專利名稱：利用華西小石積治療和預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及華西小石積(Osteomeles schwerinae)提取物及其系統(tǒng)性級(jí)分 (fractions)，其可用作預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物以及用于功能性保健食品。
背景技術(shù)：
糖尿病是重要的成人疾病之一，在世界范圍內(nèi)引起了我們的關(guān)注。最近，韓國(guó)的糖尿病患病率達(dá)到了 10%，并且隨著經(jīng)濟(jì)的快速增長(zhǎng)還在不斷增加。全世界的糖尿病人數(shù)量超過(guò)了 240，000，000并預(yù)期在2025年達(dá)到380，000，000。據(jù)2009年美國(guó)JAMA預(yù)測(cè)，亞洲將報(bào)告預(yù)期糖尿病患者總數(shù)的60%。目前，糖尿病的發(fā)病時(shí)間有越來(lái)越早的趨勢(shì)，似乎大都為中年群體。由于壽命的延長(zhǎng)，因此很難避免并發(fā)癥。例如，糖尿病發(fā)病10 20年后，幾乎每個(gè)人體器官都會(huì)被損害從而引起糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病白內(nèi)障、糖尿病腎病、糖尿病神經(jīng)病變、心臟病、癌癥以及骨質(zhì)疏松等。慢性糖尿病腎病需要血液透析，并且可能成為晚期腎病的一個(gè)重要原因。糖尿病白內(nèi)障和糖尿病視網(wǎng)膜病引起失明甚至導(dǎo)致死亡。在美國(guó)， 25 74歲年齡組失明的主要原因就是糖尿病。例如，60%的糖尿病患者在發(fā)病后的15 20年間喪失視力。因此，只要并發(fā)癥的出現(xiàn)可以被延后5 10年，糖尿病患者及其家庭的生活質(zhì)量將完全不同，也影響著國(guó)家預(yù)算本身。引起糖尿病并發(fā)癥的機(jī)制可通過(guò)蛋白質(zhì)非酶糖基化、多元醇途徑以及氧化應(yīng)激等來(lái)解釋。蛋白質(zhì)非酶糖基化指的是還原糖和蛋白質(zhì)的氨基酸基團(tuán)如賴氨酸殘基的縮合反應(yīng)，其為Maillad反應(yīng)，不需要酶的介導(dǎo)。此反應(yīng)的結(jié)果是，生成了晚期糖基化終產(chǎn)物 (AGEs)。蛋白質(zhì)非酶糖基化更加詳細(xì)地解釋為(1)蛋白質(zhì)的氨基酸基團(tuán)如賴氨酸殘基與還原糖的醛或酮在非酶活性下反應(yīng)，為親核加成，生成早期產(chǎn)物席夫堿(schiff kise)，然后靠近席夫堿的酮胺加成物相互通過(guò)縮合反應(yīng)產(chǎn)生可逆的Amadori型早期糖基化產(chǎn)物；以及(2)當(dāng)高血糖狀況比較久時(shí)，可逆的Amadori型早期糖基化產(chǎn)物沒(méi)有進(jìn)行降解，并且只進(jìn)行重排產(chǎn)生了不可逆的晚期糖基化終產(chǎn)物。產(chǎn)生的不可逆晚期糖基化終產(chǎn)物與蛋白或脂質(zhì)偶聯(lián)或交聯(lián)，導(dǎo)致不可逆的糖蛋白或糖脂質(zhì)的生成。與可逆的Amadori型早期糖基化產(chǎn)物不同的是，不可逆的晚期糖基化終產(chǎn)物一旦生成便不發(fā)生降解，甚至當(dāng)血糖水平恢復(fù)到正常時(shí)也不降解，并且只要存在與晚期糖基化終產(chǎn)物偶聯(lián)的蛋白質(zhì)或脂質(zhì)，其就在組織中積聚，從而導(dǎo)致組織的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生異常變化引起并發(fā)癥(Vinson, J. Α.等，1996，營(yíng)養(yǎng)生物化學(xué)雜志(J. Nutritional Biochemistry) 7 :559-663 ；Smith, P. R.等，1992，Eur. J. Biochem.，210 :729-739)。例如，糖化白蛋白，其為通過(guò)葡萄糖和多種蛋白之間反應(yīng)生成的晚期糖基化終產(chǎn)物中的一種，是慢性糖尿病腎病的一個(gè)主要原因。糖化白蛋白比正常白蛋白更容易插入腎小球細(xì)胞(glomerular cells)中。高濃度葡萄糖刺激了腎小球系膜細(xì)胞(mesangium cells)從而增加了細(xì)胞外基質(zhì)的合成。由于過(guò)多的糖化白蛋白引入其中以及增多的細(xì)胞外基質(zhì)，誘發(fā)了腎小球纖維化。通過(guò)這種機(jī)制，腎小球不斷損傷，最終需要諸如血液透析或器官移植的特別治療。當(dāng)慢性糖尿病持續(xù)時(shí)，膠原蛋白與晚期糖基化終產(chǎn)物在動(dòng)脈壁中偶聯(lián)，并且基膜蛋白也與晚期糖基化終產(chǎn)物在腎小球中偶聯(lián)，其都在組織中積聚(Brownlee， Μ.等，1986，科學(xué)(Sciences)，232，1629-1632)。這種蛋白質(zhì)非酶糖基化可誘發(fā)基膜、血漿白蛋白、晶狀體蛋白(lens protein)、纖維蛋白以及膠原蛋白的糖基化，并且由此產(chǎn)生的晚期糖基化終產(chǎn)物引起組織結(jié)構(gòu)和功能的異常變化，導(dǎo)致慢性糖尿病并發(fā)癥如糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病白內(nèi)障、糖尿病腎病及糖尿病神經(jīng)病變。在高血糖情況下，當(dāng)產(chǎn)生晚期糖基化終產(chǎn)物時(shí)，誘發(fā)脂質(zhì)代謝紊亂，與此同時(shí)對(duì)抗有毒氧自由基的防御系統(tǒng)變?nèi)醵鹧趸瘧?yīng)激(Yokozawa，Τ.等，2001，J. of Trad. Med.， 18 :107-112)。因此，蛋白質(zhì)非酶糖基化與氧化應(yīng)激機(jī)制的關(guān)系非常密切。多元醇途徑的過(guò)程包括以下幾個(gè)步驟(1)醛糖或酮糖通過(guò)醛糖還原酶(AR)還原生成山梨醇；以及O)山梨醇通過(guò)脫氫酶氧化產(chǎn)生果糖。在正常情況下，醛糖還原酶對(duì)葡萄糖的親和力非常低。但在高血糖情況下，多元醇途徑的第一個(gè)酶醛糖還原酶被過(guò)度激活，因此過(guò)多的血糖轉(zhuǎn)化成了山梨醇和果糖，其在組織中積聚破壞了滲透壓平衡，導(dǎo)致并發(fā)癥。也就是說(shuō)，增加的滲透壓阻止了水分，導(dǎo)致了糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病白內(nèi)障以及糖尿病神經(jīng)病變(糖尿病(Diabetes), Kim 等，韓國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)(Korean Diabetes Association)，韓國(guó)醫(yī)學(xué)出版社(Korea Medical Book Publisher),483 ；Soulis-Liparota,Τ.等，1995，糖尿病學(xué)(Diabetologia)，38 :357-394)。據(jù)報(bào)道，晚期糖基化終產(chǎn)物能激活人體微血管內(nèi)皮細(xì)胞中多元醇途徑的主要
