專利名稱：順鉑抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體及其制備，并作為注射液或注射 用凍干品，經(jīng)靜脈注射，由人源性抗肺癌單抗片段將順鉬隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)特異性 導(dǎo)向于肺癌細(xì)胞發(fā)揮作用，治療相應(yīng)的肺癌。
背景技術(shù)：
靶向給藥系統(tǒng)是指采用新技術(shù)、新工藝制備而成的、可使藥物濃集于作用部位 的給藥系統(tǒng)。它能將藥物最大限度地輸送至靶器官或靶細(xì)胞，從而減小對(duì)非靶器官、非 靶細(xì)胞的影響，達(dá)到降低全身毒副作用，提高療效的目的?？煞譃槲锢砘瘜W(xué)靶向制劑、 被動(dòng)靶向制劑、主動(dòng)靶向制劑以及雙重和多重靶向制劑。物理化學(xué)靶向系利用磁場(chǎng)導(dǎo)向 或溫度、pH等因素實(shí)現(xiàn)靶向給藥。被動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)是利用不同組織部位、器官自然生 理特性的差異，攔截不同粒徑范圍的載藥微粒。若微粒表面被鏈狀親水聚合物修飾可在 血液環(huán)境中高度水合，形成表面水化層，既增加了穩(wěn)定性，又有隨時(shí)變化的空間構(gòu)象， 難于被血漿中的調(diào)理素識(shí)別、攝取，可規(guī)避機(jī)體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES，肝脾組織中分布豐 富)的清除，而具有隱形作用，在血液中長(zhǎng)循環(huán)，從而對(duì)血管滲漏性強(qiáng)的炎癥區(qū)、實(shí)體 瘤等實(shí)現(xiàn)更為有效的被動(dòng)靶向給藥。主動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)一方面可利用細(xì)胞特異性配體作為導(dǎo)向物質(zhì)，將載藥微粒導(dǎo) 向于細(xì)胞的特異性受體而發(fā)揮作用。另一方面，主動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)也可利用細(xì)胞表面 抗原與特異性抗體結(jié)合力很強(qiáng)，以癌表皮細(xì)胞為免疫原，通過(guò)抗體制備技術(shù)制得的特異 性單抗或其經(jīng)酶切后的Fab或F(ab’)2片段。F(ab’)2片段來(lái)源用雜交瘤細(xì)胞株 4A10 (分類命名雜交瘤細(xì)胞株4A10，保藏日期2010年10月13日，保藏單位中國(guó) 典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏編號(hào)CCTCCC201090)細(xì)胞接種BALB/C小鼠腹腔 獲得腹水后，經(jīng)常規(guī)鹽析及Pr0tein-GSephar0Se4B親和層析后，再經(jīng)胃蛋白酶沒(méi)切純化 后獲得。作為導(dǎo)向物質(zhì)，將載藥微粒特異性地導(dǎo)向于癌細(xì)胞發(fā)揮作用。去除單抗Fc片 段后的Fab或F (ab’)2片段可避免機(jī)體產(chǎn)生二次抗體，用其修飾的載藥微粒也可規(guī)避被 機(jī)體RES清除，但去除Fc片段有降低單抗免疫反應(yīng)特性的風(fēng)險(xiǎn)，相對(duì)而言通常F (ab’ )2 片段較Fab更好。結(jié)合隱形作用和主動(dòng)靶向性的給藥系統(tǒng)，是抗癌藥研究的重要方向。類脂質(zhì)體是非離子表面活性劑單獨(dú)或與其它脂質(zhì)混合，在溶液中以自組裝方式 形成、結(jié)構(gòu)類似于生物膜的新型給藥系統(tǒng)。其結(jié)構(gòu)組成及體內(nèi)外性質(zhì)與脂質(zhì)體相似，但 因不含易氧化變質(zhì)的磷脂，而更加穩(wěn)定。