專利名稱：胰島素緩釋微米球組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種生物制藥技術(shù)領(lǐng)域的組合物及其制備方法，尤其是一種胰島
素緩釋微米球組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
制藥行業(yè)從藥物發(fā)現(xiàn)，到臨床的應(yīng)用，最后一個環(huán)節(jié)是藥物制劑。其中有一部分藥
物需要長期給藥才能治愈；還有一部分需要靶向等局部給藥。要達(dá)到這些目的，原料藥必
須要制備成相應(yīng)的劑型。例如需要長期給藥但在體內(nèi)的半衰期短的藥物，宜制備成緩釋或 控釋劑型；對于一些腫瘤的治療，需要一些藥物靶向于病照，例如靶向于腫瘤血管的栓塞微
米球制劑等；基因重組技術(shù)用于治療蛋白的表達(dá)和生產(chǎn)的20多年以來，到目前為止，已有 30多個蛋白藥物產(chǎn)品投入臨床使用，近200個在審批和研發(fā)過程中，涌現(xiàn)出一批諸如安進(jìn) (Amgen)、基因技術(shù)(Genentech)等一批新的大型醫(yī)藥公司。相對于蛋白大分子藥物本身的 快速發(fā)展，其劑型技術(shù)進(jìn)展緩慢。 一方面，蛋白大分子藥物口服不吸收、體內(nèi)半衰期短，需要 注射給藥；另一方面，許多何爾蒙、細(xì)胞因子類的蛋白藥物治療周期長，長期而頻繁地注射 成為必須，也影響患者順應(yīng)性的主要原因。緩釋蛋白藥物的劑型的研發(fā)，由于在制備微粒過 程導(dǎo)致活性的損失諸如W/0/W法制備的微米球易突釋等缺點(diǎn)。發(fā)展制備具有活性保護(hù)的蛋 白微米球又可以提高包封率和減少突釋的方法勢在必行。人們?yōu)榱藴p少突釋研究了制備雙 層微米球，但是到目前還是不能解決這一難題。 經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，[Claudia Klingler， Bernd W. Miiller， HartwigSteckel， Insulin_micro_and nanoparticles for pulmonary delivery, InternationalJournal of Pharmaceutics, 377(2009) 173-179] ， [Claudia Klingler， BerndW.Miiller， Hartwig Steckel，胰島素的微納米粒用于肺部給藥，國際藥學(xué)雜志， 377 (2009) 173-179]Claudia Klingler等人在該文獻(xiàn)報道了利用噴霧干燥的方法制備 2踐的顆粒用于肺部給藥，但是在用藥安全、方便仍然存在非常大的問題，正如曾經(jīng)參加 了 Exubera早期臨床試驗(yàn)的洛杉磯查爾斯德魯大學(xué)(Charles R. DrewUniversity)醫(yī)學(xué)教 授Mayer Davidson說"Exubera(胰島素的吸入劑)的體積比較大，使用起來不方便。另 外，使用Exubera的患者還需要使用長效胰島素來維持血糖的水平，并需要定期進(jìn)行肺功 能檢測。"輝瑞Exubera撤市之后，諾和諾德也終止了吸入性胰島素的開發(fā)。該文獻(xiàn)利用
w/o/w最見的復(fù)乳法來制備雙層微米球，而復(fù)乳法的油水界面是公認(rèn)的蛋白殺手，導(dǎo)致水
溶性的蛋白在該界面的聚集，同樣致使包封率也不高，存在不完全釋放和突釋。[Yadong Hah，Huayu Tian，Pan He，Xuesi Chen，Xiabin Jing，Insulin nanoparticle preparation and encapsulation intopoly(lactic_co_glycolic acid)microspheres by using an anhydrous system, International Journal of Pharmaceutics 378(2009)159-166]， [Yadong Hah等人在該文獻(xiàn)報道了制備胰島素的納米粒及利用S/0/0乳化法進(jìn)一步被 包裹在PLGA微米球里，國際藥學(xué)雜志，378(2009) 159-166]。他們利用文獻(xiàn)[Zhang, X. F. ， Hu， J. L ， Chen， X. S. ， Jing， X. B，2005. Preparation and characteri—zation ofbiodegradableinsulin-loaded microspheres. Chem. J. Chin. U 26， 554 7 57.]的方法等 電點(diǎn)沉淀法制備納米粒，然后再微囊包形成PLGA微米球，但是制備的納米胰島素的顆粒仍 然不是球形，而是立方體形和其它不規(guī)則的形狀，這也不利于進(jìn)一步包封；制備微米球利用 了大量的難于除去的有機(jī)溶劑N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)、玉米油、乙醚、和乙醇等這些溶劑 對環(huán)境及微米球的質(zhì)量造成極大的質(zhì)量控制麻煩等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種胰島素緩釋微米球組合物及 其制備方法。本發(fā)明解決了現(xiàn)有的技術(shù)長期無法制備球形的納米胰島素的難題，利用水包 油-油包固體(S/O/W)制備微米球方法把上述納米球進(jìn)一步微囊包在具有緩釋的高分子材 料中。使其制備的微米球表面光滑圓整，均勻度好，顆粒規(guī)整無粘連；包封率高，突釋小，載