酶--酸糖還原酶(AR) (Nakamura, N.等，2000，F(xiàn)ree Radic Biol. Med. ,29 :17-25)。此時(shí)，
果糖的非酶糖基化速度約為葡萄糖的10倍。因此，當(dāng)高濃度的果糖與蛋白質(zhì)進(jìn)行偶聯(lián)時(shí)， 加速了晚期糖基化終產(chǎn)物的生成。蛋白質(zhì)非酶糖基化、多元醇途徑以及氧化應(yīng)激的機(jī)制均與引起糖尿病并發(fā)癥有關(guān)。因此，對(duì)于延緩、預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥來(lái)說(shuō)，抑制晚期糖基化終產(chǎn)物的生成是非常重要的(Brownlee, Μ.等，1988，N. Engl. Med.，318，1315-1321)。合成的蛋白糖基化抑制劑氨基胍為親核性聯(lián)氨，其與Amadori產(chǎn)物偶聯(lián)來(lái)阻礙蛋白質(zhì)的交聯(lián)，結(jié)果抑制晚期糖基化終產(chǎn)物的生成，由此可以延緩或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的發(fā)展(Brownlee, M.等，1986，科學(xué)(Sciences), 232,1629-1632 ；Edelstein, D.等，1992，糖尿病(Diabetes)，41，26- )。因此，氨基胍被認(rèn)為是很有前景的預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的合成藥物，并且已完成了三期臨床試驗(yàn)。然而，由于在長(zhǎng)期用藥期間觀察到的毒性，氨基胍的臨床試驗(yàn)已經(jīng)停止。因此，迫切需要開發(fā)一種更安全及更有效的天然藥物。因此，本發(fā)明的發(fā)明人嘗試采用天然物質(zhì)開發(fā)一種治療糖尿病并發(fā)癥的組合物， 最終發(fā)明人通過(guò)證實(shí)華西小石積提取物及其級(jí)分具有抗糖尿病、抗衰老以及抗癌作用而完成了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種組合物，其通過(guò)抑制作為引起糖尿病并發(fā)癥主要原因之一的晚期糖基化終產(chǎn)物的生成和醛糖還原酶的過(guò)度活性并表現(xiàn)出抗氧化作用，用于預(yù)防、延緩和治療糖尿病并發(fā)癥如晶狀體纖維變性、視網(wǎng)膜及腎臟病理性異常等，以及提供一種用該組合物治療糖尿病并發(fā)癥的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種預(yù)防或延緩衰老、預(yù)防或治療癌癥的組合物，其基于晚期糖基化終產(chǎn)物和氧化應(yīng)激為衰老及癌癥的原因而制備，以及提供一種用該組合物預(yù)防衰老的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種用于治療糖尿病并發(fā)癥及用于預(yù)防或延緩衰老的組合物，其包括采用醇、水或其混合物提取的華西小石積(Osteomeles schwerinae)提取物，以及逐級(jí)用己烷、乙酸乙酯、丁醇和水對(duì)其進(jìn)行分級(jí)處理的級(jí)分。
本發(fā)明還提供一種利用所述提取物和級(jí)分來(lái)預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥以及預(yù)防衰老的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于預(yù)防和改善糖尿病并發(fā)癥的功能性保健食品及一種用于預(yù)防或延緩衰老的藥物組合物和功能性保健食品，其包括所述提取物及級(jí)分。
有益效果
相對(duì)于傳統(tǒng)的糖尿病并發(fā)癥治療劑而言，華西小石積提取物是一種安全無(wú)毒性的天然提取物，治療糖尿病并發(fā)癥非常有效。因此，華西小石積提取物可以有效地用來(lái)制備用于預(yù)防、延緩和治療糖尿病并發(fā)癥的藥物組合物和功能性保健食品。


本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的應(yīng)用可通過(guò)參考附圖得到最好的理解，其中
圖1是說(shuō)明華西小石積提取和系統(tǒng)性分級(jí)的簡(jiǎn)圖2是華西小石積提取物的HPLC色譜圖3是說(shuō)明在華西小石積提取物中培養(yǎng)28天后通過(guò)ELISA法分析的AGE-BSA含量的圖表；
圖4是說(shuō)明在華西小石積提取物己烷(HEX)層中培養(yǎng)觀天后通過(guò)ELISA法分析的AGE-BSA含量的圖表；
圖5是說(shuō)明在華西小石積提取物乙酸乙酯(EA)層中培養(yǎng)28天后通過(guò)ELISA法分析的AGE-BSA含量的圖表；
圖6是說(shuō)明在華西小石積提取物丁醇(BuOH)層中培養(yǎng)觀天后通過(guò)ELISA法分析的AGE-BSA含量的圖表；
圖7是說(shuō)明在華西小石積提取物水層中培養(yǎng)觀天后通過(guò)ELISA法分析的AGE-BSA 含量的圖表；
圖8是說(shuō)明在華西小石積種子提取物中培養(yǎng)觀天后通過(guò)ELISA法分析的AGE-BSA 含量的圖表；
圖9是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)AGE-BSA抑制作用的圖表；
圖10是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)AGE-BSA阻斷作用的圖表；
圖11是說(shuō)明華西小石積提取物己烷層對(duì)AGE-BSA抑制作用的圖表；
圖12是說(shuō)明華西小石積提取物己烷層對(duì)AGE-BSA阻斷作用的圖表；
