專利名稱：一種治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的藥物組合物、其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，該藥物組合物主要由黃芩、川芎和當(dāng)歸組成，具有治 療和緩解中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的作用，尤其是治療和緩解老年癡呆、血管性癡呆或輕 度認(rèn)知障礙癥的作用，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
老年性癡呆是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。近年來，隨著世界人口的老 齡化.老年癡呆癥的發(fā)病率呈不斷上升趨勢，目前該病列死亡原因第4位(僅次于心臟病、 腫瘤和中風(fēng))，成為當(dāng)前老年醫(yī)學(xué)所面臨的最為嚴(yán)峻的問題之一。據(jù)統(tǒng)計，在我國60歲以 上人口中患病率約5%，約600萬，并隨年齡增高而增加。老年性癡呆的病理變化，在形態(tài) 上主要表現(xiàn)為大腦皮質(zhì)明顯萎縮，以額葉、顳葉、頂葉為主。腦回萎縮變窄，腦溝增寬，腦室 擴(kuò)大；主要的組織病理學(xué)變化是在大腦細(xì)胞外出現(xiàn)了由β-淀粉樣蛋白的42個氨基酸肽的 亞型(即Αβ42)聚集形成的淀粉樣斑塊(老年斑)(SP)，以及在神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)了由細(xì)胞微 管和過度磷酸化的Tau蛋白構(gòu)成的神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFT)。由于淀粉樣蛋白的產(chǎn)生增多 或清除減少，聚集的β “淀粉樣蛋白啟動了一系列在神經(jīng)退行性變性與癡呆發(fā)病中的病理 過程，即淀粉樣蛋白假說。Αβ42的聚集導(dǎo)致了淀粉樣斑塊的形成，并啟動一系列與神經(jīng)元 和突觸功能異常、炎性反應(yīng)、Tau蛋白的過度磷酸化、神經(jīng)纖維纏結(jié)形成、神經(jīng)元死亡、神經(jīng) 遞質(zhì)異常相關(guān)的改變，最終導(dǎo)致癡呆的發(fā)生。老年性癡呆臨床以意識模糊、記憶缺損、人格 和語言障礙為主要表現(xiàn)。該病可導(dǎo)致老年人生活質(zhì)量下降，嚴(yán)重者喪失生活自理能力，給家 庭、社會帶來沉重負(fù)擔(dān)，隨著我國人口的老齡化，其發(fā)病率亦持續(xù)升高，因此積極防治老年 性癡呆已成為老年臨床醫(yī)學(xué)的一個重要課題。按發(fā)病機(jī)制，老年性癡呆癥可分為4類阿爾茨海默癥(Alzheimer’ S diease, AD)、血管性癡呆癥(Vascular dementia，VD)、混合型癡呆癥(Mixed dementia, MD)和其它 癡呆癥(Other dementia, 0D)，其中AD和VD最常見?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對老年性癡呆的病因及發(fā)病機(jī)制已經(jīng)進(jìn)行了多年的研究，但因其病因復(fù) 雜，至今對其具體環(huán)節(jié)尚未明了，目前對AD的病因和發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識主要集中于遺傳和環(huán) 境因素所引起的腦內(nèi)慢性炎癥和膽堿能系統(tǒng)功能進(jìn)行性下降，主要的較具代表性的學(xué)說 有膽堿能學(xué)說、自由基損傷學(xué)說、鈣超載學(xué)說及中醫(yī)的血流變學(xué)說等。中醫(yī)學(xué)對老年性癡呆病位、病因、病機(jī)有獨(dú)到的認(rèn)識。中醫(yī)辨證論治理論認(rèn)為，無 論血管性癡呆或阿爾茨海默病，都主要表現(xiàn)為中醫(yī)“神”的病變。中醫(yī)認(rèn)為痰濁、瘀血是加 速腦衰老導(dǎo)致老年癡呆的重要因素，心腎不足、氣虛血虧、陰損精衰是發(fā)病的核心，而痰瘀 火邪的作用只是發(fā)病的重要因素。辨證論治是中醫(yī)的特色與精華，在中醫(yī)對老年性癡呆的 治療中占主導(dǎo)地位。因老年性癡呆的發(fā)病機(jī)制存在多種假說，目前尚無一種假說能較完整的解釋老年 性癡呆，因此盡管臨床治療老年性癡呆的藥物種類很多，但還沒有特效藥物，目前用于治療老年性癡呆的藥物主要有改善膽堿能神經(jīng)傳遞藥、自由基消除劑和抗氧化劑、改善血液循 環(huán)和腦細(xì)胞代謝的藥物和鈣通道阻滯劑等。在老年性癡呆的治療上，中藥及其復(fù)方在緩解衰老及衰老相關(guān)疾病的防治方面有 著豐富的理論和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，具有整體調(diào)理、綜合施治的優(yōu)點(diǎn)，且毒副作用少，適宜長期服用， 尤其是中藥多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多方式的作用機(jī)制，治療AD具有明顯的優(yōu)越性，在AD治療中， 起到越來越重要的作用。