專利名稱：具有延長的半衰期的藥物融合體和綴合物的制作方法
具有延長的半衰期的藥物融合體和綴合物本發(fā)明涉及具有改良的血清半衰期的藥物融合體和綴合物。這些融合體和綴合物包含免疫球蛋白(抗體)單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域和促胰島素(insulinotropic)分子和/或腸降血糖素(incretin)和/或腸肽(gut peptide)分子。本發(fā)明另外涉及包含這樣的藥物融合體和綴合物的應(yīng)用、制劑、組合物和裝置。本發(fā)明也涉及組合物，其包含超過一個(gè)作為融合體或綴合物的一部分而存在的促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子，也涉及所述組合物的應(yīng)用和制劑。
背景技術(shù)：
許多藥物具有能用于治療和/或診斷目的的活性，但由于給藥時(shí)，它們迅速地從機(jī)體清除，因此具有有限的價(jià)值。例如，許多具有治療用途活性的多肽通過腎臟迅速地從循環(huán)中清除。因此，為了獲得想要的治療效果或頻繁的給藥方案，必須施用大劑量。需要具有改良的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的改良的治療劑和診斷劑。
一類這樣的在體內(nèi)或體循環(huán)中具有短半衰期的藥物是腸降血糖素激素諸如胰高血糖素-樣肽I以及艾塞那肽(exendin)(例如艾塞那肽_4)和其它腸肽諸如PYY。胰高血糖素-樣肽(GLP) -I是一種腸降血糖素激素，具有有效的葡萄糖-依賴性的促胰島素作用和胰高血糖素抑制(glucagonostatic)作用、對(duì)胰腺P細(xì)胞的營養(yǎng)作用和對(duì)胃腸分泌和運(yùn)動(dòng)的抑制作用，這些結(jié)合起來來降低血漿葡萄糖和減小血糖波動(dòng)幅度。此外，通過其提高飽腹感的能力，GLP-I會(huì)降低攝食量，因此限制體重增加，甚至可以引起體重減輕(Drucker (2002) Gastroenterology 122:531-544，Giorgiano 等X (2006)Diabetes Research and Clinical Practice 74:S152-155)， Holt (2002) Diabetes/Metabolism Research and Reviews 18:430-441)?？傊?，這些作用會(huì)賦予 GLP-1 獨(dú)特的特征，被認(rèn)為用作抗糖尿病劑是相當(dāng)理想的，特別是由于其抗高血糖作用的葡萄糖依賴性會(huì)使嚴(yán)重低血糖的任何風(fēng)險(xiǎn)最小化。然而，它的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效動(dòng)力學(xué)特征使得天然GLP-I在治療上是無用的。因此，盡管連續(xù)給藥時(shí)GLP-I最有效，但是單次皮下注射具有短期效果。GLP-I對(duì)體內(nèi)酶降解是高度敏感的，二肽基肽酶IV (DPP-IV)的裂解可能是最相關(guān)的，因?yàn)檫@快速發(fā)生，并產(chǎn)生非促胰島素的代謝物(Metlein (1999) Regulatory Peptides85:9-244)。因此,基于對(duì)影響其代謝穩(wěn)定性和藥代動(dòng)力學(xué)/藥效動(dòng)力學(xué)特征的因素的理解，利用GLP-I的治療潛能的策略已經(jīng)成為熱切研究的焦點(diǎn)。已經(jīng)進(jìn)行了廣泛的工作，嘗試以使其降解減緩?fù)瑫r(shí)仍然保持生物活性的方式抑制肽酶或修飾GLP-I。W005/027978公開了具有延長作用特征的GLP-1衍生物。W002/46227公開了異種融合蛋白，其包括與GLP-I或類似物融合的多肽(例如，白蛋白)(這些類似物的公開內(nèi)容通過引用并入本文，作為可用于本發(fā)明中的GLP-I類似物的實(shí)例)。W005/003296、W003/06007UW003/059934公開了氨基融合蛋白，其中GLP-I已經(jīng)與白蛋白融合，以嘗試增加激素的半衰期。肽YY是由神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞響應(yīng)于飼喂而釋放的一種短(36個(gè)氨基酸)蛋白。循環(huán)中的PYY濃度在餐后增加，并在禁食時(shí)降低。它通過NPY受體發(fā)揮它的作用，從而抑制胃能動(dòng)性和增加結(jié)腸中的水和電解質(zhì)吸收。它由回腸和結(jié)腸中的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞響應(yīng)于膳食而分泌，且已經(jīng)被證實(shí)會(huì)減少食欲(Ballantyne (2006) Obesity Surgery 16:651-658，Batterham (2003) New England Journal of Medicine 349:941-8，Boey 等X (2007)Peptides 28:390-395，和 Karra 等X (2009) Journal of Physiology 587:19-25)。艾塞那肽-4是在鈍尾毒蜥(Gila monster)的唾液中發(fā)現(xiàn)的一種激素。它是GLP_1的激動(dòng)劑，并且還具有非常有效的促胰島素效應(yīng)。與GLP-I相比，艾塞那肽-4具有遠(yuǎn)遠(yuǎn)更長的體內(nèi)半衰期。在葡萄糖代謝和胰島素分泌的調(diào)節(jié)中，它表現(xiàn)出與人胰高血糖素-樣肽-I(GLP-I)類似的生物學(xué)性質(zhì)。艾塞那肽-4會(huì)增 加胰腺￠-細(xì)胞的葡萄糖-依賴性的胰島素分泌，抑制不適當(dāng)?shù)厣叩囊雀哐撬胤置?，并減慢胃排空(DeFronzo攀乂
Diabetes Care 28:5:1092-100，Edwards 攀 ylAmerican Journal of
Physiology:Endocrinology and Metabolism 281 :E155-162, Kolterman 攀 yl (2003)Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 88 (7): 3082-9,和Nielsen等X(2004)Regulatory Peptides 117:77-88)。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，存在對(duì)改良的組合物的巨大需求，所述組合物包含腸降血糖素和/或促胰島素劑和/或腸肽劑(諸如GLP-I肽、PYY、艾塞那肽)或具有促胰島素作用和/或腸降血糖素作用和/或減食欲作用的其它藥劑，且其可以用于醫(yī)學(xué)中，例如用于治療和/或預(yù)防代謝病癥諸如糖尿病和肥胖癥。因而需要提供新的治療性組合物，其包含含有腸降血糖素/促胰島素分子/腸肽的藥劑(例如GLP-1、艾塞那肽-4、PYY),以提供更有效的和更長持續(xù)時(shí)間的體內(nèi)作用，同時(shí)維持它們的低毒性和治療益處。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明因而提供了 (a)組合物，所述組合物包含單個(gè)分子(例如單個(gè)融合體或綴合物)(或由其組成)，所述單個(gè)分子包含選自腸降血糖素和/或促胰島素劑和/或腸肽的分子的組合(即2種或更多種)，它們例如作為融合體(化學(xué)的或遺傳的)或作為綴合物存在；或者，(b)組合物，所述組合物包含2種或更多種單獨(dú)的分子，其中每種單獨(dú)的分子包含一種或多種腸降血糖素和/或促胰島素劑和/或腸肽。這些組合物(a)和/或(b)也可以包含其它蛋白或多肽，例如延長半衰期的蛋白或多肽或肽，例如其可以結(jié)合血清白蛋白(例如人血清白蛋白)，例如dAb (結(jié)構(gòu)域抗體)，例如結(jié)合血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的dAb(Albudab )。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含單個(gè)融合體(化學(xué)的或遺傳的)或單個(gè)綴合物分子(或由其組成)，其中所述融合體或綴合物包含下述分子，或由其組成(a) 2種或更多種分子，所述分子選自促胰島素分子和/或腸降血糖素分子和/或腸肽(例如肽YY (PYY)肽、3-36 PYY、艾塞那肽-4、GLP例如GLP-I例如GLP-I (7-37)A8G突變體)，它們作為與(b )的單個(gè)融合體或綴合物存在，(b )結(jié)構(gòu)域抗體(dAb )，其特異性地結(jié)合血清白蛋白(例如DOM 7h-14 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)(DOM 7h_14的氨基酸序列顯示為圖 I (h): SEQ ID NO 8)，或例如 DOM 7h_14 -IO(Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h_14_10的氨基酸序列顯示為圖I (0): SEQ ID NO 15，或DOM 7h_ll_15 (DOM 7h_ll_15的氨基酸序列顯示為圖I (P): SEQ ID NO 16)，或例如具有R108C突變的DOM 7h_14 -IO(Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h-14-10 R108C的氨基酸序列顯示為圖I (r)SEQ ID NO 18)，或例如DOM 7h-ll -15 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)，或例如具有R108C突變的DOM 7h_ll -15 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h-ll-15 R108C的氨基酸序列顯示為圖I (t): SEQ ID NO 47)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述融合體或綴合物不是2xGLP-l (7-37) A8G D0M7h_14 dAb融合體(DAT0114，具有圖I (a) : SEQ ID NO I所示的氨基酸序列)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述單個(gè)融合體或綴合物包含下述分子，或由其組成PYY(例如PYY 3-36)和艾塞那肽(例如艾塞那肽-4)和一種或多種結(jié)合血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的dAb，例如本文所述的Albudab 中的任一種。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述單個(gè)融合體具有圖I (u) : SEQ ID NO 48所示的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明另外提供了組合物，以及當(dāng)它們單獨(dú)施用時(shí)或與任意合適的藥用賦形劑或添加劑一起配制時(shí)，它們的應(yīng)用(例如用于本文中關(guān)于組合所述的 任意用途)；所述組合物包含本文所述的或公開的單獨(dú)的融合體或綴合的分子中的任一種，或由其組成。本發(fā)明也提供了核酸，其編碼本文所述的任意單獨(dú)的融合體。在上述方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述腸降血糖素/促胰島素分子/腸肽分子可以是不同的腸降血糖素/促胰島素分子/腸肽分子，或它們可以是相同的。結(jié)合血清白蛋白的dAb (即 AlbudAb )也可以是在例如 WO 2006/059106 或 WO 05/118642 或 WO 2008096158或PCT/EP2009/053640或USSN 61/163,990中描述或提及的那些中的任一種。