具有雙淋巴靶向的抗腫瘤藥物載體制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及納米材料的制備領(lǐng)域，具體的設(shè)及一種具有雙淋己祀向的抗腫瘤藥物 載體制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 淋己轉(zhuǎn)移是實(shí)體瘤的重要轉(zhuǎn)移形式，也是腫瘤導(dǎo)致患者死亡的重要原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)， 臨床上60%惡性腫瘤患者初診時(shí)即已發(fā)生淋己轉(zhuǎn)移，且目前尚無一種有效的手段加W控制 和治療。因此，對(duì)淋己轉(zhuǎn)移腫瘤進(jìn)行祀向治療的應(yīng)用基礎(chǔ)研究具有重要的臨床現(xiàn)實(shí)意義。 陽00引透明質(zhì)酸化yaluronicacid,HA)是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)和胞間質(zhì)的只要成分，在維持 細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)及調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)活動(dòng)方面都起著重要的作用。HA不但具有良好的生物相容 性、可降解性、高粘彈性及非免疫原性等物理化學(xué)和生物學(xué)性質(zhì)，它可W與腫瘤細(xì)胞表面過 量表達(dá)的受體CD44相結(jié)合。因此，借助HA具有的腫瘤祀向性，W其為祀向材料構(gòu)建腫瘤祀 向藥物傳遞系統(tǒng)，己經(jīng)成為當(dāng)前祀向治療腫瘤的研究熱點(diǎn)。
[0004]LyP-I(CGNKRTRGC)是-種通過隧菌體展示技術(shù)甄選得到的環(huán)狀九膚，其不僅對(duì)腫 瘤具有祀向性，而且對(duì)淋己轉(zhuǎn)移腫瘤也具有祀向能力。LyP-I對(duì)原位腫瘤和淋己轉(zhuǎn)移腫瘤的 革己向性是基于其與p32蛋白的特異性結(jié)合而實(shí)現(xiàn)的。（FogalV,Zhang^KrajewskiS,et al.Mitochondrial/cell-surfaceproteinp32/gClqRasamoleculartargetintumor cellsandtumorstromaU].CancerRes,2008,68(17):7210-7218.)最近研究表明，p32 蛋白不僅在腫瘤細(xì)胞有表達(dá)，而且在腫瘤淋己管和腫瘤相關(guān)巨隧細(xì)胞也存高表達(dá)，使其成 為腫瘤診斷和治療的一個(gè)潛在祀點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽〇化]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，W臨床中使用最廣泛的抗腫瘤藥物為基礎(chǔ)，公開 一種具有雙淋己祀向的藥物載體的制備方法。制備WHA和LyP-I分子為基礎(chǔ)的祀向分子， 可W實(shí)現(xiàn)祀向定位正常淋己結(jié)中的腫瘤細(xì)胞及其轉(zhuǎn)移灶，進(jìn)而可W制備對(duì)正常淋己結(jié)中的 腫瘤細(xì)胞及其轉(zhuǎn)移灶具有祀向作用的載體材料，并賦予其多功能特性。該載體材料通過雙 級(jí)祀向作用祀向定位正常淋己結(jié)中的腫瘤細(xì)胞及其轉(zhuǎn)移灶，即一方面通過HA分子使得載 體材料通過靜脈注射后，經(jīng)淋己管主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)后進(jìn)入淋己結(jié)；另一方面通過LyP-I使得載體 材料實(shí)現(xiàn)對(duì)淋己結(jié)中的腫瘤細(xì)胞及其轉(zhuǎn)移灶的祀向定位。
[0006] 本申請(qǐng)的目的是通過W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 第一方面，本發(fā)明提供一種具有雙淋己祀向的抗腫瘤藥物載體的制備方法，所述 制備方法包括如下步驟：