并且它對(duì)親水藥物、疏水性藥物、難溶性藥物 均可包載，可調(diào)整藥物的體內(nèi)分布和釋放特性，大大增加藥物的生物利用度，降低藥物 的毒性，提高療效。因此，近年來(lái)類脂質(zhì)體新型給藥系統(tǒng)已經(jīng)成為藥物的包載與傳輸?shù)?研究熱點(diǎn)。順鉬(CDDP)是一種重金屬鉬的絡(luò)合物，為雙官能團(tuán)烷化劑，化學(xué)名為順式-二氯二氨鉬(II)，為黃色粉末狀結(jié)晶，在水中微溶，不溶于乙醇等一般有機(jī)溶劑， 溶于二甲基酰胺。它在1845年由M.Peyrone合成，1978年美國(guó)FDA批準(zhǔn)其用于臨床 治療癌癥。順鉬的發(fā)現(xiàn)帶動(dòng)了金屬配合物在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展，對(duì)于癌癥治療具有革命 性的意義。其抗癌作用特點(diǎn)有(1)為高效廣譜的抗腫瘤藥，可與作用靶點(diǎn)DNA形成 CDDP-DNA復(fù)合物而發(fā)揮作用，屬細(xì)胞周期非特異性藥物。對(duì)腫瘤抑制率為61% 98%,尤其對(duì)實(shí)體瘤和對(duì)一般化療藥不甚敏感的腫瘤療效較為顯著；(2)不僅能殺傷腫 瘤細(xì)胞，抑制細(xì)胞修復(fù)，還具有較強(qiáng)的放療增敏作用；(3)與多種抗腫瘤藥物有協(xié)同作 用，其毒性譜也與它們有不同，且無(wú)交叉耐藥性，因此易與其它抗腫瘤藥配伍，既有利 于臨床的聯(lián)合用藥，還可逆轉(zhuǎn)聯(lián)合化療的毒性。因此，長(zhǎng)期以來(lái)順鉬在抗癌藥中地位顯著。但是，目前臨床所用順鉬制劑，如中國(guó)藥典2010版和歐洲藥典2001收載的注射 用順鉬，英國(guó)藥典2000版收載的注射用順鉬和順鉬注射劑，均為對(duì)癌組織、癌細(xì)胞沒(méi)有 選擇性的普通注射劑，藥物的生物利用度低，毒副作用大。其存在的問(wèn)題主要表現(xiàn)為 (1)嚴(yán)重毒副作用順鉬及其代謝產(chǎn)物主要從腎臟排泄，故腎毒性大。另有胃腸道毒 性、耳毒性及神經(jīng)毒性等也不可忽視；(2)對(duì)某些癌細(xì)胞活性較低，如乳腺癌、結(jié)腸癌 等；(3)易產(chǎn)生耐藥性；(4)僅微溶于水，性質(zhì)不穩(wěn)定，見光分解，其水溶液在室溫中放 置后會(huì)發(fā)生水解而失效，并轉(zhuǎn)變?yōu)橛卸緟s無(wú)抑瘤作用的反鉬。鑒于近年來(lái)肺癌發(fā)病率、死亡率均高居各類癌癥之首，且比例仍在繼續(xù)升高的 問(wèn)題亟待解決，應(yīng)力求使給藥系統(tǒng)所傳遞的順鉬在進(jìn)入體內(nèi)后可規(guī)避RES清除，靶向于 癌組織、癌細(xì)胞，增加生物利用度，減少全身不良反應(yīng)，提高療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有順鉬制劑用于癌癥治療的不足，提供一種不同于普通制劑的順 鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)及其制備方法，包括抗肺癌細(xì)胞單抗、單抗 F(ab’)2片段的制備及其兩親性聚合物修飾物的制備、膽固醇-親水聚合物結(jié)合物的制 備、自組裝為表面有水化層和單抗片段的包載順鉬的抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體給藥 系統(tǒng)，并通過(guò)體內(nèi)外試驗(yàn)，證實(shí)順鉬主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體的隱形性、靶向性和抗肺癌 活性。