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明另外提供了一種組合物，所述組合物包含2種或更多種單獨(dú)的融合體或綴合物(或由其組成)，且其中每種單獨(dú)的融合體或綴合物包含下述分子，或由其組成(a)—種或多種分子，所述分子選自促胰島素分子和/或腸降血糖素分子和/或腸肽(例如PYY肽、3-36 PYY、艾塞那肽-4、GLP例如GLP-I例如GLP-I (7-37) A8G突變體)，它們作為與(b)的融合體或綴合物存在，(b)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)，其特異性地結(jié)合血清白蛋白(例如DOM 7h-14 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h_14的氨基酸序列顯示為圖I (h): SEQ ID NO 8)，或例如 DOM 7h_14 -IO(Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h_14_10 的氨基酸序列顯示為圖I (o): SEQ ID NO 15，或DOM 7h_ll_15 (DOM 7h_ll_15的氨基酸序列顯示為圖I (P): SEQ ID NO 16)，或例如具有R108C突變的DOM 7h_14 -IO(Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h-14-10 R108C的氨基酸序列顯示為圖I (r) SEQ ID NO 18)，或例如DOM7h-ll -15 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)，或例如具有R108C突變的DOM 7h_ll -15 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h-ll-15 R108C的氨基酸序列顯示為圖I (t) : SEQ ID NO 47)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該組合物可以包含一種或多種選自下述的分子在圖Ia-Ig和圖Im-IV和還在圖3中的那些，還有以及Dom7h-ll-15 (R108C) - PEG - 3-36 PYY (賴氨酸在位置10)分子(其具有圖3所示的結(jié)構(gòu)，但是所述AlbudAb組分是Dom7h-ll-15 (R108C) AlbudAb) 這樣的包含2種或更多種如上所述的融合體或綴合物(或由其組成)的組合物可以是組合的制備物，所述制備物用于同時(shí)地、分開地或相繼地用于治療中，例如用于治療或預(yù)防代謝病，諸如高血糖癥、葡萄糖耐受不良、P細(xì)胞缺乏、糖尿病(例如I型或II型糖尿病或妊娠糖尿病)、非酒精性脂肪變態(tài)性肝病(steatotic liver disease)、多囊卵巢綜合征、高脂血癥或肥胖癥或特征在于進(jìn)食過量的疾病，和/或用于調(diào)節(jié)能量消耗。
當(dāng)一起或順序地施用時(shí)，本發(fā)明的融合體或綴合物可以表現(xiàn)出協(xié)同作用(協(xié)同作用是指，當(dāng)施用時(shí)它們的作用超過當(dāng)單獨(dú)施用時(shí)各自的簡單累加作用)，例如作為組合的制備物，用于同時(shí)地、分開地或相繼地用于治療中，例如用于治療或預(yù)防代謝病，諸如高血糖癥、葡萄糖耐受不良、&細(xì)胞缺乏、糖尿病(例如I型或II型糖尿病或妊娠糖尿病)、非酒精性脂肪變態(tài)性肝病、多囊卵巢綜合征、高脂血癥或肥胖癥或特征在于進(jìn)食過量的疾病，和/或用于調(diào)節(jié)能量消耗。協(xié)同作用也可以源自超過一個(gè)腸降血糖素或促胰島素分子或腸肽在一個(gè)分子上的存在，或源自AlbudAb和腸降血糖素或促胰島素分子或腸肽的相互作用。在根據(jù)本發(fā)明的任一種組合物中，所述腸降血糖素和/或促胰島素分子和/或腸肽可以選自例如=PYY肽，例如3-36或13-36 ;艾塞那肽-4，GLP例如GLP-I例如GLP-I(7-37) A8G突變體，或它們可以是這些肽的突變體、類似物或衍生物，例如它們可以保留腸降血糖素/促胰島素活性。GLP、PYY、艾塞那肽可以是在WO 2006/059106中描述的那些中的任一種。這些肽的突變體、類似物或衍生物可以是保留腸降血糖素和/或促胰島素活性 的那些。當(dāng)作為與dAb的融合體(或綴合物)存在時(shí)，促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子(例如PYY、艾塞那肽、GLP-I等)可以連接至所述dAb的N-端或C-端，或連接在dAb序列內(nèi)的某點(diǎn)處。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種腸降血糖素和/或促胰島素分子和/或腸肽分子作為與dAb的N端的融合體(或綴合物)存在，并且一種或多種腸降血糖素和/或促胰島素分子和/或腸肽分子也作為與dAb的C端的融合體(或綴合物)存在。氨基酸連接物或化學(xué)連接物也可以任選地存在，其連接促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子(例如艾塞那肽-4和/或GLP-I)與例如dAb。所述連接物可以是例如螺旋連接物，例如圖l(k): SEQ ID NO 11所示的序列的螺旋連接物，或它可以是gly-ser連接物，例如具有在圖1(1): SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列。或者，所述連接物可以是例如PEG連接物，例如在圖3中所示的PEG連接物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的融合體(或綴合物)可以包含其它分子，例如其它肽或多肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含下述2種單獨(dú)的分子，或由其組成
(a)遺傳融合體，它是艾塞那肽-4、(G4S)3連接物、7h-14AlbudAb (DAT 0115，其具有在圖Ib = SEQID NO 2中所示的氨基酸序列)；和
(b)肽綴合物，它是經(jīng)由賴氨酸(導(dǎo)入在PYY的第10位)和4個(gè)重復(fù)的PEG連接物與C-端酰胺化的PYY3-36綴合的Dom7h-14-10 (R108C) AlbudAb。直線代表連接物，該連接物共價(jià)地連接至Dom7h-14-10 (R108C) AlbudAb的游離C端半胱氨酸和在PYY序列的第10位處的賴氨酸。該肽綴合物的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)如下(且也顯示在圖3中)diqmtqspsslsasvgcirvlitcrasqwigsqlsvvyqqkpgkapkttmv/rsslcisgvps
rfsgsgsQldflilissiqpeclfaiyycaqgirhpktfgqglkveikc
IKPE.APGKDASPEELNRWASLRHYLNLVTRQRY-NH2
(SEQ ID NO 37) 其中Dom7h-14-10 (R108C)的C端半胱氨酸通過連接物共價(jià)地連接至PYY肽中的賴氨酸上。所述化學(xué)連接物具有下述結(jié)構(gòu)
OCl0
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上述兩種分子可以作為組合的制備物存在，所述制備物適合同時(shí)地、分開地或相繼地用于本文所述的治療中(a)遺傳融合體，它是艾塞那肽_4、(64幻3連接物、7h-14AlbudAb (DAT 0115，其具有在圖Ib中所示的氨基酸序列)；和(b)肽綴合物，它是經(jīng)由賴氨酸和4個(gè)重復(fù)的PEG連接物與PYY3-36綴合的Dom7h-14-10 (R108C) AlbudAb (其具有圖3所示的結(jié)構(gòu))。或者，在上述的組合物中，所述肽綴合物(b)(其具有圖3所示的結(jié)構(gòu))可以被下述分子替換Dom7h-ll-15 (R108C) - PEG - 3-36 PYY (賴氨酸在第10位)(其具有圖3所示的結(jié)構(gòu)，但是所述AlbudAb組分是Dom7h-l 1-15 (R108C))。在另一個(gè)替代方案中，在上述的組合物中，所述肽綴合物(b)(其具有圖3所示的結(jié)構(gòu))可以被下述分子替換具有圖I (V): SEQ ID NO 49所示的氨基酸序列的PYY-Dom7h-14-10融合體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，所述組合物包含下述分子，或由其組成PYY (例如PYY 3-36)和艾塞那肽(例如艾塞那肽-4)和一種或多種AlbudAb，例如本文所述的任一種AlbudAb。在一個(gè)實(shí)施方案中,所述單個(gè)融合體具有圖I (u): SEQ IDNO 48所示的氨基酸序列。Dom 7h_14是結(jié)合血清白蛋白的人免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域或dAb (Vk)，且它的氨基酸序列如圖I (h) : SEQ ID NO 8所示。Dom7h_14 dAb的CDR區(qū)在圖I (h) : SEQID NO 8所示的氨基酸序列中標(biāo)有下劃線。Dom 7h-14_10是結(jié)合血清白蛋白的人免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域或dAb (Vk)，且它的氨基酸序列如圖I (0): SEQ ID NO 15所示。Dom7h-14-10 dAb的CDR區(qū)在圖I (o):SEQ ID NO 15所示的氨基酸序列中標(biāo)有下劃線。
Dom 7h-ll_15是結(jié)合血清白蛋白的人免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域或dAb (Vk)，且它的氨基酸序列如圖I (P): SEQ ID NO 16所示。Dom7h-ll-15 dAb的CDR區(qū)在圖I (p):SEQ ID NO 16所示的氨基酸序列中標(biāo)有下劃線具有R108C突變的Dom 7h_14_10是結(jié)合血清白蛋白的人免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域或dAb (Vk)，且它的氨基酸序列如圖I (R) : SEQ ID NO 18所示。具有R108C突變的Dom 7h_ll_15是結(jié)合血清白蛋白的人免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域或dAb (Vk)，且它的氨基酸序列如圖I (t)所示。R108C突變表示這樣的突變，其中在未突變序列中的C端精氨酸被半胱氨酸替換，且在本發(fā)明的一個(gè)方面，本文所述的任一種AlbudAb可以具有該突變。本文使用的“融合體”表示這樣的融合蛋白其包含結(jié)合血清白蛋白的dAb作為第一部分，且包含促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子作為其他部分。所述結(jié)合血清白蛋白的dAb和所述促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子可以作為單個(gè)連續(xù)多肽鏈的離散部件(部分)存在。所述dAb和腸降血糖素/促胰島素分子/腸肽部分可以通過肽鍵直接互相鍵合，或通過合適的氨基酸或肽或多肽連接物相連。在適當(dāng)時(shí)，可以存在其它部分，例如肽或多肽(例如第三、第四)和/或連接物序列。所述dAb可以是在相對(duì)于所述腸降血糖素/促胰島素分子/腸肽分子的N-端位置、C-端位置或內(nèi)部。在某些實(shí)施方案中，所述融合蛋白含有一個(gè)或超過一個(gè)(例如I個(gè)至約20個(gè))dAb部分。本文使用的“綴合物”表示這樣的組合物其包含結(jié)合血清白蛋白的dAb，促胰島素分子/腸降血糖素/腸肽分子與所述dAb共價(jià)地或非共價(jià)地鍵合。所述促胰島素分子/腸降血糖素/腸肽分子可以直接地或通過合適的連接物部分間接地共價(jià)鍵合所述dAb。所述促胰島素分子/腸降血糖素/腸肽分子可以鍵合在dAb的任意合適的位置(諸如氨基-端、羧基-端)，或通過合適的氨基酸側(cè)鏈(例如，賴氨酸的e氨基，或半胱氨酸的硫醇基，無論是天然存在的還是工程化的)進(jìn)行鍵合?；蛘?，所述促胰島素分子/腸降血糖素/腸肽分子可以直接地(例如，靜電相互作用、疏水相互作用)或間接地(例如，通過互補(bǔ)的結(jié)合配偶體(例如，生物素和抗生物素蛋白)的非共價(jià)結(jié)合，其中一個(gè)配偶體共價(jià)地鍵合促胰島素分子/腸降血糖素分子，且互補(bǔ)的結(jié)合配偶體共價(jià)地鍵合所述dAb)非共價(jià)地鍵合所述dAb。所述dAb可以是在相對(duì)于所述腸降血糖素/促胰島素分子/腸肽分子的N-端位置、C-端位置或內(nèi)部。在某些實(shí)施方案中，所述綴合物蛋白含有一個(gè)或超過一個(gè)(例如I個(gè)至約20個(gè))dAb部分。本發(fā)明也提供了組合物，所述組合物包含編碼本文所述的融合體的核酸，例如，包含在圖2中所示的核酸。也提供了包含這些核酸的宿主細(xì)胞，例如非-胚胎宿主細(xì)胞，例如原核或真核(諸如哺乳動(dòng)物)宿主細(xì)胞，諸如大腸桿菌或酵母宿主細(xì)胞。本發(fā)明另外提供了一種生產(chǎn)本發(fā)明的融合體的方法，所述方法包括在適合表達(dá)所述重組核酸的條件下，維持宿主細(xì)胞，諸如上述的那些，所述宿主細(xì)胞包含編碼本發(fā)明的融合體的重組核酸和/或構(gòu)建體，由此生產(chǎn)融合體。