專利名稱：Hla-dr陽性單核細(xì)胞選擇去除器及抗氧化劑用于制造該選擇去除器的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器及抗氧化劑用于制造該選擇去除器的用途。
背景技術(shù)：
使用白細(xì)胞去除過濾器選擇性去除白細(xì)胞的技術(shù)被不斷開發(fā)和改良，用于治療全身性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩病等自身免疫性疾病以及白血病等。目前，開發(fā)了使用無紡布等作為過濾器的白細(xì)胞去除器。成為白細(xì)胞去除療法的對象的疾病與各種免疫細(xì)胞所導(dǎo)致的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。 在免疫反應(yīng)中承擔(dān)重要作用的T細(xì)胞通過存在于其表面的抗原受體與抗原的結(jié)合而開始活動，但T細(xì)胞的反應(yīng)中必須有抗原呈遞細(xì)胞的存在。T細(xì)胞通過抗原呈遞細(xì)胞上的主要組織相容性抗原(MHC抗原)與抗原的組合而發(fā)生反應(yīng)。人類的MHC抗原被稱作HLA抗原，白細(xì)胞中作為抗原呈遞細(xì)胞的組分中表達(dá)有 HLA-DR抗原。開始活動的T細(xì)胞通過其他白細(xì)胞組分而受到抗原呈遞，進(jìn)而被活化，免疫反應(yīng)進(jìn)行?；罨陌准?xì)胞引起腸上皮細(xì)胞的傷害或骨破壞，導(dǎo)致疾病的發(fā)病。如此，作為HLA-DR抗原陽性細(xì)胞的抗原呈遞細(xì)胞可以說是與免疫反應(yīng)的最初階段以及之后的反應(yīng)都密切相關(guān)的重要免疫細(xì)胞。另外，還已知，對于白細(xì)胞去除器的對象疾病的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎或潰瘍性結(jié)腸炎的患者，與健康人相比，其HLA-DR抗原陽性細(xì)胞的比例更高(參照非專利文獻(xiàn)1和2)。作為使用白細(xì)胞去除過濾器選擇性去除白細(xì)胞的技術(shù)，專利文獻(xiàn)1中公開了通過在血液中添加大量的檸檬酸，適當(dāng)減弱造血干細(xì)胞的粘著性，從而提高造血干細(xì)胞的回收率的方法。另外，專利文獻(xiàn)2公開了選擇地去除單核細(xì)胞和/或單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞的過濾器裝置?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1 日本特開平11_32沈18號公報(bào)專利文獻(xiàn)2 日本專利第3812909號公報(bào)非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn) 1 =Mottonen M. et. al.，Immunology, 2000, vol. 100，p. 238—244非專利文獻(xiàn)2 =Sawada K. et. al. ,Jpn. J. Apheresis. , 1995, vol. 14. No. 1，ρ· 48—50

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題包括抗原呈遞細(xì)胞、T細(xì)胞在內(nèi)的除淋巴細(xì)胞以外的白細(xì)胞組分，有粒細(xì)胞。粒細(xì)胞由于活性氧的產(chǎn)生而導(dǎo)致的細(xì)胞傷害性等，因而也與疾病的發(fā)病有關(guān)。粒細(xì)胞的活化與作為抗原呈遞細(xì)胞的單核細(xì)胞、通過抗原呈遞而被活化的淋巴細(xì)胞密切相關(guān)。認(rèn)為通過控制白細(xì)胞的免疫反應(yīng)開始階段的抗原呈遞，可以控制大部分的免疫反應(yīng)。以往的白細(xì)胞去除療法僅僅是將免疫細(xì)胞的各個(gè)組分去除。認(rèn)為，只要能夠選擇性去除免疫反應(yīng)中更密切相關(guān)的抗原呈遞細(xì)胞，則白細(xì)胞去除的治療效果的效率更為提高。為了提高白細(xì)胞去除的治療效果的效率，尤其重要的是，選擇性去除通過吞食作用(吞噬)攝入粒狀的大抗原而進(jìn)行抗原呈遞的HLA-DR陽性單核細(xì)胞。但是，可在臨床上使用的HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器仍是未知的，專利文獻(xiàn) 1和2中也未公開能夠擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞選的裝置。鑒于上述事實(shí)，本發(fā)明要解決的課題在于，提供可在臨床上使用的HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器。