藥量高。 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的 本發(fā)明涉及的胰島素緩釋微米球組合物，其組分和重量百分比為聚乳酸-羥基 乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)或聚己內(nèi)酯(PCL)為50%-99.8%、胰島素納米球組合物為 0. 2% -50%。 所述的胰島素納米球組合物，其組分和重量百分比為胰島素為50% -99. 99%、
葡聚糖為0% _50%、鋅離子化合物為0.01% -50%。 所述胰島素緩釋微米球組合物的粒徑為1-500 iim。 所述的鋅離子化合物為醋酸鋅、氯化鋅、硫酸鋅、硫酸氫鋅、硝酸鋅或葡萄糖酸鋅。
本發(fā)明還涉及的如上所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，包括以下步 驟 ①胰島素納米球組合物制備 a)預(yù)先將占胰島素納米球組合物的重量百分比為0. 01% _50%鋅離子的化合物 配制成一定濃度溶液、或上述鋅離子化合物和含有占胰島素納米球組合物的重量百分比為 0% _50%葡聚糖配制成一定濃度的葡聚糖和鋅離子化合物的溶液； b)然后再在上述步驟a)的溶液中滴加含有占胰島素納米球組合物的重量百分比
為50% -99. 99%的胰島素溶解在酸性(鹽酸溶液，pH < 2)的PEG溶液中； c)然后再將上述步驟b)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干， d)將上述步驟c)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解聚乙二醇(PEG)，再離心除去上
清液即PEG的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去聚乙醇(PEG)即得
胰島素納米球組合物； ②胰島素緩釋微米球組合物制備 a)將步驟①得占胰島緩釋微米球組合物的重量百分比為2% _50%胰島素納米球 組合物加入到占胰島素緩釋微米球組合物的重量百分比為50% _98%聚乳酸-羥基乙酸 (PLGA)、聚乳酸(PLA)、或聚己內(nèi)酯(PCL)有機(jī)溶液后，形成混懸液。即油相(0)中攪拌或漩 渦等使之均勻分散形成均勻的混懸液； b)將完成步驟a)形成微米球的混懸液加到重量百分比濃度為0%_10%的氯化鈉 溶液和重量百分比濃度為1% _10%表面活性劑乳化l-5min，然后把它轉(zhuǎn)移到重量百分比
5濃度為1 % -10 %的氯化鈉溶液固化1-4小時；然后將收集的微米球用水洗滌三到五次除去 表面活性劑和氯化鈉； c)將完成步驟b)的樣品凍干除去水分得胰島素緩釋微米球組合物；
所述的胰島素的重量百分比濃度為0. 001% 20% 所述的鋅離子的化合物為醋酸鋅、氯化鋅、硫酸鋅、硫酸氫鋅、硝酸鋅、或葡萄糖 酸鋅的重量百分比濃度為0. 001% -20% ; 所述的葡聚糖的重量百分比濃度為0.001 % -20%，葡聚糖的分子量為 10000-5000000道爾頓； 所述的PEG的分子量為2， 000-300， 000道爾頓，在水溶液中的重量百分比濃度為
1% -40% ; 所述的胰島素納米球組合物，其顆粒的粒徑大小在0.01iim-2iim，以粒徑為 0. 02踐-liimm為佳。 所述的油相(0)為聚乳酸羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己內(nèi)酯(PCL)或它 們的任意混合物的有機(jī)溶液； 所述的有機(jī)溶液中的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿、或丙酮 有機(jī)溶液，以二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈或它們的任意組合的有機(jī)溶液為佳；