本發(fā)明也提供了藥物組合物，其包含本發(fā)明的組合物。本發(fā)明另外提供了本發(fā)明的組合物，其用于醫(yī)學(xué)中，例如用于治療例如代謝性疾病或病癥，諸如高血糖癥、葡萄糖耐受不良、3細(xì)胞缺乏、糖尿病(例如I型或2型糖尿病或妊娠糖尿病)、非酒精性脂肪變態(tài)性肝病、多囊卵巢綜合征、高脂血癥或肥胖癥或特征在于進(jìn)食過量的疾病(例如它可以用于抑制食欲或調(diào)節(jié)能量消耗)、胰腺炎，也用于預(yù)防腫瘤生長例如胰腺腫瘤生長(例如胰腺癌)，且所述用途包括給所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的組合物。本發(fā)明也提供了包含本文所述的任一種PYY AlbudAb的組合物(無論單獨(dú)使用，還是聯(lián)合使用)，其用于治療和/或預(yù)防胰腺炎，也用于預(yù)防腫瘤生長例如胰腺腫瘤生長(例如胰腺癌)。本發(fā)明也提供了一種治療個(gè)體的方法，所述個(gè)體具有疾病或障礙，諸如本文所述的那些，例如代謝性疾病或病癥，諸如高血糖癥、葡萄糖耐受不良、3細(xì)胞缺乏、糖尿病(例如I型或2型糖尿病或妊娠糖尿病)、非酒精性脂肪變態(tài)性肝病、多囊卵巢綜合征、高脂血癥或肥胖癥或特征在于進(jìn)食過量的疾病(例如它可以用于抑制食欲或調(diào)節(jié)能量消耗)、胰腺炎，也用于預(yù)防腫瘤生長例如胰腺腫瘤生長(例如胰腺癌)，也用于預(yù)防腫瘤生長例如胰腺腫瘤生長；所述方法包括給所述個(gè)體施用治療有效量的本發(fā)明的組合物。根據(jù)本發(fā)明可以治療或預(yù)防的其它代謝性疾病或病癥包括、但不限于胰島素抗性、膜島素缺乏、超聞膜島素血癥、聞血糖癥、血脂異常、聞脂血癥、聞麗血癥、聞膜增血糖素血癥、高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、腎衰竭、神經(jīng)病(例如，自主神經(jīng)病、副交感神經(jīng)神經(jīng)病和多神經(jīng)病)、視網(wǎng)膜病變、白內(nèi)障、代謝障礙(例如，胰島素和/或葡萄糖代謝障礙)、內(nèi)分泌障礙、肥胖癥、體重減輕、肝障礙(例如，肝病、肝脂肪變態(tài)、肝硬化和與肝移植有關(guān)的障礙)和與這些疾病或障礙有關(guān)的病癥。另外，使用本發(fā)明的化合物可以預(yù)防或治療的與糖尿病有關(guān)的病癥包括、但不限于高血糖癥、肥胖癥、糖尿病視網(wǎng)膜病變、單神經(jīng)病、多神經(jīng)病、動(dòng)脈粥樣硬化、潰瘍、心臟病、中風(fēng)、貧血、壞疽(例如，腳和手的壞疽)、陽痿、感染、白內(nèi)障、腎功能減退、自主神經(jīng)系統(tǒng)功能失常、受損的白細(xì)胞功能、腕管綜合征、Dupuytren攣縮和糖尿病酮癥酸中毒。本發(fā)明也提供了用于治療或預(yù)防與高血糖有關(guān)的疾病的方法，所述方法包括給患者或受試者施用至少一劑量的本發(fā)明的組合物，例如藥物組合物。當(dāng)在本申請(qǐng)中述及患者或受試者時(shí),這可以是指人或非人患者或受試者。本發(fā)明另外涉及使用本發(fā)明的綴合物或融合體，調(diào)節(jié)患者中的胰島素響應(yīng)性的方法，以及增加細(xì)胞的葡萄糖攝取的方法，和調(diào)節(jié)細(xì)胞的胰島素敏感性的方法。也提供了刺激胰島素合成和釋放的方法，增強(qiáng)脂肪、肌肉或肝組織對(duì)胰島素?cái)z取的敏感性的方法，刺激葡萄糖攝取的方法，減慢消化過程的方法，減少食欲的方法，調(diào)節(jié)能量消耗的方法，或阻斷患者中胰高血糖素的分泌的方法，所述方法包括給所述患者施用本發(fā)明的組合物，例如施用至少一劑量的本發(fā)明的組合物，例如藥物組合物。本發(fā)明的組合物(例如藥物組合物)可以單獨(dú)施用，或與其它分子或部分聯(lián)合施用，所述其它分子或部分例如多肽、治療蛋白(例如Albiglutide ，它是與人血清白蛋白分子共價(jià)連接的2個(gè)GLP-I分子)和/或分子(例如，胰島素和/或其它蛋白(包括抗體)、肽或小分子，它們調(diào)節(jié)患者中的胰島素敏感性、體重、心臟病、高血壓、神經(jīng)病、細(xì)胞代謝和/或葡萄糖、胰島素或其它激素水平)。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的綴合物或融合體與胰島素(或胰島素衍生物、類似物、融合蛋白或促分泌劑)聯(lián)合施用。本發(fā)明也提供了本發(fā)明的組合物，其用于治療疾病或障礙，諸如上述那些中的任一種，例如代謝障礙，諸如高血糖癥、胰腺炎、糖尿病(I或2型糖尿病，或妊娠糖尿病)或肥、胖癥或特征在于腸運(yùn)動(dòng)過度的疾病，且也用于預(yù)防腫瘤生長例如胰腺腫瘤生長(例如胰腺癌)。本發(fā)明也提供了本發(fā)明的組合物用于生產(chǎn)藥劑的應(yīng)用，所述藥物用于治療疾病或障礙，諸如上述那些中的任一種，例如代謝障礙，諸如高血糖癥、糖尿病(I或2型或妊娠糖尿病)或肥胖癥、胰腺炎或特征在于腸運(yùn)動(dòng)過度的疾病，以及例如胰腺腫瘤生長(例如胰腺癌)。本發(fā)明也涉及本文所述的組合物用于治療、診斷或預(yù)防的應(yīng)用。本發(fā)明的組合物(例如組合物的dAb組分)可以進(jìn)一步格式化(formatted)成具有更大的流體動(dòng)力學(xué)尺寸，以進(jìn)一步延長半衰期，例如，通過連接PEG基團(tuán)、血清白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體或至少其轉(zhuǎn)鐵蛋白-結(jié)合部分、抗體Fe區(qū)域，或通過綴合抗體結(jié)構(gòu)域。例如，結(jié)合血清白蛋白的dAb可以格式化成抗體的更大抗原結(jié)合片段(例如，格式化成Fab、 Fab，、F (ab) 2、F (ab，)2、IgG、scFv)。在本公開內(nèi)容描述的本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，作為在本發(fā)明的融合體中使用“dAb”的替代，預(yù)見到，技術(shù)人員可以使用這樣的結(jié)構(gòu)域，其包含特異性地結(jié)合血清白蛋白的dAb的CDR，例如結(jié)合血清白蛋白的Dom7h-14或Dom 7h_14_10或Dom 7h_14_10 R108C的⑶R(例如，所述⑶R可以移植到合適的蛋白支架或骨架上，例如affibody、SpA支架、LDL受體A類結(jié)構(gòu)域或EGF結(jié)構(gòu)域)。本公開內(nèi)容作為整體應(yīng)當(dāng)相應(yīng)地解釋，以提供這樣的替代dAb的結(jié)構(gòu)域的公開。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明的組合物，其包含雙-特異性配體或多-特異性配體，所述配體包括根據(jù)本發(fā)明的第一 dAb (其結(jié)合血清白蛋白，例如本文所述那些中的任一種，例如Dom7h-14)和第二 dAb (其具有與第一 dAb相同或不同的結(jié)合特異性)和任選地在多-特異性配體的情況下的其它dAb。第二 dAb (或其它dAb)可以任選地結(jié)合不同的靶物，例如FgFr Ic或⑶5靶物。在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，所述dAb組分可以是在WO 2008096158或W005118642中公開的任一種dAb，它們的細(xì)節(jié)通過引用并入本文。因而，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于通過腸胃外給藥來遞送的本發(fā)明的組合物，所述腸胃外給藥例如通過皮下注射、肌肉內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射、吸入、鼻遞送、透粘膜(例 如舌下)遞送、經(jīng)皮遞送、透皮遞送、經(jīng)口遞送、遞送至患者的胃腸道、直腸遞送或眼遞送。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的融合體或綴合物在藥物制備中的應(yīng)用，所述藥物用于下述遞送皮下注射、或肌肉內(nèi)遞送、透皮遞送、吸入、靜脈內(nèi)遞送、鼻遞送、透粘膜遞送、經(jīng)口遞送、遞送至患者的胃腸道、直腸遞送或眼遞送。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了通過皮下注射、肌肉內(nèi)注射或靜脈內(nèi)注射、吸入、鼻遞送、透粘膜(例如舌下)遞送、經(jīng)皮遞送、透皮遞送、經(jīng)口遞送、遞送至患者的胃腸道、直腸遞送或眼遞送來遞送給患者的方法，其中所述方法包括給患者施用藥學(xué)有效量的本發(fā)明的融合體或綴合物。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了口服的、可注射的、可吸入的、可霧化的、局部的或眼的制劑，其包含本發(fā)明的融合體或綴合物。所述制劑可以是片劑、丸劑、膠囊、液體或糖漿劑或軟膏劑。在一個(gè)方面，所述組合物可以口服給藥，例如作為飲料，例如作為用于治療肥胖的體重減輕飲料來銷售。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種用于直腸遞送給患者的制劑，所述制劑可以提供為例如栓劑。例如，可以如在WO 03/002136 (通過引用并入本文)中所述，制備用于GLP-I化合物的腸胃外給藥的組合物。例如，通?？梢匀缭跉W洲專利號(hào)272097 (授權(quán)給Novo Nordisk A/S)或在WO93/18785 (都通過引用并入本文)中所述，制備用于某些肽的鼻給藥的組合物。術(shù)語“受試者”或“個(gè)體”在本文中被定義為包括動(dòng)物，如哺乳動(dòng)物，包括、但不限于，靈長類動(dòng)物(例如人)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔子、豚鼠、大鼠、小鼠或其它?？?、羊科、馬科、犬科、貓科、哨齒動(dòng)物或鼠科物種。本發(fā)明也提供了一種試劑盒，其用于將根據(jù)本發(fā)明的組合物施用給受試者(例如，人患者)，所述試劑盒包含本發(fā)明的組合物、藥物遞送裝置和任選的使用說明書。所述組合 物可以提供為制劑，諸如冷凍干燥的制劑。在某些實(shí)施方案中，所述藥物遞送裝置選自注射器、筆式注射裝置、吸入器、鼻內(nèi)或眼給藥裝置(例如，mister、眼或鼻滴管)和無針注射裝置。本發(fā)明的組合物(例如綴合物或融合體)可以低壓凍干(lyophilized)進(jìn)行儲(chǔ)存，并在使用前在合適的載體中重構(gòu)?？梢允褂萌我夂线m的低壓凍干方法(例如，噴霧干燥、餅干燥)和/或重構(gòu)技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，冷凍干燥和重構(gòu)可以導(dǎo)致不同程度的抗體活性損失，且可能必須調(diào)節(jié)使用水平來補(bǔ)償。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含本文所述的低壓凍干的(冷凍干燥的)組合物。優(yōu)選地，低壓凍干的(冷凍干燥的)組合物在再水合時(shí)，其活性損失不超過約20%、或不超過約25%、或不超過約30%、或不超過約35%、或不超過約40%、或不超過約45%、或不超過約50% (例如,對(duì)血清白蛋白的結(jié)合活性)?；钚允窃诘蛪簝龈芍爱a(chǎn)生組合物效果所需要的組合物的量。例如，獲得并維持希望的血清濃度希望的時(shí)間段所需要的綴合物或融合體的量?？梢栽诘蛪簝龈芍笆褂萌我夂线m的方法測定組合物的活性，并可以在再水合之后使用相同方法測定活性，以測定損失的活性的量。本發(fā)明也提供了包含本發(fā)明的組合物的持續(xù)釋放制劑，這樣的持續(xù)釋放制劑可以包含與下述物質(zhì)相組合的本發(fā)明的組合物例如透明質(zhì)酸、微球或脂質(zhì)體和其它藥學(xué)上或藥理學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。這樣的持續(xù)釋放制劑可以是例如栓劑形式。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的組合物和藥學(xué)上或生理上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。


