專利名稱：沒食子有效部位在制備抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種沒食子有效部位的藥物應用，尤其是在制備治療抗?jié)冃越Y(jié)腸炎 作用的藥物的用途。
背景技術(shù)：
沒食子是沒食子蜂科昆蟲沒食子蜂Cynips gallae-tinctorice Oliv的幼蟲，寄 生于殼斗科植物沒食子樹Quercus infectoria Oliv.幼枝上，所產(chǎn)成的蟲癭。沒食子性干 寒，味苦澀，具有固澀、收斂、燥濕、止血、消炎的作用，是維吾爾醫(yī)常用藥材。維吾爾醫(yī)理論 認為其針對結(jié)腸炎引起的腸壁吸收力及捏住力下降，直接作用于腸壁，斂腸，消炎止瀉，開 通腸阻，促使?jié)冇?。臨床用于潰瘍性結(jié)腸炎的治療，療效顯著。但有關(guān)沒食子有效部位 作為制備抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用的藥物用途尚未見報道。潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)又稱非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，是一種原 因不明的慢性直腸和結(jié)腸炎性疾病，以腹痛、腹瀉、黏液血便、里急后重為主要臨床表現(xiàn)。病 變主要位于結(jié)腸的黏膜層，以潰瘍?yōu)橹?，多累及直腸和遠端結(jié)腸，也可遍及整個結(jié)腸。流行 病學資料提示，潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率不論在國內(nèi)和國外都有逐年增高的趨勢，我國潰瘍 性結(jié)腸炎患病率近10年來比上世紀50年代增加10倍左右，歐洲20個中心調(diào)查顯示潰瘍 性結(jié)腸炎的年發(fā)病率為11. 2/100000，該病可發(fā)生于任何年齡，與結(jié)腸癌的發(fā)病有關(guān)，且病 程長，病變程度輕重各異，由于病因不明，臨床上常常表現(xiàn)反復發(fā)作而治愈難度大，被世界 衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種沒食子有效部位作為制備治療抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用 藥物的用途，該沒食子有效部位采用水提后有機溶劑萃取的即可得到?jīng)]食子有效部位，主 要包括鞣質(zhì)類；再將有效部位經(jīng)凝膠色譜提取分離即可得到單體化合物，包括沒食子酸、 間-雙沒食子酸、沒食子酸甲酯、1，2，3，6-四-0-沒食子?；?β-D-葡萄糖、1，2，3，4， 6-五-0-沒食子?；?β -D-葡萄糖。經(jīng)臨床結(jié)果表明，沒食子有效部位對潰瘍性結(jié)腸炎有 明顯的治療作用，總有效率91.7%，近期治愈率66. 7 %，有效為25 %，無效為8. 3 %。藥理 研究表明，沒食子有效部位對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治療作用；可顯著增高潰瘍組織 中SOD含量，降低MPO含量，且有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，對潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān)的常見致病菌 有抑菌作用，沒食子有效部位是治療潰瘍性結(jié)腸炎的佳藥。本發(fā)明所述的沒食子有效部位在制備治療抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的藥物的用途，沒食子 有效部位的提取方法按下列步驟進行a、取干燥沒食子藥材粉碎，過2號篩，稱取IOOg藥材粉末，加水提取3次，每次加 5-15倍量水，提取20-120min ；b、將提取液減壓濃縮至500_1500ml，濃縮液用乙醚萃取至醚層澄清，棄去乙醚 層；
c、將水層部位再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，真空干燥溫度45-90°C，得到 30-60%的沒食子有效部位；d、將步驟c得到的沒食子有效部位用常規(guī)方法凝膠層析柱進行化學成分的分離， 即可得到單體化合物，包括沒食子酸、間-雙沒食子酸、沒食子酸甲酯、1，2，3，6-四-0-沒食 子?；鵢 β -D-葡萄糖、1，2，3，4，6-五-0-沒食子?；?β -D-葡萄糖。
沒食子有效部位采用2000年版藥典附錄X B鞣質(zhì)含量測定法，測定鞣質(zhì)的含量大 于 50%。本發(fā)明在沒食子臨床治療潰瘍性結(jié)腸炎有效性的基礎(chǔ)上，對沒食子進行了較系統(tǒng) 的研究(1)著眼于沒食子提取物的安全性，對沒食子提取物進行了一般毒理學研究，對大 鼠分別進行了直腸給藥急性毒性試驗、直腸給藥黏膜刺激性試驗及長期毒性試驗。大鼠直 腸給藥急性毒性試驗結(jié)果表明直腸單次給藥，其MTD > 13g/kg，為成人臨床擬用藥量的 245倍，此劑量未見由藥物引起的毒性反應，病理解剖也未見大鼠臟器的明顯病理變化。大 鼠直腸給藥粘膜刺激性試驗及長期毒性試驗結(jié)果表明大鼠多次直腸給藥，未見由藥物引 起的直腸粘膜充血、紅腫現(xiàn)象，組織病理學未見大鼠直腸粘膜由藥物引起的病理變化。沒 食子提取物無明顯刺激性。沒食子提取物3個不同劑量給藥組大鼠與對照組比較，各項指 標均無明顯差異，未見與藥物作用有關(guān)的病理變化。沒食子提取物在這3個不同劑量條件 下，給藥120天對大鼠無明顯毒性。(2)為研究沒食子對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)動物模型 的治療作用，采用三硝基苯磺酸和乙醇復合方法制備大鼠UC模型，經(jīng)病理切片證實造模成 功后，用沒食子提取物進行治療，評價大鼠結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)(CMDI)、檢測體重、腸重指數(shù) 和免疫器官重量指數(shù)的變化、檢測大鼠結(jié)腸組織中超氧化物歧化酶(SOD)、髓過氧化物酶 (MPO)活性。