專利名稱：一種磁性氯屈膦酸二鈉脂質體的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種包覆磁性納米粒子和抗癌藥物的脂質體的制備，屬于靶向藥物載 體制備技術領域。
背景技術：
脂質體是磷脂分子通過疏水締合作用在水或溶液中自發(fā)形成的一種分子有序組 合體，直徑25 lOOOnm不等，由于其粒子大小處于納米級的介觀范圍，有許多獨特的物理， 化學性質，而且脂質體的制備工藝簡單，在人體內無毒、無免疫原性、可降解、緩釋等特點， 所負載的藥物種類廣泛，可以減少所需藥量，增強其體內穩(wěn)定性和藥理作用，降低藥物的毒 副作用，使藥物具有被動靶向特征，還可以將脂質體制備成免疫形式以實現(xiàn)主動靶向性。脂質體的結構特點是具有生物相容性的磷脂雙分子層膜，藥物經(jīng)負載后，經(jīng)靜脈 注射、口服、皮膚、眼部、鼻腔、肺部和粘膜等多種途徑給藥，以延長藥物半衰期，提高生物利 用度。由于脂質體的體內分布依賴于給藥途徑，所以目前脂質體仍以注射應用為主，但近年 隨著制備技術的完善和應用途徑的拓展，脂質體非注射給藥方式逐漸成為研究的熱點。四氧化三鐵納米微粒是一種具有反尖晶石結構的磁性材料，在其晶體中，由02_圍 成的空隙有兩種類型，即八面體型和正四面體，其中1/2的Fe3+占據(jù)在八面體中，而另外1/2 的Fe3+和全部的Fe2+占據(jù)在正四面體中。由于其特殊的晶體結構，因此四氧化三鐵可作為 一種典型的半導體材料，除此外，四氧化三鐵獨特的磁性可調功能也被人們廣泛研究。近年 來，四氧化三鐵被廣泛應用于磁共振成像、給藥系統(tǒng)、生物醫(yī)藥、生物傳感器等系統(tǒng)中。但 是，由于單獨的磁性粒子生物相容性差，易團聚等原因，表面進行其他生物相容性好、副作 用小的物質包覆的磁性粒子正逐漸取代單獨的磁性粒子應用于生物體內，因此將其包埋與 生物相容性良好的脂質體內作為磁靶向給藥系統(tǒng)的磁性材料，具有很好的應用前景。磁性靶向給藥系統(tǒng)包括藥物和適當?shù)拇判圆牧霞氨匾妮o料，在體外磁場引導 下，隨血液流動，選擇的到達并定位于病灶部位。藥物從載體中釋放后，在病灶組織的細胞 或亞細胞水平上發(fā)揮藥效，因此將正常組織的影響降至最低。磁性靶向脂質體是磁導向藥 物傳遞系統(tǒng)中的一種新型藥物導向載體，在脂質體內部能夠包裹103 104個藥物分子和納 米四氧化三鐵分子，因而能夠磁靶向給藥。磁靶向脂質體對人體幾乎不造成傷害，而且內部 包裹的磁性物質可以安全的排出體外。因此磁靶向脂質體在藥物載體領域受到人們的廣泛 關注。脂質體的制備方法主要有薄膜分散法、反相蒸發(fā)法、冷凍干燥法等，新型靶向脂質 體有長循環(huán)脂質體、熱敏/光敏脂質體、免疫脂質體、磁性脂質體等。石麗萍等(中國危重 病急救醫(yī)學2001，13，11,659-661)通過反相蒸發(fā)發(fā)制備了酸敏性脂質體，并研究了其在小 鼠體內重要臟器中的分布研究。在CN100998563專利中，利用卵磷脂，膽固醇和磁性微粒通 過反相蒸發(fā)發(fā)制備出磁性脂質體。Vincent Chan等(Langmuir 2002，18，3134-3141)通過 薄膜法制備了 了大單室熱敏感型脂質體。Shuliang Li等(Langmuir 2004，20，7917-7925) 通過擠壓法制備出包覆肌動蛋白脂質體，并考慮了肌動蛋白含量和脂質體尺寸對其原子力
3學顯微鏡對脂質體結構的影響。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種磁性氯屈膦酸二鈉脂質體的制備方法，脂質體通過包覆 磁性粒子可以提高其藥物運輸?shù)陌邢蛐?，從而提高病灶部位對藥物的吸收。本發(fā)明實現(xiàn)的主要步驟包括(1)納米四氧化三鐵的制備三頸燒瓶中加入摩爾比為100 1 1的乙酰丙酮鐵、苯胺、油酸混合液，磁力攪 拌下通入保護器以除去氧氣，將體系升溫至80-120°C并保持20-30min并攪拌使反應物混 合均勻，移去氮氣后，繼續(xù)加熱至溫度達到260-270°C，保持回流狀態(tài)2-4h。