圖I :是下述氨基酸序列的圖解(a)DAT0114 (SEQ ID NO I), (b)DAT0115 (SEQID NO 2),(c)DAT0116 (SEQ ID NO 3),(d)DAT0117 (SEQ ID NO 4),(e)DAT0118 (SEQ IDNO 5), (f) DAT0119 (SEQ ID NO 6) (g)DAT0120 (SEQ ID NO 7) (h) Dom7h_14 (SEQ IDNO 8) ((Albudab )) (CDR 標(biāo)有下劃線)，(i)GLP_1 7-37 A(8)G (SEQ ID NO 9)，(j)艾塞那肽-4 (SEQ ID NO 10)，(k)螺旋連接物(SEQ ID NO 11) (l)Gly-ser 連接物(SEQ ID NO12)，(m)艾塞那肽 4、(G4S)3、連接物 D0M7h-14-10 融合體(DMS7139:SEQ ID NO 13)，(n)艾塞那肽 4、(G4S)3、連接物 D0M7h-l 1-15 融合體(DMS7143: SEQ ID NO 14)，(o) D0M7h-14_10(SEQ ID NO 15)，(p)D0M7h-ll-15 (Albudab ) (SEQ ID NO 16)，(q)0mpT AWA 信號(hào)肽(前導(dǎo)序列)(SEQ ID NO 17),(r)D0M 7H-14-10 R108C 突變體(Albudab ) (SEQ ID NO 18)，(s)PYY 3-36 (用 PEG 衍生化在 10 位處的賴氨酸)(SEQ ID NO 19) (t) 7h-ll_15R108C(Albudab ) (SEQ ID NO 47)； (u) DAT0116R108C: 190 PYY (SEQ ID NO 48)； (V) PYY-Dom7h-14-10 AlbudAb 的遺傳融合體(SEQ ID NO 49)。圖2 :是下述核酸序列的圖解(a)DAT0114 (哺乳動(dòng)物構(gòu)建體)(SEQ ID NO 20)，(b)DAT0115 (哺乳動(dòng)物構(gòu)建體)(SEQ ID NO 21)，(c) DAT0115 (為大腸桿菌構(gòu)建體優(yōu)化)(SEQ ID NO 22)，(d)DAT0116 (哺乳動(dòng)物構(gòu)建體)(SEQ ID NO 23)，(e) DAT0116 (為大腸桿菌構(gòu)建體優(yōu)化)(SEQ ID NO 24)，(f)DAT0117 (哺乳動(dòng)物構(gòu)建體)(SEQ ID NO 25)，(g)DATOl 17 (為大腸桿菌構(gòu)建體優(yōu)化)(SEQ ID NO 26)，(h)DAT0118 (哺乳動(dòng)物構(gòu)建體)(SEQID NO 27)，(i)DAT0119 (哺乳動(dòng)物構(gòu)建體)(SEQ ID NO 28)，( j) DAT0120 (哺乳動(dòng)物構(gòu)建體)(SEQ ID NO 29)，(k)Dom7h-14 (SEQ ID NO 30)，(I)艾塞那肽 4、(G4S)3、連接物D0M7h-14-10 融合體(DMS7139:SEQ ID NO 31)，(m)艾塞那肽4、(G4S) 3、連接物D0M7h_ll_15融合體(DMS7143:SEQ ID NO 32) (n) Dom 7h_14_10 (SEQ ID NO 33), (o) Dom 7h_ll_15(SEQ ID NO 34)，(p) Omp AWA 信號(hào)肽(SEQ ID NO 35)，(q) Dom 7h_14_10 R (108) C (SEQID NO 36)。圖3 :顯示了一種肽綴合物，它是經(jīng)由賴氨酸和4個(gè)重復(fù)的PEG連接物與PYY3-36綴合的Dom7h-14-10 (R108C) AlbudAb。該分子用于在實(shí)施例7-9中詳述的實(shí)驗(yàn)中。(SEQID NO 37)。圖4 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的DIO小鼠中，體重隨時(shí)間的變化。圖5 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的DIO小鼠中，食物攝入隨時(shí)間的變化。圖6 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的DIO小鼠中的身體脂肪％。(基線和在第15天時(shí))。圖7 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的小鼠中，DIO小鼠的體脂量和瘦體重的變化(基線相對(duì)于15天)。圖8 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的DIO小鼠中，內(nèi)分泌分析物的測量結(jié)果。圖9 :顯示了在用肽-AlbudAb的組合和對(duì)照治療的DIO小鼠中，肝的組織病理學(xué)的變化。圖10 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的db/db小鼠中，糖基化的血紅蛋白Alc的測
量結(jié)果。圖11 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的db/db小鼠中％ HbAlc的變化(基線相對(duì)于第16天)。圖12 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的db/db小鼠中的血漿胰島素水平(在第16 天)。圖13 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的db/db小鼠中，體重隨時(shí)間的變化。圖14 :顯示了在用肽-AlbudAb治療的db/db小鼠中，食物攝入隨時(shí)間的變化。圖15 :顯示了前導(dǎo)序列的氨基酸序列(a)ompA (大腸桿菌衍生的)(SEQ ID NO38), (b) ompA-AMA (人工序列)(SEQ ID NO 39), (c) ompA-AWA (人工序列)(SEQ ID NO40), (d)ompT (大腸桿菌衍生的)(SEQ ID NO 41), (e)ompT-AMA (人工序列)(SEQ ID NO42), (f) GAS (釀酒酵母衍生的)(SEQ ID NO 43)，(g) GAS-AMA (人工序列)(SEQ ID NO44)，(h)GAS-AWA (人工序列)(SEQ ID NO 45) (i)Pel B (胡蘿卜軟腐歐文氏菌)(SEQ IDNO 46)。
具體實(shí)施例方式在本說明書中已經(jīng)參照實(shí)施方案描述了本發(fā)明，描述方式使得本說明書能夠既清楚又簡明。但是應(yīng)當(dāng)理解，在不偏離本發(fā)明的情況下，可以對(duì)這些實(shí)施方案進(jìn)行各種組合或分開。除非另有說明，否則本文所用的所有科技術(shù)語都具有本領(lǐng)域(例如細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、核酸化學(xué)、雜交技術(shù)和生物化學(xué))普通技術(shù)人員公知的相同含義。將標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于分子、遺傳和生化方法(一般參見Sambrook等，Molecular Cloning: A LaboratoryManual,第 2 版(1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,N. Y.和 Ausubel 等，Short Protocols in Molecular Biology (1999)第 4 版，John Wiley & Sons, Inc.,所述文獻(xiàn)通過引用并入本文)和化學(xué)方法。本文使用的術(shù)語“促胰島素劑”(“insulinotropic agents”)是指,能夠刺激激素胰島素、或引起激素胰島素的刺激、合成或表達(dá)或活性的化合物。促胰島素劑的已知實(shí)例包括、但不限于例如葡萄糖、GIP、GLP、艾塞那肽(例如艾塞那肽-4和艾塞那肽-3)、PYY (例如 3-36 PYY)和 OXM。本文使用的術(shù)語“腸降血糖素”(“incretin”)是指一類胃腸激素，其在葡萄糖水平正常時(shí)或特別是升高時(shí)，會(huì)引起釋放的胰島素的量增力口。作為實(shí)例，它們包括GLP-1、GIP、0XM、VIP和PP (胰腺多肽)。腸肽(gut peptides)是從腸的不同部件中的不同細(xì)胞釋放出的一類肽,它們提供信號(hào)傳遞功能，PYY也是腸肽的一個(gè)實(shí)例。本文關(guān)于多肽所用的術(shù)語“類似物”是指修飾的肽，其中肽的一個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基已經(jīng)被其它氨基酸殘基置換，和/或其中一個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基已經(jīng)從肽刪除，和/或其中一個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基已經(jīng)從肽刪除，和/或其中一個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基已經(jīng)添加至肽。這樣的氨基酸殘基的添加或刪除可以發(fā)生在肽的N-端和/或肽的C-端，或它們可以在肽內(nèi)部。使用簡單的系統(tǒng)來描述GLP-I的類似物例如GLP-1 A8G (7_37個(gè)氨基酸)指定GLP-I類似物，其中在8位的天然存在的丙氨酸已經(jīng)被甘氨酸殘基置換。使用根據(jù)IUPAC-IUB命名法所用的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)單字母縮寫，描繪肽類似物及其衍生物的通式。當(dāng)提及多肽使用時(shí)，本文使用的“片段”是具有這樣氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列與整個(gè)天然存在的多肽的一部分，但是并非其所有氨基酸序列相同。片段可以是“獨(dú)立的”，或被包含在更大多肽內(nèi)，它們作為單個(gè)更大多肽中的單個(gè)連續(xù)區(qū)域，形成所述更大多肽的一部分或區(qū)域。作為實(shí)例，天然存在的GLP-I的片段包括天然存在的氨基酸1-36的氨基酸7-36。此外，多肽的片段也可以是天然存在的部分序列的變體。例如，包含天然存在的GLP-I的氨基酸7-30的GLP-I片段也可以是在它的部分序列內(nèi)具有氨基酸置換的變體。本發(fā)明的合適的促胰島素劑的實(shí)例包括GLP_1、GLP-I衍生物、GLP-I類似物、或GLP-I類似物的衍生物。另外，它們包括艾塞那肽_4、艾塞那肽-4類似物和艾塞那肽-4衍生物或片段和艾塞那肽_3、艾塞那肽-3衍生物和艾塞那肽-3類似物、PYY PYY -I衍生物、PYY -I類似物或PYY -I類似物的衍生物、PYY片段(例如3-36和/或13-36 PYY)。
本文使用的術(shù)語“GLP-1”是指GLP-1 (7-37) ,GLP-I (7-36),GLP-I (7-35),GLP-I(7-38),GLP-I (7-39),GLP-I (7-40),GLP-1 (7_41)、GLP_1 類似物、GLP-1 肽、GLP-1 衍生物、或GLP-I類似物的突變體或片段或衍生物。這樣的肽、突變體、類似物和衍生物是促胰島素劑。例如GLP-I可以是具有圖l(i): SEQ ID NO 9所示的氨基酸序列的GLP-1 (7-37)A8G突變體。