用于解決問題的方案本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在含檸檬酸或其鹽的抗凝劑的存在下使血液流入到具備與含抗氧化劑的填充液接觸且經(jīng)輻射線滅菌的細(xì)胞去除過濾器的去除器中，可以選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞，進(jìn)而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明提供以下的抗氧化劑用于制造HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途、HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器和選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞的方法。(1) 一種抗氧化劑用于制造HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途，所述HLA-DR 陽性單核細(xì)胞選擇去除器從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞，所述HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器，所述細(xì)胞去除過濾器填充有含抗氧化劑的填充液，且經(jīng)輻射線滅菌，所述抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種，所述抗氧化劑為選自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、次磷酸、抗壞血酸和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。(2)上述(1)所述的抗氧化劑的用途，其中，所述填充液含有300ppm以上的焦亞硫酸鈉。(3)上述⑴或⑵所述的抗氧化劑的用途，其中，所述輻射線為Y射線或電子射線。(4) 一種HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器，其用于從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞，所述HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器，所述細(xì)胞去除過濾器填充有含抗氧化劑的填充液且經(jīng)輻射線滅菌，所述抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種，所述抗氧化劑為選自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、次磷酸、抗壞血酸和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。(5)上述(4)所述的選擇去除器，其中，所述填充液含有300ppm以上的焦亞硫酸鈉。(6)上述(4)或(5)所述的選擇去除器，其中，所述輻射線為Y射線或電子射線。
(7) 一種HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器，其具備與上游側(cè)的第1流路和下游側(cè)的第2流路連接的、填充有含抗氧化劑的填充液且經(jīng)輻射線滅菌的細(xì)胞去除過濾器；和與所述第1流路連接且可將含抗凝血?jiǎng)┑难汗┙o到所述細(xì)胞去除過濾器的、含有選自檸檬酸和其鹽的至少1種抗凝血?jiǎng)┑娜萜鳌?8) 一種選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞的方法，其為使用具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器的選擇去除器，從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除 HLA-DR陽性單核細(xì)胞的方法，其包含以下工序利用含抗氧化劑的填充液填充所述細(xì)胞去除過濾器的工序；對填充有所述填充液的細(xì)胞去除過濾器進(jìn)行輻射線滅菌的工序；和將包含含檸檬酸或其鹽的抗凝血?jiǎng)┑难和ㄒ褐了鲞^濾器裝置進(jìn)行過濾的工序，所述抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種，所述抗氧化劑為選自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、次磷酸、抗壞血酸和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。(9)上述(8)所述的方法，其中，所述填充液含有300ppm以上的焦亞硫酸鈉。(10)上述⑶或(9)所述的方法，其中，所述輻射線為Y射線或電子射線。發(fā)明的效果本發(fā)明能夠提供可在臨床上安全使用的HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器。