試驗結(jié)果表明，沒食子提取物高劑量組動物潰瘍均完全愈合，與模型組動物相 比較，高、低劑量組動物組織中SOD顯著增高(P < 0. 01)，MPO顯著降低(P < 0. 01)。沒食 子提取物對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治療作用。(3)以沒食子總鞣質(zhì)為考察指標，對提取 工藝進行篩選試驗，結(jié)果沒食子水提后用乙醚萃取，水層部位再用醋酸乙酯萃取，回收醋酸 乙酯，真空干燥，干浸膏得率高于40%，總鞣質(zhì)含量大于60%。說明采用此法可較好的富集 沒食子總鞣質(zhì)。按常規(guī)方法將提取的沒食子有效部位制成口服制劑，該制劑作為制備治療抗?jié)?性結(jié)腸炎病。沒食子有效部位抗?jié)冃越Y(jié)腸炎新藥擬利用自然界豐富的沒食子藥材資源，研制 抗?jié)冃越Y(jié)腸炎維吾爾醫(yī)藥制劑及新藥。是從沒食子藥材中提取的有效部位_沒食子總鞣 質(zhì)制成的制劑，臨床上用于治療潰瘍性結(jié)腸炎，臨床療效顯著。該制劑將作為治療潰瘍性結(jié) 腸炎疾病的有效藥物推廣使用，給潰瘍性結(jié)腸炎患者解除病痛，帶來福音。
具體實施例方式實施例1a、取干燥沒食子藥材粉碎，過2號篩，稱取IOOg藥材粉末，加水提取3次，每次加 5倍量水，提取20min ；b、將提取液減壓濃縮至500ml，濃縮液用乙醚萃取至醚層澄清，棄去乙醚層；C、將水層部位再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，真空干燥，溫度45°C，得到30%的沒食子有效部位；d、將步驟c得到的沒食子有效部位用凝膠層析柱(型號=Si5Phadex LH-20)進行化 學成分的分離，以水和20% -100%甲醇進行梯度洗脫，得到了 40% -70%甲醇洗脫液的浸 膏I和70% -100%甲醇洗脫液的浸膏II，再將浸膏I和II分別用型號MCI-GEL CHP-20P 凝膠層析柱分離，以水和20% -80%甲醇梯度洗脫；浸膏I得到了化合物沒食子酸，間-雙 沒食子酸和沒食子酸甲酯；浸膏II得到了 30% -60%甲醇洗脫液的浸膏III和浸膏IV，再分 別將浸膏III和浸膏IV用型號=Si5Phadex LH-20凝膠層析柱分離，以水和20% -100%的甲醇 進行梯度洗脫，在浸膏III的60% -100%的甲醇洗脫液中得到了化合物1，2，3，6_四-0-沒 食子?；鵢 β -D-葡萄糖；在浸膏IV的40 % 60 %的甲醇洗脫液中得到了化合物1，2，3，4， 6-五-0-沒食子酰基-β -D-葡萄糖。沒食子有效部位采用2000年版藥典附錄X B鞣質(zhì)含量測定法，測定鞣質(zhì)的含量 大于50%。實施例2a、取干燥沒食子藥材粉碎，過2號篩，稱取IOOg藥材粉末，加水提取3次，每次加 10倍量水，提取50min ；b、將提取液減壓濃縮至800ml，濃縮液用乙醚萃取至醚層澄清，棄去乙醚層；C、將水層部位再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，真空干燥溫度65°C，得到45% 的沒食子有效部位；d、將步驟c得到的沒食子有效部位用凝膠層析柱(型號=Si5Phadex LH-20)進行化 學成分的分離，以水和20% -100%甲醇進行梯度洗脫，得到了 40% -70%甲醇洗脫液的浸 膏I和70% -100%甲醇洗脫液的浸膏II，再將浸膏I和II分別用型號MCI-GEL CHP-20P 凝膠層析柱分離，以水和20% -80%甲醇梯度洗脫；浸膏I得到了化合物沒食子酸，間-雙 沒食子酸和沒食子酸甲酯；浸膏II得到了 30% -60%甲醇洗脫液的浸膏III和浸膏IV，再分 別將浸膏III和浸膏IV用型號=Si5Phadex LH-20凝膠層析柱分離，以水和20% -100%的甲醇 進行梯度洗脫，在浸膏III的60% -100%的甲醇洗脫液中得到了化合物1，2，3，6_四-0-沒 食子?；?β-D-葡萄糖；在浸膏IV的40% -60%的甲醇洗脫液中得到了化合物1，2，3，4， 6-五-0-沒食子?；?β -D-葡萄糖。沒食子有效部位采用2000年版藥典附錄X B鞣質(zhì)含量測定法，測定鞣質(zhì)的含量 大于50%。實施例3a、取干燥沒食子藥材粉碎，過2號篩，稱取IOOg藥材粉末，加水提取3次，每次加 15倍量水，提取120min ；b、將提取液減壓濃縮至1500ml，濃縮液用乙醚萃取至醚層澄清，棄去乙醚層；C、將水層部位再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，真空干燥溫度90°C，得到60% 的沒食子有效部位；
d、將步驟c得到的沒食子有效部位用凝膠層析柱(型號=Si5Phadex LH-20)進行化 學成分的分離，以水和20% -100%甲醇進行梯度洗脫，得到了 40% -70%甲醇洗脫液的浸 膏I和70% -100%甲醇洗脫液的浸膏II，再將浸膏I和II分別用型號MCI-GEL CHP-20P 凝膠層析柱分離，以水和20% -80%甲醇梯度洗脫；浸膏I得到了化合物沒食子酸，間-雙沒食子酸和沒食子酸甲酯；浸膏II得到了 30% -60%甲醇洗脫液的浸膏III和浸膏IV，再分 別將浸膏III和浸膏IV用型號=Si5Phadex LH-20凝膠層析柱分離，以水和20% -100%的甲醇 進行梯度洗脫，在浸膏III的60% -100%的甲醇洗脫液中得到了化合物1，2，3，6_四-O-沒 食子?；鵢 β -D-葡萄糖；在浸膏IV的40 % 60 %的甲醇洗脫液中得到了化合物1，2，3，4， 6-五-O-沒食子?；?β -D-葡萄糖。沒食子有效部位采用2000年版藥典附錄X B鞣質(zhì)含量測定法，測定鞣質(zhì)的含量 大于50%。