專利名稱：誘餌流感療法的制作方法
誘餌流感療法相關(guān)申請(qǐng)案的交叉參考本申請(qǐng)案主張2008年1月3日申請(qǐng)的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)案第61/018，783號(hào)的優(yōu) 先權(quán)，該案完整內(nèi)容以引用的方式并入本文中。政府支持本發(fā)明是在美國國立綜合醫(yī)學(xué)研究所(National Institute of General Medical Sciences)(合作研究(glue grant)合同號(hào)TO4GM62116)和美國國立衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health)(合同號(hào)GM57073)所授權(quán)的美國政府支持下進(jìn)行。美國政府對(duì)本 發(fā)明享有某些權(quán)利。
背景技術(shù)：
流感經(jīng)歷了一個(gè)漫長(zhǎng)的歷程大規(guī)模流行、流行、復(fù)蘇和爆發(fā)。禽流感，包括H5m 毒株引起的禽流感，是一種高傳染性并且可能會(huì)致死的病原體，但其目前感染人類的能力 有限。然而，據(jù)過去的觀察，禽流感病毒能累積突變，而這些突變將改變其宿主特異性并使 其易于感染人類。事實(shí)上，上世紀(jì)的兩次重大的流感大規(guī)模流行都是起源于禽流感病毒，其 改變其遺傳組成以弓I致人類感染。流感仍然是醫(yī)療系統(tǒng)的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。此外，當(dāng)前的H5m、H7N7、H9N2和H2N2禽流感 病毒株可能累積改變其宿主特異性并使其易于感染人類的突變，是一個(gè)重要的問題。亟需 改進(jìn)的用于減少并治療人類流感(包括流感流行和大規(guī)模流行)的系統(tǒng)和藥劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供用于鑒別適用作流感治療劑的藥劑的系統(tǒng)，以及所述藥劑、含有所述 藥劑的組合物和其使用方法。除此之外，本發(fā)明還提供模擬傘形拓?fù)?umbrella-topology) 聚糖和/或與傘形拓?fù)渚厶歉?jìng)爭(zhēng)與流感血球凝集素多肽的相互作用的藥劑。


圖1 野生型HA的示范性序列的比對(duì)。序列是從NCBI流感病毒序列數(shù)據(jù)庫 (http://www. ncbi. nlm. nih. gov/genomes/FLU/FLU. html)獲得。圖2 :HA聚糖結(jié)合結(jié)構(gòu)域的序列比對(duì)?；疑Y(jié)合唾液酸所涉及的保守氨基酸。 紅色結(jié)合Neu5Ac a2-3/6Gal基序所涉及的特定氨基酸。黃色影響Q226 (137、138) 和E190(186、228)定位的氨基酸。綠色結(jié)合其它連接到Neu5Ac a 2_3/6Gal基序的單 糖(或修飾)所涉及的氨基酸。ASI30、APR34、A而63、ADS97和Viet04的序列都是從其 各自的晶體結(jié)構(gòu)獲得。其它序列是從瑞士蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫Swi ssProt(http://us. expasy. org)獲得?？s寫:ADA76, A/ 鴨 / 艾伯塔(Alberta)/35/76 (HlNl) ；ASI30, A/ 豬 / 愛荷華 (Iowa)/30 (HlNl) ；APR34，A/波多黎各(Puerto Rico)/8/34 (HlNl) ；ASC18，A/南卡羅來納 州(South Carolina)/1/18 (HlNl) ；AT91，A/得克薩斯(Texas)/36/91 (HlNl) ；ANY18，A/紐 約(New York)/1/18 (HlNl) ；ADU63, A/鴨 / 烏克蘭(Ukraine)/1/63 (H3N8) ；AAI68, A/愛
7知(Aichi)/2/68 (H3N2) ；AM99, A/ 莫斯科(Moscow)/10/99 (H3N2) ；ADS97, A/ 鴨 / 新加坡 (Singapore)/3/97 (H5N3) ；Viet04，A/越南(Vietnam)/1203/2004 (H5m)。圖3 說明Hl HA的保守子序列特征的序列比對(duì)。圖4 說明H3 HA的保守子序列特征的序列比對(duì)。圖5 說明H5 HA的保守子序列特征的序列比對(duì)。圖6 α 2-3-和α 2_6唾液酸化聚糖的錐形拓?fù)渑c傘形拓?fù)涞谋容^。α 2-3-和 α 2-6 的拓?fù)浞謩e是由三糖基序 Neu5Ac α 2_3Gal β l_3/4GlcNAc 和 Neu5Ac α 2_6Gal β l-4GlcNAc的糖苷扭轉(zhuǎn)角控制(圖7)。參數(shù)(θ )，即這些三糖基序中 Neu5Ac的C2原子與隨后的Gal和GIcNAc糖的Cl原子之間的角，經(jīng)定義以表征所述拓?fù)洹?θ輪廓與α 2-3和α 2-6基序的構(gòu)象圖的疊加顯示，α 2_3基序采用100%的錐形拓?fù)洌?α 2-6基序采取錐形和傘形拓?fù)?圖7)。在α 2-3和α 2-6采取的錐形拓?fù)渲校珿lcNAc和 隨后的糖沿橫越錐形的區(qū)域定位。HA與錐形拓?fù)涞南嗷プ饔弥饕婕坝芯幪?hào)位置(根據(jù) H3HA編號(hào))的氨基酸與Neu5Ac和Gal糖的接觸。另一方面，在α 2_6特有的傘形拓?fù)渲校?\GlcNAc和隨后的糖轉(zhuǎn)向HA結(jié)合位點(diǎn)(如在HA-α 2-6共晶體結(jié)構(gòu)中所觀察到的)。較長(zhǎng) 的α 2-6寡糖(例如至少四糖)將偏好此構(gòu)象，因?yàn)槠淠芡ㄟ^GIcNAC與Neu5Ac之間乙酰 基的糖內(nèi)范德華接觸(intra-sugar van der Waals contact)穩(wěn)定。HA與傘形拓?fù)涞南嗷?作用除涉及有編號(hào)位置(根據(jù)H3HA編號(hào))的氨基酸與Neu5Ac和Gal糖的接觸外，還涉及 其與GIcNAC和隨后的糖的接觸。圖7 :α2_3和α2_6的錐形與傘形拓?fù)錁?gòu)象采樣。(A) - (D)分別顯示Neu5Ac α 2_3Gal、Neu5Ac α 2_6Gal、Gal β l_3GlcNAc 禾Π Gal β l_4GlcNAc 鍵聯(lián)的構(gòu)象(Φ，Ψ) 圖 °這些從GlycoMaps DB (http://www. glycosciences. de/model ing/glycomapsdb/)獲得 的圖是使用MM3力場(chǎng)，使用從頭分子動(dòng)力學(xué)(MD)模擬產(chǎn)生。能量分布是以顏色編碼，從紅色 (表示最高能量)開始到綠色(表示最低能量)。圈住的區(qū)域1-5表示在HA-聚糖共晶體結(jié) 構(gòu)中所觀察到的α 2-3和α 2-6寡糖的(Φ，Ψ)值。在HA結(jié)合口袋中，Neu5Ac α 2_3Gal 的反式構(gòu)象(圈住的區(qū)域1)占優(yōu)勢(shì)，但A/愛知/2/68H3N2HA與α 2-3的共晶體結(jié)構(gòu)除外， 其構(gòu)象是非對(duì)稱的(圈住的區(qū)域2)。另一方面，在HA結(jié)合口袋中，Neu5Ac α 2_6Gal的順 式構(gòu)象(圈住的區(qū)域3)占優(yōu)勢(shì)。圈住的區(qū)域1和2采取錐形拓?fù)?，而圈住的區(qū)域3采取 傘形拓?fù)洹?E)-(F)分別顯示α 2-3和α 2-6基序的錐形和傘形拓?fù)洳蓸?。?gòu)象圖中標(biāo)為 紅色的區(qū)域用作外邊界，以計(jì)算一組給定的(Φ，Ψ)值的θ參數(shù)(Neu5Ac的C2原子與隨 后的Gal和GlcNAc糖的Cl原子之間的角)。根據(jù)能量截止，使用大于110°的θ值來表 征錐形拓?fù)?，并且使用小?00°的θ值來表征傘形拓?fù)洹＆容喞c構(gòu)象能量圖的疊加指 示，由于α 2-3基序在能量方面不利于采用傘形拓?fù)洌势洳捎?00%的錐形拓?fù)?。另一?面，α 2-6基序采取錐形和傘形拓?fù)洌疫@一采樣是根據(jù)Neu5Ac α 2_6Gal鍵聯(lián)的ω角 (0-C6-C5-H5)歸類。圖8.示范性錐形拓?fù)?。本圖說明采用錐形拓?fù)涞哪承┦痉缎?但不詳盡)聚糖 結(jié)構(gòu)。圖9.示范性傘形拓?fù)洹?A)某些可采用傘形拓?fù)涞氖痉缎?但不詳盡)N和0連 接聚糖結(jié)構(gòu)。(B)某些可采用傘形拓?fù)涞氖痉缎?但不詳盡)0連接聚糖結(jié)構(gòu)。圖10. HA結(jié)合聚糖陣列數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)挖掘分析。上圖顯示從代表性復(fù)雜聚糖結(jié)構(gòu)中歸納出的聚糖特征類型(例如一對(duì)、三聯(lián)體、四聯(lián)體等)的實(shí)例。所述全面的特征組是從聚 糖陣列中的各聚糖歸納得到。下圖顯示使用聚糖陣列分析的各HA的復(fù)雜分類規(guī)則的圖示。 α 2-3Α型表示最廣泛的特異性，而B型和C型分類表示由三糖α 2-3基序周圍的結(jié)構(gòu)變化 所強(qiáng)加的限制。α 2-6Α型表示結(jié)合長(zhǎng)α 2_6(線性或分枝)，而B型表示結(jié)合短α 2_6 (線 性或分枝)。在陣列上，“核心”對(duì)應(yīng)于連接到還原端的間隔基，或在單個(gè)α 2-6雙觸聚糖 的情況下，對(duì)應(yīng)于三甘露糖基(trimarmosyl)核心。a 只有在巖藻糖基化α 2_3基序具有 GlcNAc[6S]的情況下，才能觀察到結(jié)合信號(hào)；b 只觀察到6’-唾液乳糖的結(jié)合信號(hào);c 也觀 察到較短6，-唾液乳糖胺的結(jié)合信號(hào)(B型)；d 結(jié)合信號(hào)明顯低于H5m雙突變株的α 2-3Β 型；e 只觀察到具有GlcNAc[6S]的較短α 2-6的結(jié)合信號(hào)；f 結(jié)合信號(hào)剛好高于所觀察到 的具有GlcNAc [6S]的α 2-3基序的背景；* =A/越南/1203/04的來源是禽類，但此病毒株