圖13是說(shuō)明華西小石積提取物乙酸乙酯層對(duì)AGE-BSA抑制作用的圖表；
圖14是說(shuō)明華西小石積提取物乙酸乙酯層對(duì)AGE-BSA阻斷作用的圖表；
圖15是說(shuō)明華西小石積提取物丁醇層對(duì)AGE-BSA抑制作用的圖表；
圖16是說(shuō)明華西小石積提取物丁醇層對(duì)AGE-BSA阻斷作用的圖表；
圖17是說(shuō)明華西小石積提取物水層對(duì)AGE-BSA抑制作用的圖表；
圖18是說(shuō)明華西小石積提取物水層對(duì)AGE-BSA阻斷作用的圖表；
圖19是說(shuō)明華西小石積提取物在離體(ex vivo)小鼠晶狀體中抗白內(nèi)障作用的一組照片；
圖20是說(shuō)明華西小石積小枝圖表；
圖21是說(shuō)明華西小石積小枝作用的一組照片；
圖22是說(shuō)明華西小石積小枝作用的圖表；
圖23是說(shuō)明I型糖尿病動(dòng)物模型中采用華西小石積提取物治療后腎功能指標(biāo)變化的一組圖表；
圖M是說(shuō)明I型糖尿病動(dòng)物模型中采用華西小石積提取物治療后的腎臟組織學(xué)變化的一組照片；㈧PAS(過(guò)碘酸-雪夫氏)染色，⑶MaSSOn三色染色；
圖25是說(shuō)明I型糖尿病動(dòng)物模型中采用華西小石積提取物治療后的足細(xì)胞 (podocyte)損失變化的一組照片；(A)突觸足蛋白(synatopodin)染色，(B)WT-I染色；
圖沈是說(shuō)明晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)表達(dá)模式變化(A，C)以及華西小石積提取物治療后I型糖尿病動(dòng)物模型中的晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE蛋白)(B，D)的一組照片及圖表；
圖27是說(shuō)明在I型糖尿病動(dòng)物模型中考察的華西小石積提取物抗氧化作用的一組照片及圖表；
圖觀是說(shuō)明I型糖尿病動(dòng)物模型中華西小石積提取物對(duì)視網(wǎng)膜血管周細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的預(yù)防作用的一組照片；
圖四是說(shuō)明華西小石積提取物治療后I型糖尿病動(dòng)物模型中涉及視網(wǎng)膜血管細(xì)胞損傷的AGEs、iNOS (誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶)及NF- κ B表達(dá)模式變化的一組照片；
圖30是說(shuō)明在II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)腎臟中華西小石積提取物的AGEs抑制作用的一組照片及圖表；
圖31是說(shuō)明華西小石積提取物治療后II型糖尿病動(dòng)物模型中PAS染色的腎臟的一組照片；
圖32是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中足細(xì)胞損失的預(yù)防作用的一組照片及圖表；
圖33是說(shuō)明II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中華西小石積提取物抗血管生成 (anti-angiogenesis)作用的一組照片；
圖34是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中血視網(wǎng)膜屏障損害的預(yù)防作用的一組照片；
圖35是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中血管周細(xì)胞損失和無(wú)細(xì)胞毛細(xì)血管生成的預(yù)防作用的一組照片及圖表；
圖36是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中視網(wǎng)膜血管中晚/葉片提取物在離體小鼠晶狀體中抗白內(nèi)障作用的 /葉片提取物的級(jí)分在離體小鼠晶狀體中抗白內(nèi)障 /葉片提取物的級(jí)分在離體小鼠晶狀體中抗白內(nèi)障期糖基化終產(chǎn)物積聚的預(yù)防作用的一組照片及圖表；
圖37是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中Muller細(xì)胞活性的作用的一組照片；
圖38是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中晶狀體渾濁的預(yù)防作用的一組照片；
圖39是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中晶狀體纖維變性的預(yù)防作用的一組照片；
圖40是說(shuō)明華西小石積提取物對(duì)II型糖尿病動(dòng)物模型(SDT)中的晶狀體中醛糖還原酶活性的作用的圖表。
具體實(shí)施方式
在下文中將詳細(xì)描述本發(fā)明。
本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物，其包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
糖尿病并發(fā)癥為糖尿病發(fā)展較長(zhǎng)時(shí)間后產(chǎn)生的癥狀，其是由糖尿病引起但又完全不同于糖尿病的疾病。所以，判斷糖尿病并發(fā)癥和糖尿病的標(biāo)準(zhǔn)是互不相同的，因此用于糖尿病并發(fā)癥的治療劑完全不同于用于糖尿病的制劑。
糖尿病并發(fā)癥由晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)和醛糖還原酶的異?；钚约霸鰪?qiáng)的氧化應(yīng)激引起。因此，可通過(guò)檢測(cè)晚期糖基化終產(chǎn)物、醛糖還原酶活性以及抗氧化活性來(lái)評(píng)價(jià)用于糖尿病并發(fā)癥的候選治療劑的作用。糖尿病并發(fā)癥的典型示例有糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病白內(nèi)障、糖尿病腎病及糖尿病神經(jīng)病變。因此，可通過(guò)考察對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病白內(nèi)障、糖尿病腎病及糖尿病神經(jīng)病變的抑制作用來(lái)驗(yàn)證候選治療劑的效果。
