專利名稱：核苷膦酸類化合物的脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種用于藥物的制劑的制備方法，特別是一種核苷膦酸類化合物的脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
病毒感染嚴(yán)重威脅著人類健康，迫切需要有效的藥物治療。以乙型肝炎為例，我國的乙肝病毒攜帶者有超過一億人，其中慢性乙型肝炎患者約3000萬，目前的治療用藥中，α-干擾素的療程較長，價格昂貴，而且只有30~50％的響應(yīng)率，拉米呋定為核苷類似物，通過抑制逆轉(zhuǎn)錄酶以及DNA聚合酶的作用來阻斷病毒繁殖，效果明顯，但有一定的副作用，而且容易引發(fā)病毒DNA聚合酶突變而出現(xiàn)抗藥性，停藥后反彈更是嚴(yán)重。核苷膦酸類化合物，對逆轉(zhuǎn)錄酶以及DNA聚合酶有廣譜的抑制性，是一類很有前途的抗病毒化合物。經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，美國Gilead公司在此領(lǐng)域已經(jīng)獲得一系列專利(USP 5,935,946Nucleotide analog composition and synthesis method核苷類似物的處方和合成途徑；USP 5,733,788 PMPA preparation替諾福韋的制備)。但其中某些化合物生物利用度低，特別是病灶細(xì)胞攝取率低，但代謝迅速，用藥劑量較大，毒性相應(yīng)變大；已上市的阿德福韋酯，因腎臟毒性較大，導(dǎo)致患者往往不能完成治療。將脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物技術(shù)應(yīng)用于核苷膦酸類化合物尚未見專利和文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種核苷膦酸類化合物的脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法。使其能夠提高藥物的包封率和穩(wěn)定性，從而提高生產(chǎn)效率，降低生產(chǎn)成本，改善制劑在貯存中的穩(wěn)定性。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，本發(fā)明以核苷膦酸類化合物作為活性成分，由核苷膦酸類化合物和脂質(zhì)組成，其中核苷膦酸類化合物的摩爾百分比為0.99~50.00％，脂質(zhì)的摩爾百分比為50.00~99.01％，通過以下任意一種方法制備得到pH梯度法、鈣離子梯度法、電性包裹法。
本發(fā)明可以通過以下方法來實現(xiàn)pH梯度法先以中性或弱堿性水溶液制備脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物，然后加酸降低外水相pH值，內(nèi)外水相間形成pH梯度，使核苷膦酸類化合物向脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物的內(nèi)水相遷移，核苷膦酸類化合物可以在制備脂質(zhì)體時加入，也可以在形成pH梯度后加入，得核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物。。
鈣離子梯度法先制備空白脂質(zhì)體或空白脂質(zhì)復(fù)合物，其內(nèi)外水相均為含有鈣離子的水溶液，然后降低外水相鈣離子濃度，內(nèi)外水相間形成鈣離子梯度后，加入核苷膦酸類化合物，得核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物。
電性包裹法在制備脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物時，在脂質(zhì)處方中使用一種或幾種陽離子脂質(zhì)或陽離子兩親性物質(zhì)，單獨或連同其它脂質(zhì)形成脂質(zhì)膜。
本發(fā)明所說的核苷膦酸類化合物是如下開鏈結(jié)構(gòu) 其中，B為核苷堿基或修飾的堿基，包括腺嘌呤，胞嘧啶，胸腺嘧啶，鳥嘌呤以及它們的修飾衍生物，還包括以上結(jié)構(gòu)的膦酸酯類化合物。
R為H，CH3，CF3，CH2OH，CH2F；X為O，S。
本發(fā)明所說的脂質(zhì)所述的的脂質(zhì)為各種天然或人工合成的陽離子磷脂、陰離子磷脂、中性磷脂、以上磷脂的聚乙二醇修飾修飾產(chǎn)物、膽固醇和其混合物。
本發(fā)明所說的脂質(zhì)體為藥劑學(xué)中常規(guī)采用的術(shù)語，其特征是，其結(jié)構(gòu)為脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成的囊泡結(jié)構(gòu)，包括單層脂質(zhì)體、多層脂質(zhì)體、多室脂質(zhì)體，其粒徑在20nm到50μm之間。
本發(fā)明所說的脂質(zhì)復(fù)合物為藥劑學(xué)中常規(guī)采用的術(shù)語，其特征是，其中包含的核苷膦酸類化合物與脂質(zhì)間通過非共價鍵作用結(jié)合，包括配位鍵、氫鍵、親水疏水作用、電荷相互作用或物理包裹。復(fù)合物的粒徑在20nm到50μm之間。
本發(fā)明中所說的磷脂具有兩親性，可以形成雙分子層囊泡結(jié)構(gòu)裝載藥物，或直接形成脂質(zhì)顆粒裝載藥物。
本發(fā)明所形成的脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物均包含脂質(zhì)膜，其中包含0~100％天然或人工合成的陽離子兩親性化合物。
部分核苷膦酸類化合物帶負(fù)電，本發(fā)明中所說的陽離子磷脂和陽離子兩親性化合物帶正電荷，可以和帶負(fù)電荷的核苷膦酸類化合物結(jié)合，通過兩者間的靜電作用形成復(fù)合物，大大提高載藥率。
本發(fā)明中所說的磷脂的聚乙二醇修飾產(chǎn)物可以在脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物表面形成一個親水性的高分子層，有助于保持其穩(wěn)定性，降低了血漿蛋白與其作用，使其在血漿中的循環(huán)時間大大延長，從而維持較高的、平穩(wěn)的血藥濃度，在抗病毒治療中，發(fā)揮持續(xù)的抗病毒作用防止病毒復(fù)制，抑制耐藥變異株的產(chǎn)生。