所述的聚乳酸羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己內(nèi)酯(PCL)或它們的任意混合 物的有機(jī)溶液濃度為聚乳酸羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己內(nèi)酯(PCL)或它們的任 意混合物的重量百分比濃度為5% 40% ; 所述的聚乳酸羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚己內(nèi)酯(PCL)它們的分子量為 5000-500000道爾頓； 所述的表面活性劑為聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、 或泊洛沙姆(poloxmer); 所述的聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、或泊洛沙 姆(poloxmer)它們的分子量分別為10000-1000000道爾頓、4000_300000道爾頓、 20000-400000道爾頓或10000-400000道爾頓； 所述的表面活性劑聚乙烯醇(PVA)的重量百分比濃度為0.5% _10%或含 0.5% -10%氯化鈉的溶液、聚乙二醇(PEG)的重量百分比濃度為0.5% -20%或含 0. 5% _10%氯化鈉的鹽溶液、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)重量百分比濃度為0. 5% -20%或含 重量百分比濃度為0. 5% _10%氯化鈉等鹽溶液、泊洛沙姆(poloxmer)重量百分比濃度為 0. 5% -20%或含0. 5% _10%氯化鈉等鹽溶液。 本發(fā)明克服現(xiàn)有的技術(shù)制備不了球形的胰島素的納米球，可以制備成非常規(guī)則的 微納米球組合物，還有可以克服胰島素在緩控釋材料里的不穩(wěn)定性；制備成微納米球組合 物，避免用常規(guī)的W/0和W/0/W的包封率不高，及S/0/0的嚴(yán)重突釋，造成的環(huán)境污染的缺 點(diǎn)；采用該方法制備微米球組合物，其粒徑的大小可以根據(jù)不同需要，進(jìn)行控制，不污染環(huán) 境；可以避免對胰島素的治療的作用影響，尤其是那些物理化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定的。微粒的表面 光滑圓整，顆粒規(guī)整無粘連，粒徑可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)控從1 P m到500 ii m，其凍干粉劑為 白色細(xì)膩、疏松，不會塌陷、不粘連，再分散性良好。


圖1胰島素納米球組合物掃描電鏡圖。 圖2胰島素緩釋PLGA微米球組合物掃描電鏡圖。 圖3胰島素緩釋PLGA微米球組合物體外釋放曲線圖。
具體實(shí)施例方式以下對本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明以下實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn) 行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
實(shí)施例一
①胰島素納米球組合物制備 a)預(yù)先將醋酸鋅在水中溶解，配制成重量百分比濃度分別為0.001%、0.001%、 10%、或20%等溶液； b)將胰島素溶解在鹽酸溶液(pH < 2)重量百分比濃度分別為1%、10%、20%或 40X的PEG(分子量為8000道爾頓)配制成重量百分比濃度分別為0. 001%、1%、10%或 20%等; c)然后再在上述步驟a)和b)的溶液按照重量比分別為i : i、i : io、i : 3或
1 : 4等把步驟a)的溶液滴加b)的溶液中并不斷地?cái)嚢瑁?d)然后再將上述步驟c)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干，
e)將上述步驟d)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解PEG，再離心除去上清液即PEG 的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去PEG即得胰島素納米球組合 物(即制備到胰島素占胰島素納米球組合物的重量百分比分別為50%、99.99%、75%或 80% ;醋酸鋅相應(yīng)的為50%、0.01%、25%或20% ;葡聚糖全為零)；(其中按照1 : 10制 備的胰島素納米球的如圖1所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均勻，約0. 01-0. 03 ii m ;其它
的i : i、i : 3或i : 4制備的胰島素納米球的顆粒的表面與i : io的相似比較光滑、粒
徑分布也較均勻，粒徑分別約為0. 3-1 ii m、0. 5-1. 5 ii m和0. 4-2 y m，圖上均未顯示)；
②胰島素緩釋微米球組合物制備 a)將①得占胰島素納米球組合物和聚乳酸(PLA)重量百分比濃度為5%、
10%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為i : 20、3 : 20、i : 15或
2 : 245(相對應(yīng)的胰島素納米球組合物所占胰島素緩釋微米球組合物的重量百分比為 50%、60%、75%或98% )比例攪拌、漩渦或超聲1_5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體 (S/0)乳液; b)把步驟(a)得乳液滴加到1 % _10%氯化鈉和0% -10%的聚乙二醇(PVA)水溶 液并攪拌、漩渦或超聲0. 1-5分鐘形成復(fù)乳； (c)把步驟(b)的復(fù)乳加到濃度為1 % -10%的1000ml氯化鈉溶液固化1_4小時；