圖1表示本實(shí)施方式的選擇去除器的一個(gè)例子的概略圖。附圖標(biāo)記說明10選擇去除器20第1流路30含有抗凝血?jiǎng)┑娜萜?0細(xì)胞去除過濾器50送液泵60第2流路
具體實(shí)施例方式以下詳細(xì)地說明本發(fā)明的實(shí)施方式(以下稱作本實(shí)施方式。)。需要說明的是，本發(fā)明并非限定于以下的實(shí)施方式，可以在其主旨范圍內(nèi)進(jìn)行各種變形后實(shí)施。本實(shí)施方式的抗氧化劑用于制造HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途為，抗氧化劑用于制造從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞的、HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途，所述HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器，所述細(xì)胞去除過濾器填充有含抗氧化劑的填充液且經(jīng)輻射線滅菌，
所述抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種，所述抗氧化劑為選自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、次磷酸、抗壞血酸和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。與以往的白細(xì)胞去除器相比，本實(shí)施方式中的HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器 (以下有時(shí)僅記載為“選擇去除器”。)，其HLA-DR陽性單核細(xì)胞的去除率特別地高，可用于從全血、血漿或紅細(xì)胞制劑或者血小板制劑等血液來源制劑中選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞。作為選擇去除器使用的容器，只要是能夠具備細(xì)胞去除過濾器的容器則無特別限定。作為選擇去除器并無特別限定，例如可舉出以疊層狀填充有細(xì)胞去除過濾器的容器、填充有卷繞成圓筒狀的細(xì)胞去除過濾器的容器等。選擇去除器的容器形狀并無特別限定，例如可舉出圓柱狀或者三棱柱狀、四棱柱狀、六棱柱狀或八棱柱狀等棱柱狀等。選擇去除器的容器形狀優(yōu)選為圓筒狀。作為優(yōu)選的圓筒狀選擇去除器，可舉出，特征在于血液的流向?yàn)閺膱A筒外周流向內(nèi)側(cè)、集中于最內(nèi)側(cè)并從血液流出口流出的容器。另外，還優(yōu)選使用具有容器的截面積從血液的流入口至流出口變小的形狀的容器等。本實(shí)施方式中，選擇去除器中還可設(shè)置用于在處理血液時(shí)或者洗滌選擇去除器時(shí)使液體流入或流出的管、回路等。作為選擇去除器的容器的材質(zhì)可以舉出聚碳酸酯樹脂等。本實(shí)施方式的細(xì)胞去除過濾器由未將表面改性的聚酯無紡布構(gòu)成。通過使聚酯無紡布為疊層狀的疊層體或者將聚酯無紡布卷繞成圓筒狀，可制成細(xì)胞去除過濾器。本實(shí)施方式的“未將表面改性的聚酯無紡布”是指為了使血液與聚酯直接接觸而在無紡布的表面配置有聚酯，并且意味著未對聚酯無紡布的表面實(shí)施親水化處理等。親水化處理例如可舉出利用聚合物的涂布等。本實(shí)施方式的聚酯無紡布中，由于聚酯無紡布的纖維徑有助于其吸附、過濾的能力，因而優(yōu)選使用具有有效平均纖維徑的聚酯無紡布。聚酯無紡布的纖維徑過大時(shí)則接觸效率降低、過小時(shí)則凝集塊等堵塞物質(zhì)的吸附量增加，從這一觀點(diǎn)出發(fā)，聚酯無紡布的平均纖維徑優(yōu)選為0. 5μπι以上且50 μ m以下的范圍內(nèi)、更優(yōu)選為Iym以上且40 ym以下的范圍內(nèi)、進(jìn)一步優(yōu)選為1. 5 μ m以上且35 μ m以下的范圍內(nèi)。本實(shí)施方式的“平均纖維徑”是指用以下方法求得的值。從構(gòu)成細(xì)胞去除過濾器的1張或多張聚酯無紡布中采樣通過目視識別為實(shí)質(zhì)上均一的部分。在采樣時(shí)，在聚酯無紡布中，將過濾血液時(shí)與血液透過的部分相對應(yīng)的有效過濾截面積部分劃分成邊長為0. 5cm的正方形，從中隨機(jī)采樣6個(gè)位置。進(jìn)行隨機(jī)采樣時(shí)，例如通過在劃分后的所有位置上指定序號，然后使用隨機(jī)數(shù)表等的方法選擇必要數(shù)量的區(qū)域來進(jìn)行。對于采樣的3個(gè)位置以上、優(yōu)選5個(gè)以上的各區(qū)域，使用掃描型電子顯微鏡以放大倍率2500倍拍攝照片。