將反應后得到 的混合物冷卻至室溫，無水乙醇洗滌數(shù)次，離心，將最終得到的黑色產(chǎn)物分散于無水乙醇， 得到四氧化三鐵磁流體；(2)包覆藥物和納米四氧化三鐵的脂質體的制備按質量比5 1稱取卵磷脂和膽固醇，溶于氯仿中，震動使固體溶解，將溶液旋轉 蒸發(fā)以除去溶劑氯仿，將附有磷脂膜的燒瓶置于恒溫干燥箱中60°C烘干。將氯屈膦酸二鈉溶于PH = 7. 4的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)中，按照與氯屈膦酸二鈉 質量比為1 1的比例，加入步驟(1)中已制備的四氧化三鐵磁流體，將此混合物轉移至已 烘干上步驟制備的帶有磷脂膜的燒瓶中，將此體系震動，超聲后，分別用0. 7%的氯化鈉溶 液(生理鹽水)和PBS洗滌，離心，將最終產(chǎn)物置于恒溫4°C冰箱中儲存。產(chǎn)物的性能評價利用透射電子顯微鏡(TEM)，X射線衍射儀(XRD)對納米四氧化 三鐵和脂質體的形貌尺寸進行分析，紫外-可見分光光度計對藥物的包封率進行測量，以 評估所制備脂質體作為藥物載體的負載性能。本發(fā)明的技術優(yōu)點本發(fā)明采用反相蒸發(fā)的方法成功制備了磁性氯屈膦酸二鈉脂質體，整個技術過程 方法簡單，低污染，所制備的脂質體對藥物的包封性好，可以達到工業(yè)化生產(chǎn)的要求。


圖1為所制備納米四氧化三鐵的XRD衍射譜圖，圖中衍射峰均為納米四氧化三鐵 的特征衍射峰。圖2為所制備納米四氧化三鐵的透射電鏡照片。圖3為所制備磁性氯屈膦酸二鈉脂質體的透射電鏡照片。實施例1三頸燒瓶中加入0.035g乙酰丙酮鐵，0. lmL苯胺，0.32mL油酸，磁力攪拌下通入氮 氣，將體系升溫至100°c并保持20min，除去氮氣后，繼續(xù)加熱至溫度達到260°C，保持回流 狀態(tài)2h。將反應后得到的混合物冷卻至室溫，無水乙醇洗滌數(shù)次，離心，將最終得到的黑色 產(chǎn)物分散于無水乙醇，使之以磁流體的形式備用。20mL氯仿中溶解0. 34g卵磷脂，0. 068g膽固醇，將此混合液旋轉蒸發(fā)以除去溶劑 氯仿，此時燒瓶壁上會附有一層單分子磷脂膜，將此燒瓶在60°C的恒溫干燥箱中烘干。
20mLPBS中加入0. 2g氯屈膦酸二鈉和0. 2g上述已制備的納米四氧化三鐵磁流體， 將此混合物轉移至已烘干的帶有磷脂膜的燒瓶中，將此體系劇烈震動后連續(xù)超聲lh以使 單分子磷脂膜自發(fā)形成磷脂雙分子層，將得到的脂質體分別用生理鹽水和PBS洗滌，離心， 以除去未成囊的磷脂分子。實施例2三頸燒瓶中加入0. llg乙酰丙酮鐵，0. 3mL苯胺，0. 96mL油酸，磁力攪拌下通入氬 氣，將體系升溫至120°C并保持20min，除去氮氣后，繼續(xù)加熱至溫度達到260°C，保持回流 狀態(tài)2h。將反應后得到的混合物冷卻至室溫，無水乙醇洗滌數(shù)次，離心，將最終得到的黑色 產(chǎn)物分散于無水乙醇，使之以磁流體的形式備用。15mL氯仿中溶解0. 14g卵磷脂，0. 028g膽固醇，將此混合液旋轉蒸發(fā)以除去溶劑 氯仿，此時燒瓶壁上會附有一層單分子磷脂膜，將此燒瓶在60°C的恒溫干燥箱中烘干。15mLPBS中加入0. lg氯屈膦酸二鈉和0. lg實施例1中已制備的納米四氧化三鐵 磁流體，將此混合物轉移至已烘干的帶有磷脂膜的燒瓶中，將此體系劇烈震動后連續(xù)超聲 lh以使單分子磷脂膜自發(fā)形成磷脂雙分子層，將得到的脂質體分別用生理鹽水和PBS洗 滌，離心，以除去未成囊的磷脂分子。實施例4三頸燒瓶中加入0.035g乙酰丙酮鐵，0. lmL苯胺，0.32mL油酸，磁力攪拌下通入氮 氣，將體系升溫至100°c并保持20min，除去氮氣后，繼續(xù)加熱至溫度達到260°C，保持回流 狀態(tài)2h。將反應后得到的混合物冷卻至室溫，無水乙醇洗滌數(shù)次，離心，將最終得到的黑色 產(chǎn)物分散于無水乙醇，使之以磁流體的形式備用。15mL氯仿中溶解0. 14g卵磷脂，0. 