是從受感染的人類分離得到。圖例f6_o硫酸化GIcNAc ；,_(；1(；或GalNAc ；...抖未巖藻 糖基化 GlcNAc ；fu無 GalNAc β l_4Gal 鍵聯(lián)的 Gal。圖11 :Viet04_H5HA與雙觸α 2-6唾液酸化聚糖(錐形拓?fù)?的結(jié)合。表面的立 體視圖用呈延長(zhǎng)構(gòu)象的Neu5Ac α 2_6Gal鍵聯(lián)表現(xiàn)Viet04_H5聚糖結(jié)合位點(diǎn)(從百日咳毒 素共晶體結(jié)構(gòu)獲得；PDB ID:1PT0)。Lysl93(橙色)與呈此構(gòu)象的聚糖無任何接觸。其它 可能涉及結(jié)合呈此構(gòu)象的聚糖的氨基酸包括Asnl86、Lys222和Ser227。然而，在所述延 長(zhǎng)構(gòu)象中不存在結(jié)合呈順式構(gòu)象的α 2-6唾液酸化寡糖的HA中所觀察到的某些接觸。不 希望受任何特定理論的束縛，可注意到，這表明延長(zhǎng)構(gòu)象與HA的結(jié)合可能不如順式構(gòu)象 理想。Neu5Ac a2-6Gal β l_4GlcNAcb 分枝連接到 Man α l_3Man (PDB ID 1LGC)禾口 Man α l-6Man(PDB ID : 1ZAG)的分枝狀N連接聚糖的結(jié)構(gòu)疊加于Neu5Ac α 2_6Gal鍵聯(lián)的順式 和延長(zhǎng)構(gòu)象的Viet04H5HA結(jié)合位點(diǎn)中的Neu5Ac α 2_6Gal鍵聯(lián)上。所述疊加顯示，Neu5Ac α 2-6Gal β l_4GlcNAc分枝連接到核心的Man α l-6Man的結(jié)構(gòu)與結(jié)合位點(diǎn)具有不利的空 間重疊(在兩種構(gòu)象中)。另一方面，所述分枝連接到核心的Man α l-3Man的結(jié)構(gòu)(如圖 中所示，其中三甘露糖核心呈紫色)與順式構(gòu)象中的Lysl93具有空間重疊，但盡管不太理 想，仍能在不與延長(zhǎng)構(gòu)象中的Lysl93具有任何接觸的情況下結(jié)合。圖12 上呼吸道組織切片的凝集素染色。利用木菠蘿凝集素(Jacalin)(綠色) 和刀豆凝集素(ConA)(紅色)的氣管組織共染色揭示，木菠蘿凝集素(特異性結(jié)合0連接 聚糖)優(yōu)先與氣管頂表面上的杯狀細(xì)胞結(jié)合，而刀豆凝集素(特異性結(jié)合N連接聚糖)優(yōu) 先結(jié)合氣管纖毛上皮細(xì)胞。不希望受任何特定理論的束縛，本發(fā)明人注意到，此發(fā)現(xiàn)表明杯 狀細(xì)胞主要表達(dá)0連接聚糖，而纖毛上皮細(xì)胞主要表達(dá)N連接聚糖。利用木菠蘿凝集素和 SNA(紅色；特異性結(jié)合α 2-6)進(jìn)行的氣管共染色顯示，SNA結(jié)合杯狀細(xì)胞和纖毛細(xì)胞。另 一方面，木菠蘿凝集素(綠色)和特異性結(jié)合α 2-3唾液酸化聚糖的MAL (紅色)的共染色 顯示，MAL與假復(fù)層氣管上皮結(jié)合很弱，甚至不結(jié)合，但與所述組織的底層區(qū)域廣泛結(jié)合?？?的說來，凝集素染色數(shù)據(jù)指示分別作為氣管上皮頂面上纖毛和杯狀細(xì)胞中的N連接和0連 接聚糖的一部分的α 2-6唾液酸化聚糖的優(yōu)勢(shì)表達(dá)和廣泛分布。圖13 人上呼吸道組織的聚糖多樣性。(A)利用刀豆凝集素(紅色)/木菠蘿凝集 素(綠色)和SNA-I (紅色)/木菠蘿凝集素(綠色)進(jìn)行的氣管組織切片共染色。木菠蘿 凝集素結(jié)合的局部區(qū)域?qū)?yīng)于表達(dá)0連接聚糖的杯狀細(xì)胞，而刀豆凝集素結(jié)合的區(qū)域?qū)?yīng)于氣管上皮頂面上表達(dá)N連接聚糖(白色箭頭)的纖毛細(xì)胞。SNA-I與杯狀細(xì)胞(與黃色木 菠蘿凝集素共染色)和纖毛細(xì)胞的廣泛結(jié)合分別顯示在頂面上0連接和N連接α 2-6的優(yōu) 勢(shì)表達(dá)。已知纖毛上皮細(xì)胞主要表達(dá)N連接α 2-6，則對(duì)從人支氣管上皮(human bronchial epithelial, HBE)細(xì)胞分離的N連接聚糖進(jìn)行MALDI-MS分析?；谌祟愡m應(yīng)性Hmi和 H3N2病毒廣泛吸附至這些細(xì)胞，故將HBE細(xì)胞選作代表性上呼吸道纖毛上皮細(xì)胞。(B)使用 滿足質(zhì)量峰(在士 3. 5道爾頓范圍內(nèi))的可能的唾液酸化聚糖結(jié)構(gòu)的圖示顯示HBE細(xì)胞的 MALDI-MS聚糖分布圖。HBE主要表達(dá)α2_6(相比α 2_3)唾液酸化聚糖。(C)使用唾液酸 酶A去除唾液酸，隨后用2-ΑΒ標(biāo)記(B)中觀察到的N連接聚糖，以便由唾液酸的數(shù)量反褶 積出分枝模式。使用T0FT0F MS進(jìn)一步分析(B)和(C)中用青色突顯的峰。(D)m/z 2148 處代表性峰的MS-MS圖顯示m/z 548和713的碎片離子(fragment ion)，以及其對(duì)應(yīng)的支 持長(zhǎng)寡糖分枝(具有多個(gè)乳糖胺重復(fù))超過多個(gè)短乳糖胺分枝的平衡離子(以紅色顯示)。 m/z 2660的MS-MS圖也支持長(zhǎng)寡糖分枝。圖14 重組HI、H3WTHA與上和下呼吸道組織切片的劑量反應(yīng)性結(jié)合。HA結(jié)合是 相對(duì)于碘化丙啶染色(紅色)，以綠色顯示。氣管組織的頂面主要表達(dá)具有長(zhǎng)分枝拓?fù)涞?α 2-6聚糖。另一方面，肺泡組織主要表達(dá)α 2-3聚糖。HlHA顯著結(jié)合氣管頂表面，而且隨 著HlHA濃度從40 μ g/ml稀釋到10 μ g/ml，其結(jié)合逐漸減少。HlHA在最大濃度下，也僅有 些弱地結(jié)合肺泡組織。H3HA的結(jié)合模式不同于H1HA。例如，H3HA在40 μ g/ml和20 μ g/ml 下，顯著結(jié)合氣管和肺泡組織。然而，在10μ g/ml濃度下，H3HA主要結(jié)合氣管組織的頂面， 而極少結(jié)合或不結(jié)合肺泡組織?？偟恼f來，這些組織結(jié)合數(shù)據(jù)突顯了高親和力結(jié)合氣管組 織頂面的重要性。此外，這些數(shù)據(jù)還揭示，由于H3HA對(duì)α 2-3唾液酸化聚糖顯示出某種親 和力，故介導(dǎo)人類感染未必一定需要對(duì)α 2-6唾液酸化聚糖具有高特異性(如利用HlHA所 示)°圖15 人類適應(yīng)性Η1、Η2和Η3 HA的劑量依賴性直接結(jié)合。人類適應(yīng)性Η1、Η2和 Η3ΗΑ的特征性結(jié)合模式在于，在HA從40 μ g/ml稀釋到2. 5 μ g/ml的范圍內(nèi)，其結(jié)合處于 飽和水平。H1HA(SC18)有限的特異性與其限制性氣管組織結(jié)合相關(guān)(圖14)。另一方面， H3HA(Mos99)結(jié)合不同唾液酸化聚糖的能力與其同HlHA比較起來更為廣泛地結(jié)合氣管組 織切片一致(圖14)。圖16 :H5N1病毒的劑量依賴性直接聚糖結(jié)合。與人類適應(yīng)性HI、H2和H3HA的劑 量依賴性結(jié)合特征相比，Viet0304和HK486H5m病毒以高親和力結(jié)合α 2_3(飽和信號(hào)從 128降到32HAU)，并以極低親和力結(jié)合長(zhǎng)α 2_6寡糖。因此，本發(fā)明認(rèn)識(shí)到，具有硫酸化/ 巖藻糖基化取代的三糖基序Neu5Ac α 2-3Gal β l-3/4GlcNAc-(顯示于右側(cè))作為生理學(xué) N連接、0連接聚糖和糖脂的一部分，將是禽病毒的理想標(biāo)靶。圖17 :SC18、NY 18和AV18 HA與α 2-3和α 2-6的分子相互作用。HA上的聚糖 結(jié)合位點(diǎn)是以涉及聚糖結(jié)合的氨基酸顯示，包括高度保守的Neu5Ac錨(Thrl36、Trpl53、 Thrl55和Leul94)。為清楚起見，未顯示Tyr95和Hisl83。氨基酸位置是根據(jù)HmiHA編 號(hào)。(A)顯示SC18HA與呈傘形拓?fù)涞拈L(zhǎng)α 2-6的相互作用。Lys222、Asp225和Gln226提 供與基礎(chǔ)區(qū)域的接觸，而Aspl90、Glnl92和Serl93提供與延伸區(qū)域的接觸。(B)NY18HA與 長(zhǎng)α 2-6的相互作用顯示出Asp225與基礎(chǔ)區(qū)域接觸的喪失(如在(A)中，在SC18HA情況下 所觀察到的)。(C)AVlSHA與呈錐形拓?fù)涞摩?2-3的相互作用顯示，HA與錐形拓?fù)涞南嗷プ饔弥簧婕芭cNeu5Ac和Gal糖在基礎(chǔ)區(qū)域的接觸，這與長(zhǎng)α 2-6的傘形拓?fù)湫纬蓪?duì)照。AV18 中Glul90和Gln226是定位成提供與這些糖的最佳接觸。AV18中Glul90的側(cè)鏈構(gòu)象是根 據(jù)APR34HA- α 2-3共晶體結(jié)構(gòu)中Glul90的側(cè)鏈構(gòu)象指定。