本發(fā)明中，發(fā)明人證實(shí)了華西小石積提取物及其級(jí)分對(duì)糖尿病并發(fā)癥具有治療作用，并且還證實(shí)了具有對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物生成和醛糖還原酶活性的抑制作用以及抗氧化作用。另外，發(fā)明人證實(shí)了華西小石積提取物具有離體抗白內(nèi)障作用。本發(fā)明人同樣證實(shí)了華西小石積提取物在I型和II型糖尿病動(dòng)物模型(圖23-40)中對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病白內(nèi)障、糖尿病腎病及糖尿病神經(jīng)病變的預(yù)防、延緩和治療都是有效的。因此，本發(fā)明人通過(guò)體外、離體及體內(nèi)的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)證實(shí)了華西小石積提取物及其級(jí)分是很有前景的預(yù)防、延緩及治療糖尿病并發(fā)癥的候選組合物。
用于本發(fā)明的華西小石積為落葉灌木，屬薔薇科。高1 3m，小枝細(xì)弱微彎，為紅褐色或灰褐色。幼枝密被灰白色柔毛，并且隨其生長(zhǎng)逐漸脫落。多年生枝為黑褐色。已知該植物的藥性平和(smooth and clams)。有效用于清熱解毒、收斂止瀉、祛風(fēng)除濕、瘡瘍腫毒、 咽喉腫痛、泄瀉、痢疾、腸風(fēng)下血、陰挺、風(fēng)濕痹痛等(中華本草，上海科學(xué)出版社，第4卷，第 2677 頁(yè)；ISBN7-5323-5106-8/R. 1287)。
華西小石積的組合物和生理活性尚未有報(bào)道。
可以采用華西小石積的整個(gè)植株來(lái)得到本發(fā)明的華西小石積提取物。優(yōu)選幼小枝、葉片、或種子，但是植株的其余部分同樣可以使用。
本發(fā)明的華西小石積提取物可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的傳統(tǒng)提取方法制備， 如超聲波提取、過(guò)濾及回流提取。
本發(fā)明的提取物可以采用水、Q C4低級(jí)醇或其混合溶劑提取自干燥的華西小石積植株。此時(shí)，低級(jí)醇優(yōu)選甲醇或乙醇。
此處采用的溶劑體積為提取物體積的1 10倍，或優(yōu)選1 5倍。優(yōu)選的溶劑量為干燥華西小石積量的1 10倍，進(jìn)一步優(yōu)選1 5倍量。
本發(fā)明的級(jí)分由本發(fā)明的提取物制備。首先，將本發(fā)明的提取物除去溶劑，向殘留物中加入水和己烷，然后分離己烷層得到己烷級(jí)分。接著，向水層中加入乙酸乙酯然后再分離乙酸乙酯層獲得乙酸乙酯級(jí)分。除去乙酸乙酯層后，向其中加入丁醇分離丁醇級(jí)分。除去丁醇層后，最后得到水層。
為了分析對(duì)作為糖尿病并發(fā)癥標(biāo)志物的晚期糖基化終產(chǎn)物產(chǎn)生的抑制作用及其治療效果，本發(fā)明人通過(guò)采用BSA(牛血清白蛋白)測(cè)定果糖及葡萄糖的結(jié)合程度。采用已知對(duì)晚期糖基化終產(chǎn)物具有優(yōu)異抑制作用的氨基胍作為陽(yáng)性對(duì)照。在用華西小石積提取物或其級(jí)分治療的實(shí)驗(yàn)組中，提取物或其級(jí)分顯示了高于氨基胍的效果(表2，圖3-8)。
為更準(zhǔn)確地證實(shí)華西小石積提取物及其級(jí)分的作用，本發(fā)明人考察了其是否可以抑制晚期糖基化終產(chǎn)物和膠原蛋白之間的交聯(lián)，或其是否可以阻斷晚期糖基化終產(chǎn)物和膠原蛋白之間已建立的交聯(lián)。
將本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分與已知的作為AGEs交聯(lián)劑 (cross-linker)抑制劑的氨基胍進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果證實(shí)了從植株葉片、小枝和種子得到的華西小石積提取物及其級(jí)分具有優(yōu)異的交聯(lián)劑抑制作用(圖9、11、13、15和17)。
將本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分與已知的作為AGh交聯(lián)劑阻斷劑的 ALT-71 KAlteon Inc. ,Ramsey,N)進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果證實(shí)了從植株葉片、小枝和種子得到的華西小石積提取物及其級(jí)分具有優(yōu)異的交聯(lián)劑阻斷作用(圖10、12、14、16和18)。
因此，本發(fā)明人證實(shí)了華西小石積提取物及其級(jí)分抑制了晚期糖基化終產(chǎn)物的生成及其與其它蛋白的交聯(lián)，表明了本發(fā)明所述提取物及其級(jí)分對(duì)糖尿病并發(fā)癥具有優(yōu)異的預(yù)防和治療作用。
本發(fā)明人進(jìn)一步考察了華西小石積提取物及其級(jí)分是否可以抑制作為糖尿病并發(fā)癥另一個(gè)標(biāo)志的醛糖還原酶的活性。此時(shí)，采用3，3_四亞甲基戊二酸作為比較對(duì)照。結(jié)果，與傳統(tǒng)的醛糖還原酶抑制劑相比，證實(shí)了本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分具有優(yōu)異的醛糖還原酶抑制作用(見(jiàn)表6)。
華西小石積提取物及其級(jí)分的抗氧化作用通過(guò)DPPH法測(cè)定自由基來(lái)考察。結(jié)果，本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分顯示出了與作為陽(yáng)性對(duì)照的維生素C、維生素E或 BHT(丁羥甲苯)相同或更高的抗氧化作用(見(jiàn)表7)。
正如上文所述，已證實(shí)本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分具有優(yōu)異的抑制AGEs 形成的作用——AGEs形成是糖尿病并發(fā)癥的一個(gè)原因并且是評(píng)價(jià)糖尿病并發(fā)癥治療效果的一個(gè)指標(biāo)，還具有抑制與其它蛋白交聯(lián)的作用，抑制醛糖還原酶活性的作用以及抗氧化作用，因此，可以用作預(yù)防、延緩及治療糖尿病并發(fā)癥的組合物。