028g膽固醇，將此混合液旋轉蒸發(fā)以除去溶劑 氯仿，此時燒瓶壁上會附有一層單分子磷脂膜，將此燒瓶在60°C的恒溫干燥箱中烘干。15mLPBS中加入0. lg氯屈膦酸二鈉和0. 1實施例1中已制備的納米四氧化三鐵磁 流體，將此混合物轉移至已烘干的帶有磷脂膜的燒瓶中，將此體系劇烈震動后連續(xù)超聲lh 以使單分子磷脂膜自發(fā)形成磷脂雙分子層，將得到的脂質體分別用生理鹽水和PBS洗滌， 離心，以除去未成囊的磷脂分子。實施例5三頸燒瓶中加入0. llg乙酰丙酮鐵，0. 3mL苯胺，0. 96mL油酸，磁力攪拌下通入氬 氣，將體系升溫至120°C并保持20min，除去氮氣后，繼續(xù)加熱至溫度達到260°C，保持回流 狀態(tài)2h。將反應后得到的混合物冷卻至室溫，無水乙醇洗滌數(shù)次，離心，將最終得到的黑色 產(chǎn)物分散于無水乙醇，使之以磁流體的形式備用。20mL氯仿中溶解0. 34g卵磷脂，0. 068g膽固醇，將此混合液旋轉蒸發(fā)以除去溶劑 氯仿，此時燒瓶壁上會附有一層單分子磷脂膜，將此燒瓶在60°C的恒溫干燥箱中烘干。20mLPBS中加入0. 2g氯屈膦酸二鈉和0. 2g上述已制備的納米四氧化三鐵磁流體， 將此混合物轉移至已烘干的帶有磷脂膜的燒瓶中，將此體系劇烈震動后連續(xù)超聲lh以使 單分子磷脂膜自發(fā)形成磷脂雙分子層，將得到的脂質體分別用生理鹽水和PBS洗滌，離心，
5以除去未成囊的磷脂分子。產(chǎn)物的性能評價試驗將所制備的磁性氯屈膦酸二鈉脂質體溶于18mL氯仿和2mL甲醇混合溶液中，除去 脂質體膜以釋放出所包覆的氯屈膦酸二鈉，通過紫外-可見分光光度計檢測藥物濃度以計 算藥物的包封率。包封率計算方法包封率=(脂質體中包封的藥物/脂質體中藥物總量)X 100%通過計算得到實施例1-5的包封率分別為24.8%，25. 3%，22.9%，26.8%， 26. 4%。
權利要求
一種磁性氯屈膦酸二鈉脂質體的制備方法，其特征在于其主要步驟包括(1)納米四氧化三鐵的制備三頸燒瓶中加入摩爾比為100∶1∶1的乙酰丙酮鐵、苯胺、油酸混合液，磁力攪拌下通入保護氣以除去氧氣，將體系升溫至80-120℃并保持20-30min，并攪拌使反應物混合均勻，移去氮氣后，繼續(xù)加熱至溫度達到260-270℃，保持回流狀態(tài)2-4h；將反應后得到的混合物冷卻至室溫，無水乙醇洗滌數(shù)次，離心，將最終得到的黑色產(chǎn)物分散于無水乙醇，得到四氧化三鐵磁流體；(2)包覆藥物和納米四氧化三鐵的脂質體的制備按質量比5∶1稱取卵磷脂和膽固醇，溶于氯仿中，震動使固體溶解，將溶液旋轉蒸發(fā)以除去溶劑氯仿，將附有磷脂膜的燒瓶置于恒溫干燥箱中60℃烘干；將氯屈膦酸二鈉溶于PH＝7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，加入與氯屈膦酸二鈉質量比為1∶1的步驟(1)中已制備的四氧化三鐵磁流體，將此混合物轉移至已烘干的上步驟制備的帶有磷脂膜的燒瓶中，將此體系震動，超聲后，分別用0.7％的氯化鈉溶液和PH＝7.4的磷酸鹽緩沖溶液洗滌，離心，將最終產(chǎn)物置于恒溫4℃冰箱中儲存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種磁性氯屈膦酸二鈉脂質體的制備方法，屬于靶向藥物載體制備技術領域。主要步驟包括(1)納米四氧化三鐵的制備和(2)包覆藥物和納米四氧化三鐵的脂質體的制備。該方法通過熱分解法制備的納米四氧化三鐵粒子尺寸均勻，形貌規(guī)則，具有良好的磁性，通過反相蒸發(fā)法制備的磁性氯屈膦酸二鈉脂質體粒徑小于200nm，符合醫(yī)用制劑尺寸要求，對磁性粒子及藥物包封性良好，所包覆的物質不易泄漏，制備方法簡單，工藝設備要求低，具有良好的醫(yī)用前景。
文檔編號A61K47/02GK101849909SQ201010124090
公開日2010年10月6日 申請日期2010年3月15日 優(yōu)先權日2010年3月15日
發(fā)明者黨勝春, 姜德立, 張建新, 李娣, 謝吉民, 陳敏, 黃春霞 申請人:江蘇大學