在國際專利申請(qǐng)?zhí)?0/11296 (The General Hospital Corporation)中描述了其它GLP-I類似物，該專利申請(qǐng)涉及包含GLP-I (7-36)和其功能衍生物的肽片段，所述肽片段的促胰島素活性超過GLP-I (1-36)或GLP-I (1-37)的促胰島素活性，還涉及它們作為促胰島素劑的應(yīng)用(通過引用并入本文，特別作為用于本發(fā)明中的藥物的實(shí)例)。國際專利申請(qǐng)?zhí)朩 91/11457 (Buckley等人)公開了有活性的GLP-1肽7-34、7-35,7-36和7-37的類似物，它們也可以用作根據(jù)本發(fā)明的GLP-I藥物(通過引用并入本文，特別作為用于本發(fā)明中的藥物或藥劑的實(shí)例)。本文使用的術(shù)語“艾塞那肽-4肽”是指艾塞那肽-4 (1-39)、艾塞那肽_4類似物、艾塞那肽-4肽的片段、艾塞那肽-4衍生物、或艾塞那肽-4類似物的衍生物。這樣的肽、片段、類似物和衍生物是促胰島素劑。艾塞那肽-4 (1-39)的氨基酸序列如圖I (j): SEQ IDNO 10所示。在PCT 專利公開 WO 99/25728 (Beeley 等人)、WO 99/25727 Beeley 等人)、WO98/05351 (Young 等人)、WO 99/40788 (Young 等人)、WO 99/07404 (Beeley 等人)和 WO99/43708 (Knudsen等人)(都通過引用并入本文，特別作為用于本發(fā)明中的藥物的實(shí)例)中，描述了可用于本發(fā)明中的其它艾塞那肽-類似物。本文使用的術(shù)語PYY表示這樣的肽YY，它是響應(yīng)于飼喂而釋放的一種短(36個(gè)氨基酸)蛋白。循環(huán)中的PYY濃度在餐后增加，并在禁食時(shí)降低。PYY肽的片段(例如活性片段)也可用于本發(fā)明中，例如3-36、13-36是保留活性的PYY類似物和衍生物。本文使用的“肽”表示通過肽鍵連接到一起的約2至約50個(gè)氨基酸。本文使用的“多肽”表示通過肽鍵連接到一起的至少約50個(gè)氨基酸。多肽通常包含三級(jí)結(jié)構(gòu)，并折疊成功能結(jié)構(gòu)域。本文使用的“展示系統(tǒng)”表示這樣的系統(tǒng)，其中對(duì)于基于希望的特性(諸如物理的、化學(xué)的或功能的特性)的選擇，可以得到多肽或肽的集合。所述展示系統(tǒng)可以是多肽或肽(例如，在溶液中，固定化在合適的支持物上)的合適集合。所述展示系統(tǒng)也可以是采用細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)(例如，在例如轉(zhuǎn)化的、感染的、轉(zhuǎn)染的或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞中表達(dá)核酸文庫，和在細(xì)胞表面上展示編碼的多肽)或無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)(例如，乳液區(qū)室化和展示)的系統(tǒng)。示例性的展示系統(tǒng)將核酸的編碼功能與所述核酸編碼的多肽或肽的物理的、化學(xué)的和/或功能的特性相關(guān)聯(lián)。當(dāng)采用這樣的展示系統(tǒng)時(shí)，可以選擇具有希望的物理的、化學(xué)的和/或功能的特性的多肽或肽，并可以容易地分離或回收編碼選擇的多肽或肽的核酸。許多將核酸的編碼功能與多肽或肽的物理的、化學(xué)的和/或功能的特性相關(guān)聯(lián)的展示系統(tǒng)是本領(lǐng)域已知的，例如，噬菌體展示(噬菌體展示，例如噬粒展示)、核糖體展示、乳液區(qū)室化和展示、酵母展示、嘌呤霉素展示、細(xì)菌展示、在質(zhì)粒上展示、共價(jià)展示等(參見，EP 0436597 (Dyax),美國專利號(hào) 6，172，197 (McCafferty#U),美國專利號(hào) 6，489，103 (Griffiths #U))o
本文使用的“有功能的”(“functional”)描述了具有生物活性(諸如特異性的結(jié)合活性)的多肽或肽。例如，術(shù)語“有功能的多肽”包括通過它的抗原-結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合靶抗原的抗體或其抗原結(jié)合片段。本文使用的“靶配體”表示被多肽或肽特異性地或選擇性地結(jié)合的配體。例如，當(dāng)多肽是抗體或其抗原結(jié)合片段時(shí)，靶配體可以是任意希望的抗原或表位。與靶抗原的結(jié)合依賴于有功能的多肽或肽。本文使用的“抗體”是指I gG、I gM、I gA、I gD或I gE或片段(例如Fab、F (ab ’)2、Fv、二硫鍵連接的Fv、scFv、閉合 構(gòu)象多特異性抗體、二硫鍵連接的scFv、雙特異抗體),無論是源自天然地產(chǎn)生抗體的任何物種，還是通過重組DNA技術(shù)制備；無論分離自下列哪種樣品血清、B細(xì)胞、雜交瘤、轉(zhuǎn)染瘤、酵母或細(xì)菌。本文使用的“抗體形式”(“antibody format”)表示任意合適的多肽結(jié)構(gòu),其中可以摻入一個(gè)或更多個(gè)抗體可變結(jié)構(gòu)域，從而賦予該結(jié)構(gòu)對(duì)抗原的結(jié)合特異性。多種合適的抗體形式是本領(lǐng)域已知的，例如，嵌合的抗體、人源化的抗體、人抗體、單鏈抗體、雙特異性的抗體、抗體重鏈、抗體輕鏈、抗體重鏈和/或輕鏈的同源二聚體和異源二聚體、任意前述物質(zhì)的抗原-結(jié)合片段(例如，F(xiàn)v片段(例如,單鏈Fv (scFv)、二硫鍵連接的Fv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’ )2片段)、單個(gè)抗體可變結(jié)構(gòu)域(例如，dAb JhJhh 和任意前述物質(zhì)的修飾形式(例如，通過共價(jià)連接聚乙二醇或其它合適的聚合物或人源化的Vhh進(jìn)行修飾)。短語“免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域”表示獨(dú)立于其它V區(qū)或結(jié)構(gòu)域而特異性地結(jié)合抗原或表位的抗體可變結(jié)構(gòu)域(VHJhh、')。免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域可以以含有其它可變區(qū)或可變結(jié)構(gòu)域的形式(例如，同源多聚體或異源多聚體)存在，其中其它區(qū)域或結(jié)構(gòu)域不是單個(gè)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合所必需的(即其中免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域與抗原的結(jié)合獨(dú)立于另外的可變結(jié)構(gòu)域)。“結(jié)構(gòu)域抗體”或“dAb”與本文所用的術(shù)語“免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域”同義?！皢蝹€(gè)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域”與本文所用的術(shù)語“免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域”同義?！皢蝹€(gè)抗體可變結(jié)構(gòu)域”與本文所用的術(shù)語“免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域”同義。在一個(gè)實(shí)施方案中，免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域是人抗體可變結(jié)構(gòu)域，但是也包括來自其它物種的單個(gè)抗體可變結(jié)構(gòu)域，諸如嚙齒動(dòng)物(例如，如在WO 00/29004中所公開的,其內(nèi)容通過引用整體并入本文)、鉸口鯊和駱駝科Vhh dAb。駱駝科Vhh是這樣的免疫球蛋白單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域多肽其源自包括駱駝、美洲駝羊、羊駝、單峰駱駝和原駝在內(nèi)的物種，且生產(chǎn)天然地缺少輕鏈的重鏈抗體。所述Vhh可以是人源化的?！敖Y(jié)構(gòu)域”是折疊的蛋白結(jié)構(gòu)，它具有獨(dú)立于蛋白的其余部分的三級(jí)結(jié)構(gòu)。通常，結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)蛋白的離散的功能性質(zhì)，并且在許多情況下可以添加、去除或轉(zhuǎn)移給其它蛋白，而不喪失該蛋白和/或該結(jié)構(gòu)域的其余部分的功能?！皢蝹€(gè)抗體可變結(jié)構(gòu)域”是折疊的多肽結(jié)構(gòu)域，其包含抗體可變結(jié)構(gòu)域特有的序列。因此，它包括完整的抗體可變結(jié)構(gòu)域和修飾的可變結(jié)構(gòu)域(例如，其中一個(gè)或更多個(gè)環(huán)已經(jīng)被不是抗體可變結(jié)構(gòu)域特有的序列所置換)，或者已被截短或包含N-端或C-端延伸的抗體可變結(jié)構(gòu)域，以及至少保留全長結(jié)構(gòu)域的結(jié)合活性和特異性的可變結(jié)構(gòu)域的折疊片段。術(shù)語“文庫”表示異源多肽或核酸的混合物。文庫由成員組成，每個(gè)成員都具有單個(gè)多肽或核酸序列。就這一方面而言，“文庫”和“集合”同義。文庫成員之間的序列差異會(huì)造成文庫中存在的多樣性。文庫可以是多肽或核酸的簡單混合物的形式，或者可以是用核酸文庫轉(zhuǎn)化的生物體或細(xì)胞的形式，例如細(xì)菌、病毒、動(dòng)物或植物細(xì)胞等。在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)單個(gè)的生物體或細(xì)胞僅含有一個(gè)或有限數(shù)目的文庫成員。在一個(gè)實(shí)施方案中，將核酸摻入到表達(dá)載體中，以表達(dá)該核酸所編碼的多肽。因此，在一個(gè)方面，文庫可以是宿主生物體群體的形式，每個(gè)生物體含有一個(gè)或更多個(gè)表達(dá)載體拷貝，所述載體含有核酸形式的文庫的單個(gè)成員，該成員可以被表達(dá)而產(chǎn)生其相應(yīng)的多肽成員。因此,宿主生物體群體具有編碼多種多肽的集合的潛力。本文使用的術(shù)語“劑量”表示施用給受試者的組合物的量，所述施用是一次性全部施用(單位劑量)，或在確定的時(shí)間段內(nèi)的2次或更多次施用。例如，劑量可以表示在I天(24小時(shí))(日劑量)、2天、I周、2周、3周、I個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月或6個(gè)月或更多個(gè)月的過程中施用給受試者的融合體或綴合物的量(例如通過單次施用，或通過2次或更多次施用)。給藥之間的間隔可以是任何希望的時(shí)間量。短語“半衰期”表示融合體或綴合物的血清或血漿濃度在體內(nèi)降低50%所需要的時(shí)間，例如因?yàn)樘烊粰C(jī)制所致降解和/或清除或隔離。本發(fā)明的組合物在體內(nèi)是穩(wěn)定的，其半衰期因結(jié)合抵抗降解和/或清除或隔離的血清白蛋白分子(例如人血清白蛋白(HSA))而延長。這些血清白蛋白分子是天然存在的蛋白，它們本身在體內(nèi)的半衰期較長。如果分子的功能活性在體內(nèi)的持續(xù)時(shí)間比對(duì)延長半衰期的分子不具有特異性的類似分子更長的話，則該分子的半衰期延長。例如，將本發(fā)明的包含對(duì)人血清白蛋白(HSA)特異性的dAb和腸降血糖素和/或促胰島素分子和/或腸肽分子(諸如GLP-UPYY或艾塞那肽)的組合物與相同配體(其中不存在對(duì)HSA的特異性，即不結(jié)合HSA，但是結(jié)合另一種分子。例如，它可以結(jié)合細(xì)胞上第三靶物)相比較。通常，半衰期延長10%、20%、30%、40%、50%或以上。2x、3x、4x、5x、10x、20x、30x、40x、50x或以上的半衰期延長范圍是可能的?；蛘?，或另外，最高達(dá)30x、40x、50x、60x、70x、80x、90x、100x、150x的半衰期延長范圍也是可能的。本文使用的“流體動(dòng)力學(xué)尺寸”(“hydrodynamic size”)表示,基于分子在水溶液中的擴(kuò)散，分子(例如，蛋白分子、配體)的表觀尺寸?？梢蕴幚淼鞍自谌芤褐械臄U(kuò)散或運(yùn)動(dòng)，以衍生出蛋白的表觀尺寸，其中所述尺寸由蛋白顆粒的“Stokes半徑”或“流體動(dòng)力學(xué)半徑”給出。蛋白的“流體動(dòng)力學(xué)尺寸”取決于質(zhì)量和形狀(構(gòu)象)，所以具有相同分子量的兩種蛋白可能具有不同的流體動(dòng)力學(xué)尺寸(基于蛋白的總構(gòu)象)。如下進(jìn)行兩個(gè)序列之間的“同源性”或“同一性”或“相似性”(這些術(shù)語在本文可互換使用)的計(jì)算。為了最佳比較目的，比對(duì)序列(例如對(duì)于最佳比對(duì)，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一個(gè)或兩個(gè)中引入缺口，為了比較目的，非同源序列可以忽略不計(jì))。在一個(gè)實(shí)施方案中，為了比較目的所比對(duì)的參照序列的長度是參照序列長度的至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、80%、90%、100%。然后，比較在相應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置處的氨基酸殘基或核苷酸。當(dāng)?shù)谝恍蛄兄械哪硞€(gè)位置被與第二序列中的相應(yīng)位置相同的氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)時(shí)，那么分子在該位置是相同的(本文所用的氨基酸或核酸“同源性”等同于氨基酸或核酸“同一性”)。兩個(gè)序列之間的同一性百分比隨考慮缺口數(shù)和各缺口長度后的序列共享的相同位置數(shù)而變化，需要弓I入這些缺口以進(jìn)行兩個(gè)序列的最佳比對(duì)。使用采用默認(rèn)參數(shù)的算法BLAST 2 Sequences (Tatusova, T. A.等X，F(xiàn)EMS Microbiol Lett, 174 187-188 (1999)，可以準(zhǔn)備和測定氨基酸和核苷酸序列比對(duì)以及如本文定義的同源性、相似性或同一性。、