(D)顯示SC18、NY18與AV18HA 之間關(guān)鍵氨基酸位置的差異，將其與ASI30和APR34HA相比較。圖18:捕獲多價(jià)HA-聚糖相互作用的結(jié)合分析。圖中顯示連續(xù)結(jié)合分析與 HA單元和一次抗體(pAb)及經(jīng)標(biāo)記二次抗體(sAb)的預(yù)復(fù)合作用之間結(jié)合信號(hào)的比 較。為了研究多價(jià)HA-聚糖相互作用，使用包含代表性生物素化ci2-3和α2-6(短和 長(zhǎng))聚糖的抗生物素蛋白鏈菌素板陣列。在涂布抗生物素蛋白鏈菌素的高結(jié)合力(High BindingCapacity)384孔板(皮爾斯公司(Pierce))中裝載生物素化聚糖(3，SLN、6，SLN、 3’ SLN-LN、6’ SLN-LN和3’ SLN-LN-LN)，達(dá)到各孔的最高容量。此板陣列各孔中聚糖的空 間布置偏好只結(jié)合HA單元中三個(gè)HA單體中的一個(gè)。在涉及連續(xù)應(yīng)用HA單元、一次抗體和 二次抗體的ELISA型結(jié)合分析中，聚糖間距和HA單元的尺寸限制了 HA單元與單一聚糖的 結(jié)合。連續(xù)分析的條件偏好形成1 1 1比率的HA pAb sAb。盡管經(jīng)標(biāo)記sAb (每 個(gè)HA單元1個(gè))含量豐富，但甚至在40 μ g/ml的高HA濃度下觀察到的極小結(jié)合信號(hào)也支 持單一聚糖以低親和力結(jié)合一個(gè)HA單元(青色圓圈)。相反，HA單元與一次抗體和二次抗 體(HA 一次抗體二次抗體=4 2 1比率)的預(yù)復(fù)合作用促進(jìn)4個(gè)HA單元的特殊 空間布置。因此，所述預(yù)復(fù)合單元使得可研究多個(gè)HA單元的相對(duì)空間定位對(duì)多價(jià)聚糖結(jié)合 親和力的影響。倘若每個(gè)預(yù)復(fù)合HA單元具有4個(gè)結(jié)合事件(各事件由青色圓圈顯示)，則 與6’ SLN-LN的結(jié)合增加8倍顯示出，此空間布置通過多價(jià)結(jié)合增強(qiáng)了聚糖結(jié)合信號(hào)。結(jié) 合信號(hào)是根據(jù)HRP活性測(cè)定。所有分析都重復(fù)進(jìn)行3次。關(guān)于聚糖的圖例3’SLN :Neu5Ac α 2-3Gal β l_4GlcNAc ；6，SLN (短 α 2-6) :Neu5Ac α 2_6Gal β l_4GlcNAc ；3，SLN-LN Neu5Ac a2-3Gal βl-4GlcNAc β l_3Galβ l_4GlcNAc ;6， SLN-LN(長(zhǎng) α 2-6) :Neu5Ac α 2-6Gal β 1—4G1 cNAc β l_3Gal β 1—4G1 cNAc ；3，SLN—LN—LN :Neu5Ac α 2_3Gal β l-4GlcNAc β l-3Gal β l_4GlcNAc β l_3Gal β l_4GlcNAc圖19-21 =HlNl HA的劑量依賴性直接結(jié)合。在劑量依賴性預(yù)復(fù)合HA實(shí)驗(yàn)的情況 下，制備含有適量標(biāo)記His的HA蛋白、一次抗體(小鼠抗6X Hi s標(biāo)簽IgG)和二次抗體 (結(jié)合HRP的山羊抗小鼠IgG，圣塔克魯茲生物技術(shù)公司(Santacruz Biotechnology))(比 率為4 2 1)的儲(chǔ)備液，并在冰上培育20分鐘。用含BSA的PBS緩沖液，將適量預(yù) 復(fù)合HA儲(chǔ)備液稀釋到250 μ 1。將50 μ 1預(yù)復(fù)合的HA添加到涂布聚糖的各孔中，并在室溫 下培育2小時(shí)，隨后洗滌。為了定量結(jié)合親和力，定義結(jié)合參數(shù)K/，并根據(jù)以下模型進(jìn)行計(jì) 算。使用希爾等式(Hill equation)的典型形式表示多價(jià)結(jié)合y=wtii；'線性化后變?yōu)?br> / 、log= η*log([/M])-Iogfc')
v-y)其中y-HA單元中聚糖結(jié)合位點(diǎn)的飽和分率；[HA]-HA的濃度(以M為單位)；η-協(xié) 同因子；K/-多價(jià)HA-聚糖相互作用的表觀結(jié)合常數(shù)。y值是通過相對(duì)于飽和結(jié)合信號(hào)(其 表示在所有HA單元上100%的占有率)校正結(jié)合信號(hào)計(jì)算得到，η和K/是根據(jù)線性化希爾
11模型計(jì)算得到。通常，1指示正協(xié)同性，其中預(yù)復(fù)合物中一個(gè)HA單元的結(jié)合使另一 HA 單元的結(jié)合增強(qiáng)。另一方面，1指示負(fù)協(xié)同性，其中預(yù)復(fù)合物中一個(gè)HA單元的結(jié)合對(duì)其 它亞單元的結(jié)合具有負(fù)面影響。表觀結(jié)合常數(shù)K/主要用于定量不同HA與不同聚糖的相對(duì) 結(jié)合親和力，由此，其絕對(duì)值應(yīng)在比較親和力的情況下取得。在上述模型中，假設(shè)所述板各 孔中的聚糖多于HA。為了滿足這一假設(shè)，使用濃度范圍在0.05yg/ml到5yg/ml內(nèi)的HA 的結(jié)合信號(hào)來計(jì)算η和K/。所有人類適應(yīng)性Hl和Η3ΗΑ都以高親和力有效結(jié)合長(zhǎng)α 2-6 聚糖(6’SLN-LN)。在雪貂模型中，人類適應(yīng)性SC18和TX91Hmi病毒可有效傳播。人類適 應(yīng)性Mos99H3N2病毒是一種疫苗株。盡管來自NY18 (SC18的Asp225Gly單突變型，一種無 效傳播的病毒)的HA在高濃度下顯示出與其它有效人類適應(yīng)性HA相當(dāng)?shù)摩?-6結(jié)合，但 具有明顯較低的長(zhǎng)α 2-6結(jié)合親和力。相反，來自AV18(SC18的Aspl90Glu/Asp225Gly雙 突變型，一種不會(huì)傳播的病毒)的HA顯示出高結(jié)合親和力結(jié)合α2_3的相反傾向。圖22:SC18和ΝΥ18 HA與人氣管切片結(jié)合。在所有切片中，氣管上皮細(xì)胞的頂面 都是由白色箭頭指示。SC18HA的結(jié)合模式局限于頂面上特定區(qū)域周圍。NY 18HA則顯示出 分布良好的頂面結(jié)合模式(綠色HA相對(duì)于紅色PI)。如由MAL-II染色圖案確定，在表達(dá) α 2-3聚糖的上皮細(xì)胞內(nèi)區(qū)上，NY 18ΗΑ顯著染色。圖23 =SClS和NY18 HA與木菠蘿凝集素的人氣管共染色。在所有切片中，氣管上 皮細(xì)胞的頂面都是由白色箭頭指示。通過HA(紅色)與木菠蘿凝集素(綠色)(杯狀細(xì)胞 的標(biāo)志物)共染色，進(jìn)一步詳述SC18和NY18不同的頂面結(jié)合模式(圖22)。為清楚起見， 放大了頂面的代表性區(qū)域。SC18HA與木菠蘿凝集素(黃色)的顯著共染色指示，SClSHAi 要結(jié)合上皮細(xì)胞頂面上的杯狀細(xì)胞。NY18HA的結(jié)合模式與木菠蘿凝集素具有極少重疊，表 明其不結(jié)合氣管組織頂面上的杯狀細(xì)胞。
具體實(shí)施例方式HA序列元件的描述HA序列元件1HA序列元件1是大致對(duì)應(yīng)于天然流感分離株中所發(fā)現(xiàn)的多種HA蛋白的殘基 97-185 (其中使用H3HA作為參考物，來指定殘基位置)的序列元件。此序列元件的基本結(jié) 構(gòu)為C(Y/F)P X1 C X2 W X3 W X4 H H P，其中X1為大約30到大約45個(gè)氨基酸長(zhǎng)；X2為大約5到大約20個(gè)氨基酸長(zhǎng)；X3為大約25到大約30個(gè)氨基酸長(zhǎng)；且X4為大約2個(gè)氨基酸長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，X1為約35到約45，或約35到約43，或約35、約36、約37、約38、 約39、約40、約41、約42或約43個(gè)氨基酸長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，X2為約9到約15，或約9 到約14，或約9、約10、約11、約12、約13或約14個(gè)氨基酸長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，X3為約26 到約28，或約26、約27或約28個(gè)氨基酸長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，X4具有序列(G/A) (I/V)。在 一些實(shí)施例中，X4具有序列GI ；在一些實(shí)施例中，X4具有序列GV ；在一些實(shí)施例中，X4具有 序列AI ；在一些實(shí)施例中，X4具有序列AV。在一些實(shí)施例中，HA序列元件1包含二硫鍵。在一些實(shí)施例中，此二硫鍵橋接對(duì)應(yīng)于97位與139位(基于本文中利用的典型H3編號(hào)系 統(tǒng))的殘基。在一些實(shí)施例中，尤其是在Hl多肽中，X1為約43個(gè)氨基酸長(zhǎng)，和/或X2為約13 個(gè)氨基酸長(zhǎng)，和/或X3為約26個(gè)氨基酸長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，尤其是在Hl多肽中，HA序列元件1具有結(jié)構(gòu)C Y P Xia T(A/T) (A/S)C X2 W X3 W X4 H H P，其中Xia為大約27到大約42，或大約32到大約42，或大約32到大約40，或大約26到 大約41，或大約31到大約41，或大約31到大約39，或大約31、大約32、大約33、大約34、大 約35、大約36、大約37、大約38、大約39或大約40個(gè)氨基酸長(zhǎng)，并且X2-X4如上文所述。