其特點(diǎn)為同時(shí)具有長(zhǎng)循環(huán)的特性和高度的細(xì)胞靶向性，可規(guī)避RES的清除，使 藥物高度濃集于靶細(xì)胞，顯著提高藥物的生物利用度，從而高效低毒治療相應(yīng)肺癌。本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)1、本發(fā)明順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)中，每ml該隱形類脂質(zhì) 體混懸液由以下物質(zhì)組成順鉬0.5 10mg，經(jīng)抗肺癌細(xì)胞單克隆抗體的F(ab，)2片段 修飾的聚合物的溶液(A)0.05 0.16ml，膽固醇-親水聚合物(B)0.2 lOOmg，膽固醇 (C)0.2 90mg，表面活性劑(D)脂肪酸山梨坦(Span)、聚山梨酯(Tween) 0.5 60mg， 帶電荷的附加劑(E)—一帶負(fù)電荷的磷酸二鯨蠟酯或帶正電的十八胺、二甲基雙十八烷 基溴化銨O 20mg，緩沖溶液任一種pH3.6 9.5的硼酸鹽、磷酸鹽或碳酸鹽緩沖 溶液適量。其中，A和B為自制品，其余為市售產(chǎn)品。2、本發(fā)明順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的制備方法為處方量的脂溶性膜材B、C、D、E用有機(jī)溶劑溶解完全后，與順鉬混合超聲，再采用注入法或薄 膜法與含有聚合物_抗肺癌細(xì)胞單抗F(ab’ )2片段修飾物(水溶性膜材)溶液A的緩沖 溶液混合，在20-40°C下混合攪拌并超聲，脂溶性部分因疏水作用自動(dòng)聚集，親水性部分 自動(dòng)向外舒張而自組裝成為類脂質(zhì)體，有機(jī)溶劑揮發(fā)后得到表面載有單抗片段的順鉬主 動(dòng)肺靶向隱形類脂質(zhì)體混懸液。3、本發(fā)明順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，是注射劑或注射用凍干 品。以甘露醇為凍干保護(hù)劑，順鉬類脂質(zhì)體凍干品，以及用同樣處方更換主藥制得的維 甲酸類脂質(zhì)體凍干品，均可于4°C避光長(zhǎng)期保存。本發(fā)明所采用自制抗肺癌細(xì)胞單克隆抗體的F(ab’)2片段修飾的聚合物、自 制膽固醇與親水聚合物的結(jié)合物及其它輔料，以自主裝方式制備所得順鉬抗肺癌主動(dòng)靶 向隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的混懸液，可直接靜脈注射使用，也可制成凍干粉針使用。 其平均粒徑為l.lym，Zeta電位為-65.0mv，包封率為(71.25士 1.14) %，載藥量為 (8.81 士0.23) %，釋放規(guī)律符合 Weibull distribution 模型，擬合方程為lnlnlOO/(100-Q) =0.37851nt-1.4299 (r2 = 0.9596)，t1/2 = 17h，264 小時(shí)累積釋放量(Q264h) = 94.21%。細(xì) 胞試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，表面用蛋白修飾的隱形類脂質(zhì)體與類脂質(zhì)體相比較，規(guī)避巨噬細(xì)胞的 吞噬的作用可提高65.84% 22.55%，具有顯著性差異；對(duì)癌細(xì)胞的抑制與原藥活性一 致，沒(méi)有顯現(xiàn)原藥以外的毒性。在正常大鼠體內(nèi)的試驗(yàn)結(jié)果表明，該給藥系統(tǒng)進(jìn)入血液 后釋放緩慢，且沒(méi)有突釋效應(yīng)，AUCVt= 11.368，藥物的生物利用度高；在各主要器官 的分布由大到小為心、腎、脾、肺、肝。然而在接種了肺癌細(xì)胞后的裸鼠體內(nèi)抗癌藥 效試驗(yàn)結(jié)果表明，藥物在非靶器官心、肝、腎中下降34.19% 82.85%，脾中變化不明 顯；對(duì)靶標(biāo)腫瘤組織增加25.40%，肺組織增加209.57%，藥物的靶向分布作用顯著， 從而有利于癌癥治療。