為證實(shí)華西小石積提取物及其級(jí)分在實(shí)際中對(duì)糖尿病并發(fā)癥的治療作用，發(fā)明人進(jìn)行了離體實(shí)驗(yàn)。特別地，發(fā)明人考察了華西小石積提取物及其級(jí)分對(duì)最典型的糖尿病并發(fā)癥之一糖尿病白內(nèi)障的抑制作用。糖尿病白內(nèi)障由木糖誘發(fā)，然后用華西小石積提取物及其級(jí)分進(jìn)行治療。結(jié)果，證實(shí)了提取物及其級(jí)分具有顯著的糖尿病白內(nèi)障治療效果(圖19和圖20說(shuō)明了華西小石積提取物的作用，圖21和圖22說(shuō)明了從華西小石積提取物用己烷、乙酸乙酯、丁醇和水各自得到的級(jí)分的作用)。特別地，華西小石積提取物在10μ g/ml 的濃度下顯示出了優(yōu)異的抗糖尿病白內(nèi)障作用(圖19和圖20)，并且這四種級(jí)分在5 μ g/ ml的濃度下同樣顯示出了優(yōu)異的抗糖尿病白內(nèi)障作用(圖21和圖22)。此外，本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分在由鏈脲佐菌素(STZ)誘發(fā)的I型糖尿病動(dòng)物模型和II型糖尿病動(dòng)物模型SDT(自發(fā)性糖尿病torii (spontaneous diabetic torii))大鼠中，對(duì)糖尿病白內(nèi)障、腎病及神經(jīng)性病變顯示出了優(yōu)異的預(yù)防和治療作用。本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分的以上作用均高于陽(yáng)性對(duì)照氨基胍(I型糖尿病模型)和二甲雙胍(II型糖尿病模型)(圖23-40)。
將華西小石積提取物按200mg/kg/天的劑量治療正常組動(dòng)物(SD大鼠)一天一次持續(xù)8周。給藥過(guò)程中，沒(méi)有大鼠死亡。動(dòng)物血液的ALT和AST水平(肝功能測(cè)試指標(biāo)) 在正常范圍內(nèi)，表明動(dòng)物肝臟沒(méi)有受到治療的影響(見(jiàn)表9)。
本發(fā)明的藥物組合物包含基于組合物總重量濃度為0. 1 99. 9wt%的本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分，還可另外包括任何藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
本發(fā)明的藥物組合物通過(guò)與常規(guī)使用的稀釋劑或賦形劑如填充劑、藥效延長(zhǎng)劑 (extenders)、粘合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑及表面活性劑進(jìn)行混合，可制備成口服或腸胃外給藥?？诜o藥的固體制劑為片劑、丸劑、粉末劑、顆粒劑以及膠囊劑。所述固體制劑的制備通過(guò)將本發(fā)明的華西小石積提取物與一種或多種合適的賦形劑如淀粉、碳酸鈣、蔗糖或乳糖、明膠等進(jìn)行混合。除簡(jiǎn)單的賦形劑之外，也可以采用潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、滑石粉等。 口服給藥的液體制劑為懸浮劑、溶液劑、乳劑及糖漿劑，并且上述劑型除常規(guī)采用的簡(jiǎn)單稀釋劑如水和液體石蠟之外，還可以包括多種賦形劑如潤(rùn)濕劑、甜味劑、芳香劑以及防腐劑。腸胃外給藥的制劑為無(wú)菌水溶液(sterilized aqueous solutions)、水不溶性賦形劑 (water-insoluble excipients)、懸浮劑、乳劑、凍干制劑以及栓劑。水不溶性賦形劑和懸浮劑除活性化合物或化合物組外，可以包括丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、注射用酯如油酸乙酯(ethylolate)等。栓劑除活性化合物或化合物組之外還可以包括wit印sol、聚乙二醇(macrogol)、吐溫61、可可油、月桂油(laurin butter)、甘油明膠等。
本發(fā)明的藥物組合物的應(yīng)用對(duì)象為脊椎動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選試驗(yàn)動(dòng)物如大鼠、小鼠、家兔、豚鼠、倉(cāng)鼠、狗和貓，最優(yōu)選猿類如黑猩猩、大猩猩及人類。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)口服或腸胃外給藥。腸胃外給藥優(yōu)選的示例為皮膚外用(external skin application)、直腸給藥、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、子宮內(nèi)注射或腦室內(nèi)注射。然而，皮膚外用為最優(yōu)選。
本發(fā)明藥物組合物的有效劑量可以根據(jù)體重、年齡、性別、健康狀況、飲食、給藥頻率、給藥方法、排泄以及病情的嚴(yán)重程度來(lái)確定。華西小石積提取物的劑量為每天0.01 1000mg/kg，優(yōu)選每天30 500mg/kg，更優(yōu)選每天50 300mg/kg，給藥頻率優(yōu)選一天1 6次。
本發(fā)明的藥物組合物可以單獨(dú)用藥或結(jié)合外科手術(shù)、放射療法、激素療法、化學(xué)療法及生物調(diào)節(jié)器用藥。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防和改善糖尿病并發(fā)癥的功能性保健食品，其包括作為活性成分的華西小石積提取物及其級(jí)分。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，證實(shí)了華西小石積提取物及其級(jí)分不僅能有效抑制晚期糖基化終產(chǎn)物的生成(表2，圖3-8)、與其它蛋白的交聯(lián)(圖9、11、13、15和17)以及醛糖還原酶的活性(表6，圖18-31)，而且還可有效阻斷晚期糖基化終產(chǎn)物及蛋白之間已形成的交聯(lián)(圖12、14、16和18)，與此同時(shí)還具有抗氧化活性(表7)，表明了其可以有效用于預(yù)防和改善糖尿病并發(fā)癥。
華西小石積提取物按每天200mg/kg的劑量治療正常組動(dòng)物(SD大鼠)一天一次持續(xù)8周。給藥過(guò)程中，沒(méi)有大鼠死亡。動(dòng)物血液的ALT和AST水平在正常范圍內(nèi)，表明動(dòng)物肝臟沒(méi)有受到治療的影響(見(jiàn)表9)。因此，所述提取物被評(píng)價(jià)為無(wú)生物毒性的安全物質(zhì)， 其可有效地應(yīng)用于功能性保健食品中。
