專利名稱：含膠原蛋白與透明質(zhì)酸的細胞組織膠體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種含膠原蛋白與透明質(zhì)酸的細胞組織膠體。
背景技術(shù)：
將干細胞療法用于治療退化性疾病被視為是一種相當(dāng)有希望的方法。然而，欲將
干細胞保留在受術(shù)病患(recipient)體內(nèi)的植入位置(implantation site)并且維持其存活度以實現(xiàn)組織修復(fù)仍具有一定的挑戰(zhàn)性。因此，研發(fā)一種能夠促使干細胞伴隨著高存活度地移植于特定位置的一種介質(zhì)(例如細胞組織膠體)是目前相關(guān)產(chǎn)學(xué)界亟需達到的重要目標(biāo)之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是基于下列不可預(yù)期的發(fā)現(xiàn)當(dāng)干細胞生長于一種含有特定重量比例的膠原蛋白與透明質(zhì)酸(又名玻尿酸)的混合物、細胞培養(yǎng)基以及選擇性地加入明膠(gelatin)的細胞組織膠體中時，則干細胞能夠表現(xiàn)出更佳的存活力。因此，本發(fā)明提供一種含有膠原蛋白與透明質(zhì)酸的細胞組織膠體，其中以整體重量為基礎(chǔ)，該膠原蛋白與該透明質(zhì)酸的比例介于O. 01比I與100比I之間；該透明質(zhì)酸的濃度可為O. 001mg/ml至100mg/ml (例如0. 01mg/ml至lmg/ml),而該膠原蛋白的濃度可為0. lmg/ml至100mg/ml,該透明質(zhì)酸的濃度為0. O lmg/ml至35mg/ml ;更佳的是,該膠原蛋白的濃度介于3mg/ml至40mg/ml (諸如6mg/ml或9mg/ml),該透明質(zhì)酸的濃度為0. 2mg/ml至20mg/ml。本發(fā)明的細胞組織膠體可進一步包含有可供細胞生長的營養(yǎng)素(例如一細胞培養(yǎng)基)、生物活性劑、一個或多個基質(zhì)要素以及/或干細胞。該生物活性劑可為一生長因子，例如上皮生長因子(epidermal growth factor)、纖維母細胞生長因子(broblast growth factor, FGF)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growthfactor, VEGF)、結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth fcator)、血小板衍生性生長因子(platelet-derived growth factor, F1DGF)、類膜島素生長因子(insulin-likegrowth factor)、神經(jīng)生長因子(nerve growth factor)、肝細胞生長因子(hepatocytegrowth factor, HGF)、細胞聚落刺激因子(colony-stimulating factor)、干細胞因子(stem call factor)、角質(zhì)細胞生長因子(keratinocyte growth factor)、顆粒球細胞聚落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor)、顆粒球巨卩遼細胞聚落刺激因子(granulocyte macrophage colony-stimulating factor)、膠質(zhì)衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial-derived neurotropic factor)、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(ciliary neurotrophicfactor)、內(nèi)皮單核細胞活化多勝妝(endothelial-monocyte activating polypeptide)、上皮中性粒細胞活化勝肽(epithelial neutrophil activating peptide)、紅血球生成素(erythropoietin)、骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)、大腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor)、BRAK、轉(zhuǎn)化生長因子-β (transforminggrowth factor beta)及腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor)。