在一些實(shí)施例中，尤其是在Hl多肽中，HA序列元件1具有結(jié)構(gòu)CYPXiaT(A/T) (A/S)C X2 ff(I/L) (T/V)X3A W X4 H H P，其中:Xia為大約27到大約42，或大約32到大約42，或大約32到大約40，或大約32、大 約33、大約34、大約35、大約36、大約37、大約38、大約39或大約40個(gè)氨基酸長(zhǎng)，X3a為大約23到大約28，或大約24到大約26，或大約24、大約25或大約26個(gè)氨 基酸長(zhǎng)，并且X2和X4如上文所述。 在一些實(shí)施例中，尤其是在Hl多肽中，HA序列元件1通常在X1內(nèi)(包括在Xia內(nèi))， 尤其從X1的約殘基12開始，具有序列QLSSISSFEK,(如例如圖1到3中所說明)。在一些實(shí)施例中，尤其是在H3多肽中，X1為約39個(gè)氨基酸長(zhǎng)，和/或X2為約13 個(gè)氨基酸長(zhǎng)，和/或X3為約26個(gè)氨基酸長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，尤其是在H3多肽中，HA序列元件1具有結(jié)構(gòu)C Y P Xia S(S/N) (A/S)C X2 W X3 W X4 H H P，其中Xia為大約27到大約42，或大約32到大約42，或大約32到大約40，或大約23到 大約38，或大約28到大約38，或大約28到大約36，或大約28、大約29、大約30、大約31、大 約32、大約33、大約34、大約35、大約36、大約37、大約38、大約39或大約40個(gè)氨基酸長(zhǎng)， 并且X2-X4如上文所述。在一些實(shí)施例中，尤其是在H3多肽中，HA序列元件1具有結(jié)構(gòu)C Y P Xia S(S/N) (A/S) C X2 W L(T/H)X3A W X4 H H P，其中:Xia為大約27到大約42，或大約32到大約42，或大約32到大約40，或大約32、大 約33、大約34、大約35、大約36、大約37、大約38、大約39或大約40個(gè)氨基酸長(zhǎng)，X3a為大約23到大約28，或大約24到大約26，或大約24、大約25或大約26個(gè)氨 基酸長(zhǎng)，并且X2和X4如上文所述。在一些實(shí)施例中，尤其是在H3多肽中，HA序列元件1通常在X1內(nèi)(包括在XIa 內(nèi))，尤其從X1的約殘基12開始，包括序列(L/I) (V/I)A S S G T L E F,(如例如圖1、2和4中所說明)。在一些實(shí)施例中，尤其是在H5多肽中，X1為約42個(gè)氨基酸長(zhǎng)，和/或X2為約13 個(gè)氨基酸長(zhǎng)，和/或X3為約26個(gè)氨基酸長(zhǎng)。
13
在一些實(shí)施例中，尤其是在H5多肽中，HA序列元件1具有結(jié)構(gòu)C Y P Xia S S A C X2 W X3 W X4 H H P，其中Xia為大約27到大約42，或大約32到大約42，或大約32到大約40，或大約23到 大約38，或大約28到大約38，或大約28到大約36，或大約28、大約29、大約30、大約31、大 約32、大約33、大約34、大約35、大約36、大約37、大約38、大約39或大約40個(gè)氨基酸長(zhǎng)， 并且X2-X4如上文所述。在一些實(shí)施例中，尤其是在H5多肽中，HA序列元件1具有結(jié)構(gòu)C Y P Xia S S A C X2 W L I X3A W X4 H H P，其中Xia為大約27到大約42，或大約32到大約42，或大約32到大約40，或大約32、大 約33、大約34、大約35、大約36、大約37、大約38、大約39或大約40個(gè)氨基酸長(zhǎng)，且X3a為大約23到大約28，或大約24到大約26，或大約24、大約25或大約26個(gè)氨 基酸長(zhǎng)，并且X2和X4如上文所述。在一些實(shí)施例中，尤其是在H5多肽中，利用以下序列延長(zhǎng)(即，在對(duì)應(yīng)于殘基186 到193的位置)HA序列元件1 NDAAEXX (K/R)。在一些實(shí)施例中，尤其是在H5多肽中，HA序列元件1通常在X1內(nèi)，尤其從X1的約 殘基6開始，包括序列YEELKHLXSXXNHFEK,(如例如圖1、2和5中所說明)。HA序列元件2HA序列元件2是大致對(duì)應(yīng)于天然流感分離株中所發(fā)現(xiàn)的多種HA蛋白的殘基 324-340 (也是使用基于H3HA的編號(hào)系統(tǒng))的序列元件。此序列元件的基本結(jié)構(gòu)為G A I A G F I E。在一些實(shí)施例中，HA序列元件2具有序列P X1 G A I A G F I E，其中X1為大約4到大約14個(gè)氨基酸長(zhǎng)，或約8到大約12個(gè)氨基酸長(zhǎng)，或約12、大約11、 大約10、大約9或大約8個(gè)氨基酸長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，此序列元件提供HAO裂解位點(diǎn)，使 得產(chǎn)生HAl和HA2。在一些實(shí)施例中，尤其是在Hl多肽中，HA序列元件2具有結(jié)構(gòu)P S(I/V)Q S R Xia G A I A G F I E，其中Xia為大約3個(gè)氨基酸長(zhǎng)；在一些實(shí)施例中，Xia是G(L/I)F。在一些實(shí)施例中，尤其是在H3多肽中，HA序列元件2具有結(jié)構(gòu)PXKXTR Xia GAIAGFI E，其中Xia為大約3個(gè)氨基酸長(zhǎng)；在一些實(shí)施例中，Xia是G(L/I)F。在一些實(shí)施例中，尤其是在H5多肽中，HA序列元件2具有結(jié)構(gòu)PQRXXXRXXR Xia GAIAGFI E，其中Xia為大約3個(gè)氨基酸長(zhǎng)；在一些實(shí)施例中，Xia是G(L/I)F。定義親和力如所屬領(lǐng)域中已知，“親和力”是特定配體(例如，HA多肽)與其搭配物(例如，HA受體)結(jié)合的緊密度的量度。親和力可以不同方式測(cè)量。大約(Approximately)如本文所使用，術(shù)語“大約”或“約”當(dāng)應(yīng)用于一個(gè)或多個(gè) 相關(guān)值時(shí)，是指與指定參考值類似的值。在某些實(shí)施例中，除非另作說明，或另外從上下文 中顯而易見，否則術(shù)語“大約”或“約”是指值的范圍在指定參考值任一方向(大于或小于) 的 25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11 %、10%、9%、8%、7%、 6%、5%、4%、3%、2%、1%或以下的范圍內(nèi)。生物活性如本文所使用，短語“生物活性”是指在生物系統(tǒng)中，尤其在生物體中具 有活性的任何試劑的特征。例如，認(rèn)為當(dāng)投予生物體時(shí)，對(duì)所述生物體具有生物作用的試劑 具有生物活性。在特定實(shí)施例中，在蛋白質(zhì)或多肽具有生物活性的情況下，共有蛋白質(zhì)或多 肽的至少一種生物活性的一部分所述蛋白質(zhì)或多肽通常稱為“生物活性”部分。特征部分如本文所使用，短語蛋白質(zhì)或多肽的“特征部分”為含有連續(xù)氨基酸伸 長(zhǎng)或者一起為蛋白質(zhì)或多肽的特征的連續(xù)氨基酸伸長(zhǎng)的集合的部分。所述各連續(xù)伸長(zhǎng)通常 會(huì)含有至少兩個(gè)氨基酸。此外，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，蛋白質(zhì)的特征通常需要至少5、 10,15,20或20個(gè)以上氨基酸。一般來說，特征部分為除上文指定的序列一致性外，還與相 關(guān)完整蛋白質(zhì)共有至少一個(gè)功能特征的部分。特征序列“特征序列”為可以在多肽或核酸家族所有成員中發(fā)現(xiàn)的序列，因此所 屬領(lǐng)域技術(shù)人員可將其用于定義所述家族的成員。錐形拓?fù)涠陶Z“錐形拓?fù)洹痹诒疚闹杏糜谥改承┚厶?、尤其HA受體上的聚糖所采 用的三維布置。如圖6 (左圖)中所說明，α 2-3唾液酸化聚糖或α 2-6唾液酸化聚糖都可 采用錐形拓?fù)?，而且其為短鏈寡核苷酸所特有的，但一些長(zhǎng)鏈寡核苷酸也可采用此構(gòu)象。錐 形拓?fù)涫且訬eu5Ac α 2_3Gal鍵聯(lián)的糖苷扭轉(zhuǎn)角為特征，其采取由約_60、約60或約180的 Φ (C1-C2-O-CVC6)值以及-60到60的Ψ (C2-0-C3/C6-H3/C5)樣品所指定的具有最小能量構(gòu) 象的三個(gè)區(qū)域(圖7)。圖8展現(xiàn)采用錐形拓?fù)涞木厶堑哪承┐硇?但不詳盡)實(shí)例。對(duì)應(yīng)于如本文所使用，術(shù)語“對(duì)應(yīng)于”通常用于表示HA多肽中氨基酸殘基的位置 / 一致性。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，為簡(jiǎn)單起見，本文中(如例如圖1到5中所說明)利 用典型編號(hào)系統(tǒng)(基于野生型H3HA)，因此，例如“對(duì)應(yīng)于” 190位殘基的氨基酸無需實(shí)際上 是特定氨基酸鏈中的第190位氨基酸，而是對(duì)應(yīng)于在野生型H3HA中190位所見的殘基；所 屬領(lǐng)域技術(shù)人員容易了解如何鑒別相應(yīng)氨基酸。