[0008] 載藥殼聚糖納米粒子制備：將抗腫瘤藥物溶液加入到殼聚糖溶液中，攬拌；再加 入=聚憐酸鋼溶液，再攬拌，即得載藥殼聚糖納米粒子；
[0009] 雙淋己祀向抗腫瘤藥物載體制備：將所述載藥殼聚糖納米粒子分散于水中，加入 交聯(lián)劑、透明質(zhì)酸鋼、LyP-1，攬拌，即得雙淋己祀向抗腫瘤藥物載體。
[0010] 優(yōu)選地，所述抗腫瘤藥物包括阿霉素、奧沙利銷、卡銷，奈達(dá)銷、阿柔比星、多柔比 星注射液、表柔比星注射液、米托蔥釀注射液、博萊霉素注射液、平陽霉素、絲裂霉素注射 液、厄洛替尼、吉非替尼、伊馬替尼、達(dá)沙替尼、阿立必利、阿扎司瓊、昂丹司瓊、氯憐酸、美司 鋼、利妥昔單抗、替伊莫單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、阿那曲挫，氨魯米特，福美坦，依西美 坦片糖衣、替尼泊巧、依托泊巧，噴司他下、伊立替康、白消安、氮芥、卡莫斯下、羅莫司下、高 =尖杉醋堿、n冬酷胺酶、培口冬酶、阿糖胞巧注射液、氣脈巧、吉西他濱、卡莫?dú)?、多西他?注射液、長春地辛、長春新堿、紫杉醇、索拉菲尼、地西他濱、丙卡己阱中的至少一種；
[0011] 所述交聯(lián)劑為四異氯酸醋、丙二胺、聚乙二醇、聚丙二醇、=徑甲基丙烷、聚丙二醇 縮水甘油酸、a-甲基苯乙締、丙締臘、丙締酸、甲基丙締酸、乙二醒、正娃酸乙醋、正娃酸甲 醋、S甲氧基硅烷、對(duì)甲苯橫酸、對(duì)甲苯橫酷氯、二丙締酸-1,4-下二醇醋、二甲基丙締酸乙 二醇醋、丙締酸下醋、過氧化二異丙苯、過氧化雙2,4 一二氯苯甲酯、丙締酸、丙締酸徑乙 醋、丙締酸徑丙醋、甲基丙締酸、甲基丙締酸徑乙醋、甲基丙締酸徑丙醋、二乙締基苯、N-徑 甲基丙締酷胺、雙丙酬丙締酷胺、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽中的至少 一種。
[0012] 優(yōu)選地，載藥殼聚糖納米粒子制備的步驟中，所用溶液的重量份數(shù)包括：
[0013] 抗腫瘤藥物溶液 5~6份，
[0014] 殼聚糖溶液 4~5份，
[0015] S聚憐酸鋼溶液 1~2份。
[0016] 優(yōu)選地，載藥殼聚糖納米粒子制備的步驟中，所述再攬拌后得到載藥殼聚糖納米 粒子的懸浮液，對(duì)所述懸浮液離屯、、冷凍干燥可得載藥殼聚糖納米粒子的粉末；
[0017] 所述離屯、的轉(zhuǎn)速在10000~14000轉(zhuǎn)/min;所述冷凍干燥的設(shè)備為凍干機(jī)。
[0018] 優(yōu)選地，載藥殼聚糖納米粒子制備的步驟中，所述殼聚糖溶液的制備包括如下步 驟：將8~10份殼聚糖加入到4~5份的酸性溶液中，攬拌至少1個(gè)小時(shí)，待殼聚糖完全溶 解后，依次通過0. 45Jim和0. 22Jim的濾紙；
[0019] 其中，所述酸性溶液包括稀鹽酸、稀硫酸、稀硝酸、氯酸、草酸、亞硫酸、丙酬酸、憐 酸、亞硝酸、氨氣酸、甲酸、苯甲酸、丙締酸、乙酸、丙酸中的至少一種；其中，所述稀鹽酸的質(zhì) 量分?jǐn)?shù)為37%，稀硫酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%，稀硝酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。
[0020] 優(yōu)選地，載藥殼聚糖納米粒子制備的步驟中，所述=聚憐酸鋼溶液的制備包括如 下步驟：將4~5份立聚憐酸鋼加入到4~5份的水中，攬拌至少30分鐘，待S聚憐酸鋼完 全溶解后，依次通過0. 45Jim和0. 22Jim的濾紙。
[0021] 優(yōu)選地，載藥殼聚糖納米粒子制備的步驟中，所述抗腫瘤藥物溶液的制備包括：將 4~5份抗腫瘤藥物加入到4~5份的有機(jī)溶劑中，攬拌至少10分鐘直到藥物完全溶解；
[0022] 其中，所述有機(jī)溶劑包括2 -甲氧基乙醇、氯仿、1，1，2 -S氯乙締、1，2 -二甲氧 基乙燒、1，2, 3, 4 -四氨化糞、2 -乙氧基乙醇、環(huán)下諷、喀晚、甲酯胺、正己燒、氯苯、二氧雜 環(huán)己燒、乙臘、二氯甲燒、乙締基乙二醇、N，N-二甲基甲酯胺、甲苯、N，N-二甲基乙酷胺、 甲基環(huán)己燒、1，2 -二氯乙締、二甲苯、甲醇、環(huán)己燒、N-甲基化咯燒酬、乙醇、己醇中的至 少一種。
[0023] 優(yōu)選地，雙淋己祀向抗腫瘤藥物載體制備的步驟中，所用組分及其重量份數(shù)包 括：