氨基酸序列的翻譯后修飾已知氨基酸序列的翻譯后修飾可以天然地發(fā)生，這些可以包括，例如去酰胺化或N端環(huán)化或殘基的添加或刪除。本發(fā)明因此包括由這樣的翻譯后修飾得到的本文公開的序列的變體，例如所述序列的去酰胺化形式核酸、宿主細(xì)胞
本發(fā)明涉及分離的和/或重組的核酸，它們編碼本文所述的本發(fā)明的組合物例如融合體。在本文中稱作“分離的”核酸是已經(jīng)與在它的原始環(huán)境中(例如，在細(xì)胞中，或在核酸的混合物諸如文庫中)的其它物質(zhì)(例如，其它核酸，諸如基因組DNA、cDNA和/或RNA)分離的核酸。分離的核酸可以分離為載體(例如，質(zhì)粒)的一部分。在本文中稱作“重組的”核酸是已經(jīng)通過重組DNA方法生產(chǎn)的核酸，所述重組DNA方法包括依賴于人工重組的方法，諸如克隆進(jìn)載體或染色體中(其中使用例如限制性酶、同源重組、病毒等)，以及使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)制備的核酸。本發(fā)明也涉及重組宿主細(xì)胞例如哺乳動(dòng)物或微生物，其包含(一種或更多種)重組核酸或表達(dá)構(gòu)建體，它們包含編碼本文所述的本發(fā)明的組合物(例如融合體)的核酸。還提供了制備本文所述的本發(fā)明的組合物(例如融合體)的方法，所述方法包括在適合表達(dá)融合多肽的條件下，維持本發(fā)明的重組宿主細(xì)胞，例如哺乳動(dòng)物或微生物。如果需要，所述方法可以另外包括分離或回收融合體的步驟。例如，使用任意適合選定的宿主細(xì)胞的方法(例如，轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、電穿孔、感染)，可以將編碼本發(fā)明組合物(例如本發(fā)明的融合多肽)的核酸分子(即，一個(gè)或更多個(gè)核酸分子)或包含這樣的核酸分子的表達(dá)構(gòu)建體(即，一個(gè)或更多個(gè)構(gòu)建體)導(dǎo)入合適的宿主細(xì)胞中，使得所述核酸分子可操作地連接至一個(gè)或更多個(gè)表達(dá)控制元件(例如，在載體中，在通過細(xì)胞中的過程建立的構(gòu)建體中，整合進(jìn)宿主細(xì)胞基因組中)，以制備重組宿主細(xì)胞?？梢栽谶m合表達(dá)的條件下(例如，在有誘導(dǎo)物存在下，在合適的動(dòng)物中，在補(bǔ)充了適當(dāng)?shù)柠}、生長因子、抗生素、營養(yǎng)補(bǔ)劑等的合適的培養(yǎng)基中)，維持得到的重組宿主細(xì)胞，由此生產(chǎn)編碼的肽或多肽。如果需要，可以分離或回收編碼的肽或多肽(例如，從哺乳動(dòng)物、動(dòng)物、宿主細(xì)胞、培養(yǎng)基、乳汁)。該方法包括在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的宿主細(xì)胞中表達(dá)(參見，與WO 92/03918，GenPharm International)。隨后可以進(jìn)一步修飾肽或融合蛋白或綴合物,例如化學(xué)地或酶促地修飾，這是在表達(dá)宿主中、在培養(yǎng)基中，或在純化過程中或純化以后，例如通過C端的酰胺化。也可以在合適的體外表達(dá)系統(tǒng)中生產(chǎn)本文所述的本發(fā)明的組合物(例如融合多肽)，例如通過化學(xué)合成，或通過任意其它合適的方法。如本文所述和例證的，本發(fā)明的組合物(例如融合體和綴合物)通常會(huì)以高親和力
結(jié)合血清白蛋白。例如，所述融合體或綴合物可以以約5微摩爾至約100 pM (例如約I微摩爾至約100 pM,例如 400-800nm,例如約 600nm)的親和力(KD; KD=Koff (kd) /Kon (ka)[通過表面等離子體共振測定])結(jié)合人血清白蛋白?？梢栽诖竽c桿菌中或在畢赤酵母物種(例如，巴氏畢赤酵母(A中表達(dá)本發(fā)明的組合物(例如融合體或綴合物)。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在大腸桿菌iE. coli)中或在畢赤酵母物種(例如，巴氏畢赤酵母)中或在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物(例如CHO或HEK 293細(xì)胞)中表達(dá)時(shí)，以至少約0.5 mg/L的量分泌融合體。盡管當(dāng)在大腸桿菌中或在畢赤酵母物種中或在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，本文所述的組合物可以是可分泌的，但是可以使用任意合適的方法來生產(chǎn)它們，所述方法例如合成化學(xué)方法或不采用大腸桿菌或畢赤酵母物種的生物生產(chǎn)方法。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)施用有效量時(shí)，本發(fā)明的組合物在動(dòng)物模型中是有效的，所述動(dòng)物模型例如在WO 2006 /059106(例如在公開的WO 2006 /059106的第104-105頁)中描述的那些，或在本文的實(shí)施例中描述的那些。一般而言，有效量是約0.0001 mg/kg至約10 mg/kg (例如，約 0.001 mg/kg 至約 10 mg/kg,例如約 0. 001 mg/kg 至約 I mg/kg,例如約0. 01 mg/kg至約I mg/kg,例如約0. 01 mg/kg至約0. I mg/kg)。本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)所述疾病模型能夠預(yù) 測在人類中的治療效能。通常，本發(fā)明的組合物以純化形式與藥理上或生理學(xué)上合適的載體一起使用。通常，這些載體可以包括水性溶液或醇/水溶液、乳劑或混懸劑，任一種包括鹽水和/或緩沖介質(zhì)。胃腸外媒介物可以包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉以及乳酸化的林格液。如果需要在混懸劑中維持多肽復(fù)合物的話，則可以從增稠劑中選出合適的生理上可接受的輔料，這些增稠劑例如羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、明膠和海藻酸鹽、蔗糖、海藻糖、山梨醇、去污劑諸如吐溫-20或吐溫-80。靜脈內(nèi)的媒介物包括流體和營養(yǎng)補(bǔ)充劑和電解質(zhì)補(bǔ)充劑，例如基于林格氏葡萄糖的那些。也可含有防腐劑和其它添加劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體(Mack (199,2)Remington f s Pharmaceutical Sciences,第 16 版)。各種合適的制劑都可采用，包括延長釋放制劑。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的給藥途徑可以為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的任何途徑。對(duì)于治療，可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，將本發(fā)明的藥物融合體或綴合物施用給任何患者?？赏ㄟ^任何合適的方式進(jìn)行施用，包括腸胃外地、靜脈內(nèi)地、透粘膜的遞送(例如舌下)、通過皮下注射、肌肉內(nèi)地、腹膜內(nèi)地、口服地、透皮地、透粘膜地、通過肺途徑、通過鼻遞送、胃腸道遞送、直腸遞送或眼遞送，或者在合適時(shí)用導(dǎo)管直接輸注。給藥的劑量和頻率取決于患者年齡、性別和狀況、同時(shí)施用的其它藥物、禁忌和臨床醫(yī)生要考慮的其它參數(shù)。按照指示，可以局部給藥或全身給藥。本發(fā)明的組合物可以低壓凍干進(jìn)行儲(chǔ)存，并在使用前在合適的載體中重構(gòu)。已經(jīng)證實(shí)，該技術(shù)對(duì)于常規(guī)免疫球蛋白是有效的，且可以采用本領(lǐng)域已知的冷凍干燥和重構(gòu)技術(shù)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，冷凍干燥和重構(gòu)可以導(dǎo)致不同程度的抗體活性損失(例如對(duì)于常規(guī)免疫球蛋白，IgM抗體傾向于具有比IgG抗體更大的活性損失)，且可能必須向上調(diào)節(jié)使用水平來補(bǔ)償。對(duì)于預(yù)防應(yīng)用而言，例如當(dāng)施用給具有前驅(qū)糖尿病或胰島素抗性的個(gè)體時(shí)，也可以以類似或稍低的劑量施用含有本發(fā)明的融合體或綴合物的組合物，以預(yù)防、抑制或延遲疾病發(fā)作(例如，維持緩解或靜止?fàn)顟B(tài)，或者預(yù)防急性期)。熟練的臨床醫(yī)生能夠確定合適的給藥間隔，以治療、抑制或預(yù)防疾病。當(dāng)施用本發(fā)明的組合物來治療、抑制或預(yù)防疾病時(shí)，可以施用最多每天4次、每天I次、每周兩次、每周I次、每兩周I次、每月I次或每2月I次、每3個(gè)月I次、每6個(gè)月I次或以更長的間隔,劑量為例如約0. 0001 mg/kg至約10 mg/kg(例如，約 0.001 mg/kg 至約 10 mg/kg,例如約 0. 001 mg/kg 至約 I mg/kg,例如約 0. 01 mg/kg 至約 I mg/kg,例如約 0. 01 mg/kg 至約 0. I mg/kg)。用本文所述的組合物進(jìn)行的治療被視為“有效”的條件是相對(duì)于治療前存在的所述征狀，或者相對(duì)于未用所述組合物或其它合適對(duì)照治療的個(gè)體(人或模型動(dòng)物)中的所述征狀，一種或更多種征狀或征象減少或減輕(例如減輕至少10%，或在臨床評(píng)價(jià)量表中的至少一個(gè)點(diǎn))。盡管征狀隨所針對(duì)的疾病或障礙的確切性質(zhì)而明顯不同，但是可以由一般熟練的臨床醫(yī)生或技術(shù)人員進(jìn)行測定。類似地，如果相對(duì)于未經(jīng)所述組合物治療的類似個(gè)體(人或動(dòng)物模型)的所述征狀，一種或更多種征狀或征象的發(fā)作或嚴(yán)重程度延遲、減少或消除，則用本文所述的組合物進(jìn)行的預(yù)防是“有效”的。本發(fā)明的組合物可以與其它治療劑或活性劑(例如其它多肽或肽或小分子)結(jié)合施用。這些其它的藥劑可以包括各種藥物，例如二甲雙胍(metformin)、胰島素、格列酮類(glitazones)(例如羅格列酮(rosaglitazone))、免疫抑制劑、免疫刺激劑。 本發(fā)明的組合物可以與一種或更多種額外的治療劑或活性劑一起施用和/或配制。當(dāng)本發(fā)明的組合物與額外的治療劑一起施用時(shí)，可以在額外的藥劑之前、同時(shí)、一起或之后，施用所述融合體或綴合物。通常，以提供重疊的治療效果的方式，施用本發(fā)明的組合物和額外的藥劑。半衰期