實施例4 a、取干燥沒食子藥材粉碎，過2號篩，稱取IOOg藥材粉末，加水提取3次，每次加 12倍量水，提取80min ；b、將提取液減壓濃縮至1100ml，濃縮液用乙醚萃取至醚層澄清，棄去乙醚層；C、將水層部位再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，真空干燥溫度80°C，得到50% 的沒食子有效部位；d、將步驟c得到的沒食子有效部位用常規(guī)方法凝膠層析(型號=Si5Phadex LH-20) 進行化學成分的分離，以水和20% -100%甲醇進行梯度洗脫，得到了 40% -70%甲醇洗 脫液的浸膏I和70% -100%甲醇洗脫液的浸膏II，再將浸膏I和II分別用型號=MCI-GEL CHP-20P凝膠層析柱分離，以水和20% -80%甲醇梯度洗脫；浸膏I得到了化合物沒食 子酸，間-雙沒食子酸和沒食子酸甲酯；浸膏II得到了 30% -60%甲醇洗脫液的浸膏III 和浸膏IV，再分別將浸膏III和浸膏IV用型號=Si5Phadex LH-20凝膠層析柱分離，以水和 20% -100%的甲醇進行梯度洗脫，在浸膏III的60% -100%的甲醇洗脫液中得到了化合物 1，2，3，6-四-0-沒食子?；?β -D-葡萄糖；在浸膏IV的40 % 60 %的甲醇洗脫液中得到 了化合物1，2，3，4，6-五-0-沒食子?；?β -D-葡萄糖。沒食子有效部位采用2000年版藥典附錄X B鞣質(zhì)含量測定法，測定鞣質(zhì)的含量 大于50%。沒食子有效部位作為制備治療抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用的藥物的用途，采用水提后有 機溶劑萃取即可得到?jīng)]食子有效部位，主要包括鞣質(zhì)類；有效部位經(jīng)凝膠色譜提取分離即 可得到單體化合物，包括沒食子酸、間-雙沒食子酸、沒食子酸甲酯、1，2，3，6-四-0-沒食子 ?；?β-D-葡萄糖、1，2，3，4，6-五-0-沒食子?；?β-D-葡萄糖，按常規(guī)方法將提取的沒 食子有效部位制成口服制劑。實施例5沒食子有效部位在制備治療抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的實驗研究摘要目的研究沒食子提取物對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)動物模型的治療作用。 方法采用三硝基苯磺酸和乙醇復合方法制備大鼠UC模型，經(jīng)病理切片證實造模成功后， 隨機分為沒食子提取物高、低劑量組，模型組和柳氮磺吡啶組。灌胃給藥20d后，評價大鼠 結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)(CMDI)；檢測體重、腸重指數(shù)和免疫器官重量指數(shù)的變化；檢測大鼠結(jié) 腸組織中超氧化物歧化酶(SOD)、髓過氧化物酶(MPO)活性。結(jié)果沒食子提取物高劑量 組動物潰瘍均完全愈合，與模型組動物相比較，高、低劑量組動物組織中SOD顯著增高(P < 0. 01)，MPO顯著降低(P < 0. 01)。結(jié)論沒食子提取物對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治 療作用。本發(fā)明通過建立大鼠結(jié)腸炎模型，沒食子提取物給藥后，觀察其治療作用并檢測相關(guān)指標，了解其治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機理。實驗材料與方法動物及分組SPF級SD大鼠50只，雌雄各半，200_250g，提供單位中國人民解放軍南京軍區(qū)醫(yī)學動物實驗中心，許可證號SCXK (蘇)2003-0004。隨機分為空白對照組、模型組、陽性對照 組及沒食子提取物高、低劑量組，每組10只。藥物及試劑沒食子有效部位浸膏，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)研究所提供，批號090926 ；2， 4，6_三硝基苯磺酸(TNBS)為Sigma公司產(chǎn)品，50%體積分數(shù)，批號046K5008 ；無水乙醇 (AR)為南京化學試劑有限公司產(chǎn)品，批號061110961 ；乙醚(AR)為南京化學試劑有限公 司產(chǎn)品，批號060610483 ；柳氮磺吡啶腸溶片為上海三維制藥有限公司產(chǎn)品，國藥準字 Η31020450，批號200701C03 ；SOD試劑盒(測總超氧化物歧化酶)，批號20070516 ；髓過氧 化物酶(MPO)測試盒，批號20070516，以上測試盒均由南京建成生物工程研究所產(chǎn)品模型制備SD大鼠60只，雌雄各半，200 250g，分組稱重標記，禁食一天，自由飲水。造模 將50% (V/V)的乙醇與5%的TNBS等量混勻，配成造模溶液。用乙醚將大鼠麻醉，并固定， 將一段直徑2. Omm長約IOcm的嬰兒導尿管，由大鼠肛門輕緩插入深約8cm，緩緩注入TNBS 與乙醇混合溶液Iml/只，注入時讓大鼠仰面稍微傾斜，防止漏液。隨后2 3天內(nèi)，觀察大 鼠的生理變化。出現(xiàn)腹瀉，粘液膿血便造模成功。給藥從制備模型后的第7天開始灌胃給藥，每日1次，共20天。空白對照組和模型組 灌胃給予10ml/kg生理鹽水。陽性對照組柳氮磺吡啶腸溶片100mg/kg，沒食子提取物高、 低劑量組給藥劑量分別為1. 68g/kg和0. 34g/kg。 組織標本的制備及指標檢測大鼠給藥第21天，處死大鼠，取結(jié)腸組織，進行形態(tài)觀察及結(jié)腸組織損傷評分 (CMDI)；剪取結(jié)腸稱重計算腸重指數(shù)。隨機選取部分結(jié)腸，用10% (V/V)的福爾馬林溶液固 定，然后取病變處及其前后各三段腸管，經(jīng)流水沖洗，常規(guī)制備切片、HE染色。同時摘取脾 臟和胸腺，稱其重量，并計算其臟器指數(shù)。處死大鼠前眼球取血，分離得到血清，3000r/min 離心10分鐘，_4°C保存?zhèn)溆?