Fu/CMCS納米微球溶解于2ml水中， 制備5-Fu/CMCS納米微球溶液。將4mg轉鐵蛋白(Tf)溶解在2ml醋酸鈉溶液(30mmol/L，pH 5. 0)中，將10 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應20min ;在60 iU，O. lmo1/ L碳二亞胺存在下，將90 ii g氧化后的Tf和lml 5-Fu/CMCS納米微球溶液反應10min，制得 Tf-5-Fu/CMCS納米微球。 (4)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對腫瘤細胞的生長抑 制作用。體外釋放實驗同實施例1的步驟。體外釋放實驗結果表明，當釋藥時間達到5天 時還有30% 5-Fu未釋放到溶液中(圖5)，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的 緩釋效果。 (5)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對腫瘤細胞的生長抑 制作用。MTT實驗的方法同實施例1。結果表明靶向載藥微球對腫瘤細胞的殺傷率在量效 和時效上明顯比同劑量的單獨5-Fu抗腫瘤藥物的殺傷率高，載藥納米微球表面修飾上Tf 后能顯著提高藥物對腫瘤細胞的靶向殺傷率(圖6)。
實施例4 :Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備方法和應用 (1)羧甲基殼聚糖的制備(CMCS):將12g殼聚糖(CS)溶解于130ml異丙醇溶液 中，在攪拌條件下加入質量濃度為50 %的NaOH溶液90ml ，讓殼聚糖在堿性條件下膨脹，在 8t:下存放17h使其堿化完全；在45t:下，將8g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出CMCS粗 成品；利用冰醋酸調節(jié)溶液PH至7. 0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小分子雜 質，干燥，得到白色粉狀CMCS。 (2) 5-Fu/CMCS納米微球的制備在pH 7. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按 7 : 1.5 : 2. 5的摩爾比，將CMCS、碳二亞胺(EDAC)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)，攪拌反應60min， 離心收集，干燥，制得5-Fu/CMCS納米微球。載藥納米微球的平均粒徑為100nm，平均載藥量 為45 % ，平均藥物包封率為65 % 。 (3) Tf-5-Fu/CMCS納米微球的制備將4mg 5-Fu/CMCS納米微球溶解于5ml水中， 制備5-Fu/CMCS納米微球溶液。將12mg轉鐵蛋白(Tf)溶解在5ml醋酸鈉溶液(30mmol/L， pH 5. 0)中，將140 ii g的高碘酸鈉(60mmol/L)與其混合，冰浴下反應150min ;在120 yl，
80. lmol/L碳二亞胺存在下，將120 ii g氧化后的Tf和3ml 5-Fu/CMCS納米微球溶液反應 60min，制得Tf-5-Fu/CMCS納米微球。 (4)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對腫瘤細胞的生長抑 制作用。體外釋放實驗同實施例1的步驟。體外釋放實驗結果表明，當釋藥時間達到5天 時還有35% 5-Fu未釋放到溶液中，即載藥微球能明顯延緩藥物的釋放，具有良好的緩釋效 果。 (5)Tf-5-Fu/CMCS納米微球作為抗腫瘤藥物的耙向載藥系統(tǒng)對腫瘤細胞的生長抑 制作用。MTT實驗的方法同實施例1。與實施例3的結果類似，耙向載藥微球對腫瘤細胞的 殺傷率在量效和時效上明顯比同劑量的單獨5-Fu抗腫瘤藥物的殺傷率高，載藥納米微球 表面修飾上Tf后能顯著提高藥物對腫瘤細胞的靶向殺傷率。 上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
權利要求
一種改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于是先將殼聚糖改性為羧甲基殼聚糖，然后用生物交聯(lián)劑將藥物分子上的活性氨基和羧甲基殼聚糖上的活性羧基交聯(lián)，制成載藥納米微球；最后通過化學修飾方法將靶向性生物分子連接在載藥微球的表面，得到改性殼聚糖靶向載藥納米微球。
2. 根據權利要求1所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所述羧甲基殼 聚糖由以下方法制備將5-15g殼聚糖溶解于50-150ml異丙醇溶液中，在攪拌條件下加 入質量濃度為50 %的NaOH溶液20-100ml，使殼聚糖在堿性條件下膨脹，在O-l(TC下存放 6-18h使其堿化完全；在30-5(TC下，將2-10g固體氯乙酸加入上述溶液中，制備出羧甲基殼 聚糖粗成品；利用冰醋酸調節(jié)溶液PH至7. 0，然后依次用乙醇溶液洗滌，透析袋透析除去小 分子雜質，干燥，得到白色粉狀羧甲基殼聚糖。
3. 根據權利要求1所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所述靶向性生 物分子為能與腫瘤細胞表面的特異性受體分子結合的生物分子。