本發(fā)明的功能性保健食品可另外包括各種香料或天然糖類。上述天然糖類可以為單糖如葡萄糖和果糖、雙糖如麥芽糖和蔗糖、多糖如糊精和環(huán)糊精以及葡萄糖醇如木糖醇 (Xilytole)、山梨醇和赤蘚醇中的一種。除此之外，還可以包括作為甜味劑的天然甜味劑如奇異果甜蛋白和甜菊提取物，以及合成甜味劑如糖精和阿巴斯甜。每100重量份的本發(fā)明功能性保健食品中，天然糖的含量?jī)?yōu)選為0. 01 0. 04重量份，更優(yōu)選為0. 02 0. 03重量份。
除上述提及的配料外，本發(fā)明的功能性保健食品還可以包括多種營(yíng)養(yǎng)素、維生素、礦物質(zhì)、香料、著色劑、果膠酸及其鹽、褐藻酸及其鹽、有機(jī)酸、保護(hù)性膠體增粘劑 (protective colloidal viscosifiers)、pH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇、用于加入到蘇打中的碳酸化器(carbonators)等。本發(fā)明的功能性保健食品還可以包括添入了水果果肉的天然果汁、水果飲料和蔬菜飲料。上述所有配料可以單獨(dú)或一起加入。配料的混合比例實(shí)質(zhì)上不重要，但通常，每100重量份的本發(fā)明功能性保健食品中，每一種可加入0. 01 0. 1重量份。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種用于預(yù)防或延緩衰老的藥物組合物或功能性保健食品， 其包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，考察了華西小石積提取物及其級(jí)分的抗氧化作用，結(jié)果，本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分顯示出了與傳統(tǒng)抗氧化劑、維生素C、維生素 E及BHT(丁羥甲苯)相當(dāng)或更好的抗氧化作用(見(jiàn)表7)。因此，本發(fā)明的華西小石積提取物及其級(jí)分可以消除氧化應(yīng)激——其為衰老的一個(gè)直接原因，表明了本發(fā)明的提取物可有效地用于制備抑制或延緩衰老的藥物組合物或功能性保健食品。
本發(fā)明還提供了一種用于預(yù)防和治療癌癥的藥物組合物或用于預(yù)防和改善癌癥的功能性保健食品，其包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
晚期糖基化終產(chǎn)物引起癌癥的事實(shí)已被報(bào)道CTokuda H.等，2005，Book of Abstract of 53rd GA Congress joint with SIF，P076)。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，證實(shí)了華西小石積提取物或其級(jí)分能有效地抑制晚期糖基化終產(chǎn)物的生成(表2，圖 3-18)、抑制晚期糖基化終產(chǎn)物和其它蛋白之間的交聯(lián)、同時(shí)阻斷已產(chǎn)生的交聯(lián)(圖9-18)。 因此，證實(shí)了本發(fā)明的提取物可有效地用來(lái)制備用于預(yù)防和治療癌癥的藥物組合物或功能性保健食品。
本發(fā)明還提供了一種治療糖尿病并發(fā)癥的方法，其包括將藥學(xué)有效量的華西小石積提取物或其級(jí)分施用于糖尿病并發(fā)癥個(gè)體的步驟。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的華西小石積提取物或其級(jí)分抑制了糖尿病并發(fā)癥原因之一的晚期糖基化終產(chǎn)物的生成(見(jiàn)表2及圖3-18)，并且抑制了糖尿病并發(fā)癥另一原因的醛糖還原酶的活性(見(jiàn)表6)。通過(guò)離體(見(jiàn)圖19-22)和體內(nèi)(見(jiàn)圖23-40) 試驗(yàn)，同樣證實(shí)了本發(fā)明的提取物可以有效抑制糖尿病并發(fā)癥之一的糖尿病白內(nèi)障。上述結(jié)果表明本發(fā)明的提取物及其級(jí)分可施用于糖尿病并發(fā)癥個(gè)體以治療所述并發(fā)癥。
所述治療方法的對(duì)象不僅適用于本發(fā)明所用的小鼠，同樣適用于其它脊椎動(dòng)物。 適用的對(duì)象優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選如大鼠、小鼠、家兔、豚鼠、倉(cāng)鼠、狗和貓這樣的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物， 最優(yōu)選猿類如黑猩猩、大猩猩及人類。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，通過(guò)皮膚外用及腹膜內(nèi)注射進(jìn)行給藥。由于本發(fā)明的華西小石積提取物或其級(jí)分無(wú)細(xì)胞毒性，其也可以通過(guò)口服或腸胃外來(lái)給藥。腸胃外給藥優(yōu)選的示例為直腸給藥、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、子宮內(nèi)注射或腦室內(nèi)注射。然而，皮膚外用為最優(yōu)選。
本發(fā)明藥物組合物的有效劑量可以根據(jù)體重、年齡、性別、健康狀況、飲食、給藥頻率、給藥方法、排泄以及病情的嚴(yán)重程度來(lái)確定。
本發(fā)明還提供了一種預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的方法，其包括將華西小石積提取物或其級(jí)分施用于糖尿病個(gè)體的步驟。
糖尿病個(gè)體中，血糖沒(méi)有得到適當(dāng)控制，以至于血液中存在過(guò)多的葡萄糖。當(dāng)過(guò)多的葡萄糖長(zhǎng)時(shí)間在血液中存在時(shí)，便生成了晚期糖基化終產(chǎn)物，其引發(fā)糖尿病并發(fā)癥。此時(shí)，施用本發(fā)明的華西小石積提取物或其級(jí)分可以抑制該個(gè)體中晚期糖基化終產(chǎn)物的生成，從而預(yù)防或延緩糖尿病個(gè)體的糖尿病并發(fā)癥。
本發(fā)明還提供了一種抑制和延緩衰老的方法，其包括將華西小石積提取物或其級(jí)分施用于糖尿病個(gè)體的步驟。
本發(fā)明的華西小石積提取物或其級(jí)分具有優(yōu)異的抗氧化作用。因此，施用本發(fā)明的華西小石積提取物或其級(jí)分可以延遲或抑制糖尿病個(gè)體的衰老。
本發(fā)明還提供了一種治療癌癥的方法，其包括將華西小石積提取物或其級(jí)分施用于癌癥個(gè)體的步驟，以及一種預(yù)防癌癥的方法，其包括將華西小石積提取物或其級(jí)分施用于個(gè)體的步驟。