(d)把步驟(c)得到的離心收集微米球，并用水洗滌3-5次，凍干后得到微米球 組合物(1 : 20比例制備的微米球如圖2所示，微米球的表面光滑、粒徑分布均勻，粒徑 為約40-100 iim;其它相應(yīng)比例3 : 20、1 : 15或2 : 245制備的微米球的粒徑分別約為 60-150 ii m、 100-200 ii m和200-500 ii m，圖上均未顯示)。 1 : 20比例制備的微米球在體外釋放曲線如圖3所示，結(jié)果顯示沒有突釋和不完全釋放，其它也有類似的結(jié)果但圖上未顯示。
實(shí)施例二 ①胰島素納米球組合物制備 a)預(yù)先將硫酸鋅分別溶解在重量濃度為0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量 為10000的葡聚糖溶液中，配制成重量百分比濃度分別為O. 001%、0. 001%、5%、10%、或 20%等溶液； b)將胰島素溶解在酸性(鹽酸溶液，pH < 2)重量百分比濃度分別為1%、5%、 10X、20X或40X的PEG(分子量為6000道爾頓)配制成重量百分比濃度分別為0. 001%、 1%、5%、10%或20%等; c)然后再在上述步驟a)和b)的溶液按照重量比分別為1 : 1、1 : 10、1 : 8、 1 : 3或3 : 14等把步驟a)的溶液滴加b)的溶液中并不斷地?cái)嚢瑁?
d)然后再將上述步驟c)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干，
e)將上述步驟d)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解PEG，再離心除去上清液即PEG 的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去PEG即得胰島素納米球組合 物(即制備到胰島素占胰島素納米球組合物的重量百分比分別為50%、99. 98%、80%、 60%或70% ;葡聚糖分別為0%、0. 01%、10%、20%或15% ;硫酸鋅分別為50%、0. 01%、 10%、20%或15%);(結(jié)果類似如圖1所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均勻，按照1 : 1、
i : io、i : 8、i : 3或3 : 14制備的胰島素納米球的粒徑分別約為o.oi-o.04iim、
0. 02-0. 06 ii m、0. 3-1 ii m、0. 5-1. 5 ii m禾卩0. 4-2 ii m。) ②胰島素緩釋微米球組合物制備 a)將①得占胰島素納米球組合物和聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)重量百分比濃度 5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為1 : 20、3 : 20、
i : 9、i : 15或2 : 245(相對應(yīng)的胰島素納米球組合物所占胰島素緩釋微米球組合物的
重量百分比為50%、60%、85%、75%或98% )比例攪拌、漩渦或超聲0. 1_5分鐘形成均 勻得混懸液，即油包固體(S/0)乳液； b)把步驟(a)得乳液滴加到1 % _10%氯化鈉和1 % -10%的聚乙二醇(PVA)溶液 并攪拌、漩渦或超聲0. 1-5分鐘形成復(fù)乳； (c)把步驟(b)的復(fù)乳加到濃度為1% -10%的100ml OOOml氯化鈉溶液固化 1-4小時； (d)把步驟(c)得到的離心收集微米球，并用水洗滌3-5次，凍干后得到微米球組 合物(上述比例制備的微米球類似如圖2所示，微米球的表面光滑、粒徑分布均勻，相應(yīng)比 例l : 20、3 : 20、 1 : 9、1 : 15或2 : 245制備的微米球的粒徑分別約l-10iim、10-50iim、 80-120 ii m、 100-200 ii m和200-500 ii m，圖上均未顯示)。 相應(yīng)比例制備的微米球在體外釋放曲線類似如圖3所示，結(jié)果顯示沒有突釋和不
完全釋放，其它也有類似的結(jié)果但圖上未顯示。
實(shí)施例三 ①胰島素納米球組合物制備 a)預(yù)先將硝酸鋅分別溶解在重量濃度為0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量 為100000的葡聚糖溶液中，配制成重量百分比濃度分別為0. 001 % 、0. 001 % 、5% 、 10% 、或20%等溶液； b)將胰島素溶解在酸性(鹽酸溶液，pH < 2)重量百分比濃度分別為1%、5%、 10X、20X或40X的PEG(分子量為4000道爾頓)配制成重量百分比濃度分別為0. 001%、 1%、5%、10%或20%等; c)然后再在上述步驟a)和b)的溶液按照重量比分別為1 : 1、1 : 10、1 : 8、 1 : 3或3 : 14等把步驟a)的溶液滴加b)的溶液中并不斷地?cái)嚢瑁?
