專利名稱：富里酸與氟康唑或兩性霉素b組合用于真菌感染的治療的制作方法
富里酸與氟康唑或兩性霉素B組合用于真菌感染的治療
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及一種富里酸和一種或多種抗真菌化合物的組合，用于治療處理或預(yù)防多種人體和動(dòng)物體的癥狀。富里酸是環(huán)境中有機(jī)物質(zhì)的腐敗期間形成的物質(zhì)之一。它在所有pH值條件下都溶于水，并且與同樣在腐敗過程中產(chǎn)生的腐殖酸相比，通常具有較低的分子尺寸和分子量，以及較低的色度。盡管富里酸以低濃度天然存在于土壤和水中，但難以分離。美國(guó)專利No. 4，912，256中描述了一種已知的通過煙煤的可控濕式氧化工藝生產(chǎn)醫(yī)藥用途的富里酸的工藝。國(guó)際專利公開W000/19999之前已公開了富里酸在治療炎癥、痤瘡、濕疹以及細(xì)菌、真菌和病毒感染中的用途。另外，美國(guó)專利4，999，202和5，204，368公開了包含富里酸、鹽或其衍生物的組合物，其具有抑菌或殺菌特性，且作為消毒劑是有效的。 源自煤的富里酸含有高濃度的重金屬，例如鋁、汞、鎘、鉻和鉛，這些重金屬必須在藥物制劑中避免。國(guó)際專利公開W02007/125492之前已公開了通過濕式氧化法得到源自碳水化合物的富里酸組合物(CHD-FA)。CHD-FA含有低含量的重金屬，因此這種組合物在藥物應(yīng)用上是尤其有用的。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供一種包含富里酸、鹽、酯或其衍生物以及一種抗真菌化合物的組合物，該抗真菌化合物選自氟康唑和兩性霉素B。富里酸、鹽、酯或其衍生物可以具有從酸性到堿性的任何pH值，例如，富里酸的pH值可以通過由酸轉(zhuǎn)變?yōu)辂}而升高，比如鈉鹽或鉀鹽。這可以通過向富里酸中加入合適的氫氧化物來實(shí)現(xiàn)。通常地，富里酸以酸的形式或以鹽的形式存在。優(yōu)選地，富里酸為通過W02007/125492中描述的方法制備的源自碳水化合物的富里酸(CHD-FA)。特別地，該CHD-FA可源自糖化物。通常地該CHD-FA的分子量不超過20，000道爾頓且元素鋁、汞、鎘和鉻的含量低。CHD-FA是通過將碳水化合物進(jìn)行濕式氧化，然后對(duì)反應(yīng)得到的產(chǎn)物進(jìn)行處理以除去基本上所有的分子量大于20，000道爾頓的酸性成分而制備得到的。氟康唑是一種已知的抗真菌試劑，并且被描述于例如，第14版的默克索引的第4122項(xiàng)。氟康唑可以以酯的形式施用，而且應(yīng)當(dāng)理解的是，本文以及權(quán)利要求所述的術(shù)語“氟康唑”包括氟康唑的酯以及其他合適的氟康唑的藥物形式。兩性霉素B也是一種已知的抗真菌試劑，并且描述于例如，第14版的默克索引的第585項(xiàng)。令人驚訝地，發(fā)現(xiàn)富里酸和氟康唑的組合的施用對(duì)氟康唑耐藥的真菌有效。特別地，富里酸和氟康唑的組合施用對(duì)氟康唑耐藥的假絲酵母菌有效。令人驚訝地，發(fā)現(xiàn)兩性霉素B以較低或無毒劑量在和富里酸組合并施用于真菌種類時(shí)是有效的。
本發(fā)明的組合物的形式之一包含有大約10ml/kg的大約O. 25-1%的富里酸、鹽、酯或其衍生物的溶液以及大約10ml/kg的氟康唑。本發(fā)明的兩性霉素B可以以對(duì)個(gè)體無毒的有效劑量出現(xiàn)在組合物中。更特別地，該組合物包含大約O. 25%的富里酸和大約O. 06mg/l至大約O. 5mg/l的兩性霉素B。根據(jù)本發(fā)明更進(jìn)一步的實(shí)施方式，提供一種包含如上所述的組合物作為活性成分的藥物組合物。該藥物組合物可以是適于口服或局部施用或其他適于施用的劑型。例如該藥物組合物可以制備成液體、片劑、膠囊或其類似物，或霜?jiǎng)┗蜍浉唷８鶕?jù)本發(fā)明的另一方面，提供一種如上所述的組合物或藥用組合物用于治療或預(yù)防人體或動(dòng)物體的疾病或癥狀的方法。該方法可以包括口服或局部施用或其他合適的施用 形式。該治療的人或動(dòng)物可以是免疫抑制的或免疫功能不全的。該疾病或癥狀可由于耐藥真菌弓I起。該疾病或癥狀可由酵母菌引起。優(yōu)選地，該疾病或癥狀是由假絲酵母菌引起。該疾病或癥狀可由曲霉囷或接合囷引起。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了如上所述的組合物在制備治療或預(yù)防人體或動(dòng)物體的疾病或癥狀的藥物組合物的用途。該藥物組合物可以是適于口服或局部施用或其他適于施用的形式。例如該藥物組合物可以制備成液體、片劑、膠囊劑或其類似物，或霜?jiǎng)┗蜍浉唷?br>