對采樣的各區(qū)域的中央部分及其附近位置拍攝照片，直至拍于照片中的纖維總根數(shù)達(dá)到每個(gè)區(qū)域超過100根，測定纖維的直徑。直徑是指相對于纖維軸呈直角方向的纖維的寬度。將所測定的全部纖維的直徑之和除以纖維數(shù)得到的值作為平均纖維徑。其中，在纖維的寬度的測定中，不考慮這些情況下得到的數(shù)據(jù)由于多個(gè)纖維相互重疊而被其他纖維遮擋，從而無法測定纖維寬度的情況；多個(gè)纖維由于熔融等而變成較粗的纖維的情況；直徑明顯不同的纖維混存的情況等。“由于多個(gè)纖維相互重疊而被其他纖維遮擋，從而無法測定纖維寬度的情況”是指，在掃描電子顯微鏡照片中被遮擋的情況；“多個(gè)纖維由于熔融等而變成較粗的纖維的情況”是指，熔融成纖維徑為其他纖維的平均值的1. 5倍以上的纖維等的情況；“直徑明顯不同的纖維混存的情況”是指，纖維徑為其他纖維的平均值的2倍以上的情況。從抑制堵塞、防止壓力損失的上升、使流動順暢的觀點(diǎn)出發(fā)，聚酯無紡布的單位面積重量優(yōu)選為20g/cm2以上且llOg/cm2以下、更優(yōu)選為60g/cm2以上且lOOg/cm2以下。本實(shí)施方式的“細(xì)胞去除過濾器在容器中的填充密度”是指將細(xì)胞去除過濾器填充于容器中時(shí)的每一定體積的重量，細(xì)胞去除過濾器在容器中的填充密度優(yōu)選為o.oig/ cm3以上且0.5g/cm3以下。從提高與血液樣品的接觸效率、抑制堵塞、防止壓損的上升、使流動順暢的觀點(diǎn)出發(fā)，該填充密度更優(yōu)選為0. 03g/cm3以上且0. 3g/cm3以下。本實(shí)施方式的細(xì)胞去除過濾器中填充有含抗氧化劑的填充液。本實(shí)施方式中的“抗氧化劑”是指，具有易于向其他分子等給予電子的性質(zhì)的原子、分子或離子，抗氧化劑具有抑制細(xì)胞去除過濾器的受到氧的作用而導(dǎo)致的變化的性質(zhì)?？寡趸瘎檫x自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、 次磷酸、抗壞血酸、和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。作為抗壞血酸衍生物并無特別限定，例如可舉出5-甲基-3，4_ 二羥基滌特綸 (5-methyl-3,4-dihydroxytetoron, MDT)等?？寡趸瘎┛墒褂?種也可混合使用2種以上。從處理性、安全性的觀點(diǎn)出發(fā)，抗氧化劑優(yōu)選焦亞硫酸鈉。本實(shí)施方式中的“細(xì)胞去除過濾器填充有填充液”是指，填充液保持與細(xì)胞去除過濾器接觸、細(xì)胞去除過濾器浸漬于填充液中的狀態(tài)。本實(shí)施方式中的“填充液”是指，在選擇去除器的制造階段填充于選擇去除器內(nèi)部的液體，在填充液中添加有抗氧化劑。含抗氧化劑的填充液可如下制作將抗氧化劑直接添加于水或生理食鹽水等生理溶液等填充液中進(jìn)行溶解，或者將抗氧化劑預(yù)先溶解于少量的醇等溶劑中并將所得溶液添加于填充液中，從而制作而成。對于含抗氧化劑的溶液中的抗氧化劑的濃度，由選擇去除器所使用的抗氧化劑的種類和滅菌條件決定其最佳濃度，優(yōu)選為IOOppm以上且IOOOppm以下、更優(yōu)選為300ppm以上且IOOOppm以下。本實(shí)施方式中的“輻射線滅菌”是指，將填充有填充液的細(xì)胞去除過濾器中存在的微生物殺滅或去除。本實(shí)施方式中的“輻射線”是指，包括α射線、β射線、中子束或電子射線等粒子束，X射線或Y射線等電磁波在內(nèi)的電離輻射線，從常用于醫(yī)療用具的滅菌的觀點(diǎn)出發(fā)，輻射線優(yōu)選為電子射線或Y射線。電子射線為帶電粒子束，帶電粒子束對照射對象物質(zhì)的原子的軌道電子或被分子束縛的電子直接作用電力，引起電離。Y射線借助與照射對象物質(zhì)的原子或原子核的相互作用而產(chǎn)生帶電粒子束，二次產(chǎn)生的帶電粒子束具有電離作用。本實(shí)施方式的利用電子射線和Y射線的微生物的滅菌效果是通過電離作用產(chǎn)生的自由基損傷微生物的DNA鏈，從而阻礙細(xì)胞分裂能力，基本的滅菌原理是相同的。輻射線滅菌所使用的輻射線的照射劑量根據(jù)選擇去除器中存在的細(xì)菌的種類、細(xì)菌的數(shù)量或者想獲得的無菌性保證水平等而不同，可以通過測定D值或者實(shí)施有效性檢查等而分別決定，優(yōu)選通常使用的IOkGy以上且IOOkGy以下，其中優(yōu)選IOkGy以上且50kGy 以下、特別優(yōu)選15kGy以上且40kGy以下。本實(shí)施方式的“D值”是指將特定微生物數(shù)量的90%殺死或者使特定微生物數(shù)量減少至1/10的滅菌處理單位(時(shí)間或吸收劑量等)。與Y射線相比，電子射線由于在短時(shí)間內(nèi)完成一定劑量的照射，因而單位時(shí)間的照射劑量(劑量率)高，自由基的產(chǎn)生量一般較少，因此有能夠降低照射對象物質(zhì)的氧化劣化的傾向。認(rèn)為其原因在于，劑量率高時(shí)，則氧在表面被消耗，還沒有擴(kuò)散到內(nèi)部時(shí)即被完全消耗。認(rèn)為電子射線滅菌時(shí)的聚酯的分解可能比、射線滅菌時(shí)減少，但并不是不產(chǎn)生