中藥復(fù)方是根據(jù)中醫(yī)藥理論的作用機(jī)理，選用不同的組方，采用多種分析手段，從 多方位、多角度，全面而客觀地闡述了中藥復(fù)方制劑的促智作用。根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)研 究，選項(xiàng)出的有效中藥復(fù)方有補(bǔ)腎益智方是老年性癡呆的主要生化指標(biāo)、中藥補(bǔ)腎益智方 具有補(bǔ)腎、益氣、生髓、養(yǎng)腦作用，其含藥血清能有效地保護(hù)由淀粉樣蛋白引起的這些改變; 丹桅逍遙散使模型大鼠腦能量負(fù)荷、蛋白質(zhì)、糖醛還原酶信使含量降低；使模型的腦蛋白 質(zhì)、糖醛還原酶信使含量回升，減輕物質(zhì)代謝障礙。中醫(yī)藥治療老年性癡呆已經(jīng)積累了豐富 的經(jīng)驗(yàn)，具有整體調(diào)理、綜合施治的優(yōu)點(diǎn)，且毒副作用少，適宜長期服用，同時在保健預(yù)防及 調(diào)暢情志等方面有許多獨(dú)到之處，形成了較為系統(tǒng)的理論。但目前還存在一些不足，主要表 現(xiàn)在許多臨床研究中沒有采用統(tǒng)一的診斷、分型、療效評定標(biāo)準(zhǔn)，在組方、選藥、劑量上因人 而異，無法規(guī)范。治療老年性癡呆應(yīng)以早期診斷預(yù)防為主，并早日開發(fā)出療效確切的系列藥 物，促使中醫(yī)藥治療老年性癡呆的研究深入化和科學(xué)化，提高中醫(yī)藥治療老年性癡呆的臨 床療效，以造福人類。隨著人口的老齡化以及疾病譜的改變中醫(yī)中藥在防治老年性癡呆的 前景會越來越廣闊。目前尚無文獻(xiàn)報道僅僅由黃芩、川芎、當(dāng)歸三味原料藥制備成制劑，尤其是將這三 種藥合用用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變，未見相關(guān)研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種藥物組合物，該藥物組合物主要由黃芩、川芎和當(dāng)歸 組成，具有治療和緩解中樞神經(jīng)退行性病變的作用，尤其是具有治療和緩解老年癡呆、血管 性癡呆和輕度認(rèn)知障礙的作用。優(yōu)選地，本發(fā)明藥物組合物中，所述的主要原料藥黃芩、川芎和當(dāng)歸的重量配比為 黃芩5-20份，川芎5-15份，當(dāng)歸5-15份；更為優(yōu)選地，所述主要原料藥的重量配比為黃芩 10-15份，川芎8-12份，當(dāng)歸8-12份，更優(yōu)選為黃芩12-15份，川芎10-12份，當(dāng)歸10-12 份。本發(fā)明的目的還在于提供一種制備本發(fā)明藥物組合物的活性成分的制備方法，制 備本發(fā)明藥物組合物的活性成分時，先從原料藥中制備獲取川芎和當(dāng)歸揮發(fā)性成分，備用； 所得揮發(fā)性成分與經(jīng)水或與水相互溶的有機(jī)溶劑提取后的川芎、當(dāng)歸和黃芩清膏混合均 勻，即得藥物組合物活性成分，混合后的活性成分加入制藥上可接受的輔料，以制劑常規(guī)技 術(shù)制備所需的藥物單元劑型，如可以是顆粒、片劑、膠囊、滴丸、口服液、混懸液、乳濁液、注 射液等臨床所需的劑型。或者，本發(fā)明主要原料藥組合物的活性成分的提取制備方法可以是取處方量的 原料藥，粉碎合并后，以水或與水相互溶的有機(jī)溶劑提取1-4次，過濾，合并各次提取濾液， 濾液減壓濃縮后的活性成分提取物清膏，備用；提取物清膏加入制藥上可接受的賦形劑，混合均勻，以制劑常規(guī)技術(shù)制備所需的藥物單元劑型。本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，給出了具體制備本發(fā)明藥物組合物活性成分的方法，該方法包括(a)稱取處方量的黃芩、川芎和當(dāng)歸，粉碎成粗粉；(b)取黃芩，加水或30-80% 的乙醇提取，濾過，濾液濃縮得清膏I ； (c)取川芎、當(dāng)歸，混合，加水蒸餾，收集揮發(fā)油，備 用；藥渣所得水煎液濾過，濾液濃縮，得清膏II ； (d)將(b)、(c)步驟制備的清膏I、清膏II 和揮發(fā)油混合均勻，加入藥學(xué)上可接受飛賦形劑，以常規(guī)制劑工藝制備所需的單元劑型。本發(fā)明的再一優(yōu)選實(shí)施例中，給出了另一種途徑制備本發(fā)明藥物組合物活性成分 的方法，具體包括(a)稱取處方量的黃芩、川芎和當(dāng)歸，粉碎成粗粉；(b)取黃芩、川芎、當(dāng) 歸，混合，加水煎煮蒸餾，收集揮發(fā)油，藥渣水煎液過濾，濾液濃縮，得清膏；(c)將所得清膏 和揮發(fā)油混合均勻，加入藥學(xué)上可接受的賦形劑，以常規(guī)制劑技術(shù)制備所需的單元劑型。本發(fā)明中，所用的能夠與水相互溶的有機(jī)溶劑，可以是選自與水相互溶的甲醇、乙 醇、丙酮中的任意一種，優(yōu)選為與水相互溶的乙醇，更優(yōu)選為濃度為30% -80%的乙醇。本發(fā)明中，所用的提取方法可以是煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取或滲 漉提取中的任意一種方式，或者采用不同提取方法的組合。