圖I顯示了白假絲酵母感染老鼠之后單獨(dú)使用不同濃度的CHD-FA或與氟康唑組合治療的腎臟組織的載菌量。
具體實(shí)施例方式耐藥性已經(jīng)成為治療由真菌劑引起的疾病和癥狀的主要問題。例如用氟康唑治療假絲酵母感染以及用兩性霉素B治療曲霉屬時(shí)，都產(chǎn)生了耐藥性。尤其是在用兩性霉素B治療曲霉屬時(shí)，不再有效。因?yàn)樗枰种魄箤俚臐舛葹?mg/l，而這對(duì)個(gè)體是有毒的。另外，免疫抑制或免疫功能不全病人的機(jī)會(huì)型真菌感染，難以用抗真菌試劑控制。因此需要對(duì)這些病人，尤其是服用抗癌藥物的癌癥病人或服用任何藥物導(dǎo)致免疫抑制的其他病人，的治療策略。有三項(xiàng)旨在評(píng)估富里酸抗特定生物體的抗真菌特性研究。在這些研究中使用的富里酸及其制備方法如W02007/125492中描述，下文將其稱為CHD-FA。簡(jiǎn)要地，該富里酸源自碳水化合物，特別地，糖類。該CHD-FA的分子量不超過20，000道爾頓，低含量的元素鋁、汞、鎘、鉻和鉛、銀、砷和鈹，即低于30ppm。CHD-FA是通過將所述碳水化合物進(jìn)行濕式氧化，然后對(duì)反應(yīng)得到的產(chǎn)物進(jìn)行處理以除去基本上所有的分子量大于20，000道爾頓的酸性成分而制備得到的。在第一項(xiàng)研究中，將白假絲酵母的腎臟載菌量作為評(píng)價(jià)單獨(dú)增加CHD-FA濃度或與抗真菌化合物氟康唑結(jié)合的效果指標(biāo)。結(jié)果顯示富里酸顯著增加了氟康唑的抗白假絲酵母的活性。在第二項(xiàng)研究中，通過在組織培養(yǎng)板上定量的菌落數(shù)評(píng)估單獨(dú)的富里酸或與結(jié)合抗真菌化合物兩性霉素B用于抗曲霉菌或接合菌的效果。在第三項(xiàng)研究中，通過在組織培養(yǎng)板上定量的菌落數(shù)評(píng)估氟康唑與富里酸結(jié)合用于抗耐藥菌株假絲酵母菌的效果。所有溶液均限定為重量百分比/體積。以下舉例僅限于示例的目的，且不以任何形式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。實(shí)施例I-體內(nèi)CHD-FA抗假絲酵母的效果I. I.新的抗生素耐藥調(diào)節(jié)劑，也被稱為源自碳水化合物的富里酸(CHD-FA)的物理性質(zhì)
CHD-FA被重新制成4%的溶液。在運(yùn)輸中于室溫及暗處保存該溶液。該4%的CHD-FA溶液為黃/棕色的略粘的溶液，且具有強(qiáng)烈氣味，在25°C下pH為2. I。I. 2.方法L 2. I監(jiān)管問是頁所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)按照UK內(nèi)政部第40/3101許可的侵襲性真菌病(許可證持有者DrPeter Warn)進(jìn)行并獲得當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會(huì)許可。所有實(shí)驗(yàn)由完成內(nèi)政部個(gè)人許可課程的
1、2和3部分的技術(shù)員進(jìn)行，這些技術(shù)員均持有現(xiàn)行的個(gè)人許可證。所有實(shí)驗(yàn)在曼徹斯特(Manchester)大學(xué)的生物服務(wù)單位里專用的Biohazard 2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行(該地點(diǎn)持有指定證書)。I. 2. 2動(dòng)物樽型使用老鼠進(jìn)行研究，雄⑶I鼠(遠(yuǎn)親雜交品系與Swiss鼠非常相似)供應(yīng)自查爾斯河(馬爾蓋特UK) (Charles River (Margate UK))并且無特定病原體(交付時(shí)為16_18g)。所有老鼠在免疫抑制時(shí)重量為20-22g。小鼠被安置在單獨(dú)的通風(fēng)籠中(IVCs)并配備HEPA過濾空氣。預(yù)熱壓處理箱內(nèi)配置有無菌aspen薄片基床。提供隨意使用的一次性包裝袋無菌水。提供隨意的標(biāo)準(zhǔn)鼠的食物(如果小鼠表現(xiàn)出敗血癥的跡象，則將食物潤(rùn)濕搗爛)。小鼠在22土 1°C下經(jīng)歷一個(gè)12小時(shí)的明暗周期，相對(duì)濕度為55-60%以及背景噪音< 60分貝。