自由基。通過使用本實(shí)施方式的HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器，能夠從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞。通過選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞，與以往的白細(xì)胞去除的治療效果相比，效率更為提高。本實(shí)施方式中的“HLA-DR陽性細(xì)胞”是指，人血液成分白細(xì)胞中的、細(xì)胞表面表達(dá)有HLA-DR抗原的血細(xì)胞。本實(shí)施方式中的“HLA-DR陽性單核細(xì)胞”是指為單核細(xì)胞的HLA-DR陽性細(xì)胞， "HLA-DR陽性B細(xì)胞”是指為B細(xì)胞的HLA-DR陽性細(xì)胞。本實(shí)施方式中的“含抗凝血?jiǎng)┑难骸笔侵福趶娜梭w采集的新鮮血液中混合抗凝血?jiǎng)┖蟮难?。本?shí)施方式中的“能夠選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞”是指，所去除的HLA-DR 陽性單核細(xì)胞在所去除的白細(xì)胞中所占的比例為12%以上。本實(shí)施方式中的抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸或其鹽組成的組中的至少1種。作為抗凝血?jiǎng)┎o特別限定，例如可舉出檸檬酸鈉溶液、ACD-A液、CPD液等。ACD-A(acid-citrate-dextrose)液是由檸檬酸鈉、檸檬酸和葡萄糖組成的溶液; CPD(citrate-phosphate-dextrose)液是指檸檬酸鈉、檸檬酸、葡萄糖和磷酸二氫鈉二水合物組成的溶液?？鼓?jiǎng)┛墒褂?種，還可混合使用2種以上。優(yōu)選的是，本實(shí)施方式的HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器具備與上游側(cè)的第1 流路和下游側(cè)的第2流路連接的、填充有含抗氧化劑的填充液且經(jīng)輻射線滅菌的細(xì)胞去除過濾器；與所述第1流路連接且能夠?qū)⒑鼓獎(jiǎng)┑难汗┙o至所述細(xì)胞去除過濾器的、 含有選自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種抗凝血?jiǎng)┑娜萜?。選擇去除器10例如為圖1所記載的構(gòu)成。第1流路20為連接含抗凝血?jiǎng)┑娜萜?30和細(xì)胞去除過濾器40的流路。第1流路20安裝于送液泵50上，可以將從患者采集的血液送液至細(xì)胞去除過濾器40。儲存于容器30中的抗凝血?jiǎng)┍还┙o至第1流路20、與流過第1流路20的血液相混合。然后，該含抗凝血?jiǎng)┑难罕粚?dǎo)入到細(xì)胞去除過濾器40進(jìn)行過濾。第2流路60為將通過細(xì)胞去除過濾器過濾后的血液導(dǎo)出至細(xì)胞去除過濾器外的流路。本實(shí)施方式的從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞的方法為，通過使用具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器的選擇去除器，從而能夠從血液中選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞的方法，其包含以下工序利用含抗氧化劑的填充液填充所述細(xì)胞去除過濾器的工序；對所述填充有填充液的細(xì)胞去除過濾器進(jìn)行輻射線滅菌的工序；和將包含含檸檬酸或其鹽的抗凝血?jiǎng)┑难和ㄒ褐了鲞^濾器裝置進(jìn)行過濾的工序。本實(shí)施方式的第一工序?yàn)?，通過向選擇去除器內(nèi)通液填充液而填充細(xì)胞去除過濾器的工序。 本實(shí)施方式的第二工序?yàn)?，在填充液的存在下對通過第一工序而填充有填充液的細(xì)胞去除過濾器進(jìn)行輻射線滅菌的工序。輻射線滅菌的方法并無特別限定，例如可舉出對HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器進(jìn)行包裝后實(shí)施照射的方法等。對輻射線滅菌裝置并無特別限定，例如可舉出JS9500型輻射線滅菌裝置(AECL公司)等。本實(shí)施方式的第三工序?yàn)閷⒑鼓獎(jiǎng)┑难和ㄒ褐镣ㄟ^第二工序進(jìn)行了輻射線滅菌的細(xì)胞去除過濾器中進(jìn)行過濾的工序。通過用細(xì)胞去除過濾器對血液進(jìn)行過濾，可以將HLA-DR陽性單核細(xì)胞捕獲于細(xì)胞去除過濾器中，從而選擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞。本實(shí)施方式中，在第三工序中進(jìn)行通液血液之前將填充液中的抗氧化劑去除，優(yōu)選預(yù)先對細(xì)胞去除過濾器進(jìn)行洗滌。洗滌所使用的溶液只要是生理性溶液則可以使用各種溶液。另外，為了抑制對血液凝固因子的刺激，可以使用在生理性溶液中添加有抗凝血?jiǎng)┑娜芤?，其中可?yōu)選使用生理食鹽水或在生理食鹽水中添加有抗凝血?jiǎng)┑娜芤骸Ｍㄟ^使用本實(shí)施方式的選擇去除器，可以制造從血液中將HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇性去除的血液。本實(shí)施方式中，制造選擇性去除了 HLA-DR陽性單核細(xì)胞的血液的方法包含以下