本發(fā)明中所說的膽固醇具有調(diào)節(jié)藥物從脂質(zhì)復(fù)合物或脂質(zhì)體中釋放速度的作用。
應(yīng)當(dāng)說明的是，許多脂質(zhì)都適合用于本發(fā)明，除以上脂質(zhì)外，藥學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員已知的任何成囊泡脂質(zhì)都可以考慮。
本發(fā)明中所說的膽固醇具有調(diào)節(jié)藥物從脂質(zhì)復(fù)合物或脂質(zhì)體中釋放速度的作用。
本發(fā)明所述的陽離子脂質(zhì)或陽離子兩親性物質(zhì)選自1，2-二油酰氧丙基-N，N，N-三甲基溴化銨(DOTAP)、[1-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N，N-氯化三甲銨(DOTMA)、溴化雙甲基雙十八烷基胺(DDAB)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、3β-[N-(N’，N’-二甲氨基乙基)-氨甲酰]膽固醇(DC-cholestrol)或以上物質(zhì)的混合物。
本發(fā)明的有益效果表現(xiàn)在以下方面核苷膦酸類化合物是水溶性成分，通常的脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物的制備方法如薄膜分散法等對此類藥物的包封率很低，一般在10~20％以下，通過本發(fā)明所述的方法包封率有明顯改善。
與普通的薄膜分散法相比，采用pH梯度法、鈣離子梯度法制備的核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物，藥物包封率為普通的薄膜分散法的2~4倍，采用電性包裹法制備的核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物，藥物包封率為普通的薄膜分散法的3~10倍。
使用電性包裹法還能夠提高制劑的穩(wěn)定性，使制劑的貯存有效期大大延長。
具體實施例方式
實施例1將含164mg二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)和54mg膽固醇的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入HEPES溶液(pH＝7)10ml，振搖，室溫放置2h，加入鹽酸溶液調(diào)節(jié)外水相至pH＝4，加入10mg替諾福韋(PMPA)，搖勻，保溫2小時，形成均勻乳白的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為23％。
實施例2將含277mg二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、52mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)和108mg膽固醇的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入HEPES溶液(pH＝7)10ml，振搖，室溫放置2h，加入鹽酸溶液調(diào)節(jié)外水相至pH＝4，加入10mg替諾福韋，搖勻，保溫2小時，形成均勻乳白的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為35％。
實施例3將含652mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、337mgl-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿(POPC)和344mg膽固醇的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入HEPES溶液(pH＝7)10ml，振搖，室溫放置2h，加入鹽酸溶液調(diào)節(jié)外水相至pH＝3，加入10mg阿德福韋(PMEA)，搖勻，保溫2小時，形成均勻乳白的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為54％。
實施例4將含174mg二月桂酰磷脂酰膽堿(DLPC)、57mg膽固醇的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入HEPES氯化鈣緩沖液(pH＝7)10ml，振搖，室溫放置2h，HEPES緩沖液調(diào)節(jié)鈣離子濃度，形成鈣離子梯度，加入10mg阿德福韋，形成均勻乳白的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為28％。
實施例5將含399mg卵磷脂(EPC)、289mg甲氧基聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)、163mg膽固醇的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入HEPES氯化鈣緩沖液(pH＝7)10ml，振搖，室溫放置2h，HEPES緩沖液調(diào)節(jié)鈣離子濃度，形成鈣離子梯度，加入10mg替諾福韋，形成均勻乳白的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為43％。
實施例6將含1054mg二豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、401mg膽固醇的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入HEPES氯化鈣緩沖液(pH＝7)10ml，振搖，室溫放置2h，HEPES緩沖液調(diào)節(jié)鈣離子濃度，形成鈣離子梯度，加入10mg阿德福韋，形成均勻乳白的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為53％。