，按試劑盒說明書測定SOD及MPO活性。統(tǒng)計學處理采用SPSSl 1. 5軟件處理統(tǒng)計數(shù)據(jù)資料，采用t檢驗和F分析(q檢驗)分析上述 各組實驗各均數(shù)。實驗結(jié)果沒食子有效部位對TNBS所致潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸損傷的影響CMDI是反應結(jié)腸損傷程度的主要指標，高劑量組和陽性藥組與模型組比較有顯著 差異(P < 0. 01)，低劑量組與模型組比較無統(tǒng)計學差異。表1沒食子有效部位對TNBS所致潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸損傷的影響 與模型組組比較ΑΡ< 0. 05“Ρ < 0. 01。沒食子有效部位對TNBS所致潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸腸重指數(shù)的影響沒食子有效部位高劑量組和陽性藥組腸重指數(shù)與正常組比較無明顯差異(P > 0.05)，與模型組比較顯著降低(P <0.01)；沒食子提取物低劑量組腸重指數(shù)與正常對照組 有顯著差異(P < 0. 01)，與模型組比較明顯降低(P < 0. 05)。表2沒食子有效部位對TNBS所致潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸腸重指數(shù)的影響 與正常組比較#P<0. 05，#P<0. 01 ；與模型組組比較ΑΡ < 0. 05ΑΑΡ < 0. 01大鼠免疫器官相對重量的測定與對照組比較，陽性藥組、沒食子提取物高、低劑量組的免疫器官均無顯著差異(P > 0. 05)；各組與模型組比較均無統(tǒng)計學意義(P > 0. 05)。表3沒食子有效部位對TNBS所致潰瘍性結(jié)腸炎大鼠免疫器官的影響 與正常組比較*P< 0. 05**P < 0. 01 ；與模型組比較,P < 0. 05 “P < 0. 01。
沒食子有效部位對TNBS所致的UC大鼠血清MPO活性的影響與模型組比較，高劑量組和陽性藥組MPO活性顯著降低(P < 0. 01)，低劑量組與模 型組比較無統(tǒng)計學意義(P >0.05)；與模型組比較，陽性藥、沒食子提取物高、低劑量組SOD 活性顯著升高(P <0.01)。表4沒食子有效部位對TNBS所致潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清中MPO、SOD活性的影響
與正常組比較*P< 0. 05**P < 0. 01 ；與模型組比較 >P < 0. 05 aaP < 0. 01。病理檢查結(jié)果空白對照組各鼠結(jié)腸組織內(nèi)襯單層柱狀上皮，粘膜完整，杯狀細胞豐富，粘膜間 散在淋巴漿細胞浸潤，部分區(qū)粘膜下可見淋巴濾泡，肌層及漿膜層均無明顯異常。模型組 其中9只鼠結(jié)腸粘膜上皮基本變性、脫落，被大片壞死及炎性滲出物所代替，粘膜下高度水 腫，粘膜下、肌層、漿膜層及漿膜外見大量炎癥細胞浸潤，以中性粒細胞為主。另1鼠除結(jié)腸 粘膜中炎癥細胞略增多外，大致與空白對照組鼠結(jié)腸組織形態(tài)相似。陽性藥給藥組各鼠 結(jié)腸組織形態(tài)與空白對照組基本一致，內(nèi)襯單層柱狀上皮，粘膜完整，杯狀細胞豐富，粘膜 間散在淋巴漿細胞浸潤，部分區(qū)粘膜下可見淋巴濾泡，肌層及漿膜層均無明顯異常。低劑 量給藥組其中7例鼠結(jié)腸粘膜見散在點狀上皮變性、脫落，粘膜下及肌層見較多急慢性炎 細胞浸潤，并有淋巴濾泡形成充填潰瘍，其余3例鼠結(jié)腸粘膜形態(tài)與空白對照組基本一致， 粘膜完整，杯狀細胞豐富，粘膜間散在淋巴漿細胞浸潤，部分區(qū)粘膜下可見淋巴濾泡，肌層 及漿膜層均無明顯異常。高劑量給藥組8例鼠結(jié)腸粘膜見多處粘膜較大面積上皮變性、脫 落，炎性滲出物及壞死較多，粘膜下、肌層及漿膜層均可見大量炎細胞浸潤，以中性粒細胞 為主。其余2例鼠結(jié)腸粘膜形態(tài)與空白對照組基本一致，粘膜完整，杯狀細胞豐富，粘膜間 散在淋巴漿細胞浸潤，部分區(qū)粘膜下可見淋巴濾泡，肌層及漿膜層均無明顯異常。討論目前，治療潰瘍性結(jié)腸炎的常用藥物主要包括激素(如皮質(zhì)類固醇類)、氨基水楊 酸類(如SASP、5-ASA)和免疫抑制劑(如氨甲喋呤)、鈣離子拮抗劑、肝素等，但效果欠佳， 且不良反應多，停藥后容易復發(fā)。中醫(yī)治療多從調(diào)理脾胃、滋肝補腎治其本，清熱解毒，活血 祛淤，固腸治其標。治法上通過口服中藥、中西藥聯(lián)用及中藥保留灌腸諸法，臨床中均收到 了一定的療效，特別值得一提的是中藥口服與西藥口服對照結(jié)果看，中醫(yī)中藥的療效均優(yōu) 于單純使用西藥，說明中醫(yī)中藥在治療該病有其一定的優(yōu)勢，同時對于中藥保留灌腸也收 到了與內(nèi)服藥同樣的療效，并且操作簡便。沒食子性干寒，味苦澀，具有固澀、收斂、燥濕、止 血、消炎的作用，研究表明，沒食子含鞣質(zhì)、黃酮、沒食子酸等成分，其中鞣質(zhì)提取物的鞣質(zhì) 含量超過50%。藥理學研究證明，沒食子提取物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、β-溶血性 鏈球菌等有較強的抑制和殺滅作用；并能顯著抑制急、慢性炎癥，提高機體非特異性免疫功 能，具有清熱鎮(zhèn)痛，清除自由基和抑制脂質(zhì)過氧化損傷等作用，臨床常用于治療潰瘍性結(jié)腸 炎療效顯著。本發(fā)明采用TNBS與乙醇復合法制作大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型。TNBS是一種半抗原 物質(zhì)，乙醇溶解腸粘膜表面的粘液，破壞腸粘膜屏障，使TNBS與腸組織大分子組織蛋白結(jié)合后成為完全抗原，導致針對腸粘膜的免疫反應，誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的產(chǎn)生。