工序利用含抗氧化劑的填充液填充細(xì)胞去除過濾器的工序、對填充有填充液的細(xì)胞去除過濾器進(jìn)行輻射線滅菌的工序；和將包含含檸檬酸或其鹽的抗凝血?jiǎng)┑难和ㄒ褐吝^濾器裝置進(jìn)行過濾的工序。本實(shí)施方式的抗氧化劑用于制造HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途中，所述含抗氧化劑的填充液優(yōu)選為含300ppm以上焦亞硫酸鈉的填充液。本實(shí)施方式的抗氧化劑用于制造HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途中，所述輻射線優(yōu)選為Y射線或電子射線。本實(shí)施方式中，對于HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器在臨床上的使用狀況，可以考慮以下狀況，但并無特別限定。以類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者或潰瘍性結(jié)腸炎患者為對象在臨床上使用時(shí)，優(yōu)選每周用 HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器對3L血液處理一次，共計(jì)重復(fù)5次。本實(shí)施方式中，對3L血液進(jìn)行處理是指如下進(jìn)行處理。首先，向與采血回路、送液泵、返血回路連接的HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器內(nèi)流入IL與采血回路連接的生理性溶液。接著，使500mL添加有抗凝血?jiǎng)┑纳硇匀芤毫魅際LA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器。接著，將采血回路連接于患者的肘靜脈等，將返血回路連接于患者的其他肘靜脈等。在采血回路的分支處連接與加入有抗凝劑的生理性溶液相連的導(dǎo)管。以50mL/min的流速啟動送液泵1小時(shí)，使3L添加有含抗凝血?jiǎng)┑纳硇匀芤旱难和ㄈ脒x擇去除器。3L血液通過完后，將生理性溶液與采血回路連接，使500mL生理性溶液流入選擇去除器后，將血液返回至患者。作為含抗凝血?jiǎng)┑纳硇匀芤旱奶砑臃椒úo特別限定，例如可舉出，以相對于1 容量的含4% (w/v)檸檬酸鈉的生理性溶液，血液為5 40容量的方式啟動泵，從而在血液中添加生理性溶液的方法等。采血回路由可連接于肘靜脈等的血液的導(dǎo)入部及連接血液導(dǎo)入部和選擇去除器的導(dǎo)管構(gòu)成，具有與連接于含抗凝血?jiǎng)┑纳硇匀芤旱膶?dǎo)管的分支。在連接于含抗凝血?jiǎng)┑纳硇匀芤旱膶?dǎo)管上連接有可與采血回路分開控制的送液泵。本實(shí)施方式的“血液的導(dǎo)入部”是指將血液導(dǎo)入至導(dǎo)管的部分。作為血液的導(dǎo)入部并無特別限定，例如可舉出穿線針(spike needle)、采血針等。導(dǎo)管只要是能夠送液血液和生理性溶液等且可對生物體安全地進(jìn)行送液的導(dǎo)管， 則可以使用任意的導(dǎo)管。另外，導(dǎo)管的材質(zhì)只要是不會由于血液和生理性溶液等溶液而溶出有害物質(zhì)的材質(zhì)，則可以使用任何一種材質(zhì)。作為導(dǎo)管并無特別限定，例如可舉出氯乙烯、硅、聚丙烯、聚乙烯等。從強(qiáng)度的觀點(diǎn)出發(fā)，導(dǎo)管優(yōu)選使用氯乙烯，作為氯乙烯的具體例子可舉出LC-3000N(旭化成可樂麗醫(yī)療株式會社)。送液泵只要是送液裝置即可，可以利用使用了泵等的所有公知的裝置。泵的構(gòu)造優(yōu)選使用滾柱泵(roller pump)、手指式泵(finger pump)等，優(yōu)選可在20mL/min 300mL/ min的流速范圍內(nèi)精度良好地進(jìn)行送液的泵。作為泵的具體例子，可舉出plusauto LC(旭化成可樂麗醫(yī)療株式會社)。本實(shí)施方式中的“生理性溶液”是指與體液基本等滲的溶液，按照活細(xì)胞或組織盡可能維持正常生理機(jī)能的方式調(diào)制的溶液。作為生理性溶液并無特別限定，例如可舉出生理食鹽液(包含生理食鹽水)、林格液(Ringer’ s solution)、乳酸林格液、醋酸林格液、臺羅德氏液(Tyrode’ s solution)等生理性鹽類溶液；含葡萄糖、葡聚糖、肝素等糖類的溶液；含抗凝劑的溶液等。