[0024] 載藥殼聚糖繳繁緻子 8~10份， 水 4~5份， 交聯(lián)劑 1~2份， 透明質(zhì)酸鋼 0.5~1份， LyP-I 0,5--i份,；
[00巧]優(yōu)選地，雙淋己祀向抗腫瘤藥物載體制備的步驟中，所述攬拌后得到雙淋己祀向 抗腫瘤藥物載體懸浮液，對(duì)所述懸浮液離屯、、冷凍干燥可得雙淋己祀向抗腫瘤藥物載體粉 末；所述攬拌的時(shí)間至少為12小時(shí)，所述離屯、的轉(zhuǎn)速在10000~14000轉(zhuǎn)/min。
[00%] 第二方面，本發(fā)明提供一種基于所述制備獲得的雙淋己祀向抗腫瘤藥物載體。
[0027] 第=方面，本發(fā)明提供一種所述雙淋己祀向抗腫瘤藥物載體在腫瘤抑制中的應(yīng) 用。
[0028] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有W下優(yōu)勢：
[0029] 本發(fā)明制備過程簡單，可W-次性大量制備且能保持一個(gè)很高的載藥率。其物理 化學(xué)性能穩(wěn)定，能夠長時(shí)間保持均一的形貌而不發(fā)生團(tuán)聚。對(duì)腫瘤的祀向率高，能夠準(zhǔn)備定 位到淋己轉(zhuǎn)移瘤并在其中做停留，釋放抗腫瘤藥物。
【附圖說明】
[0030] 通過閱讀參照W下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、 目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯：
[003U圖1為本發(fā)明制備得到的抗腫瘤藥物載體的SEM圖。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。W下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù) 人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不W任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可W做出若干變形和改進(jìn)。運(yùn)些都屬于本發(fā)明 的保護(hù)范圍。 陽的引 連施倆I1
[0034] a、將8份殼聚糖加入到4份的1%醋酸溶液中，攬拌1個(gè)小時(shí)，待殼聚糖完全溶解 后，將溶液依次通過0. 45Jim和0. 22Jim的濾紙。
[0035] b、將5份=聚憐酸鋼加入到4份的去離子水中，攬拌30分鐘，待=聚憐酸鋼完全 溶解后，將溶液依次通過0. 45ym和0. 22ym的濾紙。
[0036] C、將4份紫杉醇加入到5份的甲醇中，攬拌15分鐘直到藥物完全溶解。
[0037] d、將5份紫杉醇甲醇溶液滴加到5份殼聚糖溶液中，在持續(xù)的磁力攬拌下，再將2 份=聚憐酸鋼溶液緩慢滴加到溶液中，攬拌30分鐘形成負(fù)載紫杉醇的殼聚糖納米粒子。隨 后在12000轉(zhuǎn)/min轉(zhuǎn)速離屯、，離出物再在凍干機(jī)中凍干得到負(fù)載紫杉醇的殼聚糖納米粒子 粉末。
[003引 e、將10份負(fù)載紫杉醇的殼聚糖納米粒子分散在5份去離子水中，加入1份 I-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鋼、0. 5份N-徑甲基丙締酷胺、0. 5份透明質(zhì)酸 鋼和0. 5份LyP-I，攬拌12小時(shí)后，在12000轉(zhuǎn)/min轉(zhuǎn)速離屯、，離出物再在凍干機(jī)中凍干得 到具有雙淋己祀向的負(fù)載紫杉醇的殼聚糖納米粒子粉末。
[0039] 用該方法制備得到的納米粒子粒徑為293nm，包封率為99. 1 %祀向效果良好。
[0040] 連施倆I2 陽OWa、將10份殼聚糖加入到5份的1%醋酸溶液中，攬拌1. 5個(gè)小時(shí)，待殼聚糖完全溶 解后，將溶液依次通過0. 45ym和0. 22ym的濾紙。
[00創(chuàng) b、將4份立聚憐酸鋼加入到4份的去離子水中，攬拌30分鐘，待S聚憐酸鋼完全 溶解后，將溶液依次通過0. 45ym和0. 22ym的濾紙。
[0043]C、將4份紫杉醇加入到4份的甲醇溶液中，攬拌10分鐘直到藥物完全溶解。
[0044] d、將5份紫杉醇溶液滴加到5份殼聚糖溶液中，在持續(xù)的磁力攬拌下，再