去除的分離程度(degree of separation removed)如本文所使用，作為“去除的 分離程度”的氨基酸是間接影響聚糖結(jié)合的HA氨基酸。舉例來說，去除的1度分離氨基酸 可(1)與直接結(jié)合氨基酸相互作用；和/或(2)以其它方式影響直接結(jié)合氨基酸與宿主細(xì) 胞HA受體所締合的聚糖相互作用的能力；所述去除的1度分離氨基酸可以或可以不必直接 結(jié)合聚糖本身。去除的2度分離氨基酸(1)與去除的1度分離氨基酸相互作用；和/或(2) 以其它方式影響去除的1度分離氨基酸與直接結(jié)合氨基酸相互作用的能力等。直接結(jié)合氨基酸如本文所使用，短語“直接結(jié)合氨基酸”是指與一個(gè)或多個(gè)與宿 主細(xì)胞HA受體締合的聚糖直接相互作用的HA多肽氨基酸。經(jīng)工程改造如本文所使用，術(shù)語“經(jīng)工程改造”描述一種氨基酸序列已經(jīng)由人類 選擇的多肽。舉例來說，經(jīng)工程改造的HA多肽的氨基酸序列不同于天然流感分離株中所 見的HA多肽的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，經(jīng)工程改造的HA多肽的氨基酸序列不同于NCBI數(shù)據(jù)庫中所包括的HA多肽的氨基酸序列。Hl多肽當(dāng)“HI多肽”用于本文中時(shí)，所述術(shù)語是氨基酸序列包括至少一個(gè)Hl特 有的并且使Hl與其它HA亞型相區(qū)別的序列元件的HA多肽。代表性所述序列元件可通過 比對(duì)例如圖1到3中所說明的序列確定，而且其例如包括本文中關(guān)于HA序列元件的Hl特 異性實(shí)施例所述的序列。H3多肽當(dāng)“H3多肽”用于本文中時(shí)，所述術(shù)語是氨基酸序列包括至少一個(gè)H3特 有的并且使H3與其它HA亞型相區(qū)別的序列元件的HA多肽。代表性所述序列元件可通過 比對(duì)例如圖1、2和4中所說明的序列確定，而且其例如包括本文中關(guān)于HA序列元件的H3 特異性實(shí)施例所述的序列。H5多肽當(dāng)“H5多肽”用于本文中時(shí)，所述術(shù)語是氨基酸序列包括至少一個(gè)H5特 有的并且使H5與其它HA亞型相區(qū)別的序列元件的HA多肽。代表性所述序列元件可通過 比對(duì)例如圖1、2和5中所說明的序列確定，而且其例如包括本文中關(guān)于HA序列元件的H5 特異性實(shí)施例所述的序列。血球凝集素(HA)多肽如本文所使用，術(shù)語“血球凝集素多肽”(或“HA多 肽”)是指氨基酸序列包括至少一個(gè)HA特征序列的多肽。所屬領(lǐng)域中已知多種來自 流感分離株的HA序列；事實(shí)上，美國國家生物技術(shù)信息中心(National Center for BiotechnologyInformatio n,NCBI)保留到本申請(qǐng)案申請(qǐng)時(shí)為止包括9796個(gè)HA序列的數(shù) 據(jù)庫(www. ncbi. nlm. nih. gov/genomes/FLU/f lu. html)。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員參考此數(shù)據(jù)庫 可容易地鑒別一般HA多肽和/或特定HA多肽(例如，HI、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、 H10、H11、H12、H13、H14、H15或H16多肽)所特有的序列；或介導(dǎo)例如禽類、駱駝、犬、貓、香 貓、環(huán)境、馬、人類、豹、貂、小鼠、海豹、石燕(stone martin)、豬、虎、鯨等特定宿主感染的HA 所特有的序列。舉例來說，在一些實(shí)施例中，HA多肽包括一個(gè)或多個(gè)在天然流感病毒分離株 中所發(fā)現(xiàn)的HA蛋白的約殘基97與185、324與340、96與100和/或130與230之間發(fā)現(xiàn) 的特征序列元件。在一些實(shí)施例中，HA多肽的氨基酸序列包含如本文中所定義的HA序列元 件1和2中至少一個(gè)。在一些實(shí)施例中，HA多肽的氨基酸序列包含HA序列元件1和2，在 一些實(shí)施例中，所述元件彼此分隔約100到約200，或約125到約175，或約125到約160，或 約125到約150，或約129到約139，或約129、約130、約131、約132、約133、約134、約135、 約136、約137、約138或約139個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施例中，HA多肽的氨基酸序列包括區(qū) 域96-100和/或130-230內(nèi)參與聚糖結(jié)合的各位置處的殘基。舉例來說，許多HA多肽包 括一個(gè)或多個(gè)以下殘基Tyr98、Ser/Thrl36、Trp 153, Hisl83 和 Leu/Ilel94。在一些實(shí)施 例中，HA多肽包括至少2、3、4或全部5個(gè)所述殘基。如本文所使用，術(shù)語“HA多肽”涵蓋任 何長(zhǎng)度的氨基酸鏈(即，氨基酸鏈包含至少2個(gè)氨基酸或更長(zhǎng))。經(jīng)分離如本文所使用，術(shù)語“經(jīng)分離”是指試劑或?qū)嶓w⑴已經(jīng)與至少一些當(dāng) 最初產(chǎn)生(在自然界或在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中)時(shí)其所締合的組分分離；或(ii)由人工產(chǎn)生。經(jīng) 分離試劑或?qū)嶓w可與至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約 80%、約90%或90%以上其最初締合的其它組分分離。在一些實(shí)施例中，經(jīng)分離試劑為超 過 90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%^； 99%純。長(zhǎng)鏈寡糖出于本發(fā)明的目的，如果寡糖包括至少一個(gè)具有至少4個(gè)糖殘基的線 性鏈，則通常將其視為“長(zhǎng)”的。
非天然氨基酸短語“非天然氨基酸”是指具有氨基酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)(即，
O
Il
H2N——CH-C-OH )并因此能夠參與至少兩個(gè)肽鍵但R基團(tuán)不同于自然界所見的基團(tuán)的
I
R
實(shí)體。在一些實(shí)施例中，非天然氨基酸也可以具有另一非氫的R基團(tuán)，和/或可以在氨基或 羧酸部分上具有一個(gè)或多個(gè)其它取代。多肽一般說來，“多肽”是具有至少兩個(gè)彼此通過肽鍵連接的氨基酸的鏈。在一 些實(shí)施例中，多肽可包括至少3到5個(gè)氨基酸，其各自借助于至少一個(gè)肽鍵與其它氨基酸連 接。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，多肽有時(shí)包括“非天然”氨基酸，或仍能夠任選整合入多肽 鏈中的其它實(shí)體。純?nèi)绫疚乃褂茫绻噭┗驅(qū)嶓w實(shí)質(zhì)上無其它組分，則其為“純”的。舉例來說， 通常將含有超過約90%特定試劑或?qū)嶓w的制劑視為純制劑。在一些實(shí)施例中，試劑或?qū)嶓w 為至少 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或 99%純。短鏈寡糖出于本發(fā)明的目的，如果寡糖在任何線性鏈中具有不到4個(gè)或必定不 到3個(gè)殘基，則通常將其視為“短”的。特異性如所屬領(lǐng)域中已知，“特異性”是特定配體(例如，HA多肽)區(qū)別其結(jié)合 搭配物(例如人HA受體，尤其是人上呼吸道HA受體)與其它潛在結(jié)合搭配物(例如，禽類 HA受體)的能力的量度。個(gè)體如本文所使用，術(shù)語“個(gè)體”或“患者”是指可以投予本發(fā)明組合物以例如實(shí) 現(xiàn)實(shí)驗(yàn)、診斷、預(yù)防和/或治療目的的任何生物體。典型個(gè)體包括動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物，例 如小鼠、大鼠、兔、非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物和人類；昆蟲；蠕蟲等)。實(shí)質(zhì)上如本文所使用，術(shù)語“實(shí)質(zhì)上”是指展現(xiàn)相關(guān)特征或特性的全部或接近全 部范圍或程度的定性條件。生物學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員將了解，生物學(xué)和化學(xué)現(xiàn)象很少(如果有 的話)達(dá)到完全和/或進(jìn)行到完全，或者實(shí)現(xiàn)或避免絕對(duì)結(jié)果。因此，術(shù)語“實(shí)質(zhì)上”在本 文中用于記錄許多生物學(xué)和化學(xué)現(xiàn)象中固有的完全性的潛在缺乏。罹患“罹患”流感感染的個(gè)體已經(jīng)確診患有流感感染，或展現(xiàn)出一個(gè)或多個(gè)流感 感染的癥狀。易于“易于”感染流感的個(gè)體尚未確診患有流感感染，和/或可能不展現(xiàn)流感感 染的癥狀。在一些實(shí)施例中，易于感染流感的個(gè)體將會(huì)發(fā)展成流感感染。在一些實(shí)施例中， 易于感染流感的個(gè)體不會(huì)發(fā)展成流感感染。治療劑如本文所使用，短語“治療劑”是指當(dāng)投予個(gè)體時(shí)，會(huì)引起所需生物學(xué)或藥 理學(xué)作用的任何藥劑。治療有效量如本文所使用，術(shù)語“治療有效量”意味著當(dāng)投予罹患流感感染或易 于感染流感的個(gè)體時(shí)，足以治療、診斷、預(yù)防流感感染和/或其癥狀，和/或延緩其發(fā)作的本 發(fā)明聚糖誘餌的量。治療本文所使用，術(shù)語“治療”是指用于部分或完全緩解、改善、減輕、抑制、預(yù)防 特定疾病、病癥和/或病狀的一種或多種癥狀或特征，延緩其發(fā)作、降低其嚴(yán)重程度和/或 降低其發(fā)病率的任何方法。治療可以投予不展現(xiàn)疾病的病征，和/或只展現(xiàn)所述疾病的早 期病征的個(gè)體，以實(shí)現(xiàn)降低發(fā)展與所述疾病相關(guān)的病變的風(fēng)險(xiǎn)的目的。