促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子(例如GLP-UPYY或艾塞那肽配體)的增加的半衰期可用于體內(nèi)用途中。本發(fā)明如下解決了該問題通過提供促胰島素劑和/或腸降血糖素和/或腸肽藥物(例如GLP和艾塞那肽)的增加的體內(nèi)半衰期，并從而提供這些分子的功能活性在體內(nèi)的更長持續(xù)時(shí)間。如本文所述，與單獨(dú)的促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子相比，本發(fā)明的組合物可以具有顯著延長的體內(nèi)血清或血漿半衰期和/或增加的AUC和/或增加的平均停留時(shí)間(MRT)。另外，在本發(fā)明的組合物(例如，綴合物或融合體)中，促胰島素分子和/ 或腸降血糖素和/或腸肽分子的活性通常基本上不改變。然而，與單獨(dú)的促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子相比，本發(fā)明組合物的活性的某些變化是可接受的，且通常會(huì)被本發(fā)明組合物的改良的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)補(bǔ)償。例如，本發(fā)明的組合物可以以比單獨(dú)的腸降血糖素/促胰島素劑更低的親和力結(jié)合靶物，但是與單獨(dú)的腸降血糖素/促胰島素劑相比具有大致等效或更優(yōu)的效能，這是由于所述組合物的改良的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)(例如，延長的體內(nèi)血清半衰期、更大的AUC)。另外，由于本發(fā)明的組合物的增加的半衰期，它們可以以比單獨(dú)的促胰島素劑和/或腸降血糖素和/或腸肽藥物更低的頻率施用，例如它們可以每月一次或每周一次地施用給患者，并且與施用單獨(dú)的促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽相比，它們也達(dá)到促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽試劑在血液中的更恒定水平，從而實(shí)現(xiàn)希望的治療效果或預(yù)防效果。藥代動(dòng)力學(xué)分析方法和配體半衰期的測定方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。細(xì)節(jié)可以參見-.Kenneth, A : Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbookfor Pharmacists,和/fetens等X，Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach(1996)。也參見“Pharmacokinetics，，，M Gibaldi & D Perron, Marcel Dekker 出版，2nd Rev. ex edition (1982),它描述了藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)諸如t a和10半衰期和曲線下面積(AUC)。從配體相對(duì)于時(shí)間的血漿或血清濃度曲線，可以確定半衰期(VAci和)和AUC和 MRT?？梢允褂?WinNonlin 分析包(可從 Pharsight Corp. , Mountain View, CA94040,USA得到)，例如，建立曲線的模型。在第一階段(a階段)，配體主要進(jìn)行在患者中的分布，具有一些消除。第二階段階段)是末期，這時(shí)配體已經(jīng)分布，且血清濃度隨著配體從患者清除而降低。ta半衰期是第一階段的半衰期，半衰期是第二階段的半衰期。另外，本領(lǐng)域眾所周知的無分區(qū)擬合模型也可以用于確定半衰期。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明的包含融合體或綴合物的組合物，其中所述融合體或綴合物在例如人受試者中具有在下述范圍內(nèi)的消除半衰期約12小時(shí)或更長，例如約12小時(shí)至約21天，例如約24小時(shí)至約21天，例如約2-8天，例如約3_4天。本發(fā)明的組合物(即包含本文所述的融合體和綴合物的那些)會(huì)提供幾個(gè)另外的優(yōu)點(diǎn)。所述結(jié)構(gòu)域抗體組分是非常穩(wěn)定的，比抗體和抗體的其它抗原-結(jié)合片段更小，可以通過在大腸桿菌或酵母(例如，巴氏畢赤酵母)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞(例如CHO細(xì)胞)中表達(dá)來高 產(chǎn)量地生產(chǎn)，且可以從人來源文庫或從任意希望的物種容易地選擇結(jié)合血清白蛋白的抗體的抗原-結(jié)合片段。因此，可以比通常在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生產(chǎn)的治療劑(例如，人抗體、人源化的抗體或嵌合的抗體)更容易地生產(chǎn)本發(fā)明的包含結(jié)合血清白蛋白的dAb的組合物，且可以使用非免疫原性的dAb (例如,人dAb可以用于治療或診斷人的疾病)。當(dāng)促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子是含有結(jié)合血清白蛋白的dAb的藥物組合物的一部分時(shí)，可以降低所述促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子的免疫原性。因此，本發(fā)明提供了一種組合物，其在含有結(jié)合血清白蛋白的dAb的藥物組合物的背景下，可以具有更低的免疫原性(例如相對(duì)于單獨(dú)的促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子)，或可以是基本上無免疫原性的。因而，這樣的組合物可以在一段時(shí)間內(nèi)重復(fù)施用給受試者，且具有最小的由受試者的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗-藥物抗體而引起的效能損失。另外，與單獨(dú)的促胰島素劑和/或腸降血糖素和/或腸肽試劑相比，本文所述的組合物可以具有增加的安全性特性和更少的副作用。例如，作為dAb的血清白蛋白-結(jié)合活性的結(jié)果，本發(fā)明的融合體和綴合物在血管循環(huán)中具有增加的停留時(shí)間。另外，本發(fā)明的組合物在全身給藥(例如，血管內(nèi)給藥)后基本上不能穿過血腦屏障和積累在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。因此，與單獨(dú)的促胰島素劑和/或腸降血糖素和/或腸肽試劑相比，本發(fā)明的組合物可以以更大的安全性和更小的副作用來施用。類似地，與單獨(dú)的藥物相比，本發(fā)明的組合物可以具有減小的對(duì)特定器官(例如，腎臟或肝臟)的毒性。實(shí)施例
實(shí)施例I: GLP-1 (A8G)或艾塞那肽-4和D0M7h-14 AlbudAb的遺傳融合體的表達(dá)將艾塞那肽-4或GLP-I (7-37)(在第8位的丙氨酸被甘氨酸替換([Gly8] GLP-I))作為與D0M7h-14(結(jié)合血清白蛋白的結(jié)構(gòu)域抗體(dAbXAlbudAb)，其具有下示的氨基酸序列)的融合體克隆進(jìn)PTT-5載體(可從加拿大的CNRC得到)中。在每種情況下，GLP-I或艾塞那肽-4是在構(gòu)建體的5’末端處，dAb是在3’末端處?？傊?，制備了 7個(gè)構(gòu)建體(DAT0114、DAT0115、DAT0116、DAT 0117、DAT 0118、DAT 0119、DAT 0120)，它們具有圖 I (A-G)所示的氨基酸序列。在GLP-I或艾塞那肽4和dAb之間，沒有連接物，或具有g(shù)ly-ser連接物(G4S x3)或螺方定連接物(“Design of the linkers which effectively separate domains of abifunctional fusion protein.’’Protein Eng 14(8): 529-32. 456)或由 GLP-1 或艾塞那肽-4和dAb之間的第二個(gè)GLP-I部分組成的連接物。所述連接物被包括作為間隔物，以使GLP-I或 艾塞那肽-4在空間上與dAb分離，從而防止GLP-I或艾塞那肽-4和GLP-I受體之間的結(jié)合的位阻。構(gòu)建體的序列如圖I (A-G)SEQ ID NO 1_7所示。使用堿性裂解，在大腸桿菌中制備無內(nèi)毒素的DNA (使用無內(nèi)毒素的質(zhì)粒Giga試劑盒，可從Qiagen CA得到)，并用于轉(zhuǎn)染HEK293E細(xì)胞(可從加拿大的CNRC得到)。每個(gè)燒瓶使用 333ul 293fectin(Invitrogen)和 250ug DNA,以 I. 75xl06 細(xì)胞/ml，轉(zhuǎn)染進(jìn) 250ml/燒瓶的HEK293E細(xì)胞，并在30 °C表達(dá)5天。通過離心，收獲上清液，并通過在蛋白L上的親和純化進(jìn)行純化。使蛋白分批結(jié)合樹脂(填充在柱上)，并用10柱體積的PBS洗滌。用50ml0. IM甘氨酸pH2洗脫蛋白，并用Tris pH8中和。在SDS-PAGE凝膠上鑒別預(yù)期尺寸的蛋白，尺寸如下面的表I所示。表I: DAT0114.DAT 0115、DAT0116、DAT 0117、DAT 0118、DAT 0119、DAT 0120 構(gòu)
建體的分子量
白j預(yù)期的分手F
DATOl14 18256_
DATO115~ 16896DATO116~ 15950DATOirT" 19798DATO118~ 15936DATO119~ 15318DAT0120 I18895實(shí)施例2:證實(shí)GLP-I和艾塞那肽-4 AlbudAb融合體會(huì)結(jié)合血清白蛋白
通過表面等離子體共振(Biacore AB,可從GE Healthcare得到),分析GLP-I和艾塞那肽-4 AlbudAb融合體，以得到關(guān)于親和力的信息。使用被血清白蛋白包被的CM5 Biacore芯片(羧甲基化的葡聚糖基質(zhì))，進(jìn)行分析。將每種要測試的血清白蛋白(人、大鼠和小鼠血清白蛋白)的約1000個(gè)共振單元(RU)在乙酸鹽緩沖液pH5. 5中固定化。Biocore AB的流動(dòng)池I是未包被的、阻斷的陰性對(duì)照，流動(dòng)池2被人血清白蛋白(HSA)包被(815 RU)，流動(dòng)池3被大鼠血清白蛋白(RSA)包被(826 RU)，流動(dòng)池4被小鼠血清白蛋白(MSA)包被(938RU)。如上面的實(shí)施例所述，在哺乳動(dòng)物組織培養(yǎng)物中表達(dá)測試的每種融合體分子。如下制備融合體分子的濃度范圍(在16nM-2 u M范圍內(nèi))在BIACORE HBS-EP緩沖液(0. OlM HEPES、pH7. 4、0. 15M NaCl、3mM EDTA、0. 005% 表面活性劑 P20)中稀釋，并流過BIACORE 芯片。通過使結(jié)合速率(on-rate)和解離速率(off-rate)曲線擬合dAb在KD區(qū)域中的濃度所產(chǎn)生的跡線，從BIACORE跡線計(jì)算親和力(KD)。親和力(KD)總結(jié)在下面的表2中
表2: GLP-I和艾塞那肽-4 AlbudAb對(duì)人、大鼠和小鼠血清白蛋白的結(jié)合
權(quán)利要求
1.一種組合物，所述組合物包含單個(gè)融合體或綴合物，其中所述融合體或綴合物包含下述分子，或由其組成(a)至少2種分子，所述分子選自促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子，且它們作為與(b)的融合體或綴合物存在，(b)蛋白或肽，其延長所述促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子的半衰期。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述延長半衰期的蛋白或肽是結(jié)合血清白蛋白、例如人血清白蛋白的蛋白或肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述延長半衰期的蛋白包含特異性地結(jié)合血清白蛋白、例如人血清白蛋白的結(jié)構(gòu)域抗體(dAb )。
4.一種組合物，所述組合物包含至少2種單獨(dú)的融合體或綴合物，且其中每種單獨(dú)的融合體或綴合物包含下述分子，或由其組成(a) —種或多種分子，所述分子選自促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子；其作為與(b)的融合體或綴合物存在，(b)蛋白或肽，其延長所述促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子的半衰期。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述延長半衰期的蛋白或肽是結(jié)合血清白蛋白、例如人血清白蛋白的蛋白或肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述延長半衰期的蛋白包含特異性地結(jié)合血清白蛋白、例如人血清白蛋白的結(jié)構(gòu)域抗體(dAb )。
7.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的組合物，其中所述促胰島素分子和/或腸降血糖素中的至少一種選自GLP-1、PYY、艾塞那肽；或是它們的功能變體、類似物、突變體或衍生物的保留促胰島素分子和/或腸降血糖素活性的肽。
8.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求的組合物，其中至少一種腸降血糖素選自(a)具有圖I(i)(SEQ ID NO 9)所示的氨基酸序列的GLP-I (7-37) A8G突變體或其突變體、衍生物或類似物，(b)具有圖I (j) (SEQ ID NO 10)所示的氨基酸序列的艾塞那肽-4分子或其突變體、衍生物或類似物；和(c)具有圖I (s) (SEQ ID NO 19)所示的氨基酸序列的PYY肽或其突變體、衍生物或類似物。