本發(fā)明中，制藥上可接受的賦形劑，是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常用賦形劑，根據(jù) 制成不同制劑的需要，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以從這些常規(guī)的賦形劑中做出選擇，以制備成所 需的單元劑型，所選用的賦形劑包括但不局限于填充劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑寸。在本發(fā)明一實(shí)施例中，給出了不同比例的本發(fā)明藥物組合物用于抗擬癡呆小鼠模 型的實(shí)驗(yàn)研究，從而得出本發(fā)明原料藥組合物較為優(yōu)選的原料藥的配比范圍。在本發(fā)明其它實(shí)施例中，給出了本發(fā)明主要原料藥較優(yōu)配比的提取物成分用于抗 東莨菪堿致擬癡呆小鼠、抗血管性癡呆模型小鼠、對小鼠軟腦組織循環(huán)的藥理實(shí)驗(yàn)，證明本 發(fā)明藥物組合物可用于相關(guān)中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的治療。本發(fā)明中，藥物組合物的形式還可以是從黃芩、川芎和當(dāng)歸中提取出單一有效成 分進(jìn)行單一活性成分組合配比以用于治療中樞神經(jīng)退行性病變，尤其是老年癡呆、血管性 癡呆和輕度認(rèn)知障礙的治療和緩解改善。本發(fā)明中，從主要原料藥黃芩、川芎和當(dāng)歸中提取 的單一活性成分分別為黃芩苷、藁本內(nèi)酯和阿魏酸，其中各活性成分間的重量配比為黃芩 苷18-24份，藁本內(nèi)酯10-15份，阿魏酸3-6份，優(yōu)選為黃芩苷20份、藁本內(nèi)酯12份、阿魏 酸4份。在本發(fā)明實(shí)施例中，還給出了優(yōu)選的黃芩苷、藁本內(nèi)酯和阿魏酸對小鼠癡呆和認(rèn) 知障礙模型的藥理研究。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明通過下述實(shí)施例進(jìn)一步闡明，但任何實(shí)施例或其組合不應(yīng)當(dāng)理解為對本發(fā) 明的范圍或?qū)嵤┓绞降南拗?。本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求書限定，結(jié)合本說明書和本領(lǐng) 域一般常識，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以清楚地明白權(quán)利要求書所限定的范圍。在不偏離本 發(fā)明的精神和范圍的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行任何修改或改 變，這種修改和改變也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施例1本發(fā)明顆粒劑的制備
處方黃芩150g川芎150g 當(dāng)歸50g稱取處方量的上述 藥，粉碎成粗粉，當(dāng)歸、川芎合并，加10倍重量的水，浸泡，采用 水蒸氣蒸餾的方法，提取收集所得揮發(fā)性成分，備用；水提液過濾，備用；濾渣與黃芩粗粉 合并，以水箭煮提取3次，過濾，合并濾液，所得濾液再與川芎、當(dāng)歸水提液合并，減壓濃縮 得清膏，將所得的揮發(fā)性成分加入到清膏中，混合均勻，清膏中加入淀粉和微晶纖維素，制 軟材，制粒、干燥、整粒，即得顆粒劑。實(shí)施例2本發(fā)明顆片劑的制備處方黃芩150g川芎IOOg 當(dāng)歸IOOg稱取處方量的原料藥，粉碎成粗粉，合并各原料藥材，加入20倍量的70%的乙醇， 浸泡過夜，待藥材浸透，采用滲漉法進(jìn)行滲漉提取，收集滲漉提取液，滲漉器內(nèi)適時加入新 鮮的70 %的乙醇補(bǔ)充，待滲漉液顏色變淡，滲漉提取完畢，合并收集的滲漉提取液，減壓濃 縮，得原料藥活性成分提取物清膏，備用；提取物清膏中加入淀粉、微晶纖維素、交聯(lián)羧甲基 纖維素，制軟材、制粒、干燥、整粒，所得顆粒再加入潤滑劑硬脂酸鎂，壓片，即得片劑。實(shí)施例3本發(fā)明膠囊劑的制備處方黃芩200g川芎50g當(dāng)歸50g稱取處方量的原料藥，粉碎成粗粉，合并川芎和當(dāng)歸，加10倍量的水浸泡至藥材 浸透，以水蒸氣蒸餾方法提取收集所得揮發(fā)性成分，備用；水提取液過濾，得濾液，濾渣再用 水提取兩次，過濾，將各次水提液合并，減壓濃縮，得清膏I ；黃芩加50%的乙醇回流提取3次，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮，得黃芩提取清 膏II ；將清膏I、II和揮發(fā)性成分合并均勻，加入糊精和微晶纖維素，制軟材、制粒、干 燥、整粒，將整好的顆粒裝入硬膠囊囊殼內(nèi)，即得硬膠囊劑。實(shí)施例4本發(fā)明滴丸劑的制備處方黃芩50g川芎150g 當(dāng)歸150g取處方量的的黃芩、川芎、當(dāng)歸，粉碎成粗粉，混合均勻，藥材粉末中加入10倍量 60 %的乙醇回流提取3次，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得活性成分提 取物藥粉。提取物藥粉，按照本領(lǐng)域常規(guī)的制劑技術(shù)，加入制備滴丸所需的賦形劑，制成滴丸 劑。