作為生理性溶液，還優(yōu)選使用對至少添加有1種以上的上述示例的生理性鹽類溶液、含糖類溶液、含抗凝劑的溶液等的混合液進(jìn)行稀釋得到的溶液。生理性溶液可使用1種，還可制成以任意比例混合有2種以上的混合液進(jìn)行使用， 其中可使用生理食鹽液。本實(shí)施方式中，通過用HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器對從患者采集的血液進(jìn)行處理，可獲得選擇性去除了 HLA-DR陽性單核細(xì)胞的血液制劑。作為從患者采集的血液并無特別限定，例如可舉出全血、血漿或者紅細(xì)胞制劑或血小板制劑等血液來源制劑等。實(shí)施例以下通過實(shí)施例和比較例進(jìn)一步具體地說明本實(shí)施方式，本實(shí)施方式并非僅限定于這些實(shí)施例。[實(shí)施例1]將聚對苯二甲酸乙二醇酯(PET)無紡布(平均纖維徑2. 3 μ m、單位面積重量90g/ m2、厚度0. 45mm)剪切成直徑6. 8mm的圓狀，重疊11張而制成細(xì)胞去除過濾器，將該細(xì)胞去除過濾器層疊在直徑6. 8mm、容器容量ImL的聚乙烯制的柱中(Movicol (注冊商標(biāo))、 e ^ ” ”公司)(填充密度0. 14g/cm3)。用焦亞硫酸鈉水溶液(焦亞硫酸鈉林純藥)填充柱內(nèi)，將該柱放入紙殼箱中進(jìn)行包裝，并照射25kGy的γ射線進(jìn)行滅菌處理。將所得的圓柱作為選擇去除器。水溶液中焦亞硫酸鈉的濃度為800ppm。從健康人志愿者采集血液，向其中添加作為抗凝血?jiǎng)┑暮?% (w/v)檸檬酸鈉水合物的檸檬酸鈉液(Citramin (注冊商標(biāo))、扶桑藥品)，使得檸檬酸鈉液為9. 1% (ν/ν), 將所得的人新鮮血液(檸檬酸鈉水合物的最終濃度為0. 36g/100mL)作為過濾前樣品。通過通液生理食鹽水(大塚生食注(注冊商標(biāo))、大塚制藥)對滅菌過的選擇去除器進(jìn)行洗滌，以0. ISmL/分鐘對過濾前樣品過濾10分鐘。將此時(shí)從出口流出的血液作為過濾后樣品，用于以下的測定。使用自動血球數(shù)測定裝置(Sysmex SF-3000 (東亞醫(yī)用電子制))測定過濾前后的白細(xì)胞濃度，由下式(1)計(jì)算白細(xì)胞去除率。式(1)白細(xì)胞去除率(％) = [1_(過濾后白細(xì)胞濃度/過濾前白細(xì)胞濃度)]X100[比較例1]除了填充水(不含焦亞硫酸鈉)作為填充液之外，通過與實(shí)施例1相同的方法獲得白細(xì)胞去除器。添加作為抗凝血?jiǎng)┑暮衛(wèi)Omg/lOOmL甲磺酸萘莫司他的溶液，使得甲磺酸萘莫司他溶液(Futhan(注冊商標(biāo))、鳥居藥品、以下相同。)為12% (ν/ν)，將所得的人新鮮血液(甲磺酸萘莫司他的最終濃度為1.2mg/100mL)作為過濾前樣品。使用上述白細(xì)胞去除器，利用與實(shí)施例1相同的方法對過濾前樣品進(jìn)行過濾。測定白細(xì)胞濃度，計(jì)算白細(xì)胞去除率。[比較例2]添加作為抗凝血?jiǎng)┑暮衛(wèi)Omg/lOOmL甲磺酸萘莫司他的溶液，使得甲磺酸萘莫司他溶液為12% (v/v)，將所得的人新鮮血液(甲磺酸萘莫司他的最終濃度為1. 2mg/100mL)作為過濾前樣品。使用實(shí)施例1的選擇去除器，利用與實(shí)施例1相同的方法對過濾前樣品進(jìn)行過濾。測定白細(xì)胞濃度，計(jì)算白細(xì)胞去除率。[比較例3]除了使用與比較例1同樣地制作的白細(xì)胞去除器之外，利用與實(shí)施例1相同的方法對過濾前樣品進(jìn)行過濾。測定白細(xì)胞濃度，計(jì)算白細(xì)胞去除率。[實(shí)施例2 4]除了在與實(shí)施例1同樣制作的柱內(nèi)填充100ppm、300ppm或IOOOppm的焦亞硫酸鈉水溶液之外，利用與實(shí)施例1相同的方法計(jì)算白細(xì)胞去除率。[實(shí)施例5]將按照以12% (ν/ν)含有作為抗凝血?jiǎng)┑腁⑶-A液(含有0. 8%檸檬酸、2. 2%檸檬酸鈉、2. 2%葡萄糖溶液，社)的方式添加了 ACD-A液的人新鮮血液作為過濾前樣品。使用實(shí)施例1的選擇去除器，利用與實(shí)施例1相同的方法對過濾前樣品進(jìn)行過濾。測定白細(xì)胞濃度，計(jì)算白細(xì)胞去除率。將實(shí)施例1 5和比較例1 3的結(jié)果示于表1。本實(shí)施方式中使用的HLA-DR陽性單核細(xì)胞的選擇性去除的試驗(yàn)方法如下所述。[試驗(yàn)例1]使過濾前、過濾后樣品分別與進(jìn)行了熒光標(biāo)記的抗HLA-DR抗體(BECT0N， DICKINSON AND COMPANY.)反應(yīng)，利用流式細(xì)胞儀(FACS Calibur, BECTON, DICKINSON AND COMPANY.)進(jìn)行分析。將與抗HLA-DR抗體反應(yīng)的細(xì)胞作為HLA-DR陽性細(xì)胞，計(jì)算各樣品的 HLA-DR陽性細(xì)胞濃度。