9.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中所述特異性地結(jié)合血清白蛋白的結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)選自DOM 7h-14 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h_14的氨基酸序列顯示為圖 I (h) : SEQ ID NO 8)，或 DOM 7h_14 -IO(Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h_14_10 的氨基酸序列顯示為圖I (0): SEQ ID NO 15)，和具有R108C突變的DOM 7h_14 -10 (Vk)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb) (DOM 7h-14-10 R108C的氨基酸序列顯示為圖I (r) SEQ ID NO 18)；和 7h-ll-15 AlbudAb (DOM 7h_ll_15 的氨基酸序列顯示為圖 I (p) : SEQ ID NO 16)和7h-ll-15 R108C AlbudAb (DOM 7h_ll_15 R108C 的氨基酸序列顯示為圖 I (T) : SEQ IDNO 47);或這樣的dAb，其結(jié)合在血清白蛋白上的相同表位，或其與它們中的任一種競爭與血清白蛋白的結(jié)合。
10.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其另外包含氨基酸連接物或化學(xué)連接物，所述連接物連接促胰島素分子和/或腸降血糖素分子和/或腸肽和結(jié)合血清白蛋白的dAb o
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其中所述氨基酸連接物選自具有圖I(k) (SEQID NO 11)所示的氨基酸序列的螺旋連接物，具有圖I (I) (SEQ ID NO 12)所示的氨基酸序列的gly-ser連接物,或PEG連接物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述PEG連接物具有圖3所示的PEG連接物結(jié)構(gòu)。
13.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中所述促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子存在于所述dAb的N-端或C-端中的任一端或兩端處。
14.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中一個(gè)或多個(gè)促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽存在于所述dAb的C端處，且另外，一個(gè)或多個(gè)促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子存在于所述dAb的N端處。
15.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其包含一種或多種在下面指出的肽-AlbudAb 分子圖 la-lg (SEQ ID NO 1-7);和圖 lm-ln (SEQ ID NO 13-14);和圖 Iu-Iv (SEQ ID NO 48-49);和圖 3 或 Dom7h-ll_15 (R108C) - PEG - 3-36 PYY (賴氨酸在第 10位)(具有圖3所示的結(jié)構(gòu)，但是AlbudAb組分是Dom7h-l 1-15 (R108C))。
16.根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求6所述的組合物，其包含(a)DATOl 15分子(具有在圖lb: SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列)，和(b)或(c)中的任一項(xiàng)(b)Dom7h-14-10(R108C) - PEG - 3-36 PYY (賴氨酸在第10位)(具有圖3所示的結(jié)構(gòu))，作為組合的制備物，用于同時(shí)地、分開地或相繼地使用，(c)Dom7h-ll-15 (R108C) - PEG - 3-36 PYY (賴氨酸在第10位)(具有圖3所示的結(jié)構(gòu)，但是AlbudAb組分是Dom7h-ll-15 (R108C))。
17.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中通過向所述蛋白或肽上連接選自下述的額外分子PEG基團(tuán)、血清白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體或至少其轉(zhuǎn)鐵蛋白-結(jié)合部分、抗體Fe區(qū)域，或通過綴合抗體結(jié)構(gòu)域，將所述延長半衰期的蛋白或肽被進(jìn)一步格式化，以增加它的流體動(dòng)力學(xué)尺寸。
18.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中所述融合體或綴合物包含另外的肽或多肽部分。
19.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中所述融合體或綴合物包含額外的dAb部分,所述dAb部分具有與選自下述的AlbudAb相同或不同的結(jié)合特異性Dom7h_14、Dom7h-ll_15 或任一種 Dom 7h-14_10 dAb。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的組合物，其中所述額外的dAb與Dom7h-14、Dom7h-ll_15或任一種Dom 7h-14-10 dAb競爭結(jié)合。
21.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中所述融合體或綴合物在人類中具有12小時(shí)或更長、例如12-21天的消除半衰期。
22.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其中所述融合體或綴合物以在約5微摩爾至約I皮摩爾范圍內(nèi)的KD結(jié)合人血清白蛋白。
23.一種藥物組合物，其包含與藥學(xué)上或生理上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑相組合的根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的組合物，其包含其它治療劑或活性劑。
25.一種組合物，所述組合物包含(a)根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)所述的組合物，和(b)其它治療劑或活性劑；它們用于分開地、相繼地或并行地施用給受試者。
26.一種組合物，所述組合物包含2種或更多種根據(jù)權(quán)利要求3或6所述的融合體或綴合物作為組合的制備物，用于同時(shí)地、分開地或相繼地用于治療中，所述融合體或綴合物各自包含下述分子，或由其組成(a)—個(gè)或多個(gè)促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子，其作為與(b)的融合體或綴合物存在，(b)特異性地結(jié)合血清白蛋白的結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)o
27.根據(jù)任一項(xiàng)前述權(quán)利要求所述的組合物，其用于治療或預(yù)防代謝性疾病或障礙。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的組合物，其中所述疾病或障礙選自高血糖癥、葡萄糖耐受不良、3細(xì)胞缺乏、糖尿病(I型或II型糖尿病或妊娠糖尿病)、肥胖癥、特征在于進(jìn)食過量的疾病。
29.根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物在藥物制備中的應(yīng)用，所述藥物用于治療或預(yù)防代謝性疾病或障礙。
30.根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物在藥物制備中的應(yīng)用，所述藥物用于通過皮下、靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射遞送給受試者。
31.根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物在藥物制備中的應(yīng)用，所述藥物用于腸胃外、口服、直腸、透粘膜、皮下注射、眼、肺或胃腸道遞送。
32.—種治療或預(yù)防代謝病的方法，所述方法包括，給患者施用治療或預(yù)防有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物。
33.一種口服的、可注射的、可吸入的或可霧化的制劑，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物。
34.一種栓劑形式的持續(xù)釋放制劑，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物。
35.一種冷凍干燥制劑，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物。
36.一種遞送裝置，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物。
37.一種分離的或重組的核酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的融合體。
38.一種核酸，其編碼根據(jù)權(quán)利要求15所述的融合體。
39.一種載體，其包含根據(jù)權(quán)利要求37或38所述的核酸。
40.一種非胚胎宿主細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求37或38所述的核酸或根據(jù)權(quán)利要求39所述的載體。
41.一種治療或預(yù)防患者的與高血糖有關(guān)的代謝性疾病或障礙的方法，所述方法包括，給所述患者施用治療或預(yù)防有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述疾病或障礙選自高血糖癥、葡萄糖耐受不良、3細(xì)胞缺乏、糖尿病(I型或II型糖尿病或妊娠糖尿病)、肥胖癥、特征在于進(jìn)食過量的疾病。
43.一種在患者中刺激胰島素產(chǎn)生和/或增加胰島素敏感性的方法，所述方法包括，給所述患者施用至少一個(gè)劑量的根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物。
44.一種治療或預(yù)防腫瘤生長、例如胰腺腫瘤生長的方法，所述方法包括，給所述患者施用治療或預(yù)防有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物；或包含PYY和AlbudAb的單個(gè)融合體或綴合物，例如本文所述那些中的任一種。
45.一種治療或預(yù)防胰腺炎的方法，所述方法包括，給所述患者施用治療或預(yù)防有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的組合物；或包含PYY和AlbudAb的單個(gè)融合體或綴合物。
46.根據(jù)權(quán)利要求44或45所述的方法，其中所述PYY是3-36PYY，且所述AlbudAb是本文所述那些中的任一種。全文摘要
本發(fā)明涉及具有改良的血清半衰期的藥物融合體和綴合物。這些融合體和綴合物包含免疫球蛋白(抗體)單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域和促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子。本發(fā)明另外涉及包含這樣的藥物融合體和綴合物的應(yīng)用、制劑、組合物和裝置。本發(fā)明也涉及組合物，其包含超過一個(gè)作為融合體或綴合物的一部分而存在的促胰島素分子和/或腸降血糖素和/或腸肽分子，也涉及所述組合物的應(yīng)用和制劑。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102666586SQ201080053892
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2010年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月30日
發(fā)明者B.哈米爾頓, C.赫林, M.A.保利克 申請(qǐng)人:葛蘭素集團(tuán)有限公司