實(shí)施例5本發(fā)明口服液的制備處方黃芩150g川芎150g 當(dāng)歸150g取處方量的黃芩、川芎、當(dāng)歸，粉碎成粗粉，合并，藥材中加10倍量的水至浸透，水 蒸氣蒸餾提取，收集揮發(fā)性成分備用；提取液過濾，藥渣再用水回流提取兩次，過濾，合并各 次水提取液，減壓濃縮至相對密度約為1. 05，加入所得的揮發(fā)性成分，并加入制備口服液所 需的防腐劑和助溶劑，制備成口服制劑。實(shí)施例6單一提取制備而得的有效成分片劑處方黃芩苷2g藁本內(nèi)酯1. 2g阿魏酸0. 4g稱取處方量的黃芩苷、藁本內(nèi)酯和阿魏酸，合并均勻，加入填充劑微晶纖維素和崩 解劑交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，以聚維酮的乙醇溶液為粘合劑，制軟材、制粒、整粒，所得顆粒中加入潤滑劑硬脂酸鎂，壓制成片。實(shí)施例7本發(fā)明藥物顆?？箶M癡呆小鼠模型的試驗(yàn)?zāi)憠A能學(xué)說認(rèn)為，癡呆患者腦內(nèi)Maynert基底核及海馬和新皮層區(qū)膽堿能神經(jīng)元 減少導(dǎo)致乙酰膽堿神經(jīng)遞質(zhì)水平降低，從而導(dǎo)致認(rèn)知功能及情緒行為的障礙。東莨菪堿為M 膽堿能受體阻斷劑，可阻斷乙酰膽堿對M受體的激動作用，造成學(xué)習(xí)記憶功能障礙，故采用 小鼠腹腔注射氫溴酸東莨菪堿液(SCOP)可造成學(xué)習(xí)記憶障礙，可模擬老年性癡呆患者的 學(xué)習(xí)記憶能力減退，可用于早期藥物的篩選。因此選擇避暗法中逃避潛伏期(S)和錯誤次 數(shù)作為考核指標(biāo)來進(jìn)行黃芩、川芎和當(dāng)歸三味中藥配伍配比比例篩選。 1實(shí)驗(yàn)材料1. 1 動物KM小鼠，體重18_22g，SPF級，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供，動物合 格證號川實(shí)動管質(zhì)SCXK (川)2004-16。小鼠在室溫22-24°C，明暗周期12h/12h條件下飼 養(yǎng)，除給藥、造模及試驗(yàn)程序外均自由飲水?dāng)z食。實(shí)驗(yàn)場地為國家中醫(yī)藥管理局成都中醫(yī)藥 大學(xué)中藥藥理三級實(shí)驗(yàn)室，編號TCM-2009-315。1. 2 藥物黃芩、川芎、當(dāng)歸均購自成都同仁堂藥店，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室王光志博 士鑒定，均為藥典正品，按照不同的劑量配伍配比比例，采用實(shí)施例2的方法制備成100% 標(biāo)準(zhǔn)提取液備用(標(biāo)準(zhǔn)提取液為每Iml提取液中含Ig生藥材)。氫溴酸東莨菪堿液(SC0P， 上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn))。安理申，衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號080709。1. 3試劑和儀器BA-200自動避暗測試儀(及測試箱)(小鼠)，由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)， ACHE試劑盒，南京建成生物工程所，批號20090606。2實(shí)驗(yàn)方法2. 1、藥物配比的正交設(shè)計選L9 (34)正交設(shè)計表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，見表1。表1黃芩、川彎和當(dāng)歸配比比例(g) 2. 1模型制備避暗實(shí)驗(yàn)組各組小鼠分別于第14日給藥后50min，除空白對照組外，其余各組小 鼠在避暗訓(xùn)練前l(fā)Omin，ip給予SCOP 2mg/kg體重(0. lml/10g體重)，造成小鼠記憶獲得 障礙模型?？瞻讓φ战Mip等量的N. S。2. 2分組與給藥小鼠適應(yīng)三天，120只小鼠隨機(jī)分成12組，10只/組，即正常對照組(A)、模型組 (B)、安理申陽性對照組(C)、D(黃芩川彎當(dāng)歸=1 1 1)、E(黃芩川芎當(dāng)歸= 1:2: 2)、F(黃芩川芎當(dāng)歸=1:3: 3)、G(黃芩川芎當(dāng)歸=2 1 2)、H(黃 芩川彎當(dāng)歸=2 2 3)、1(黃芩川彎當(dāng)歸=2:3: 1)、J (黃芩川彎當(dāng)歸 =3:1: 3)、K(黃芩川芎當(dāng)歸=3:2: 1)、L(黃芩川芎當(dāng)歸=3:3:2); 按0. 2ml/10g體重/天ig給藥，模型對照組、空白對照組給予等量生理鹽水，安理申組給藥 劑量為1. 3mg/kg體重；給藥15日，于第14、15日給藥后開始進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)試驗(yàn)。2. 3小鼠學(xué)習(xí)記憶能力測試(避暗法)2. 3. 1避暗訓(xùn)練避暗試驗(yàn)組小鼠于實(shí)驗(yàn)第14日ig給藥或蒸餾水50min后，除空 白對照組外，其余各組小鼠ip. SCOP造模，造模后IOmin后將動物背對洞口放入避暗箱明 室，適應(yīng)3min，通36V交流電，即刻計時，記錄5min內(nèi)各動物的潛伏期和錯誤次數(shù)。