并且，與原藥相比，它的抑瘤率提高80.34%。組織切片結(jié)果顯 示了它不僅能顯著抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，還具有控制轉(zhuǎn)移的作用。總之，經(jīng)動(dòng)物體外、體 內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)，該給藥系統(tǒng)具有明顯的緩釋作用，并可靶向性地發(fā)揮抗癌作用，抑制腫瘤 生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移作用顯著，尚未發(fā)現(xiàn)有明顯的毒性，還可降低原藥的局部刺激性，展示了該 給藥系統(tǒng)血液中的隱形性、對(duì)癌細(xì)胞的主動(dòng)靶向性和抗肺癌的活性，能充分發(fā)揮高效低 毒治療相應(yīng)肺癌的作用。


圖IBSA隱形類脂質(zhì)體的鏡下形態(tài)(X400)；圖2順鉬的累積釋放曲線/% (η = 3)；圖3普通類脂質(zhì)體與連接BSA的隱形類脂質(zhì)體在不同時(shí)間條件下的被吞噬率；圖4普通類脂質(zhì)體與連接BSA的隱形類脂質(zhì)體在不同濃度條件下的被吞噬率；圖5健康大鼠血液中的藥物濃度_時(shí)間曲線。培養(yǎng)物名稱雜交瘤細(xì)胞株4Α10保藏日期2010年10月13日保藏單位中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC保藏編號(hào)CCTCCC201090
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的制備過(guò)程，不僅可以將含有聚合物-抗體F(ab’)2片段結(jié)合物溶液的 緩沖溶液，與含處方量的順鉬和脂溶性膜材的有機(jī)相混合，通過(guò)自組裝過(guò)程制得表面連 接有抗肺癌單抗片段的隱形類脂質(zhì)體，還可通過(guò)處方調(diào)整，采用同樣的制備過(guò)程，制備 得到表面帶不同電荷的順鉬類脂質(zhì)體、表面帶不同蛋白質(zhì)的順鉬隱形類脂質(zhì)體，以及順 鉬類脂質(zhì)體和順鉬隱形類脂質(zhì)體。在主要處方成分及用量基本不變前提下，調(diào)整個(gè)別處方成分與比例，得到表面 不帶電荷的普通類脂質(zhì)體與帶正電荷的類脂質(zhì)體、負(fù)電荷的類脂質(zhì)體；通過(guò)分別加入 Chol-PEG4000, Chol"PEG6000, Chol"PVA> Chol-Plu> Plu 等兩親性物質(zhì)，得到不同的 順鉬隱形類脂質(zhì)體；以Plu-BSA、Plu-OVA或Plu-單抗片段修飾物調(diào)整隱形類脂質(zhì)體的 處方，在20 40°C條件溫和地制得表面進(jìn)行蛋白質(zhì)修飾或單抗片段修飾的順鉬隱形類脂 質(zhì)體。將制得的各種類脂質(zhì)體混懸液保存于4°C，用于有關(guān)性質(zhì)研究。對(duì)BSA、OVA連接到類脂質(zhì)體表面的性質(zhì)特點(diǎn)的研究，不僅為連接單抗片段的 工作提供經(jīng)驗(yàn)，也提供了觀察性質(zhì)相近、分子量不同的系列蛋白質(zhì)對(duì)隱形類脂質(zhì)體表面 的影響的條件。另外，本發(fā)明還可通過(guò)調(diào)整模型藥物一主藥，制備得到維甲酸隱形類脂質(zhì) 體。經(jīng)過(guò)對(duì)部分考察項(xiàng)目進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)順鉬主動(dòng)肺靶向隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)， 對(duì)模型藥物沒(méi)有特定要求，可以采用同樣處方，包載不同性質(zhì)的藥物。