含有肺炎球菌表面蛋白a的肺炎球菌疫苗的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及含有肺炎球菌表面蛋白A的肺炎球菌疫苗。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺炎球菌是主要的呼吸道病原性細菌，在兒童、成人中引起包含髓膜炎、敗血癥在 內(nèi)的侵襲性感染癥（Invasive pneumococcal (Iisease = IF1D)、社區(qū)獲得性肺炎。現(xiàn)有的肺炎 球菌疫苗抗原為決定該細菌的血清型的莢膜多糖，已知到目前為止存在至少93種血清型。
[0003] 在2000年，在美國引入了在多糖抗原中結(jié)合有無毒化白喉毒素（CRM197)的7價肺 炎球菌結(jié)合疫苗（PCV7)作為兒童用疫苗。引入PCV7后，由疫苗含有的7血清型的肺炎球 菌引起的侵襲性感染癥明顯減少，但由兒童和成人中的非疫苗含有血清型即血清型19A等 引起的IPD癥例增加的問題浮現(xiàn)。因此，在2010年，引入了在PCV7中進一步追加6血清型 的莢膜多糖體作為抗原的13價肺炎球菌結(jié)合疫苗（PCV13)，并已經(jīng)在美國在兒童、成人中 得到認可。
[0004] 另一方面，Croney等人收集接種PCV13前的2002~2010年間發(fā)病的來源于美國 亞拉巴馬州的兒童侵襲性感染癥的肺炎球菌株并進行了大規(guī)模調(diào)查，結(jié)果，僅含有60%的 PCV13中含有的血清型，其余的40 %的菌株含有PCV13中不含的17血清型（非專利文獻 1)。在日本，從2011年開始了對兒童接種PCV7的公費資助，在2012年報道了，與美國同樣 由非疫苗含有血清型引起的iro增加（非專利文獻2)。在現(xiàn)有疫苗中繼續(xù)追加非疫苗血清 型莢膜多糖體作為抗原是不現(xiàn)實的，可以說這暗示了基于莢膜多糖體的現(xiàn)有的肺炎球菌疫 苗的極限。
[0005] 為了彌補如上所述的現(xiàn)有肺炎球菌疫苗的缺點，作為肺炎球菌表層蛋白抗原之一 的肺炎球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A，以下記作"PspA"）作為新型 肺炎球菌疫苗抗原受到關(guān)注。已知PspA具有圖1所示的包含各結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)，在PspA的 a _螺旋和脯氨酸富集區(qū)存在對肺炎球菌顯示感染防御作用的抗體所識別的抗原表位（非 專利文獻3、4)。PspA根據(jù)其抗原表位區(qū)域的基因序列而大致分為三個家族，并進一步分為 六個被稱為支系的亞組。由臨床分離的肺炎球菌的PspA家族在家族1和2中占98%以上 (非專利文獻5)。已知PspA還作為病原因子發(fā)揮作用，抑制補體C3與肺炎球菌菌體表面 的結(jié)合（非專利文獻6)，另一方面，已知抗PspA特異抗體對PspA所具有的補體抑制活性發(fā) 揮拮抗性作用，顯示出對該細菌的感染防御活性（非專利文獻7、8)。據(jù)報道，該感染防御活 性也由交叉識別不同的PspA家族的抗體而產(chǎn)生（非專利文獻9)。另一方面，不同的PspA 的交叉反應(yīng)性具有多樣性（非專利文獻1〇、11)，因此認為篩選顯示更廣泛的交叉反應(yīng)的屬 于家族1和家族2的支系的組合對基于PspA的疫苗的開發(fā)是重要的。
[0006] 例如專利文獻1、2中記載了 PspA蛋白質(zhì)作為針對肺炎球菌感染的疫苗的免疫學(xué) 活性成分有用。
[0007] 非專利文獻12中，對家族1支系1的PspA與家族2支系4的PspA的融合蛋白和 家族1支系1的PspA與家族2支系3的PspA的融合蛋白的疫苗效果進行了研宄。另外， 非專利文獻13中，對家族1支系2的PspA與家族2支系4的PspA的融合蛋白的疫苗效果 進行了研宄。但是，對于這兩篇文獻中記載的PspA融合蛋白，沒有評價對表達支系5和6 的PspA的肺炎球菌的疫苗效果、對廣范圍的臨床分離肺炎球菌株的疫苗效果，尚未有實用 化的報道。
[0008] 現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0009] 專利文獻
[0010] 專利文獻1 :日本特公平6-504446號公報
[0011] 專利文獻2 :日本特表2000-503676
[0012] 非專利文獻
[0013] 非專利文獻 I :Croney CM, Coats MT, Nahm MH et al. 2012. PspA family distribution,unlike capsular serotype,remains unaltered following introduction of the heptavalent pneumococcal conjugate vaccine. Clin Vaccine Immunol. 19:891-896.
[0014] 非專利文獻2 :厚生勞動科學(xué)研究費補助金藥品/醫(yī)療器械等監(jiān)管科學(xué)綜合事業(yè)。 "新匕<開発$札亡11讓，肺炎球菌、口夕々彳；1^、1^等?各7夕千>?有効性、安全性 並以(二子?投與方法(二関玄3基礎(chǔ)的?臨床的研究"來源于兒童侵襲性感染癥的肺炎球菌 的免疫學(xué)分析。柴山恵吾。P46-53。平成24年3月
[0015] 非專利文獻 3 :McDaniel LS，Ralph BA, McDaniel DO et al. 1994. Localization of protection-eliciting epitopes on PspA of Streptococcus pneumonia between amino acid residues 192 and 260. Microb Pathog. 17:323-37.
[0016] 非專利文獻 4 :Daniels CC，Coan P，King J et al. 2010. The proline-rich region of pneumococcal surface proteins A and C contains surface-accessible epitopes common to all pneumococci and elicits antibody-mediated protection against sepsis. Infect Immun. 78:2163-2172.
[0017] 非專利文獻 5 :Hollingshead SK，Becker R，Briles DE. 2000. Diversity of PspA:mosaic genes and evidence for past recombination in Streptococcus pneumoniae. Infect Immun. 68:5889-5900.
[0018] 非專利文獻 6 :Tu AH，F(xiàn)ulgham RL，McCrory M et al. 1999. Pneumococcal surface protein A inhibits complement activation by Streptococcus pneumoniae. Infect Immun. 67:4720-4724.
[0019] 非專利文獻 7 :Ezoe H，Akeda Y，Piao Z，Aoshi T，Koyama S，Tanimoto T，Ken J.Ishii KJ，Oishi K. 2011. Intranasal vaccination with pneumococcal surface protein A plus poly (I:C)protects against secondary pneumococcal pneumonia in mice.Vaccine 29:1754-1761.
[0020] 非專利文獻 8 :Piao Z，Oma K，Ezoe H，Akeda Y，Tomono K，Oishi K. 2011. Comparative effects of toll-like receptor agonists on a low dose PspA intranasal vaccine against fatal pneumococcal pneumonia in mice. J Vaccines Vaccin 2:1,htt://dx. doi. org/10. 4172/2157-7560. 1000113
[0021] 非專利文獻 9 :Ren B，Szalai AJ，Hollingshead SK et al. 2004. Effects of PspA and antibodies to PspA on activation and deposition of complement on the pneumococcal surface. Infect Immun. 72:114-122.
[0022] 非專利文獻 10 :Darrieux M，Moreno AT，F(xiàn)erreira DM et al. 2008. Recognition of pneumococcal isolates by antisera raised against PspA fragments different clades. J Med Microbiol. 57:273-278.
[0023]非專利文