傘形拓?fù)涠陶Z“傘形拓?fù)洹痹诒疚闹杏糜谥改承┚厶?，尤其HA受體上的某些聚糖 所采用的三維布置。本發(fā)明認(rèn)識(shí)到結(jié)合傘形拓?fù)渚厶鞘墙閷?dǎo)人類宿主感染的HA蛋白的特 征。如圖6(右圖)中所說明，通常僅α 2-6唾液酸化聚糖采用傘形拓?fù)?，而且傘形拓?fù)涫?長(zhǎng)鏈(例如大于四糖)寡糖所特有的。傘形拓?fù)涞膶?shí)例由為約-60的Neu5Ac α 2-6Gal鍵 聯(lián)的Φ角提供(例如參看圖7)。圖9展現(xiàn)可采用傘形拓?fù)涞木厶堑哪承┐硇?但不詳 盡)實(shí)例。傘形拓?fù)渚厶强梢杂米髡T餌，抑制流感病毒與具有傘形拓?fù)渚厶堑腍A受體結(jié)合。 在某些實(shí)施例中，傘形拓?fù)渚厶鞘蔷哂幸韵滦问降墓烟荖eu5Ac α 2-6Sugl-Sug2_Sug3其中(a)Neu5Ac α 2-6通常(但非必需)在非還原端；(b) Sugl (i)是呈α或β構(gòu)型(通常，N連接和0連接延伸為β構(gòu)型；而在通過0連接到 糖蛋白的GalNAc α-的情況下為α構(gòu)型)的己糖(通常為Gal或Glc)或己糖胺(GlcNAc 或 GalNAc)；(ii)除Neu5Ac α 2-6外，沒有糖連接到Sugl的任何非還原位置(當(dāng)Sugl是通過 0連接到糖蛋白的GalNAc α -時(shí)除外)；和/或(iii)例如硫酸酯、磷酸酯、胍鹽、胺、N-乙?；确翘遣糠挚蛇B接到Sugl的非還 原位置(通常是6位)(例如以改進(jìn)與HA的接觸)；(c) Sug2 和 / 或 Sug3 是:(i)呈α或β構(gòu)型(通常是β構(gòu)型)的己糖(通常為Gal或Glc)或己糖胺 (GlcNAc 或 GalNAc)；禾口 / 或(ii)糖(例如Fuc)或例如硫酸酯、磷酸酯、胍鹽、胺、N-乙?；确翘遣糠挚蛇B接 到Sug2、Sug3和/或Sug4的非還原位置；(d)除Neu5Ac α 2-6鍵聯(lián)外，寡糖中任何兩個(gè)糖之間的鍵聯(lián)可以是1-2、1-3、1_4 和/或1-6 (通常是1-3或1-4)；和/或(e)Neu5Ac α 2-6連接GalNAc α，而GalNAc α通過0連接到糖蛋白，并且其它 糖連接到GalNAc α的非還原端的結(jié)構(gòu)例如為(i)Neu5Ac α 2-6 (Neu5Ac α 2_3Gal β 1-3)GalNAc α -(ii)Neu5Ac α 2—6 (Gal β 1—3) GalNAc α-。接種如本文所使用，術(shù)語“接種”是指投予預(yù)期會(huì)例如對(duì)致病因子產(chǎn)生免疫反應(yīng) 的組合物。出于本發(fā)明的目的，接種可在暴露于致病因子之前、期間和/或之后投予，并且 在某些實(shí)施例中，接種可在暴露于所述因子之前、期間和/或之后立即投予。在一些實(shí)施例 中，接種包括間隔適當(dāng)時(shí)間多次投予接種組合物。變異體如本文所使用，術(shù)語“變異體”是描述相關(guān)特定HA多肽與進(jìn)行序列比較的 “母體"HA多肽之間的關(guān)系的相關(guān)術(shù)語。如果相關(guān)HA多肽的氨基酸序列與母體HA多肽一致 但在特定位置具有少量序列變化，則所述相關(guān)HA多肽可視為母體HA多肽的“變異體”。通 常，同母體比較起來，所述變異體中不到20%,15%,10%,9%,8%,7%,6%,5%,4%,3%, 2%的殘基經(jīng)取代。在一些實(shí)施例中，同母體比較起來，變異體具有10、9、8、7、6、5、4、3、2或 1個(gè)經(jīng)取代殘基。變異體通常具有極少量(例如，不到5、4、3、2或1個(gè))經(jīng)取代功能性殘基(即，參與特定生物活性的殘基)。此外，同母體比較起來，變異體通常具有不超過5、4、 3、2或1個(gè)添加或缺失，而且通常無添加或缺失。另外，任何添加或缺失通常少于約25、約 20、約19、約18、約17、約16、約15、約14、約13、約10、約9、約8、約7、約6個(gè)殘基，而且一 般少于約5、約4、約3或約2個(gè)殘基。在一些實(shí)施例中，母體HA多肽為在天然流感病毒分 離株中發(fā)現(xiàn)的多肽(例如，野生型HA)。載體如本文所使用，“載體”是指一種核酸分子，所述核酸分子能夠轉(zhuǎn)運(yùn)其所連接 的另一核酸。在一些實(shí)施例中，載體能夠在例如真核細(xì)胞或原核細(xì)胞等宿主細(xì)胞中染色體 外復(fù)制和/或表達(dá)其所連接的核酸。能夠引導(dǎo)可操作性連接的基因的表達(dá)的載體在本文中 稱為“表達(dá)載體”。野生型如所屬領(lǐng)域中所了解，短語“野生型” 一般是指在自然界中所發(fā)現(xiàn)的蛋白 質(zhì)或核酸的標(biāo)準(zhǔn)形式。舉例來說，可在天然流感病毒分離株中發(fā)現(xiàn)野生型HA多肽。多種不 同的野生型HA序列可見于NCBI 流感病毒序列數(shù)據(jù)庫http://WWW. ncbi. nlm. nih. gov/ genomes/FLU/FLU. html 中。本發(fā)明某些特定實(shí)施例的詳細(xì)描述本發(fā)明認(rèn)識(shí)到，流感HA多肽與傘形拓?fù)渚厶侵g的相互作用可介導(dǎo)流感感染。本 發(fā)明還認(rèn)識(shí)到，模擬傘形拓?fù)渚厶堑乃巹┛沙洚?dāng)“受體誘餌(receptor decoy) ”，并且適用 作治療流感感染的治療劑。除此之外，本發(fā)明提供用于鑒別模擬傘形拓?fù)渚厶遣⑶腋?jìng)爭(zhēng)個(gè)體體內(nèi)HA多肽與 HA受體之間的相互作用的藥劑的系統(tǒng)。本發(fā)明還提供治療流感感染的各種藥劑和含有所述 藥劑的組合物，以及治療流感感染的治療策略。本發(fā)明提供用于表征HA-受體相互作用的 系統(tǒng)(例如檢測(cè)分析)和影響HA-受體相互作用的藥劑。HA 受體HA通過結(jié)合糖蛋白受體來與細(xì)胞表面相互作用。HA與HA受體的結(jié)合主要是由HA 受體上的N連接聚糖介導(dǎo)。具體地說，流感病毒粒子表面上的HA識(shí)別與細(xì)胞宿主表面上的 HA受體締合的唾液酸化聚糖。在識(shí)別并結(jié)合后，宿主細(xì)胞吞食病毒細(xì)胞，并且病毒能夠復(fù)制 并產(chǎn)生將散布到鄰近細(xì)胞中的更多個(gè)病毒粒子。已經(jīng)鑒別出示范性HA-聚糖相互作用的一 些晶體結(jié)構(gòu)，并提供于表1中表1. HA-聚糖復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
一種方法，其包含以下步驟對(duì)罹患流感感染、展現(xiàn)流感感染癥狀或易于感染流感的個(gè)體投予傘形拓?fù)渚厶钦T餌，以致所述誘餌結(jié)合流感血球凝集素(HA)，并競(jìng)爭(zhēng)消除所述HA與所述個(gè)體體內(nèi)的HA受體之間的相互作用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述傘形拓?fù)渚厶钦T餌包含聚糖部分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述傘形拓?fù)渚厶钦T餌包含連接到載體的聚糖部分。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述載體是聚糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述載體是肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述載體是HA受體肽。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述載體是選自由核酸、脂質(zhì)、細(xì)胞、病毒和粒子 組成的群組。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述投藥步驟是通過靜脈內(nèi)注射進(jìn)行。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述投藥步驟是通過肌肉內(nèi)注射進(jìn)行。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述投藥步驟是通過口服進(jìn)行。
11.一種鑒別適用于治療流感感染的藥劑的方法，其通過以下進(jìn)行提供流感HA; 提供候選傘形拓?fù)湔T餌的集合，其包括至少一種模擬傘形拓?fù)渚厶堑暮蜻x誘餌；和 使所述HA與來自所述集合的候選誘餌接觸，由此鑒別出與HA相互作用并且與傘形拓?fù)渚厶歉?jìng)爭(zhēng)所述相互作用的候選誘餌。