2. 3. 2避暗測試避暗組小鼠于實(shí)驗(yàn)第15日(避暗訓(xùn)練24小時后)ig給藥或N. S 60min后，同上法將小鼠放入避暗箱明室，同時通36V交流電、計時，記錄5min內(nèi)各動物的潛 伏期和錯誤次數(shù)。2. 4統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)采用“均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差”(XiSD )表示，運(yùn)用SPSS11. 5統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)
計分析。3 結(jié)果3. 1藥物對擬癡呆小鼠模型避暗法逃避潛伏期和錯誤次數(shù)的影響與正常對照組比較，模型對照組小鼠逃避潛伏期明顯縮短，錯誤次數(shù)顯著增多，有 顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)。與模型對照組比較，黃芩川芎當(dāng)歸不同配比方組和陽 性藥逃避潛伏期明顯延長，錯誤次數(shù)顯著減少，有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 05)。見表2。表2各配比組成藥物對小鼠逃避潛伏期和錯誤次數(shù)的影響(避暗法) 以逃避潛伏期為考察指標(biāo)，由表中極差大小顯示，各影響因素作用主次為B > A > C ；方差分析結(jié)果表明A、B因素有顯著性意義(P < 0. 05)，即黃芩、川芎用量為主要影響因 素，C因素?zé)o顯著性意義(P>0.05)，即當(dāng)歸用量影響較小，故配伍比例考慮以A3B3C1為 佳，即黃芩川芎當(dāng)歸的最終重量配伍比例為15 15 5。3. 2. 1以錯誤次數(shù)為指標(biāo) 表4黃芩川芎當(dāng)歸劑量配伍比例方差分析表(錯誤次數(shù)) 以錯誤次數(shù)為考察指標(biāo)，由表中極差大小顯示，各影響因素作用主次為A>B>C ； 方差分析結(jié)果表明A因素有顯著性意義(P < 0. 05)，即黃芩用量為主要影響因素，B和C 因素?zé)o顯著性意義(P > 0. 05)，即，川芎、當(dāng)歸用量影響較小，故配伍比例考慮以A3B1C1為 佳，即黃芩川芎當(dāng)歸的最終重量配伍比例為15 5 5。4、結(jié)論綜合逃避潛伏期和錯誤次數(shù)兩方面的因素，川芎用量對逃避潛伏期為主要影響因 素，但對錯誤此時不是主要影響因素，因此其用量可以選擇次優(yōu)水平，即B2 ；雖然C不是主 要影響因素，用量可以選擇C3，但同時考慮到川芎當(dāng)歸臨床一般都是作為藥對出現(xiàn)，因此，確定A3B2C2為最佳配伍，即黃芩川芎當(dāng)歸的最終重量配伍比例為15 10 10。在以下藥理實(shí)施例中，本發(fā)明實(shí)驗(yàn)藥物組合物組所用的藥材比例及活性成分制備方法采用實(shí)施例2所制備得到的活性成分提取物作為實(shí)驗(yàn)給藥藥物。實(shí)施例8本發(fā)明藥物顆粒抗東莨菪堿致擬癡呆小鼠的試驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)材料1. 1實(shí)驗(yàn)動物KM小鼠60只，體重20 士 2g，鼠齡45 50天，雌雄各半，均由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí) 驗(yàn)動物研究所提供，合格證號為SCXK (川)2004-15，在室溫22-24°C，明暗周期12h/12h條 件下飼養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食。1. 2藥品與試劑安理申，衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號080709。氫溴酸東莨菪堿液 (SCOP)，上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號6A18007。ACHE試劑盒，南京建成生物工程所，批 號 20090606。1. 3實(shí)驗(yàn)主要儀器及試劑DT-200小鼠跳臺測試儀(及測試箱)，成都泰盟科技有限公司BA-200自動避暗測試儀(及測試箱)，成都泰盟科技有限公司2實(shí)驗(yàn)方法2. 1分組及處理KM小鼠，雌雄各半，按體重及性別隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、安理申陽 性對照組和本發(fā)明藥物高、中、低劑量組以及實(shí)施例6的單一活性成分組，各組動物按 0.2ml/10g體重/天ig給藥，給藥劑量見表1。避暗、跳臺實(shí)驗(yàn)組各組小鼠分別于第14日 給藥后50min，除空白對照組外，其余各組小鼠在避暗訓(xùn)練、跳臺訓(xùn)練前l(fā)Omin，ip給予SCOP 2mg/kg體重(0. lml/10g體重)，造成小鼠記憶獲得障礙模型?？瞻讓φ战Mip等量的N. S。 