當(dāng)其包載水溶性 藥物時(shí)藥物處于類脂質(zhì)體的雙分子層中間；而當(dāng)其包載疏水性藥物時(shí)，藥物位于類脂質(zhì) 體的疏水內(nèi)腔中。因此該領(lǐng)域技術(shù)熟練者，對(duì)該處方作非實(shí)質(zhì)性調(diào)整，還可應(yīng)用于包載其它各類 藥物。實(shí)施例Iig合4勿-抗痛細(xì)朐,單克降抗體F(ab’ ^rmmm (α)的泡丨備抗肺癌單克隆抗體及其Fab片段的制備、分離純化和鑒定方法按常規(guī)方法進(jìn) 行。以人肺鱗癌(云南矽肺癌，YTMLC-90)細(xì)胞株，按常規(guī)單抗制備與純化后進(jìn)行酶 切。以試驗(yàn)組(YTMLC-90)、小細(xì)胞肺癌(NCL-H446)、肺腺癌(A2)和對(duì)照組(人支氣 管上皮細(xì)胞HBE)，分別做免疫組化和Western-blot試驗(yàn)證實(shí)，具有肺癌靶向性。為避免 修飾類脂質(zhì)體表面后，作為異體蛋白的單抗有Fc片段，被血漿中的特異蛋白發(fā)現(xiàn)、被內(nèi) 皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除，也為避免單抗異體蛋白激活機(jī)體的免疫反應(yīng)產(chǎn)生二次抗體，在獲得抗 肺癌單抗后，用胃蛋白酶切除其Fc片段并與F(ab’)2片段分離，純化后所得F(ab’ )2 片段經(jīng)電泳鑒定分子量。ELISA夾心法測(cè)定單抗及其F(ab，)2片段活性，結(jié)果二者活性 基本一致。于4°C保存。聚合物-單抗F (ab’)2片段修飾物(A)的合成方法為將末端含有羥基的聚合 物PluronicF68(簡(jiǎn)稱Plu)，與丁二酸酐溶于無(wú)水吡啶，40 90°C反應(yīng)2 8h后，將減 壓蒸除吡啶所得粘稠物溶于水后，水層經(jīng)無(wú)水乙醚洗滌、氯仿萃取，干燥后的氯仿層經(jīng) 過(guò)濾、濃縮后，用無(wú)水乙醚沉淀產(chǎn)物，乙酸乙酯重結(jié)晶。產(chǎn)物經(jīng)12 72h透析后旋轉(zhuǎn) 蒸餾至干，得白色蠟狀固體，以DMF溶解后，攪拌下將該溶液滴入N-羥基丁二酸亞胺(NHS)和二環(huán)已基碳二亞胺(DCC)的DMF溶液中，攪拌至生成聚合物活化酯R(可與 蛋白質(zhì)的ε-氨基反應(yīng))，離心后將上清液緩慢滴入0.01 2g · L—1的單抗F(ab，)2片 段溶液(與R的摩爾比=1 10 1000)中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1 10h，混合于0.005 0.2mol NaHCO3溶液中，即得相應(yīng)的單抗片段修飾的兩親性聚合物的溶液A。4°C保 存。另以同樣方法，以牛血清白蛋白BSA、卵清蛋白OVA制備了 Plu-BSA、Plu-OVA, 供制備對(duì)照品用。2親水聚合物-膽固醇(B)的合成根據(jù)末端含有羥基的親水性或兩親性大分子聚合物，如聚乙二醇(PEG)、聚 乙烯醇(PVA)、PluroniCF68 (Plu)等親水性或兩親性大分子物質(zhì)，可采用合成路線PEG -OH+(CH3CO)20+CH3S0CH3 —PEGOCH2CHO得到聚合物縮醛(稱聚合物-醛)，即以二 甲亞砜(DMSO)為溶劑，在室溫下與乙酸酐反應(yīng)，得到相應(yīng)的縮醛衍生物聚合物-醛。 再與膽固醇在無(wú)水乙醇和稀鹽酸中回流反應(yīng)，逐步經(jīng)水、稀氫氧化鈉溶液精制處理，抽 濾后干燥，即得相應(yīng)親水性聚合物-Chol的結(jié)合物B。3.表面·雜Μ"臓丨_棚市舶隱肩讓本_1將前述處方量的脂溶性膜材B、C、D、E用有機(jī)溶劑溶解完全后，與處方量順 鉬混合超聲，再采用注入法或薄膜法與含有聚合物-抗肺癌細(xì)胞單抗F(ab’)2片段修飾 物(水溶性膜材)溶液A的緩沖溶液混合，在20-40°C攪拌并超聲，有機(jī)溶劑揮發(fā)后得到 表面載有單抗片段的順鉬主動(dòng)肺靶向隱形類脂質(zhì)體混懸液。