本發(fā)明的華西小石積提取物或其級(jí)分可以有效抑制晚期糖基化終產(chǎn)物的生成，因此施用本發(fā)明的華西小石積提取物或其級(jí)分可以有效預(yù)防和治療癌癥個(gè)體的癌癥。
本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療糖尿病并發(fā)癥、抑制和延緩衰老、或預(yù)防或治療癌癥的功能性保健食品，其包括作為活性成分的華西小石積提取物或通過(guò)系統(tǒng)性分級(jí)得到的各個(gè)級(jí)分(己烷層、乙酸乙酯層、丁醇層及水層)。所述功能性保健食品可另外包括基于成品可銷售性及消費(fèi)者喜好考慮的其它食品成分。
此外，本發(fā)明提供了一種預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物，其包括作為活性成分的含有2-0-乙酰基牡荊素、金絲桃苷及槲皮苷的華西小石積提取物或其級(jí)分。
從華西小石積提取物分離得到了化合物如白樺脂酸-3 β -基-咖啡酸酯、白樺脂醇-3β-基-咖啡酸酯、2-0-乙?；登G素、金絲桃苷、槲皮苷、阿福豆苷以及(-)_表兒茶素。每種化合物都被證實(shí)能夠抑制晚期糖基化終產(chǎn)物的生成以及醛糖還原酶的活性(見(jiàn)表 2和6)。因此，包含所述化合物的華西小石積提取物或其級(jí)分可以用作預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物。
本發(fā)明實(shí)用的及目前優(yōu)選的實(shí)施方案將通過(guò)以下實(shí)施例、實(shí)驗(yàn)例及制備例 (Manufacturing Examples)進(jìn)行說(shuō)明。
然而，考慮到公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)進(jìn)行修改及改進(jìn)。
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本發(fā)明使用的華西小石積(薔薇科)從中國(guó)云南獲取，并且已將證明樣品 (evidence sample) (no. KI0M-0S)保藏于韓國(guó)東方醫(yī)學(xué)研究院(Korea Institute of Oriental Medicine)東方醫(yī)學(xué)技術(shù)石if究中心(Oriental Medical Technology Research Center) H^^I^^SEff^^^^ (Diabetic Complication Research center)白勺示:Φ室。
將華西小石積的小枝、葉片及種子陰干并切碎，放入含有乙醇的浸提器中。室溫下提取2 5次。在40°C減壓濃縮提取物得到乙醇提取物。為防止各種成分的降解和水解， 濃縮的溫度優(yōu)選維持在40 45°C。
本發(fā)明中，將120g干燥/切碎的華西小石積加入到IL的乙醇中，然后室溫下提取 3次。提取物在40°C下減壓濃縮。結(jié)果，得到12g乙醇提取物。
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將實(shí)施例1得到的12g乙醇提取物和0. 5L水及0. 5L正己烷混合，之后分離己烷層。此過(guò)程重復(fù)3次，然后在40°C下減壓濃縮。結(jié)果，得到1. ^g己烷級(jí)分。
^mm 3 華西小石積 fe / ^^mmmz.mz.mm^mm^
將實(shí)施例1得到的12g乙醇提取物和0. 5L水及0. 5L正己烷混合，之后分離水層。 將水層和0. 5L乙酸乙酯混合，之后分離乙酸乙酯層。此過(guò)程重復(fù)3次，然后在40°C下減壓濃縮。結(jié)果，得到3. 75g乙酸乙酯級(jí)分。
實(shí)施例4 華西小石積枝/葉片提取物的IH丁醇級(jí)分的制備
向?qū)嵤├?得到的乙醇提取物中加入0. 5L水及0. 5L正己烷，之后除去己烷層并向水層加入乙酸乙酯。除去乙酸乙酯層得到水層。將水層和0.5L正丁醇混合，之后得到正丁醇層。此過(guò)程重復(fù)三次，然后在40°C下減壓濃縮。結(jié)果，得到4. IOg 丁醇級(jí)分。
實(shí)施例5 華西小石積枝/葉片提取物的水級(jí)分的制備
向?qū)嵤├?得到的12g乙醇提取物中加入0. 5L水及0. 5L正己烷，之后除去己烷層并向水層加入乙酸乙酯。除去乙酸乙酯層后，向其中加入正丁醇。除去正丁醇層后，在40°C 下進(jìn)行減壓濃縮。結(jié)果，得到2. 87g水級(jí)分。
實(shí)施例6 華西小石積種子提取物的制備
除采用華西小石積種子代替華西小石積小枝和葉片之外，通過(guò)如實(shí)施例1描述的相同方法制備華西小石積種子提取物。
實(shí)施例7 華西小石積提取物的標(biāo)準(zhǔn)化
本發(fā)明采用的提取溶劑都為超純級(jí)溶劑(韓國(guó)大中化學(xué)品&金屬有限公司 (Daejung Chemical&Metals Co. , LTD))。用于HPLC的流動(dòng)相溶劑甲醇(美國(guó)飛世爾科技 (Fisher Scientific))及水(美國(guó) J. Τ. Backer)都為 HPLC 級(jí)。
本文的HPLC采用1200分析型HPLC系統(tǒng)(安捷倫)，由二元泵(G1312A)、真空脫氣機(jī)(G1322A)、色譜柱恒溫箱(G1316A)、多波長(zhǎng)檢測(cè)器(1365B，MWD)、以及自動(dòng)進(jìn)樣器 (G13^A)組成。設(shè)備的操作以及分析結(jié)果的處理采用Chen^tation軟件。分析過(guò)程采用 Spherex C-18 柱(菲羅門(Phenomenex)，4. 6mmX250, i. d.，5. Om)。
將4kg室溫下干燥的華西小石積粉碎，然后在室溫下采用99%的乙醇提取24h共三次。過(guò)濾和濃縮以后，得到104. 16kg乙醇提取物。將乙醇提取物制成％ig/ml的濃度。將 10 μ 1制備好的乙醇提取物注入到色譜柱后進(jìn)行HPLC。
將2”-0_乙?；登G素標(biāo)準(zhǔn)品溶解于100%的甲醇中，然后通過(guò)二倍稀釋法制成用于校準(zhǔn)曲線的濃度為100、50、25、10和5μ g/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。將金絲桃苷和槲皮苷標(biāo)準(zhǔn)品溶解于100%的甲醇中，然后通過(guò)二倍稀釋法制成用于校準(zhǔn)曲線的濃度為100、50、25、 12. 5和6. 25 μ g/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。將用于校準(zhǔn)曲線的各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液注入色譜柱，然后進(jìn)行HPLC得到色譜圖。通過(guò)標(biāo)定峰數(shù)據(jù)得到用于定量分析的校準(zhǔn)曲線。