d)然后再將上述步驟c)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干，
e)將上述步驟d)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解PEG，再離心除去上清液即PEG 的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去PEG即得胰島素納米球組合 物(即制備到胰島素占胰島素納米球組合物的重量百分比分別為50%、99. 98%、80%、 60%或70% ;葡聚糖分別為0%、0. 01%、10%、20%或15% ;硝酸鋅分別為50%、0. 01%、 10%、20%或15%);(結(jié)果類似如圖1所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均勻，按照1 : 1、
i : io、i : 8、i : 3或3 : 14制備的胰島素納米球的粒徑分別約為o.ois-o.04iim、
0. 03-0. 06 ii m、0. 35-1 ii m、0. 52-1. 5 ii m禾口 0. 45-2 ii m。)
②胰島素緩釋微米球組合物制備 a)將①得占胰島素納米球組合物和聚乳酸_羥基乙酸(PLGA)重量百分比濃度為 5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為1 : 20、3 : 20、
i : 9、i : 15或2 : 245(相對應(yīng)的胰島素納米球組合物所占胰島素緩釋微米球組合物的
重量百分比為50%、60%、85%、75%或98% )比例攪拌、漩渦或超聲1_5分鐘形成均勻得 混懸液，即油包固體(S/0)乳液; b)把步驟(a)得乳液滴加到1 % _10%氯化鈉和1 % -10%的聚乙二醇(PEG)溶液 并攪拌、漩渦或超聲0. 1-5分鐘形成復(fù)乳； (c)把步驟(b)的復(fù)乳加到濃度為1 % -10%的1000ml氯化鈉溶液固化1_4小時；
(d)把步驟(c)得到的離心收集微米球，并用水洗滌3-5次，凍干后得到微米球組 合物。(上述比例制備的微米球類似如圖2所示，微米球的表面光滑、粒徑分布均勻，相應(yīng)比 例l : 20、3 : 20、1 : 9、1 : 15或2 : 245制備的微米球的粒徑分別約l-10iim、10-50iim、 80-120 ii m、 100-200 ii m和200-500 ii m，圖上均未顯示)。 相應(yīng)比例制備的微米球在體外釋放曲線類似如圖3所示，結(jié)果顯示沒有突釋和不
完全釋放，其它也有類似的結(jié)果但圖上未顯示。
實(shí)施例四 ①胰島素納米球組合物制備 a)預(yù)先將硫酸氫鋅分別溶解在重量濃度為0%、0.001%、5%、10%或20%的分子 量為60000-70000的葡聚糖溶液中，配制成重量百分比濃度分別為0. 001%、0. 001%、5%、 10%、或20%等溶液； b)將胰島素溶解在酸性(鹽酸溶液，pH < 2)重量百分比濃度分別為1%、5%、 10X、20X或40X的PEG(分子量為2000道爾頓)配制成重量百分比濃度分別為0. 001%、 1%、5%、10%或20%等; c)然后再在上述步驟a)和b)的溶液按照重量比分別為i : i、i : io、i : 8、
1 : 3或3 : 14等把步驟a)的溶液滴加b)的溶液中并不斷地?cái)嚢瑁?br> d)然后再將上述步驟c)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干，
e)將上述步驟d)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解PEG,再離心除去上清液即PEG 的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去PEG即得胰島素納米球組合 物(即制備到胰島素占胰島素納米球組合物的重量百分比分別為50%、99. 98%、80%、 60%或70% ;葡聚糖分別為0%、0. 01%、10%、20%或15% ;硝酸鋅分別為50%、0. 01%、 10%、20%或15%);(結(jié)果類似如圖1所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均勻，按照1 : 1、 1 : 10、1 : 8、1 : 3或3 : 14制備的胰島素納米球的粒徑分別約為O. OIO-0.035iim、 0. 025-0. 06 ii m、0. 34-1 ii m、0. 50-1. 5 ii m禾口 0. 45-2 ii m。)