實施例7將含54mg十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)的丙酮溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余丙酮，向茄形瓶中加入1mg/ml阿德福韋HEPES緩沖液(pH＝7)10ml，振搖，-70℃冷凍后，室溫復(fù)融，反復(fù)10次后，過高壓乳勻機10次，形成半透明的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為63％。
實施例8將含399mg豆磷脂(SPC)、71mg[1-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N，N-氯化三甲銨(DOTMA)、163mg膽固醇(cholesterol)的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入1mg/ml替諾福韋HEPES緩沖液(pH＝7)10ml，振搖，-70℃冷凍后，室溫復(fù)融，反復(fù)10次后，過高壓乳勻機10次，形成半透明的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為85％。
實施例9將含514mg二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、244mg1，2-二油酰氧丙基-N，N，N-三甲基溴化銨(DOTAP)、271mg膽固醇(cholesterol)的氯仿溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使其成膜后，繼續(xù)抽真空1小時以除去殘余氯仿，向茄形瓶中加入1mg/ml替諾福韋HEPES緩沖液(pH＝7)10ml，振搖，-70℃冷凍后，室溫復(fù)融，反復(fù)10次后，過高壓乳勻機10次，形成半透明的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中核苷膦酸類化合物的包封率為90％。
權(quán)利要求
1.一種核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法，其特征在于，含有核苷膦酸類化合物作為活性成分，由核苷膦酸類化合物和脂質(zhì)組成，其中核苷膦酸類化合物的摩爾百分比為0.99～50.00％，脂質(zhì)的摩爾百分比為50.00～99.01％，利用pH梯度法為先以中性或弱堿性水溶液制備脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物，然后加酸降低外水相pH值，內(nèi)外水相間形成pH梯度，使核苷膦酸類化合物向脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物的內(nèi)水相遷移，核苷膦酸類化合物在制備脂質(zhì)體時加入，或者在形成pH梯度后加入，得核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物。
2.一種核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法，其特征在于，含有核苷膦酸類化合物作為活性成分，由核苷膦酸類化合物和脂質(zhì)組成，其中核苷膦酸類化合物的摩爾百分比為0.99～50.00％，脂質(zhì)的摩爾百分比為50.00～99.01％，利用鈣離子梯度法為先制備空白脂質(zhì)體或空白脂質(zhì)復(fù)合物，其內(nèi)外水相均為含有鈣離子的水溶液，然后降低外水相鈣離子濃度，內(nèi)外水相間形成鈣離子梯度后，加入核苷膦酸類化合物，得核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物。
3.一種核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法，其特征在于，含有核苷膦酸類化合物作為活性成分，由核苷膦酸類化合物和脂質(zhì)組成，其中核苷膦酸類化合物的摩爾百分比為0.99～50.00％，脂質(zhì)的摩爾百分比為50.00～99.01％，利用電性包裹法為在制備脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物時，在脂質(zhì)處方中使用一種或幾種陽離子脂質(zhì)或陽離子兩親性物質(zhì)，單獨或連同其它脂質(zhì)形成脂質(zhì)膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法，其特征是，所述的陽離子脂質(zhì)或陽離子兩親性物質(zhì)選自1，2-二油酰氧丙基-N，N，N-三甲基溴化銨(DOTAP)、[1-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N，N-氯化三甲銨(DOTMA)、溴化雙甲基雙十八烷基胺(DDAB)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、3β-[N-(N′，N′-二甲氨基乙基)-氨甲酰]膽固醇(DC-cholestrol)或以上物質(zhì)的混合物。
全文摘要
一種核苷膦酸類化合物的脂質(zhì)體和脂質(zhì)復(fù)合物制劑的制備方法。本發(fā)明以核苷膦酸類化合物作為活性成分，由核苷膦酸類化合物和脂質(zhì)組成，其中核苷膦酸類化合物的摩爾百分比為0.99~50.00％，脂質(zhì)的摩爾百分比為50.00~99.01％，通過以下任意一種方法制備得到pH梯度法、鈣離子梯度法、電性包裹法。本發(fā)明包封率有明顯改善。與普通的薄膜分散法相比，采用pH梯度法、鈣離子梯度法制備的核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物，藥物包封率為普通的薄膜分散法的2~4倍，采用電性包裹法制備的核苷膦酸類化合物脂質(zhì)體或脂質(zhì)復(fù)合物，藥物包封率為普通的薄膜分散法的3~10倍。使用電性包裹法還能夠提高制劑的穩(wěn)定性，使制劑的貯存有效期大大延長。
文檔編號A61P31/12GK1679607SQ20051002378
公開日2005年10月12日 申請日期2005年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月3日
發(fā)明者徐宇虹, 張健存, 章麗輝, 陳劍 申請人:上海交通大學(xué)