12.—種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其結(jié)合流感血球凝集素(HA)并競(jìng)爭(zhēng)消除HA與HA 受體之間的相互作用。
13.一種醫(yī)藥組合物，其包含傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其結(jié)合流感血球凝集素(HA)并競(jìng)爭(zhēng)消除HA與HA受體之間的相互 作用；和醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。
14.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其具有以下結(jié)構(gòu) Neu5Ac α 2_6Sug l_Sug2-Sug3_Sug4-其中滿足以下一個(gè)或多個(gè)條件a. Neu5Ac α 2-6是在所述聚糖的非還原端；13.5呢1、5呢2、5呢3或5呢4是呈α或β構(gòu)型的己糖或己糖胺；c.除Neu5Acα 2-6外，沒有糖連接到Sugl的任何非還原位置；d.非糖部分連接到Sugl、Sug2、Sug3或Sug4的非還原位置；e.除Neu5Acα 2_6鍵聯(lián)外，所述寡糖中任何兩個(gè)糖之間的鍵聯(lián)是1_2、1_3、1_4和/或 1-6 ；和f.所述Neu5Acα 2-6Sugl-Sug2-Sug3-部分滿足所述傘形拓?fù)渚厶堑慕Y(jié)構(gòu)限制或血 球凝集素接觸限制。
15.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與血球凝集素氨基酸131、133、136、137、143、 144、145、153、155、156、159、186、187、189、190、192、193、194、196、222、225、226、228 和 / 或其組合相互作用的物質(zhì)。
16.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與血球凝集素氨基酸156、159、189、192、193、 196和/或其組合相互作用的物質(zhì)。
17.一種分離的傘形拓?fù)渚厶牵浒c血球凝集素氨基酸186、187、189、190和/或其 組合相互作用的物質(zhì)。
18.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與血球凝集素氨基酸137、145、190、226、228和/ 或其組合相互作用的物質(zhì)。
19.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與血球凝集素氨基酸190、222、225、226和/或其 組合相互作用的物質(zhì)。
20.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與血球凝集素氨基酸136、153、155、194和其組 合相互作用的物質(zhì)。
21.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與血球凝集素氨基酸190和226相互作用的物質(zhì)。
22.—種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與血球凝集素氨基酸222、225和226相互作用的 物質(zhì)。
23.一種分離的傘形拓?fù)渚厶牵浒c血球凝集素氨基酸190、192、193和225相互作 用的物質(zhì)。
24.一種分離的傘形拓?fù)渚厶牵浒c血球凝集素氨基酸186、193和222相互作用的 物質(zhì)。
25.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與130環(huán)區(qū)(130位到139位)中的一個(gè)或多個(gè) 血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
26.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與140環(huán)區(qū)(140位到146位)中的一個(gè)或多個(gè) 血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
27.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與150環(huán)區(qū)(153位到160位)中的一個(gè)或多個(gè) 血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
28.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與190環(huán)-螺旋區(qū)(183位到196位)中的一個(gè) 或多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
29.一種分離的傘形拓?fù)渚厶?，其包含與220環(huán)區(qū)(219位到228位)中的一個(gè)或多個(gè) 血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
30.根據(jù)權(quán)利要求14至29中任一權(quán)利要求所述的分離的傘形拓?fù)渚厶?，其中所述分離 的傘形拓?fù)渚厶前僖核犷愃莆铩?br> 31.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑渚哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)Neu5Ac α 2_6Sug l_Sug2-Sug3_Sug4-其中滿足以下一個(gè)或多個(gè)條件a. Neu5Ac α 2-6是在所述聚糖的非還原端；，13.5呢1、5呢2、5呢3或5呢4是呈α或β構(gòu)型的己糖或己糖胺；c.除Neu5Acα 2-6外，沒有糖連接到Sugl的任何非還原位置；d.非糖部分連接到Sugl、Sug2、Sug3或Sug4的非還原位置；e.除Neu5Acα 2_6鍵聯(lián)外，所述寡糖中任何兩個(gè)糖之間的鍵聯(lián)是1_2、1_3、1_4和/或 1-6 ；和f.所述Neu5Ac α 2-6Sugl-Sug2-Sug3-部分滿足所述傘形拓?fù)渚厶堑慕Y(jié)構(gòu)限制或血 球凝集素接觸限制。
32.—種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑浒c血球凝集素氨基酸131、133、136、137、 143、144、145、153、155、156、159、186、187、189、190、192、193、194、196、222、225、226、228 和 /或其組合相互作用的物質(zhì)。
33.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑浒c血球凝集素氨基酸156、159、189、192、 193,196和/或其組合相互作用的物質(zhì)。
34.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑浒c血球凝集素氨基酸186、187、189、190和/ 或其組合相互作用的物質(zhì)。
35.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與血球凝集素氨基酸137、145、190、226、 228和/或其組合相互作用的物質(zhì)。
36.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑浒c血球凝集素氨基酸190、222、225、226和/ 或其組合相互作用的物質(zhì)。
37.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與血球凝集素氨基酸190和226相互作用的 物質(zhì)。
38.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與血球凝集素氨基酸222、225和226相互作 用的物質(zhì)。
39.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與血球凝集素氨基酸190、192、193和225相 互作用的物質(zhì)。
40.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與血球凝集素氨基酸186、193和222相互作 用的物質(zhì)。
41.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑浒c130環(huán)區(qū)(130位到139位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
42.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與140環(huán)區(qū)(140位到146位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
43.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與150環(huán)區(qū)(153位到160位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