其病理特點是 結(jié)腸組織呈一種慢性炎癥變化，病程較長，病理變化與人類潰瘍性結(jié)腸炎相相似。試驗證實 沒食子提取物(高、低劑量組)對TNBS所致大鼠結(jié)腸潰瘍有明確的治療作用。從病理結(jié)果 顯示沒食子提取物高劑量組動物結(jié)腸組織已無明顯異常，模型組大鼠結(jié)腸黏膜及黏膜下層 炎性細胞浸潤，以中性粒細胞浸潤為主，部分出現(xiàn)上皮脫落和黏膜層壞死，出現(xiàn)明顯的肉芽 腫。MPO是存在于中性粒細胞中的一種酶，是中性粒細胞浸潤的重要指標，也是結(jié)腸炎損傷 程度的指標，實驗結(jié)果表明，沒食子提取物可明顯降低模型大鼠血清中MPO水平，說明沒食 子提取物有明顯的抗炎作用。自由基損傷是UC發(fā)病的重要機制之一，SOD是機體清除氧自 由基的重要酶類，對機體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，它能抑制腸組織中的 脂質(zhì)過氧化反應，并能穩(wěn)定細胞膜，實驗結(jié)果顯示，沒食子提取物明顯提高了大鼠外周血中 SOD水平，說明其有抗氧化損傷能力。本研究表明，沒食子有效部位對潰瘍性結(jié)腸炎有顯著 的治療作用，其機制可能與沒食子提取物的抗炎、抗氧化作用有關(guān)。
實施例6沒食子有效部位在制備治療抗炎、鎮(zhèn)痛和抗菌實驗研究摘要目的觀察沒食子有效部位的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗菌等藥理作用。方法通過二 甲苯致小鼠耳殼腫脹、醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加、角叉菜膠誘發(fā)的小鼠腹腔 白細胞游走、角叉菜膠致小鼠足跖腫脹、大鼠棉球肉芽腫、醋酸所致小鼠扭體反應、以及常 見腸道細菌的體外抗菌等試驗，觀察沒食子提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗菌作用。結(jié)果沒食子 有效部位小鼠(2.5、5.0、10.0ml/kg)，大鼠(1. 75、3. 5、7. 0ml/kg)灌胃給藥，明顯抑制二 甲苯所致小鼠耳殼腫脹；拮抗乙酸所致的小鼠腹腔毛細血管通透性增高；顯著減少角叉菜 膠所致大鼠腹腔白細胞游走；明顯抑制小鼠足趾角叉菜膠致腫；對大鼠棉球肉芽腫形成有 抑制作用；能明顯減少醋酸所致小鼠扭體反應次數(shù)。體外抗菌試驗對傷寒沙門氏菌屬、乙 型副傷寒沙門氏菌屬、鼠傷寒沙門氏菌屬、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、腸侵襲 性大腸桿菌、痢疾志賀氏菌屬、福氏志賀氏菌屬、宋內(nèi)氏志賀氏菌屬等9種常見指標菌的最 小殺菌濃度(MBC)分別為 0. 0650 %,0. 0650 %,0. 0650 %,0. 0650 %,0. 0650 %,0. 150%, 0. 150%,0. 150%,0. 50%。結(jié)論沒食子有效部位有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，對潰瘍性結(jié)腸 炎有關(guān)的常見致病菌有抑菌作用。沒食子是沒食子蜂科昆蟲沒食子蜂Cynips gallae-tinctoriceOliv的幼蟲，寄生 于殼斗科植物沒食子樹Quercus infectoriaOliv.幼枝上，所產(chǎn)成的蟲癭。沒食子性干寒， 味苦澀，具有固澀、收斂、燥濕、止血、消炎的作用，是維吾爾醫(yī)常用藥材。維吾爾醫(yī)理論認為 其針對結(jié)腸炎引起的腸壁吸收力及捏住力下降，直接作用于腸壁，斂腸，消炎止瀉，開通腸 阻，促使?jié)冇?。臨床用于潰瘍性結(jié)腸炎的治療，療效顯著。但是其治療潰瘍性結(jié)腸炎的 作用機理尚未明確，本實驗通過對沒食子有效部位的抗炎、鎮(zhèn)痛和抗菌作用進行研究，探討 其治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機理，為沒食子的新藥開發(fā)提供依據(jù)。實驗材料與儀器藥品與試劑受試藥物沒食子有效部位浸膏(每毫升含生藥40mg)，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾 醫(yī)研究所提供，批號090926。試驗試劑二甲苯，分析純，天津市北方化玻購銷中心(批號031228)。伊文思蘭 上海化學試劑采購供應站提供，F(xiàn)luka進口分裝(批號82-11-02)。醋酸鄭州市德眾化學試劑廠(批號030506)。角叉菜膠北京醫(yī)科大學藥理室提供。指標菌，傷寒沙門氏菌屬(50071)、乙型副傷寒沙門氏菌屬(50602)、鼠傷寒沙門氏菌屬(50115)、腸產(chǎn)毒性大腸 桿菌(44815)、腸致病性大腸桿菌(44336)、腸侵襲性大腸桿菌(44850)、痢疾志賀氏菌屬 (51570)、福氏志賀氏菌屬(51142)、宋內(nèi)氏志賀氏菌屬(51592)。新疆醫(yī)科大學微生物學教
研室提供。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，杭州天河生物試劑有限公司產(chǎn)品(批號200304)。MH肉湯培養(yǎng) 基，浙江省軍區(qū)后勤部衛(wèi)生防御檢驗所提供(批號200304)。MH瓊脂培養(yǎng)基，杭州天河生物 試劑有限公司(批號200304)。生理鹽水山東華魯制藥有限公司(批號H20030128)。試驗儀器BSllOS電子天平北京塞多利斯天平有限公司。DT200電子天平上海恒平科學儀 器有限公司。JM31000電子天平余姚市紀銘稱重校驗設備有限公司。外徑千分尺上海量 具刃具廠。電子體溫計福建康科技實業(yè)有限公司。秒表上海金星儀表廠，QB/T1534-199。 FM生化培養(yǎng)箱上海?，攲嶒炘O備有限公司。YJ-875超凈工作臺吳江市海留凈化設備有 限公司。DM2500顯微成像系統(tǒng)德國Leica公司產(chǎn)品。