4、給藥系統(tǒng)的形態(tài)觀察倒置顯微鏡下觀察，見附圖1，結(jié)果微粒均勻度好，基本為圓形。5、給藥系統(tǒng)的平均粒徑及表面Zeta電位測(cè)定鑒于癌細(xì)胞帶負(fù)電性，為使主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體的腫瘤靶向藥效試驗(yàn)所檢驗(yàn) 的主動(dòng)靶向作用更為可靠，本發(fā)明制備的類脂質(zhì)體均帶有不同的負(fù)電性，將對(duì)類脂質(zhì)體 表面連接單抗后，排除正電荷對(duì)癌細(xì)胞的趨向作用，實(shí)現(xiàn)抗體-抗原特異性結(jié)合的主動(dòng) 靶向作用，進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果見表1。表1不同修飾的類脂質(zhì)體的平均粒徑及表面Zeta電位
No.Fdsafl-bsaI^-bsaf'ova1。:(3 3’)2Size(nm)6496395925331100Zeta(mv)-88.5-94.7-70.4-86.5-65.0其中，F(xiàn)bsa: BSA修飾的隱形類脂質(zhì)體；Fcjva: OVA修飾的隱形類脂質(zhì)體； FF(ab，)2: F(ab，)2修飾的隱形類脂質(zhì)體；Fla:處方中加DCP (可增加負(fù)電性)的BSA 隱形類脂質(zhì)體；F2_bsa:處方中加GC(可增加正電性，即部分抵消原有負(fù)電性)的BSA隱 形類脂質(zhì)體。從表1中可以看出(1)蛋白質(zhì)種類對(duì)隱形類脂質(zhì)體的粒徑有影響，F(xiàn)bsa的粒徑大于Fota,兩者電位 無(wú)顯著差異；(BSAMr = 67KD、OVAMr = 43KD)；(2)當(dāng)隱形類脂質(zhì)體表面連接抗體片段時(shí)，其粒徑和電位變化并沒(méi)有遵循上述(1)的規(guī)律，F(xiàn)F(ab，)2的粒徑超過(guò)lym，表面電位顯著降低，可能與F(ab，)2片段自身的 結(jié)構(gòu)和性質(zhì)有關(guān)；(3)不同帶電脂質(zhì)對(duì)隱形類脂質(zhì)體的粒徑、電位有不同程度的影響當(dāng)加入 DCP或GC時(shí)，制得的Fi_BSA、F2_BSA粒徑比Fbsa小，電位變化與帶電脂質(zhì)本身性質(zhì)一致， 但變化程度不太明顯，或由隱形類脂質(zhì)體表面的蛋白表現(xiàn)出的電負(fù)性，遮蓋了部分由帶 電脂質(zhì)引起的變化。且GC對(duì)隱形類脂質(zhì)體的粒徑和電位影響較DCP大。6、給藥系統(tǒng)的包封率測(cè)定將處方量類脂質(zhì)體混懸液全部轉(zhuǎn)入預(yù)先處理好的透析袋中，室溫下懸于透析介 質(zhì)(pH6.4的0.9%生理鹽水)中，120rpm攪拌，每隔0.5h更換透析液，1.5h后停止(此 時(shí)空白泡囊加處方比例的順鉬透析率為93%以上)，測(cè)定透析液中順鉬量之和即為游離 藥物的量；將透析袋內(nèi)類脂質(zhì)體全部轉(zhuǎn)入容量瓶中，用O.lmol · I/1鹽酸-異丙醇處理 后，測(cè)定袋內(nèi)藥物量。計(jì)算得到表面不同修飾的各類隱形類脂質(zhì)體的包封率，結(jié)果見表 2。表2不同修飾的隱形類脂質(zhì)體的包封率
權(quán)利要求