HPLC 采用 Spherex C-18 柱(菲羅門(Phenomenex)，4· 6讓X 25O，i. d.，5. Om)。柱溫設(shè)定為30°C，UV檢測(cè)器的波長(zhǎng)設(shè)定為2Mnm。每種樣品采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣10 μ 1。流動(dòng)相為0. 的乙酸和甲醇的混合溶液。流速設(shè)定為l.Oml/min。流動(dòng)相的梯度組成如下 25 45% 甲醇(O 40min) — 45 70% 甲醇 00 55min) — 70 100% 甲醇(55 65min) — 100% 甲醇(65 70min)。
HPLC分析華西小石積提取物的結(jié)果如圖2和表1所示。可以看出，HPLC色譜圖確認(rèn)了三種類黃酮化合物槲皮苷、金絲桃苷及2”-O-乙酰基牡荊素為三種主要成分(圖2)。
因此，華西小石積提取物三種主要成分的含量也同時(shí)通過(guò)HPLC進(jìn)行分析。結(jié)果， 槲皮苷、金絲桃苷及2”-O-乙酰基牡荊素的含量分別確定為3. 44%U. 58%和0. 54% (表 1)。
表1
權(quán)利要求
1.一種用于預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物，包括作為活性成分的華西小石積 (Osteomeles schwerinae)提取物或其級(jí)分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物，其中所述華西小石積提取物提取自華西小石積的枝、葉片或種子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物，其中所述華西小石積提取物采用水、醇或其混合物進(jìn)行提取。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物，其中所述級(jí)分為己烷級(jí)分、乙酸乙酯級(jí)分、丁醇級(jí)分和水級(jí)分中的一種，其通過(guò)將華西小石積提取物溶于水中然后逐級(jí)采用己烷、乙酸乙酯和丁醇進(jìn)行系統(tǒng)性分級(jí)制備。
5.一種用于預(yù)防和延緩糖尿病并發(fā)癥的功能性保健食品，包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
6.一種用于預(yù)防和延緩衰老的藥物組合物，包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
7.一種用于預(yù)防和延緩衰老的功能性保健食品，包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
8.一種用于預(yù)防和治療癌癥的藥物組合物，包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
9.一種用于預(yù)防和治療癌癥的功能性保健食品，包括作為活性成分的華西小石積提取物或其級(jí)分。
10.一種治療糖尿病并發(fā)癥的方法，包括將藥學(xué)上有效劑量的華西小石積提取物或其級(jí)分施用于糖尿病并發(fā)癥個(gè)體的步驟。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的治療糖尿病并發(fā)癥的方法，其中所述華西小石積提取物提取自華西小石積的枝、葉片或種子。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的治療糖尿病并發(fā)癥的方法，其中所述華西小石積提取物采用水、醇或其混合物進(jìn)行提取。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的治療糖尿病并發(fā)癥的方法，其中所述級(jí)分通過(guò)逐級(jí)采用己烷、乙酸乙酯、丁醇和水對(duì)華西小石積提取物進(jìn)行系統(tǒng)性分級(jí)獲得。
14.一種預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的方法，包括將藥學(xué)上有效劑量的華西小石積提取物或其級(jí)分施用于糖尿病個(gè)體的步驟。
15.一種預(yù)防和延緩衰老的方法，包括將藥學(xué)上有效劑量的華西小石積提取物或其級(jí)分施用于個(gè)體的步驟。
16.一種治療癌癥的方法，包括將藥學(xué)上有效劑量的華西小石積提取物或其級(jí)分施用于癌癥個(gè)體的步驟。
17.一種預(yù)防癌癥的方法，包括將藥學(xué)上有效劑量的華西小石積提取物或其級(jí)分施用于個(gè)體的步驟。
18.華西小石積提取物或其級(jí)分在制備糖尿病并發(fā)癥治療劑和抗癌劑中的應(yīng)用。
19.一種用于預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的組合物，包括作為活性成分的含有2-0-乙?；登G素、金絲桃苷和槲皮苷的華西小石積提取物或其級(jí)分。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于糖尿病并發(fā)癥的治療劑及以其治療糖尿病并發(fā)癥的方法，更具體地，涉及一種含有華西小石積(Osteomeles schwerinae)提取物及其級(jí)分作為有效成分用于預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的制劑，其中，所述華西小石積提取物及其級(jí)分被證實(shí)可抑制糖尿病并發(fā)癥標(biāo)志物晚期糖基化終產(chǎn)物的形成、抑制醛糖還原酶的活性，具有抗白內(nèi)障作用以及抗氧化活性。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102481326SQ200980160639
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2009年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月5日
發(fā)明者俞男熙, 孫銀珍, 張大植, 李俊, 李允美, 鄭東昊, 金蘭姬, 金周奐, 金正玹, 金溫順, 金真淑, 金英淑, 金贊植 申請(qǐng)人:韓國(guó)韓醫(yī)學(xué)研究院