實驗動物Wistar和SD雄性大鼠，普通級；小鼠，昆明種，普通級，雌雄各半。由新疆醫(yī)科大 學實驗動物中心提供，合格證書新疆醫(yī)動字16-003號。方法與結(jié)果沒食子有效部位對小鼠耳殼二甲苯致腫的影響取昆明種小鼠50只，體重20士2g， 雌雄各半。隨機分為5組，每組10只，即為空白對照組、陽性對照組、沒食子有效部位小、中、 大劑量組，每日一次，連續(xù)灌胃給藥(ig) 7天，于末次給藥1小時后，每組小鼠右耳兩面涂抹 二甲苯50 μ 1，Ih后脫頸處死小鼠，用8mm打孔器取左右耳片，稱重，以兩耳片重量差值為腫 脹度，進行組間均數(shù)t檢驗，并依“(空白對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/空白對 照組平均腫脹度X 100%”計算驗證抑制率。結(jié)果沒食子有效部位不同劑量灌胃給藥，對二甲苯所致小鼠耳殼腫脹有明顯地 抑制作用(結(jié)果見表1)。表1沒食子有效部位對小鼠耳殼二甲苯致腫的影響 注與空白對照組比較，_Ρ < 0. 01、**Ρ < 0. 05。沒食子有效部位對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響取昆明種小鼠50只，體重20士2g，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，即為空白 對照組、陽性對照組、沒食子提取物小、中、大劑量組。每日一次，連續(xù)灌胃給藥7天。末次給藥后lh，各小鼠尾靜脈注射0. 5%伊文思藍生理鹽水溶液0. lml/10g,并立即ipO. 6%冰 醋酸0. 2ml/只，20min后處死小鼠，用5ml生理鹽水沖洗腹腔，收集洗滌液，洗滌液加生理 鹽水至10ml，3000rpm離心15min，取上清液于紫外分光光度計590nm波長處測定其OD值。 以OD值表示沖洗液中伊文思蘭的濃度，間接反映腹膜炎性滲出的程度。與空白對照組比較 進行組間均數(shù)t檢驗，比較有無顯著性差異。并以“(空白對照組平均OD值-給藥組平均 OD值)/空白對照組平均OD值X 100 %，，計算抑制率。結(jié)果，沒食子有效部位各給藥組腹腔洗滌液OD值較對照組明顯低，表明該制劑明 顯抑制醋酸所致的小鼠腹腔毛細血管通透性增加(結(jié)果見表2)。表2沒食子有效部位組對小鼠腹腔毛細血管通透性增高的影響(X士SD)

注與空白對照組比較，< 0. 01。沒食子有效部位對小鼠足跖角叉菜膠致腫脹的影響取昆明種小鼠50只，體重20士2g，雌雄各半。隨機分為5組，每組10只，即為空白 對照組、陽性對照組、沒食子提取物小、中、大劑量組。每日一次，連續(xù)灌胃給藥7天。于末 次給藥后lh，用2%角叉菜膠0. 06ml注入小鼠足跖中央皮下，致炎后lh、6h、24h，用千分尺 測兩足跖厚度，以致炎前后足跖厚度為腫脹度，進行各組均數(shù)t檢驗。結(jié)果，沒食子有效部位不同劑量灌胃給藥，對角叉菜膠致小鼠足跖腫脹有抑制作 用，作用可維持24小時左右，其中大劑量組比較明顯(結(jié)果見表3)。表3沒食子有效部位對小鼠足跖角叉菜膠致腫的影響(X士SD) 注與空白對照組比較，*P> 0. 05、**P < 0. 05、_P < 0. 01。沒食子有效部位對大鼠腹腔白細胞游走的影響選取SD大鼠60只，體重200士20g，雌雄各半。隨機分為6組，每組10只，即為空白對照組、模型組、陽性對照組、沒食子有效部位小、中、大劑量組?？瞻讓φ战M和模型組大 鼠灌胃給予生理鹽水，陽性對照組灌胃復方乙酰水楊酸片，受試物小、中、大劑量組分別灌 胃給予相應劑量的沒食子有效部位，每日一次，連續(xù)7天。于末次給藥后lh，除對照組外其 它組大鼠腹腔注射2%角叉菜膠0. 4ml/只，5h小時后處死動物，用3ml生理鹽水沖洗腹腔， 收集洗條液lml，置于小試管內(nèi)，按白細胞計數(shù)方法計數(shù)每個視野的白細胞總數(shù)，以白細胞 數(shù)均數(shù)為指標進行組間t檢驗。結(jié)果表明，沒食子有效部位不同劑量ig給藥，對角叉菜膠所致大鼠腹腔白細胞游 走有明顯地抑制作用(結(jié)果見表4)。表4沒食子有效部位對大鼠腹腔白細胞游走的影響(^tsi)) 陽性對照組1070 mg/kg1031.5± 196. 1*** 沒食子有效部位101.82096.8 ±623.8*** 沒食子有效部位103.62062.7±492.6*** 沒食子有效部位_10_7J_1295.9±337. 9***注與空白對照組比較ΔΔΔΡ < 0.01 ；與模型組比較< 0.01。沒食子提取物對大鼠棉球肉芽腫的影響取Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重200 士 20g，隨機分為5組，每組8只。即正常 組、5-ASA組、3個不同劑量的沒食子有效部位給藥組。在乙醚淺麻醉，麻醉成功后，每只大 鼠的兩側(cè)蹊部用碘酒消毒，75%酒精棉球脫碘后各剪小一口，以血管鉗擴充皮下組織，用眼 科鑷子將20mg的高壓滅菌棉球從切口處植入皮下，隨縫合皮膚，術(shù)后當天開始每日一次， 連續(xù)ig7天，第8天處死動物，剝離并取出棉球肉芽組織，于60°C烘箱內(nèi)干燥12h后稱重，減 去原棉球重量，即為肉芽腫凈重，并以大鼠體重折算成IOOg體重含肉芽腫mg數(shù)，以各組肉 芽腫量均數(shù)作組間t檢驗，并以“(空白對照組肉芽腫凈干重_給藥組肉芽腫凈干重)/空 白對照組肉芽腫凈濕重X 100%”計算抑制率。結(jié)果表明，沒食子有效部位不同劑量灌胃給藥，對大鼠棉球肉芽腫形成有明顯地 抑制作用(結(jié)果見表5)。表5沒食子有效部位對大鼠棉球肉芽腫的影響