②胰島素緩釋微米球組合物制備 a)將①得占胰島素納米球組合物和聚己內(nèi)脂(PCL)重量百分比濃度為5%、10%、 15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為1 : 20、3 : 20、1 : 9、1 : 15 或2 : 245(相對應(yīng)的胰島素納米球組合物所占胰島素緩釋微米球組合物的重量百分比為 50%、60%、85%、75%或98% )比例攪拌、漩渦或超聲1_5分鐘形成均勻得混懸液，即油包 固體(S/0)乳液; b)把步驟(a)得乳液滴加到1% _10%氯化鈉和1% _10%的聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)溶液并攪拌、漩渦或超聲1-5分鐘形成復(fù)乳； (c)把步驟(b)的復(fù)乳加到濃度為1% -10%的100ml OOOml氯化鈉溶液固化 1-4小時； (d)把步驟(c)得到的離心收集微米球 ，并用水洗滌3-5次，凍干后得到微米球 組合物(上述比例制備的微米球類似如圖2所示，微米球的表面光滑、粒徑分布均勻，相應(yīng) 比例1 : 20、3 : 20、1 : 9、1 : 15或2 : 245制備的微米球的粒徑分別約40-100iim、 60-150 ii m、80-120 ii m、 100-200 ii m和200-500 ii m，圖上均未顯示)。 相應(yīng)比例制備的微米球在體外釋放曲線類似如圖3所示，結(jié)果顯示沒有突釋和不
完全釋放，其它也有類似的結(jié)果但圖上未顯示。
實(shí)施例五 ①胰島素納米球組合物制備 a)預(yù)先將葡糖酸鋅分別溶解在重量濃度為0%、0.001%、5%、10%或20%的分子 量為500000的葡聚糖溶液中，配制成重量百分比濃度分別為0. 001 % 、0. 001 % 、5% 、 10% 、 或20%等溶液； b)將胰島素溶解在酸性(鹽酸溶液，pH < 2)重量百分比濃度分別為1%、5%、 10X、20X或40X的PEG(分子量為300000道爾頓)配制成重量百分比濃度分別為 0. 001%、1%、5%、10%或20%等; c)然后再在上述步驟a)和b)的溶液按照重量比分別為1 : 1、1 : 10、1 : 8、 1 : 3或3 : 14等把步驟a)的溶液滴加b)的溶液中并不斷地?cái)嚢瑁?
d)然后再將上述步驟c)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干，
e)將上述步驟d)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解PEG，再離心除去上清液即PEG 的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去PEG即得胰島素納米球組合 物(即制備到胰島素占胰島素納米球組合物的重量百分比分別為50%、99.98%、60%或 80% ;葡聚糖分別為0%、0.002%、10%或20% );(如圖l所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均勻，約0.01-0. 03 ii m);(其中1 : IO如圖l所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均勻，約
0.0l-o.03iim;其它的i : i、i : 3或i : 4顆粒的表面與i : io的相似比較光滑、粒徑
分布也較均勻，粒徑約則分別為0. 3-1 ii m、0. 5-1. 5 ii m和0. 4_2 y m、)
②胰島素緩釋微米球組合物制備 a)將①得占胰島素納米球組合物和聚乳酸(PLA)重量百分比濃度為5%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為1 : 20、3 : 20、1 : 9、1 : 15或2 : 245(相對應(yīng)的胰島素納米球組合物所占胰島素緩釋微米球組合物的重量百分比為50%、60%、85%、75%或98% )比例攪拌、漩渦或超聲0. 1_5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體(S/0)乳液; b)把步驟(a)得乳液滴加到1 % _10%氯化鈉和1 % -10%的聚乙二醇(PEG)溶液并攪拌、漩渦或超聲1-5分鐘形成復(fù)乳； (c)把步驟(b)的復(fù)乳加到濃度為1% -10%的100ml OOOml氯化鈉溶液固化1-4小時； (d)把步驟(c)得到的離心收集微米球，并用水洗滌3-5次，凍干后得到微米球組合物(上述比例制備的微米球類似如圖2所示，微米球的表面光滑、粒徑分布均勻，相應(yīng)比例l : 20、3 : 20、 1 : 9、1 : 15或2 : 245制備的微米球的粒徑分別約l-10iim、10-50iim、50-120 ii m、 100-200 ii m和200-500 ii m，圖上均未顯示)。 相應(yīng)比例制備的微米球在體外釋放曲線類似如圖3所示，結(jié)果顯示沒有突釋和不