各組小鼠在行為學(xué)試驗(yàn)結(jié)束時，立刻取腦組織，制備腦勻漿，按AchE試劑盒步驟說明測定 各組小鼠全腦AchE活性。2. 2小鼠學(xué)習(xí)記憶能力測試(1)避暗法①避暗訓(xùn)練避暗試驗(yàn)組小鼠于實(shí)驗(yàn)第14日ig給藥或蒸餾水50min后，除空白對 照組外，其余各組小鼠ip. SCOP造模，造模后IOmin后將動物背對洞口放入避暗箱明室，適 應(yīng)3min，通36V交流電，即刻計時，記錄5min內(nèi)各動物的潛伏期和錯誤次數(shù)。②避暗測試避暗組小鼠于實(shí)驗(yàn)第15日(避暗訓(xùn)練24小時后)ig給藥或N. S 60min后，同上法將小鼠放入避暗箱明室，同時通36V交流電、計時，記錄5min內(nèi)各動物的潛 伏期和錯誤次數(shù)。(2)跳臺法①跳臺訓(xùn)練跳臺試驗(yàn)組小鼠于實(shí)驗(yàn)第14日ig給藥或N. S 50min后，采用與避暗 實(shí)驗(yàn)相同的方法造小鼠記憶獲得障礙模型，IOmin后將各組小鼠放跳臺上，適應(yīng)3min，然后 給予32V交流電，即刻計時，記錄動物5min內(nèi)的潛伏期和錯誤次數(shù)。②跳臺測試跳臺組小鼠于實(shí)驗(yàn)第15日(跳臺訓(xùn)練24小時后)，土8給藥或15 60min后，同上法將小鼠放于跳臺上，同時給予32V交流電、并計時，記錄動物5min內(nèi)的潛伏期和錯誤次數(shù)。2. 3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS 15. 0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理。3 結(jié)果3. 1對小鼠逃避潛伏期和錯誤次數(shù)的影響(避暗法)表5藥物對小鼠逃避潛伏期和錯誤次數(shù)的影響(避暗法)(￡tS ) 注與模型組比較，*P < 0. 05廣P < 0. 01.由表5可知，與模型對照組比較，藥物各劑量組、安理申組能顯著延長小鼠的潛伏 期(ρ < 0. 05)，并減少5min內(nèi)小鼠的錯誤次數(shù)(ρ < 0. 05)。3. 2配伍組方(SZ)對小鼠逃避潛伏期和錯誤次數(shù)的影響(跳臺法)表6藥物組方對小鼠逃避潛伏期和錯誤次數(shù)的影響(跳臺法)() 注與模型組比較，*P < 0. 05廣P < 0.01由表6可知，與模型對照組比較，藥物各劑量組、安理申組能顯著延長小鼠的潛伏 期(ρ < 0. 05)，并減少5min內(nèi)小鼠的錯誤次數(shù)(ρ < 0. 05)。3. 3對記憶獲得障礙小鼠腦組織AchE活性的影響表7藥物組方對SCOP致記憶障礙模型小鼠腦內(nèi)AchE活性的影響(5±S ) 注與模型組比較，*P< 0. 05 ；**P < 0.01.由見表7可知，與模型對照組比較，藥物各劑量組、安理申組能顯著降低AchE活性 (P < 0. 05)。4 結(jié)論本發(fā)明藥物能顯著提高東莨菪堿所致擬癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，降低腦組織ACHE 活性。實(shí)施例9本發(fā)明藥物顆?？寡苄园V呆模型的試驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠，雌雄各半，SPF級，350_500g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所提供， 合格證號為SCXK (川)2004-15，在室溫22-24°C，明暗周期12h/12h條件下飼養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食。1.2藥品與試劑尼莫地平片，江蘇聚榮制藥集團(tuán)有限公司制造，批號080218 ；MDA、MAO試劑盒，南 京建成生物工程所，批號20091106、20091107。1.3實(shí)驗(yàn)主要儀器MT-200水迷宮，成都泰盟科技有限公司2實(shí)驗(yàn)方法2.1模型制備大鼠采用2-V0法永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈，空白組只分離雙側(cè)頸總動脈，不結(jié) 扎，術(shù)后每只大鼠每天im注射用青霉素鈉10萬單位抗感染，共3天，術(shù)中注意補(bǔ)水，術(shù)后注 意保溫，術(shù)后自由飼養(yǎng)一月后動物進(jìn)行分組給藥。2. 2分組與給藥造模大鼠SD大鼠50只，按體重分層隨機(jī)分為模型對照組、尼莫地平陽性對照組、 藥物高、中、低劑量組及實(shí)施例6處方組，另取10只同批大鼠作為空白對照組，各組動物按 lml/100g體重/天ig給藥，給藥劑量見表1，模型對照組、空白對照組給予等量生理鹽水， 連續(xù)給藥15日，于實(shí)驗(yàn)第11日給藥后開始進(jìn)行水迷宮行為學(xué)試驗(yàn)，前4天進(jìn)行定位航行實(shí) 驗(yàn)，第5天去平臺進(jìn)行空間搜索實(shí)驗(yàn)。2. 