1.一種順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體，其特征在于抗癌藥順鉬是由抗肺癌單 抗F(ab’)2片段及親水性鏈狀聚合物修飾表面的類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)包載。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體，其特征在于每毫升 該隱形類脂質(zhì)體混懸液由以下物質(zhì)組成順鉬藥物0.5 10mg，經(jīng)抗肺癌細(xì)胞單克隆抗體的F(ab，)2片段修飾的聚合物的溶液0.05 0.16ml，膽固醇-親水聚合物0.2 lOOmg，膽固醇(chol) 0.2 90mg，表面活性劑0.5 60mg，帶電荷的附加劑O 20mg，緩沖溶液，適量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體，其特征在于是注射 劑或是以甘露醇為凍干劑所制得的注射用凍干品。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體，其特征在于所述的 表面活性劑選自脂肪酸山梨坦(Span)、聚山梨酯(Tween)中一種或兩種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體，其特征在于所述的 帶電荷的附加劑選自帶負(fù)電荷的磷酸二鯨蠟酯(DCP)，或選自帶正電的十八胺(GC)、二 甲基雙十八烷基溴化銨(DDAB)中的一種或兩種。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體，其特征在于所述的 緩沖溶液選自PH3.6 9.5硼酸鹽、磷酸鹽或碳酸鹽中一種或多種。
7.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體的制備方法，其特征 在于處方量的脂溶性膜材，用適量有機(jī)溶劑溶解完全后，與處方量順鉬混合超聲，再 采用注入法或薄膜法與含有聚合物_抗肺癌細(xì)胞單抗F (ab’ )2片段修飾物溶液的緩沖溶 液混合，在20-40°C下混合攪拌并超聲，脂溶性部分因疏水作用自動(dòng)聚集，同時(shí)親水性部 分自動(dòng)向外舒張而自組裝成為類脂質(zhì)體，有機(jī)溶劑揮發(fā)后得到表面載有單抗片段的順鉬 主動(dòng)肺靶向隱形類脂質(zhì)體混懸液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的順鉬抗肺癌主動(dòng)靶向隱形類脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于 所述的有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷中一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明涉及順鉑主動(dòng)肺靶向隱形類脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)。是由順鉑與自制聚合物-單抗F(ab’)2片段修飾物、自制膽固醇-聚合物結(jié)合物、膽固醇等通過(guò)自主裝方式制備得到的注射液或凍干品，應(yīng)用于治療人肺鱗癌實(shí)體瘤。該給藥系統(tǒng)的包封率為(71.25±1.14)％，載藥量為(8.81±0.23)％，細(xì)胞試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明具有明顯的藥物緩釋作用，并在血中可規(guī)避RES的清除，對(duì)荷相應(yīng)肺癌裸鼠癌塊生長(zhǎng)的抑制率比順鉑溶液提高80.34％，靶向性地發(fā)揮治療相應(yīng)肺癌的作用顯著，尚未發(fā)現(xiàn)有明顯的毒性，還可降低原藥的局部刺激性。
文檔編號(hào)A61K9/127GK102008438SQ20101053065
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2010年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月4日
發(fā)明者劉慧敏, 周映聰, 彭麗琳, 楊紅, 武晶晶, 黃娟 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)