使用30G的一次性“胰島素Ionojects注射器(用于iv或ip給藥)或使用可重復(fù)使用的19G填喂針對(duì)動(dòng)物進(jìn)行處理。所有動(dòng)物在感染前3天均用單劑量200mg/kg的環(huán)磷酰胺(法瑪西亞(Pharmacia)公司)腹腔內(nèi)給藥(IP)進(jìn)行免疫抑制。這導(dǎo)致了在感染后持續(xù)3-4天的中性粒細(xì)胞減少產(chǎn)生極端的狀態(tài)。I. 2. 3實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間該實(shí)驗(yàn)在感染后持續(xù)53小時(shí)。I. 2. 4動(dòng)物組的大小為了結(jié)合研究動(dòng)物以每個(gè)處理組4只小鼠進(jìn)行處理。1.2. 5 感染小鼠用O. 2ml的FA7070的PBS懸浮劑+含I. 5 X IO5白假絲酵母/ml (即每只鼠3.0X104個(gè)酵母菌)的O. 05%吐溫80進(jìn)行感染。感染后所有小鼠，每日觀察至少4次。當(dāng)動(dòng)物超過實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)重程度時(shí)，對(duì)其進(jìn)行人道安樂死。I. 2. 6杭直菌處理對(duì)感染5小時(shí)后的小鼠進(jìn)行以下處理中的一種a)用填喂法給藥O. 125毫升的2 % CHD-FA (假設(shè)小鼠在處理時(shí)為25g)。CHD-FA 每日給藥兩次(總共給藥6劑)。b)用填喂法給藥O. 125毫升·的O. 5% CHD-FA (假設(shè)小鼠在處理時(shí)為25g)。CHD-FA 每日給藥兩次(總共給藥6劑)。c)靜脈注射給藥10mg/kg氟康唑的O. 25ml的5%葡糖溶液。d)用每日兩次口服給藥O. 125ml的2% CHD-FA與靜脈注射給藥10mg/kg氟康唑的5%葡糖溶液進(jìn)行組合治療。e)用每日兩次口服給藥O. 125ml的O. 5% CHD-FA與靜脈注射給藥10mg/kg氟康唑的5%葡糖溶液進(jìn)行組合治療。f)腹腔內(nèi)給藥O. 5mg/kg的兩性霉素B的5%葡萄糖稀釋液。g)載體處理的小鼠填喂法每日給藥兩次O. 125ml的O. 9%生理鹽水以及靜脈注射給藥O. 25ml的5%葡糖。I. 2. 7動(dòng)物實(shí)駘的結(jié)束感染后53小時(shí)，對(duì)所有的動(dòng)物使用附表I的程序進(jìn)行安樂死。所有動(dòng)物稱重，腎臟立即摘除，并在冰冷的無菌磷酸鹽勻漿緩沖生理鹽水中進(jìn)行勻漿。腎組織勻漿在沙氏葡萄糖瓊脂上進(jìn)行定量培養(yǎng)，并在37°C培育4天，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。I. 2. 8數(shù)據(jù)分析用數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的Kruskal-Wallis測(cè)試方法對(duì)來自培養(yǎng)載菌量的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。I. 3 結(jié)果I. 3. I腎臟載菌量腎臟載菌量的匯總示于圖I中。在該研究中,用CHD-FA治療后沒有副作用，而且研究在感染后53小時(shí)停止的原因在于載體處理組產(chǎn)生嚴(yán)重的感染。L 3. 2數(shù)據(jù)分析表I :Kruskal_Wallis :所有兩兩比較(科諾弗-英曼(Conover-Inman))
權(quán)利要求
1.包含富里酸、鹽、酯或其衍生物以及一種抗真菌化合物的組合物，該抗真菌化合物選自氟康唑和兩性霉素B。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述富里酸為CHD-FA。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的組合物，其中所述鹽包括鈉鹽或鉀鹽。
4.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的組合物，所述組合物包含大約10ml/kg的O.25% -1% (w/v)的富里酸溶液、鹽、酯或其衍生物以及大約10mg/kg的氟康唑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的組合物,所述組合物包含O.25% (w/v)的富里酸溶液、鹽、酯或其衍生物以及大約O. 06mg/l-0. 5mg/l的兩性霉素B。