3Morris水迷宮測試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力MT-200水迷宮水池平分為4個象限，平臺位于SW象限中央，水溫24°C，水面高于平臺1.5cm，水中加牛奶至不透明，大鼠每日于SW象限中間位置面向池壁入水，實(shí)驗(yàn)時間為120s，前4天定位航行，由儀器自動記錄其潛伏期，平臺停留時間、平臺停留距離，經(jīng)過平 臺次數(shù)，若大鼠在120s未找到平臺，計為120s，實(shí)驗(yàn)后所有大鼠均臺上停IOs以增強(qiáng)記憶； 實(shí)驗(yàn)共5天，第五天去平臺，進(jìn)行空間搜索實(shí)驗(yàn)，時間為120s，空間搜索中，手動記錄其潛伏 期，并由儀器自動記錄其經(jīng)過平臺次數(shù)、平臺停留時間、平臺停留距離。結(jié)果見表8。2. 4大鼠海馬、血清MDA含量、MAO活性的測定各組動物學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)試驗(yàn)測試結(jié)束后，立即取海馬組織凍存?zhèn)溆茫⊙⒎?離血清，按試劑盒說明進(jìn)行大鼠海馬、血清MDA含量與MAO活性的檢測。結(jié)果見表9和表 10。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. 1藥物對鼠空間搜索能力的影響表8藥物組方對VD模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響(5±S ) 注與模型組比較，*Ρ < 0. 05廣P < 0.01.由表8可知，與模型對照組比較，藥物各劑量組能顯著縮短大鼠的逃避潛伏期(P <0.01)，并增加120s內(nèi)大鼠的經(jīng)過平臺次數(shù)(p<0. 05)、平臺停留時間(p<0. 05)、平臺 停留距離(ρ <0.05)。3. 2對大鼠海馬組織、血清MDA含量、MAO活性的影響表9對大鼠海馬組織MDA含量、MAO活性的影響(5±S ) 注與模型組比較，*P< 0. 05 ；**P < 0.01.表10對大鼠血清MDA含量、MAO活性的影響 注與模型組比較，*P< 0. 05 ；**P < 0.01.由表9和表10可知，與模型對照組比較，藥物各劑量組、尼莫地平組能顯著降低大 鼠海馬組織、血清MDA含量、MAO活性(ρ < 0. 01)。4、結(jié)論本發(fā)明藥物可以顯著提高血管性癡呆模型的學(xué)習(xí)記憶能力，降低海馬組織和血清 中MDA及MAO的活性。實(shí)施例10本發(fā)明藥物顆粒對小鼠軟腦膜微循環(huán)試驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動物KM小鼠60只，體重20 士 2g，鼠齡45 50天，雌雄各半，均由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí) 驗(yàn)動物研究所提供，合格證號為SCXK (川)2004-15，在室溫22-24°C，明暗周期12h/12h條 件下飼養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食。1.2藥品與試劑尼莫地平片，江蘇聚榮制藥集團(tuán)有限公司制造，批號080218 ；重酒石酸去甲腎上 腺素注射液，上海禾豐制藥有限公司出品，批號0360602 ；1. 3實(shí)驗(yàn)主要儀器及試劑XTff-CTV微循環(huán)彩色電視顯微鏡，北京泰克儀器有限公司生產(chǎn)；2實(shí)驗(yàn)方法取小鼠60只，分為5組，即空白對照組、尼莫地平對照組、本發(fā)明藥物高、中、低劑 量組及實(shí)施例6處方配比組，每組12只。連續(xù)給藥7天后，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉 后，腹臥位頭部固定，顱頂正中皮膚“T”型切開，以矢狀縫外3mm，冠狀縫下3mm為中心，用手 術(shù)刀片掀開顱骨，暴露軟腦膜，形成一個直徑約5mm的顱窗，加入生理鹽水20ul，術(shù)后穩(wěn)定 30min后開始試驗(yàn)，整個試驗(yàn)過程保持動物體溫37°C。將實(shí)驗(yàn)動物置于微循環(huán)顯微鏡下選 擇直徑為30 50um微動脈血管，穩(wěn)定30min，測管徑大小，再滴加0. 1 % NAlOul，用XTW-CTV 微循環(huán)彩色電視顯微鏡借助于JS接目測微計連續(xù)觀察滴加NA后3、9min時微動脈血管管 徑大小的變化。同時觀察正常軟腦膜及滴加0. NA后微循環(huán)的血色、流態(tài)、每視野交織網(wǎng) 點(diǎn)數(shù)目。結(jié)果見表11、12、13、14。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. 1藥物對小鼠軟腦膜微動脈血管管徑的影響表11對小鼠軟腦膜微動脈血管管徑的影響(iB:S ) 注與空白對照組比較，*P < 0. 05，**P < 0. 01表12對小鼠軟腦膜微血管交織網(wǎng)點(diǎn)數(shù)目的影響(每視野娃S) 注與空白對照組比較，*P < 0. 05，**P < 0. 01表13對小鼠軟腦膜微血管血瘀模型流態(tài)的影響 注與空白對照組比較，*P < 0. 05，**P < 0. 01表14小鼠軟腦膜微血管血瘀模型血色的影響 注與空白對照組比較，*P < 0. 05，**P < 0. 