4. 根據權利要求3所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所述靶向性生 物分子為轉鐵蛋白或葉酸。
5. 根據權利要求1-4中任一項所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球，其特征在于所 述載藥納米微球的粒徑為80-160nm。
6. 權利要求1所述的改性殼聚糖靶向載藥納米微球的制備方法，其特征在于將羧甲 基殼聚糖、碳二亞胺和藥物加入醋酸緩沖溶液，反應完全后，離心收集，干燥，制得納米載藥 微球；再在其表面通過化學修飾的方法與靶向性生物分子結合。
7. —種轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球，其特征在于是由以下方法制備的(1) 羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球的制備在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按(1. 0-5. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 2-0. 8)的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和阿霉素，攪拌反應5-40min，離心收集載藥微球，干燥，制 得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球；(2) 步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球用轉鐵蛋白修飾。
8. 根據權利要求7所述的轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球，其特征在 于步驟(2)所述用轉鐵蛋白修飾具體為將l-3mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶解于l-3ml水中，制得羧 甲基殼聚糖載阿霉素納米微球溶液；將l-10mg轉鐵蛋白溶解在l-3ml，30mmol/L，pH 5. 0的 醋酸鈉溶液中，將20-120 ii g的高碘酸鈉與其混合，冰浴下反應20-160min ;在50-100 yl， 0. lmol/L的碳二亞胺存在下，將氧化后的轉鐵蛋白80-100 ii g加入l_2ml的羧甲基殼聚糖 載阿霉素納米微球溶液中，反應10-60min，得到轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載阿霉素納米 微球。
9. 一種轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球，其特征在于是由以下方 法制備的(1)羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球的制備在pH 4. 0-7. 0的醋酸緩沖溶液介質下，按(1. 0-7. 0) : (0. 5-1. 5) : (0. 5-2. 5)的摩爾比，將羧甲基殼聚糖、碳二亞胺和5-氟尿嘧啶，攪拌反應5-60min，離心收集，干燥，制備出羧甲基殼聚糖載5_氟尿嘧啶納米微球；(2)步驟(1)所得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球用轉鐵蛋白修飾。
10.根據權利要求9所述轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球，其特征在于步驟(2)中所述用轉鐵蛋白修飾具體為將2-4mg步驟(1)得到的羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶解于2-5ml水中，制 得羧甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液；將2-12mg轉鐵蛋白溶解在2-5ml，30mmo1/ L， pH 5. O的醋酸鈉溶液中，然后加入10-140 iig的高碘酸鈉，冰浴下反應10-150min;在 60-120 iU，O. lmol/L碳二亞胺存在下，將90-120 ii g氧化后的轉鐵蛋白加入到l-3ml的羧 甲基殼聚糖載5-氟尿嘧啶納米微球溶液中，反應5-50min，得到轉鐵蛋白靶向羧甲基殼聚 糖載5-氟尿嘧啶納米微球。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種改性殼聚糖靶向載藥納米微球及其制備方法。本發(fā)明是將殼聚糖改性為羧甲基殼聚糖，然后用生物交聯(lián)劑將藥物分子上的活性氨基和羧甲基殼聚糖上的活性羧基交聯(lián)，制成載藥納米微球；最后通過化學修飾方法將靶向性生物分子連接在載藥微球的表面，得到改性殼聚糖靶向載藥納米微球。該載藥納米微球粒徑小、藥物包封率高、載藥量大、靶向生物分子偶聯(lián)效率高、制備條件溫和、靶向性強、藥物毒副作用低，能提高對腫瘤細胞的靶向作用和緩釋作用，從而增強對腫瘤細胞的殺傷率。
文檔編號A61K47/48GK101716145SQ200910213719
公開日2010年6月2日 申請日期2009年12月9日 優(yōu)先權日2009年12月9日
發(fā)明者張文豪, 楊培慧, 蔡懷鴻, 蔡繼業(yè) 申請人:暨南大學