6.包含前述任一項(xiàng)權(quán)利要求中所述的組合物作為活性成分的藥物組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，所述藥物組合物的劑型為液體、片劑、膠囊或其類似物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物為適于口服的劑型。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物為適于局部施用的劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，所述藥物組合物的劑型為霜?jiǎng)?、軟膏或液體。
11.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述的組合物或藥物組合物，所述組合物或藥物組合物為用在治療或預(yù)防人體或動(dòng)物體的疾病或癥狀的方法中的組合物或藥物組合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物或藥物組合物，其中所述疾病或癥狀是由耐藥真菌引起。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的組合物或藥物組合物，其中給藥方法是口服、局部給藥或其它適合的給藥形式。
14.根據(jù)權(quán)利要求11-13任一項(xiàng)所述的組合物或藥物組合物，其中所述動(dòng)物或人是免疫抑制的或免疫功能不全的。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的組合物在制備藥物組合物中的應(yīng)用，所述藥物組合物為用在治療或預(yù)防人體或動(dòng)物體的疾病或癥狀的方法中的藥物組合物。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其中所述藥物組合物的劑型為液體、片劑、膠囊或其類似物。
17.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的應(yīng)用，其中所述藥物組合物為適于口服的劑型。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其中所述藥物組合物為適于局部施用的劑型。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的應(yīng)用，其中所述藥物組合物劑型為霜?jiǎng)?、軟膏或液體。
20.根據(jù)權(quán)利要求15-19任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述疾病或癥狀是由于耐藥真菌引起。
21.根據(jù)權(quán)利要求15-20中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述動(dòng)物或人是免疫抑制的或免疫功能不全的。
22.根據(jù)權(quán)利要求15-21中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中給藥方法是口服、局部給藥或其它適合的給藥形式。
23.一種治療或預(yù)防人體或動(dòng)物體的疾病或癥狀的方法，包括施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的組合物或藥物組合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述疾病或癥狀是由于耐藥真菌引起。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中所述動(dòng)物或人是免疫抑制的或免疫功能不全的。
26.根據(jù)權(quán)利要求23-28中任一項(xiàng)所述的方法，其中給藥方法是口服、局部給藥或其它適合的給藥形式。
全文摘要
一種用于治療或預(yù)防人體或動(dòng)物體的疾病或癥狀的富里酸、鹽、酯或其衍生物以及選自氟康唑和兩性霉素B的一種抗真菌化合物的組合物。所述富里酸是CHD-FA。
文檔編號(hào)A61K45/06GK102724977SQ201080004896
公開日2012年10月10日 申請(qǐng)日期2010年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月19日
發(fā)明者彼得·沃恩, 斯蒂芬·威廉·萊維爾斯 申請(qǐng)人:納特阿西英國(guó)有限公司