通過下式⑵計(jì)算各實(shí)施例和比較例中所去除的HLA-DR陽性細(xì)胞在所去除的白細(xì)胞中所占的比例。式(2)所去除的HLA-DR陽性細(xì)胞在所去除的白細(xì)胞中所占的比例(％)=(過濾前 HLA-DR陽性細(xì)胞濃度-過濾后HLA-DR陽性細(xì)胞濃度)/(過濾前白細(xì)胞濃度-過濾后白細(xì)胞濃度)X 100在實(shí)施例1 5中所去除的HLA-DR陽性細(xì)胞在所去除的白細(xì)胞中所占的比例分別為20. 8%、17. 2%、19. 5%、26. 9%、15. 7%。此外，在比較例1 3中分別為7.5%、 7. 5%U6. 0%。對于計(jì)算出的比例，將以比較例1的值為1. 0時(shí)的結(jié)果示于表1。[表1]
權(quán)利要求
1.一種抗氧化劑用于制造HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途，該HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞，所述HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器，所述細(xì)胞去除過濾器填充有含抗氧化劑的填充液，且經(jīng)輻射線滅菌， 所述抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種， 所述抗氧化劑為選自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、 次磷酸、抗壞血酸和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗氧化劑的用途，其中，所述填充液含有300ppm以上的焦亞硫酸鈉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗氧化劑的用途，其中，所述輻射線為γ射線或電子射線。
4.一種HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器，其用于從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除 HLA-DR陽性單核細(xì)胞，所述HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器，所述細(xì)胞去除過濾器填充有含抗氧化劑的填充液且經(jīng)輻射線滅菌， 所述抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種， 所述抗氧化劑為選自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、 次磷酸、抗壞血酸和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的選擇去除器，其中，所述填充液含有300ppm以上的焦亞硫酸鈉。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的選擇去除器，其中，所述輻射線為γ射線或電子射線。
7.—種HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器，其具備與上游側(cè)的第1流路和下游側(cè)的第2流路連接的、填充有含抗氧化劑的填充液且經(jīng)輻射線滅菌的細(xì)胞去除過濾器；和與所述第1流路連接且可將含抗凝血?jiǎng)┑难汗┙o到所述細(xì)胞去除過濾器的、含有選自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種抗凝血?jiǎng)┑娜萜鳌?br> 全文摘要
本發(fā)明提供抗氧化劑用于制造HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器的用途，所述HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器從含抗凝血?jiǎng)┑难褐羞x擇性去除HLA-DR陽性單核細(xì)胞，其中，所述HLA-DR陽性單核細(xì)胞選擇去除器具備由表面未改性的聚酯無紡布構(gòu)成的細(xì)胞去除過濾器，所述細(xì)胞去除過濾器填充有含抗氧化劑的填充液且經(jīng)輻射線滅菌，所述抗凝血?jiǎng)檫x自由檸檬酸和其鹽組成的組中的至少1種，所述抗氧化劑為選自由焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、次磷酸、抗壞血酸和抗壞血酸衍生物組成的組中的至少1種。
文檔編號A61M1/34GK102223907SQ20098014729
公開日2011年10月19日 申請日期2009年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月25日
發(fā)明者加鹽裕美子, 助川威, 櫻井正美 申請人:旭化成可樂麗醫(yī)療株式會社