專利名稱：柴胡總多糖在治療急性肺損傷藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及中藥柴胡總多糖新的藥用用途。具體涉及柴胡總多糖在治療急性肺損傷藥物中的用途。
背景技術(shù)：
急性肺損傷(acute lung injury，ALI)為由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素導(dǎo)致的急性、進(jìn)行性加重的呼吸困難、難治性低氧血癥和肺水腫。是一種以肺血管內(nèi)皮細(xì)胞及肺泡上皮細(xì)胞損傷為病理特征的臨床上常見非特異性免疫反應(yīng)疾病，即為全身炎癥導(dǎo)致系統(tǒng)性功能障礙綜合征的肺部表現(xiàn)(章卓，萬敬員，羅福玲等.中草藥雜志，2008，39: 1196-1199.)。研究發(fā)現(xiàn)，誘發(fā)ALI模型的因素可分為細(xì)菌性的和非細(xì)菌性的。嚴(yán)重感染敗血癥、創(chuàng)傷、中毒、大量輸血、體外循環(huán)和彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)等均可導(dǎo)致ALI，而以嚴(yán)重感染最為常見，嚴(yán)重階段ALI的病死率高達(dá)40% (Mclntyre RC,Pulido EJ,Bensard DD, et al.Crit Care Med 2000，28 :3314-3331.)。內(nèi)毒素是經(jīng)典的誘發(fā)ALI模型的細(xì)菌性誘因之一，LPS進(jìn)入體內(nèi)后很容易被免疫防御系統(tǒng)識(shí)別，通過傳遞炎癥反應(yīng)的一些細(xì)胞介質(zhì)來引起肺部組織損傷。臨床研究表明，ALI主要癥狀表現(xiàn)為局部募集反應(yīng)、肺中性粒細(xì)胞聚集和促炎因子和介質(zhì)的大量釋放、肺內(nèi)皮及上皮細(xì)胞受損引起的彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫、 蛋白的大量滲出和髓過氧化物酶(MPO)活性的增強(qiáng)等。研究表明由中性粒細(xì)胞為主介導(dǎo)的肺局部炎癥反應(yīng)，是形成肺毛細(xì)血管通透性增高及肺水腫的病理基礎(chǔ)。柴胡為傘形科柴胡屬(Bupleurum)植物。是我國的傳統(tǒng)中藥和常用中藥，臨床應(yīng)用十分廣泛。其性味苦涼，有疏散退熱、疏肝解郁、升陽舉氣之功效(中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì)。中國藥典。一部。北京中國醫(yī)藥科技出版社，2010:263)，用于治療寒熱往來，胸滿脅痛，口苦耳聾，頭痛目眩等。早期的研究認(rèn)為，北柴胡的主要有效成分為柴胡皂苷和揮發(fā)油。藥理學(xué)研究證明，北柴胡具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫增強(qiáng)、保肝利膽、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等作用；與北柴胡相仿，小葉黑柴胡具有明顯的解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛和增強(qiáng)免疫功能的作用(趙玉珍，陶上乘，王英華等.中藥材，1998，21 (6) :307-309)。文獻(xiàn)報(bào)道北柴胡的提取成分(水提取成分，50%乙醇提取成分，氫氧化鋇提取成分)對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖，白細(xì)胞介素-2和腫瘤壞死因子的分泌水平，均有明顯的增強(qiáng)作用。文獻(xiàn)(張興權(quán)，陳鴻珊.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，1989,3(1) :31.)報(bào)道柴胡 (Bupleurum chinense DC)多糖能顯著增加脾系數(shù)；提高巨噬細(xì)胞和天然殺傷細(xì)胞功能；能提高病毒特異抗體滴度；能明顯增加淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和皮膚遲發(fā)超敏反應(yīng)，顯示免疫促進(jìn)作用。柴胡另一成分皂苷對(duì)小鼠TPA引起的皮膚慢性炎癥和二甲苯引起的耳殼炎癥有一定程度的抑制作用。以上研究均未涉及柴胡多糖，及其多糖對(duì)急性肺損傷的作用。綜觀國內(nèi)外的研究，均未見報(bào)道柴胡總多糖的治療急性肺損傷藥效及其藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供柴胡總多糖在治療急性肺損傷藥物中新的藥用用途及柴胡總多糖的制備方法。本發(fā)明所述的中藥柴胡包括北柴胡(Bupleurum chinense DC)和小葉黑柴胡 (Bupleurum smithii var. parvifolium)。本發(fā)明從上述中藥柴胡中分離提取得到總多糖提取物。整體動(dòng)物模型試驗(yàn)證實(shí)其具有較強(qiáng)的治療實(shí)驗(yàn)性急性肺損傷作用。本發(fā)明進(jìn)行了柴胡總多糖對(duì)急性肺損傷小鼠的治療作用實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果揭示，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖對(duì)急性肺損傷有治療作用。所述的柴胡總多糖可顯著降低肺組織濕重/干重比值、明顯抑制肺灌洗液中蛋白滲出、減少肺中性粒細(xì)胞聚集數(shù)量、降低髓過氧化物酶(MPO)活性，抑制腫瘤壞死因子(TNF-α)水平升高，血清一氧化氮(NO)升高也受到抑制。