44.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠?，其包含與190環(huán)-螺旋區(qū)(183位到196位)中的 一個(gè)或多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
45.一種分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑浒c220環(huán)區(qū)(219位到228位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
46.根據(jù)權(quán)利要求31至45中任一權(quán)利要求所述的分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠郑渲兴?分離的傘形拓?fù)渚厶遣糠职僖核犷愃莆铩?br> 47.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含載體，其連接到傘形拓?fù)渚厶遣糠郑渲兴鰝阈瓮負(fù)渚厶遣糠志哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)Neu5Ac α 2_6Sug l_Sug2-Sug3_Sug4-其中滿足以下一個(gè)或多個(gè)條件a. Neu5Ac α 2-6是在所述聚糖的非還原端；[13.5呢1、5呢2、5呢3或5呢4是呈α或β構(gòu)型的己糖或己糖胺；c.除Neu5Acα 2-6外，沒有糖連接到Sugl的任何非還原位置；d.非糖部分連接到Sugl、Sug2、Sug3或Sug4的非還原位置；e.除Neu5Acα 2_6鍵聯(lián)外，所述寡糖中任何兩個(gè)糖之間的鍵聯(lián)是1_2、1_3、1_4和/或 1-6 ；和f.所述Neu5Acα 2-6Sugl-Sug2-Sug3-部分滿足所述傘形拓?fù)渚厶堑慕Y(jié)構(gòu)限制或血 球凝集素接觸限制。
48.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含連接到傘形拓?fù)渚厶遣糠值妮d體。
49.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸131、133、136、137、 143、144、145、153、155、156、159、186、187、189、190、192、193、194、196、222、225、226、228 和 /或其組合相互作用的物質(zhì)。
50.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸156、159、189、192、 193,196和/或其組合相互作用的物質(zhì)。
51.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸186、187、189、190和/ 或其組合相互作用的物質(zhì)。
52.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸137、145、190、226、 228和/或其組合相互作用的物質(zhì)。
53.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸190、222、225、226和/ 或其組合相互作用的物質(zhì)。
54.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸190和226相互作用的 物質(zhì)。
55.根據(jù)權(quán)利要求38所述的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其中所述傘形拓?fù)渚厶遣糠质悄軌蚺c 血球凝集素氨基酸222、225和226相互作用的任何物質(zhì)。
56.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸190、192、193和225相 互作用的物質(zhì)。
57.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與血球凝集素氨基酸186、193和222相互作 用的物質(zhì)。
58.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與130環(huán)區(qū)(130位到139位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
59.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與140環(huán)區(qū)(140位到146位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
60.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與150環(huán)區(qū)(153位到160位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
61.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與190環(huán)-螺旋區(qū)(183位到196位)中的 一個(gè)或多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
62.一種分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其包含與220環(huán)區(qū)(219位到228位)中的一個(gè)或 多個(gè)血球凝集素氨基酸相互作用的物質(zhì)。
63.根據(jù)權(quán)利要求47至62中任一權(quán)利要求所述的分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其中所述 分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌包含唾液酸類似物。
64.根據(jù)權(quán)利要求48至63中任一權(quán)利要求所述的分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其中所述5載體是聚糖。
65.根據(jù)權(quán)利要求48至63中任一權(quán)利要求所述的分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其中所述 載體是肽。
66.根據(jù)權(quán)利要求48至63中任一權(quán)利要求所述的分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其中所述 載體是HA受體肽。
67.根據(jù)權(quán)利要求48至63中任一權(quán)利要求所述的分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其中所述 載體是選自由核酸、脂質(zhì)、細(xì)胞、病毒和粒子組成的群組。
68.一種醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求47至67中任一權(quán)利要求所述的傘形拓?fù)渚厶钦T餌；和醫(yī)藥學(xué)上可接受 的賦形劑。
69.一種醫(yī)藥組合物，其包含分離的傘形拓?fù)渚厶钦T餌，其結(jié)合流感血球凝集素(HA)并競(jìng)爭(zhēng)消除所述HA與所述HA 受體之間的相互作用；和醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。
70.一種實(shí)現(xiàn)以下任一者的方法抑制個(gè)體體內(nèi)流感病毒與具有傘形拓?fù)渚厶堑难?凝集素受體(UTHAr)的結(jié)合；使個(gè)體感染結(jié)合UTHAr的流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)減到最小；治療個(gè) 體；抑制感染；抑制疾病的發(fā)作或進(jìn)展；或抑制病毒的傳播或擴(kuò)散，所述方法包含任選例如根據(jù)保護(hù)UTHAr的需求或處于感染結(jié)合UTHAr的流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)中任一者， 鑒別個(gè)體；任選根據(jù)聚糖誘餌能夠結(jié)合HA，例如結(jié)合UTHAr的HA，選出所述聚糖誘餌；任選提供一 種聚糖誘餌；對(duì)所述個(gè)體投予有效量的所述聚糖誘餌，由此抑制所述個(gè)體體內(nèi)所述流感病毒與 UTHAr的結(jié)合；使所述個(gè)體感染結(jié)合UTHAr的流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)減到最?。恢委熕鰝€(gè)體；抑 制感染；抑制疾病的發(fā)作或進(jìn)展；或抑制病毒的傳播或擴(kuò)散。
全文摘要
本發(fā)明揭露傘形拓?fù)渚厶钦T餌，以及利用其治療流感感染的系統(tǒng)和方法。
文檔編號(hào)A61K31/715GK101951927SQ200980101660
公開日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2009年1月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月3日
發(fā)明者S·拉古拉姆, 卡西克·維斯瓦那坦, 拉姆·薩西謝卡爾安, 拉胡爾·拉曼, 維斯瓦那坦·薩西謝卡爾安, 阿爾特希·錢德拉賽卡安, 阿拉溫德·斯里尼瓦桑 申請(qǐng)人:麻省理工學(xué)院