完全釋放，其它也有類似的結(jié)果但圖上未顯示。
實(shí)施例六 ①胰島素納米球組合物制備 a)預(yù)先將醋酸鋅分別溶解在重量濃度為0%、0.001%、5%、10%或20%的分子量為5000000的葡聚糖溶液中，配制成重量百分比濃度分別為0. 001 % 、0. 001 % 、5% 、 10% 、或20%等溶液； b)將胰島素溶解在酸性(鹽酸溶液，pH < 2)重量百分比濃度分別為1%、5%、10X、20X或40X的PEG(分子量為300000道爾頓)配制成重量百分比濃度分別為0. 001%、1%、5%、10%或20%等; c)然后再在上述步驟a)和b)的溶液按照重量比分別為i : i、i : io、i : 8、
1 : 3或3 : 14等把步驟a)的溶液滴加b)的溶液中并不斷地?cái)嚢瑁?br> d)然后再將上述步驟c)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干，
e)將上述步驟d)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解聚乙二醇(PEG)，再離心除去上清液即PEG的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去PEG即得胰島素納米球組合物(即制備到胰島素占胰島素納米球組合物的重量百分比分別為50%、99. 98%、60%或80%;葡聚糖分別為0%、0.002%、10%或20% );(如圖l所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均勻，約0.01-0. 03 ii m);(其中1 : 10如圖1所示，顆粒的表面光滑、粒徑分布均
勻，約o.oi-o.03iim;其它的i : i、i : 3或i : 4顆粒的表面與i : io的相似比較光滑、
粒徑分布也較均勻，粒徑約則分別為0. 3-1 ii m、0. 5-1. 5 ii m和0. 4-2 y m、)
②胰島素緩釋微米球組合物制備 a)將①得占胰島素納米球組合物和聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)重量百分比濃度為
115%、10%、15%、20%或40%的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為1 : 20、3 : 20、
i : 9、i : 15或2 : 245(相對應(yīng)的胰島素納米球組合物所占胰島素緩釋微米球組合物的
重量百分比為50%、60%、85%、75%或98% )比例攪拌、漩渦或超聲1_5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體(S/0)乳液; b)把步驟(a)得乳液滴加到1 % _10%氯化鈉和1 % -10%的聚乙烯醇(PVA)溶液并攪拌、漩渦或超聲1-5分鐘形成復(fù)乳； (c)把步驟(b)的復(fù)乳加到濃度為1% _10%的100ml 000ml氯化鈉溶液固化1-4小時； (d)把步驟(c)得到的離心收集微米球，并用水洗滌3-5次，凍干后得到微米球組合物(上述比例制備的微米球類似如圖2所示，微米球的表面光滑、粒徑分布均勻，相應(yīng)比例l : 20、3 : 20、1 : 9、1 : 15或2 : 245制備的微米球的粒徑分別約l-10iim、10-50iim、50-120 ii m、 100-200 ii m和200-500 ii m，圖上均未顯示)。 相應(yīng)比例制備的微米球在體外釋放曲線類似如圖3所示，結(jié)果顯示沒有突釋和不完全釋放，其它也有類似的結(jié)果但圖上未顯示。
1權(quán)利要求
一種胰島素緩釋微米球組合物，其特征是，所述的組合物粒徑為∶1-500μm，其組分和重量百分比為聚乳酸-羥基乙酸、聚乳酸或聚己內(nèi)酯為50％-98％、胰島素納米球組合物為2％-50％。
2. 權(quán)利要求1所述的制備胰島素緩釋微米球組合物，其特征是，所述的胰島素納米球 組合物，其組分和重量百分比為胰島素為50%-99. 99%、葡聚糖為0%-50%、鋅離子化合 物為0. 01% -50%。
3. 權(quán)利要求2所述的制備胰島素緩釋微米球組合物，其特征是，所述的鋅離子化合物 為醋酸鋅、氯化鋅、硫酸鋅、硫酸氫鋅、硝酸鋅或葡萄糖酸鋅。