01由表11 14可見，本發(fā)明藥高、中、低各劑量組均可改善由去甲腎上腺素所致的 大鼠軟腦膜局部微循環(huán)障礙，使微動脈血管擴(kuò)張，血流增快，每視野交織網(wǎng)點(diǎn)數(shù)增多，對血 流流態(tài)也有一定的改善作用，使血色變紅，與空白對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P < 0.05、P < 0. 01)。9分種后本發(fā)明藥各劑量組和陽性對照組軟腦膜局部微循環(huán)障礙基本恢復(fù)，而空 白對照組恢復(fù)不明顯。4 結(jié)論本發(fā)明藥有改善腦膜微循環(huán)的作用。綜上所述，本發(fā)明三個原料藥黃、川芎、當(dāng)歸配伍使用，可用于治療和緩解老年癡 呆、血管性癡呆或輕度認(rèn)知障礙諸癥，具有協(xié)同增效作用。
權(quán)利要求
一種藥物組合物，其特征在于，主要是由原料藥黃芩、川芎和當(dāng)歸組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的原料藥重量配比為黃芩 5-20份，川芎5-15份，當(dāng)歸5-15份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的原料藥重量配比為黃芩 10-15份，川芎8-12份，當(dāng)歸8-12份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的原料藥重量配比為黃芩 12-15份，川芎10-12份，當(dāng)歸10-12份。
5.一種制備權(quán)利要求1-4中任意一權(quán)利要求所述藥物組合物的活性成分的方法，其特 征是先制備獲取川芎和當(dāng)歸揮發(fā)性成分，備用；所得揮發(fā)性成分與經(jīng)水或與水相互溶的有 機(jī)溶劑提取后的川芎、當(dāng)歸和黃芩清膏混合均勻，即得藥物組合物活性成分，混合后的活性 成分加入制藥上可接受的賦形劑，以制劑常規(guī)技術(shù)制備所需的藥物單元劑型。
6.一種制備權(quán)利要求1-4中任意一權(quán)利要求所述藥物組合物的活性成分的方法，其特 征是取處方量的原料藥，粉碎合并后，以水或與水相互溶的有機(jī)溶劑提取1-4次，過濾，合 并各次提取濾液，濾液減壓濃縮后的活性成分提取物清膏，備用；提取物清膏加入制藥上可 接受的賦形劑，混合均勻，以制劑常規(guī)技術(shù)制備所需的藥物單元劑型。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征是所述的與水相互溶的有機(jī)溶劑為甲醇、乙 醇、丙酮中的任意一種或兩種；所述的提取可以是煎煮提取、回流提取、浸泡提取、超聲提取 或滲漉提取中的任意一種方式或其組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征是所述的與水相互溶的有機(jī)溶劑為30%-80% 的乙醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征是所述的原料藥是從黃芩、川芎和當(dāng)歸 中提取的單一活性成分，分別是黃芩中的黃芩苷，川芎中的藁本內(nèi)酯和當(dāng)歸中的阿魏酸，其 中所述黃芩苷、藁本內(nèi)酯和阿魏酸的重量比為黃芩苷18-24份，藁本內(nèi)酯10-15份，阿魏酸 3-6 份。
10.權(quán)利要求1-4或權(quán)利要求9中任意一權(quán)利要求所述組合物在制備具有治療和緩解 中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變藥物中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征是所述的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變?yōu)槔夏臧V 呆、血管性癡呆或輕度認(rèn)知障礙癥。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體提供了一種藥物組合物，主要由原料藥黃芩、川芎和當(dāng)歸組成。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明藥物組合，具有解毒通絡(luò)，益智醒神功效，即能夠有效改善癡呆或認(rèn)知障礙的認(rèn)知功能，改善行為學(xué)異常，提高患者生命質(zhì)量，也能有效針對腦細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷、微炎癥損傷，具有治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變，尤其是用于治療老年癡呆或血管性癡呆或輕度認(rèn)知障礙的作用。
文檔編號A61P9/00GK101869600SQ201010217290
公開日2010年10月27日 申請日期2010年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月5日
發(fā)明者代淵, 徐世軍, 辛文鋒 申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)