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)1、制備柴胡總多糖中藥柴胡包括北柴胡(Bupleurum chinense DC)和小葉黑柴胡(Bupleurum smithii var. parvifolium)。柴胡藥材以95%乙醇冷浸提取，濾過，藥渣于室溫下置通風(fēng)處晾干，然后用熱水提取3次，濾過，合并提取液，濃縮，離心，上清液以三氯醋酸去游離蛋白，離心，上清液用水透析3天，透析液濃縮至小體積后加乙醇至含醇量80%，離心，沉淀冷凍干燥即得總多糖提取物，收率達(dá)3%以上，多糖含量超過65%。所述的中藥柴胡包括北柴胡(Bupleurum chinense DC)和小葉黑柴胡(Bupleurum smithii var. parvifolium)。2、柴胡總多糖用于治療急性肺損傷試驗(yàn)1)單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)肺灌洗液離心，200μ 1 NS收集下層細(xì)胞沉積，打勻。0.05%龍膽紫染液稀釋后，光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞數(shù)。結(jié)果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖均可顯著降低小鼠單個(gè)核細(xì)胞數(shù)的增多(P < 0.001)。2)肺濕重/干重比測(cè)定右肺下葉置于濾紙，待濾紙吸干表面水分后稱重，以此為濕重；之后放置在37°C 培養(yǎng)箱烘干(> 7 )，直到兩次稱重，重量不再變化，稱得干重；計(jì)算肺組織濕重/干重比 (即W/D)。干濕比=濕重/干重。結(jié)果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖可顯著抑制小鼠肺濕重/干重比值的增高(P < 0. 01，P < 0. 05)。3)肺總蛋白測(cè)定考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)蛋白含量。牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 小鼠肺灌洗液離心。上清用生理鹽水稀釋?？捡R斯染液中加入待測(cè)樣品后，于自動(dòng)酶標(biāo)儀 (Labsystems Dragon) 540nm處讀取吸收度(A)值。結(jié)果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖可顯著抑制小鼠肺總蛋白水平的升高(P < 0. 001，P < 0. 01)。4)肺灌洗液MPO測(cè)定小鼠肺灌洗液離心。上清按MPO試劑盒說明書測(cè)定。結(jié)果顯示，與模型組相比，小葉黑柴胡和北柴胡總多糖可顯著降低小鼠肺灌洗液MPO的增高(P < 0. 05，P < 0. 01) ；20 和40mg/kg北柴胡總多糖也有一定的藥效，但沒有顯著性差異(P = 0. 07)。
5)灌洗液TNF-α測(cè)定小鼠肺灌洗液離心。上清按TNF-Ci試劑盒說明書測(cè)定。結(jié)果顯示，與模型組相比， 小葉黑柴胡和北柴胡總多糖均可顯著降低小鼠肺灌洗液TNF-Ci水平的升高(Ρ<0. 001)。6)血清NO測(cè)定取小鼠血，離心得血清。血清NO按Griss試劑法測(cè)定。結(jié)果顯示，與模型組相比， 小葉黑柴胡總多糖和北柴胡總多糖均可顯著降低小鼠血清NO水平的增高(P < 0. 001)。表1是急性肺損傷小鼠各指標(biāo)測(cè)定結(jié)果(X士SD)表 權(quán)利要求
1.柴胡總多糖在制備治療急性肺損傷藥物中的用途；所述的柴胡總多糖通過下述方法和步驟制備柴胡藥材以95%乙醇冷浸提取，濾過，藥渣于室溫下置通風(fēng)處晾干，然后用熱水提取3 次，濾過，合并提取液，濃縮，離心，上清液以三氯醋酸去游離蛋白，離心，上清液用水透析3 天，透析液濃縮至小體積后加乙醇至含醇量80%，離心，沉淀冷凍干燥即得總多糖提取物， 收率達(dá)3 %以上，多糖含量超過65 %。
2.按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的柴胡藥材選自北柴胡 Bupleurumchinense DC 或/J、卩十M柴古月 Bupleurum smithii var· parvifolium。
3.柴胡總多糖在制備防治重癥非典型性肺炎藥物中的用途。
4.柴胡總多糖在制備防治細(xì)菌性肺炎藥物中的用途。
5.柴胡總多糖在制備防治非細(xì)菌性肺炎藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及柴胡總多糖在制備防治急性肺損傷藥物中的用途。本發(fā)明從中藥柴胡中分離提取得到總多糖提取物，平均產(chǎn)物收率3.32％，多糖含量超過65％。所述柴胡總多糖提取物經(jīng)整體實(shí)驗(yàn)證實(shí)，對(duì)小鼠急性肺損傷有明顯的治療作用。所述柴胡總多糖能通過其抗炎機(jī)制，降低肺的毛細(xì)血管通透性、減輕肺水腫、抑制全身和肺部局部炎癥反應(yīng)，從而減少急性肺損傷。可用于制備防治細(xì)菌感染或非細(xì)菌感染等多種刺激因素引發(fā)的急性肺損傷藥物。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102475713SQ201010567850
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月26日
發(fā)明者力弘, 狄宏曄, 程小芹, 章蘊(yùn)毅, 謝俊云, 陳道峰 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)