4. 一種如權(quán)利要求1所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，其特征在于，包括 如下步驟① 胰島素納米球組合物制備a) 預(yù)先將占胰島素納米球組合物的重量百分比為0.01% _50%鋅離子的化合物配制 成溶液或鋅離子化合物和含有占胰島素納米球組合物的重量百分比為0% _50%葡聚糖配 制成葡聚糖和鋅離子化合物的溶液；b) 然后再在上述步驟a)的溶液中滴加含有占胰島素納米球組合物的重量百分比為 50% -99. 99%的胰島素溶解在pH < 2鹽酸溶液酸性的PEG溶液中；c) 然后再將上述步驟b)所混和均勻的在冷凍室預(yù)凍8-32小時，然后凍干，d) 將上述步驟c)凍干后的粉末利用有機(jī)溶劑溶解聚乙二醇，再離心除去上清液即聚 乙二醇的有機(jī)溶液，重復(fù)三次，然后揮發(fā)干收集然后用有機(jī)溶劑除去聚乙二醇即得胰島素 納米球組合物；② 胰島素緩釋微米球組合物制備a) 將步驟①得占胰島緩釋微米球組合物的重量百分比為2% _50%胰島素納米球組合 物加入到占胰島素緩釋微米球組合物的重量百分比為50% _98%聚乳酸-羥基乙酸、聚乳 酸、或聚己內(nèi)酯有機(jī)溶液后，形成混懸液；b) 將完成步驟a)形成微米球的混懸液加到重量百分比濃度為小于10%的氯化鈉溶液 和重量百分比濃度為1% _10%表面活性劑乳化l-5min，然后把它轉(zhuǎn)移到重量百分比濃度 為1 % -10%的氯化鈉溶液固化1-4小時；然后將收集的微米球用水洗滌三到五次除去表面 活性劑和氯化鈉；c) 將完成步驟b)的樣品凍干除去水分得胰島素緩釋微米球組合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，其特征是，所述的鋅 離子的化合物為醋酸鋅、氯化鋅、硫酸鋅、硫酸氫鋅、硝酸鋅、葡萄糖酸鋅或它們的任意混 合物的重量百分比濃度為0. 001% -20%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，其特征是，所述的葡 聚糖的重量百分比濃度為0. 001% _20%，葡聚糖的分子量為10000-500000。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，其特征是，所述的聚 乙二醇的分子量為2， 000-300， 000道爾頓，在水溶液中的重量百分比濃度為1% _40%。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，其特征是，所述的有 機(jī)溶液中的有機(jī)溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，其特征是，所述的聚乳酸_羥基乙酸、聚乳酸、聚己內(nèi)酯或它們的任意混合物的有機(jī)溶液濃度為聚乳酸_羥基乙酸、聚乳酸、聚己內(nèi)酯或它們的任意混合物的重量百分比濃度為5% _40%。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素緩釋微米球組合物的制備方法，其特征是，所述的表面活性劑為聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮或泊洛沙姆。
全文摘要
一種生物技術(shù)制藥領(lǐng)域的胰島素緩釋微米球組合物及其制備方法，其組分和重量百分比為聚乳酸-羥基乙酸、聚乳酸或聚己內(nèi)酯為50％-99.8％、胰島素納米球組合物為0.2％-50％。制備方法包括①胰島素納米球組合物制備；②胰島素緩釋微米球組合物制備。本發(fā)明克服現(xiàn)有的技術(shù)不能制備球形的微納米球及在高分子緩控釋放材料里的穩(wěn)定性，同時可以克服包封率不高，和S/O/O的嚴(yán)重突釋，及造成的環(huán)境污染的缺點(diǎn)；采用該方法制備微米球，其粒徑的大小可控制，不污染環(huán)境，微米球組合物的表面光滑圓整，顆粒規(guī)整無粘連，粒徑可以根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)控從1μm到200μm，其凍干粉劑為白色細(xì)膩，疏松，不會塌陷，不粘連，再分散性良好。
文檔編號A61K47/36GK101721375SQ20091031264
公開日2010年6月9日 申請日期2009年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月30日
發(fā)明者劉成容, 吳飛, 袁偉恩, 金拓, 陳維娟 申請人:上海交通大學(xué)