注與空白對照組比較，< 0. 01。 沒食子有效部位對小鼠醋酸所致扭體反應的影響取昆明種小鼠50只，體重20士2g，雌雄各半。隨機分為5組，每組10只，即為空白 對照組、陽性對照組、沒食子有效部位小、中、大劑量組。每日一次，連續(xù)灌胃給藥7天。末 次給藥后lh，每鼠1 0.6%醋酸0. 2ml/只，觀察每只小鼠ip醋酸后的扭體反應潛伏期及 15分鐘內(nèi)因疼痛引起的扭體次數(shù)。與對照組比較進行組間均數(shù)t檢驗，比較有無顯著性差 異。并以“(空白對照組平均扭體次數(shù)_用藥組平均扭體次數(shù))/空白對照組平均扭體次 數(shù)X 100%”計算鎮(zhèn)痛百分率。結(jié)果，沒食子有效部位能明顯降低醋酸所致小鼠扭體反應次數(shù)，表明該制劑具有 顯著的鎮(zhèn)痛作用(結(jié)果見表6)。表6沒食子有效部位對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(i±SD) 注與空白對照組比較< 0. Ol0沒食子有效部位對九種常見腸道細菌的影響指標菌工作濃度9株指標菌復蘇并傳代2次后，以無菌生理鹽水下，比濁法配成 工作濃度約為IX 106/ml，同時稀釋后接種平板，計算活菌數(shù)。藥物經(jīng)過濾除菌后，以MH肉 湯作倍比稀釋，分裝小試管，每管1.8ml，藥物稀釋度分別為1 1，1 2，1 4，1 8， 1 16,1 32,1 64。取上述細菌工作菌液0. 2ml，加入1. 8ml含藥肉湯的試管中，指標 菌最終濃度約為1 X 107ml，370C培養(yǎng)24小時，分別接種平板觀察有無相應細菌生長，計算 最小殺菌濃度(MBC)，試驗重復三次。對照組培養(yǎng)基無菌對照，藥物無菌對照，生理鹽水無 菌對照。
指標菌工作濃度107cfU/ml ；傷寒沙門氏菌屬工作濃度為2. 7X 107CfU/ml，指 標菌終濃度2. 7 X 106CfU/ml ；乙型副傷寒沙門氏菌屬工作濃度為6. 2 X 107cfu/ml，指 標菌濃度6. 2 X 106Cfu/ml ；鼠傷寒沙門氏菌屬工作濃度2. 0 X 107cfu/ml，指標菌濃度 2. 0X106cfu/ml ；腸產(chǎn)毒性大腸桿菌工作濃度0. 6X 107cfu/ml，指標菌濃度0. 6 X IO6Cfu/ ml ；腸致病性大腸桿菌工作濃度4. 8 X 107Cfu/ml，指標菌濃度4. 8 X 106cfu/ml ；腸侵襲性 大腸桿菌工作濃度0. 7 X 107Cfu/ml，指標菌濃度0. 7 X 106Cfu/ml ；痢疾志賀氏菌屬工作濃 度7. 0X107cfu/ml，指標菌濃度7. 0 X 106cfu/ml ；福氏志賀氏菌屬工作濃度2. IXlO7Cfu/ ml，指標菌濃度2. 1 XlO6CfuAil ；宋內(nèi)氏志賀氏菌屬工作濃度1. 8X 107cfu/ml，指標菌濃度 1. 8X106cfu/ml。結(jié)果表明，9種指標菌的最小殺菌濃度(MBC)分別為傷寒沙門氏菌屬0.0650%，乙 型副傷寒沙門氏菌屬0. 0650 %，痢疾志賀氏菌屬0. 0650 %，福氏志賀氏菌屬0. 0650 %，宋 內(nèi)氏志賀氏菌屬0. 0650%，鼠傷寒沙門氏菌屬0. 150%，腸產(chǎn)毒 性大腸桿菌屬0. 150%，腸 侵襲性大腸桿菌屬0. 150%，腸致病性大腸桿菌屬0. 50%。對照培養(yǎng)基無菌生長，生理鹽 水無菌生長，3種藥物消毒后均無菌生長(表7)。表7沒食子有效部位對九種常見腸道細菌的影響 討論沒食子為維吾爾醫(yī)常用藥材，收載于維吾爾藥材標準_上冊。具有固澀、燥濕、止 血、消炎、防腐之功效。用于大腸虛滑、瀉痢不止、習慣性腸炎、牙齦松弛、牙周炎、口臭、咽喉 炎等。新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院臨床利用沒食子提取物，治療潰瘍性結(jié)腸炎所致的 腹痛、腹瀉和膿血癥等，取得了顯著的療效。體內(nèi)試驗研究證明，沒食子提取物小鼠(2.5、5.0、10.01111/1^)、大鼠(1. 75、3. 5、 7. 0ml/kg)灌胃給藥，明顯抑制二甲苯所致小鼠耳殼腫脹；拮抗乙酸所致的小鼠腹腔毛細 血管通透性增高；減少角叉菜膠所致的腹腔白細胞游走；明顯的抑制角叉菜膠所致小鼠足 趾腫脹；對大鼠棉球肉芽腫形成有顯著地抑制作用；能明顯減少醋酸致小鼠扭體反應次 數(shù)。體外抗菌試驗研究證明，沒食子提取物對傷寒沙門氏菌屬、乙型副傷寒沙門氏菌屬、鼠傷寒沙門氏菌屬、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌、痢疾志賀氏菌屬、福氏志賀氏菌屬、宋內(nèi)氏志賀氏菌屬等9種常見指標菌有抑制作用，其最小殺菌濃度 (MBC)分別為傷寒沙門氏菌屬0. 0650%，乙型副傷寒沙門氏菌屬0. 0650%，痢疾志賀氏菌 屬0. 0650%，福氏志賀氏菌屬0. 0650%，宋內(nèi)氏志賀氏菌屬0. 0650%,鼠傷寒沙門氏菌屬 0. 150%，腸產(chǎn)毒性大腸桿菌屬0. 150%，腸侵襲性大腸桿菌屬0. 150%，腸致病性大腸桿菌 屬 0. 50%。上述研究表明，沒食子提取物有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，對潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān)的常 見致病菌有抑菌作用。實施例7沒食子有效部位在制備治療抗?jié)冃越Y(jié)腸炎48例的臨床觀察潰瘍性結(jié)腸炎是一種慢性非特異性潰瘍性炎癥。病變主要發(fā)生在大腸黏膜及黏膜 下層，以潰瘍及糜爛為主，以反復發(fā)作的腹瀉、腹痛及膿血黏液便為主要臨床表現(xiàn)。目前該 病發(fā)病率上升，治療棘手，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。西藥治療療效不滿意，不 良反應大。沒食子性干寒，味苦澀，具有固澀、收斂、燥濕、止血、消炎的作用，是維吾爾醫(yī)常 用藥材，主要用于治療潰瘍性結(jié)腸炎。使用沒食子有效部位治療潰瘍性結(jié)腸炎48例，現(xiàn)將 結(jié)果報告如下資料方法一般資料48例均為門診輕、中度潰瘍性結(jié)腸炎患者，隨機分為治療組和對照組。治療組24 例，男16例，女8例；年齡20-65歲，平均(42. 4士 12. 5)歲；病程1_22年，平均(7. 3士3. 6) 年；輕度11例，中度23例。對照組24例，男15例，女9例；年齡20-62歲，平均(41. 7 士 11. 9) 歲病程1-20年，平均(6. 8士2. 9)年輕度12例，中度12例。經(jīng)統(tǒng)計學處理，2組在性別、 年齡、病程及病情程度方面無顯著差異(P > 0. 05)，具可比性。納入標準所有病例均有不同程度的腹瀉、腹痛及膿血黏液便，符合2000年成都全國炎癥性 腸病學術(shù)研討會制定的診斷標準及療效評價標準。所有病例均為符合該標準的輕、中度患 者，凡腹瀉> 6次/d、有重度黏液血便、體溫在37. 50C以上、脈搏> 90次/min、血紅蛋白 < 100g/L、血沉> 30mm/h的重度患者均排除在外。治療方法治療組用沒食子有效部位1. 0g，每日4次。對照組口服柳氮磺胺吡啶1. 0g，每日4次；癥狀緩解后改為1. 0g，每日2次。2 組病例均治療8周。觀察指標與方法觀察治療前后患者腹瀉、腹痛及膿血便等癥狀、體征改善情況；大便常規(guī)、血常規(guī)、 結(jié)腸鏡下黏膜變化、活體組織病理檢查；觀察不良反應。療效標準采用1993年全國慢性非感染性腸道疾病學術(shù)研討會標準即①近期治愈臨床癥 狀消失，結(jié)腸鏡復查黏膜正常。停藥或僅用維持量藥物，觀察6個月無復發(fā)。②有效臨床 癥狀基本消失，結(jié)腸鏡復查黏膜輕度炎癥反應及部分假性息肉形成。③無效經(jīng)治療后臨床癥狀、內(nèi)鏡及病理檢查無改善。統(tǒng)計學方法 以SPSS 12. 0統(tǒng)計軟件進行x 2檢驗。觀察結(jié)果療效比較見表1。表1兩組臨床療效比較(η = 24) 討論潰瘍性結(jié)腸炎是一種以慢性非特異性炎癥改變?yōu)橹饕卣鞯慕Y(jié)腸病變綜合征候 群。本病易反復發(fā)作、遷延難愈、并發(fā)癥較多。引起潰瘍性結(jié)腸炎的病因有多種學說，如免 疫因素、遺傳因素、精神因素、感染因素、保護物質(zhì)缺乏因素等學說。最近研究表明，潰瘍性 結(jié)腸炎病人腸壁黏膜中超氧化物歧化酶(SOD)活性較低。沒食子性干寒，味苦澀，具有固 澀、收斂、燥濕、止血、消炎的作用，是維吾爾醫(yī)常用藥材。維吾爾醫(yī)理論認為其針對結(jié)腸炎 引起的腸壁吸收力及捏住力下降，直接作用于腸壁，斂腸，消炎止瀉，開通腸阻，促使?jié)冇?合。臨床用于潰瘍性結(jié)腸炎的治療，療效顯著。臨床治療觀察結(jié)果表明，沒食子有效部位對潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治療作用，總 有效率91. 7%，近期治愈率66. 7%，有效為25%，無效為8. 3%，明顯優(yōu)于對照組。藥理研 究表明，沒食子有效部位對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治療作用；可顯著增高潰瘍組織中 SOD含量(P < 0. 01)，降低MPO含量(P < 0. 01)，且有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，對潰瘍性結(jié)腸 炎有關(guān)的常見致病菌有抑菌作用。沒食子有效部位是治療潰瘍性結(jié)腸炎的佳藥。
權(quán)利要求
一種沒食子有效部位在制備抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的藥物的用途，其特征在于沒食子有效部位的提取方法按下列步驟進行a、取干燥沒食子藥材粉碎，過2號篩，稱取100g藥材粉末，加水提取3次，每次加5-15倍量水，提取20-120min；b、將提取液減壓濃縮至500-1500ml，濃縮液用乙醚萃取至醚層澄清，棄去乙醚層；c、將水層部位再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，真空干燥溫度45-90℃，得到30-60％的沒食子有效部位；d、將步驟c得到的沒食子有效部位用常規(guī)方法凝膠層析柱進行化學成分的分離，即可得到單體化合物，包括沒食子酸、間-雙沒食子酸、沒食子酸甲酯、1，2，3，6-四-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖、1，2，3，4，6-五-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種沒食子有效部位在制備抗?jié)冃越Y(jié)腸炎的藥物的用途，該沒食子有效部位采用水提后有機溶劑萃取的即可得到?jīng)]食子有效部位，主要包括鞣質(zhì)類；再將有效部位經(jīng)凝膠色譜提取分離即可得到單體化合物，沒食子酸、間-雙沒食子酸、沒食子酸甲酯、1，2，3，6-四-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖、1，2，3，4，6-五-O-沒食子?；?β-D-葡萄糖。經(jīng)臨床結(jié)果表明，沒食子有效部位對潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治療作用，總有效率91.7％，近期治愈率66.7％，有效為25％，無效為8.3％。藥理研究表明，沒食子有效部位對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎有明顯的治療作用；可顯著增高潰瘍組織中SOD含量，降低MPO含量，且有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，對潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān)的常見致病菌有抑菌作用。
文檔編號A61P1/04GK101862351SQ20101021385
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月30日
發(fā)明者斯拉甫·艾白, 李治建 申請人:斯拉甫·艾白