可使用的基質(zhì)要素包括，但不限于明膠(gelatin)、纖維連接蛋白(bronectin)、彈性蛋白(elastin)、細胞黏合素(tenacin)、層黏蛋白(Iaminin)、玻璃連接蛋白(vitronectin)、多勝肽(polypeptides)、硫酸肝素(heparan sulfate)、軟骨素(chondroitin)、硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)、角質(zhì)素(keratin)、硫酸角質(zhì)素(keratin sulfate)、硫酸皮膚素(dermatan sulfate)、鹿角菜膠(carrageenan)、肝素(heparin)、幾丁質(zhì)(chitin)、幾丁聚糖(chitosan)、褐藻膠(alginate)、瓊脂糖(agarose)、瓊脂(agar)、纖維素(cellulose)、甲基纖維素(methyl cellulose)、竣甲基纖維素(carboxyl methyl cellulose)以及肝酉唐(glycogen)。當(dāng)該細胞組織膠體含有明膠時，明膠的濃度可介于O. O lmg/ml至100mg/ml之
間(諸如lmg/ml)。較佳的，該膠原蛋白以及該透明質(zhì)酸于該含有明膠的細胞組織膠體中的濃度分別介于6mg/ml至40mg/ml之間以及O. 2mg/ml至20mg/ml之間。本發(fā)明亦提供一種輸送細胞(例如干細胞)于受體的方法，其包含有提供一含有上述該細胞組織膠體的細胞植入體，且細胞生長于該細胞組織膠體中；將該細胞植入體置于受體內(nèi)的某一位置。使用該細胞組織膠體制備一種用于細胞輸送的細胞植入體的方法也屬于本發(fā)明的范疇。
具體實施例方式下文特舉本發(fā)明一些實施例作詳細說明如后。本發(fā)明的其他目的或特征將呈現(xiàn)于后述實施例以及隨附的權(quán)利要求書中。在此所述為一種含有膠原蛋白與透明質(zhì)酸的細胞組織膠體，該膠原蛋白與該透明質(zhì)酸的重量比例介于0. 01比I與100比I之間，并且可選擇性地包括一個或多個其他成分，諸如基質(zhì)要素、生物活性劑以及可供細胞生長的營養(yǎng)素。膠原蛋白任何自然產(chǎn)生的膠原蛋白或是其他具有功能性的膠原蛋白的變異體均可被用來制備本發(fā)明的組織膠體。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少有28種帶有不同遺傳訊息的膠原蛋白。膠原蛋白容易從富含膠原蛋白的組織中單獨分離或純化出來，富含膠原蛋白的組織有諸如皮膚、肌腱、韌帶以及人類或動物的骨頭。分離及純化膠原蛋白的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員皆可得知的方法，可參見所附的文獻US第5，512，291號專利、US第2004/0138695號專利、Methods in Enzymology, vol. 82, pp. 33-64, 1982> The Preparation of Highlypurified Insoluble Collagen,Oneson, I. , et al., Am. Leather Chemists Assoc. , Vol.LXV, pp. 440-450, 1970,US第6，090, 996號專利。膠原蛋白也可通過重組技術(shù)制備而成，此類重組技術(shù)可見于一般文獻(諸如Advanced Tissue Sciences (La Jolla, Calif.),或者自商業(yè)渠道購得(例如 Fibergen 或 South San Francisco, Calif. ) 以下利用一實例進行闡述。將小牛的深屈肌腱移除脂肪與筋膜(fascia)后，將其以水清洗并冷凍，而后切成復(fù)數(shù)個厚度均為0. 5毫米的肌腱薄片。取適量的肌腱薄片置入50毫升的水中，于室溫下進行第一次萃取，所需時間為24小時，其中水溶性的部份會被去除，而后該等肌腱薄片置入一酸性溶液(例如O. 2N氫氯酸溶液)中，于一適當(dāng)溫度下(例如室溫下)進行萃取一段時間(例如12小時至24小時)；隨后將酸性溶液除去，并以水沖洗該等肌腱薄片洗去殘留的酸；經(jīng)沖洗后的肌腱薄片再置入一堿性溶液中(例如O. 75M氫氧化鈉溶液)于一適當(dāng)溫度下(例如室溫下)一段時間(例如12小時至24小時)；將堿性溶液去除后，該等肌腱薄片以一酸性溶液(例如O. IN氫氯酸溶液)調(diào)整pH值為4至7 (例如PH值為5)，再重復(fù)以水清洗該等肌腱薄片直至殘留的堿完全去除；該等肌腱薄片以醇類溶劑(例如異丙醇)進行脫脂一段時間(例如16小時)，輕輕將萃取劑倒出，然后再以醇類溶劑(例如異丙醇)于適當(dāng)溫度下(例如室溫下)進一步進行萃取一段時間(例如12小時至24小時)，以形成一含膠原蛋白的溶液，該含膠原蛋白的溶液置于一干凈的無菌操作臺中風(fēng)干而形成膠原蛋白粉末。該膠原蛋白粉末可分散于一酸性溶液(例如O. 5M或O. 25M醋酸水溶液)中形成一混合物，且存在有一蛋白質(zhì)水解酶(例如胰蛋白酶或胃蛋白酶)，于4°C下培養(yǎng)一段時間；所述的混合物經(jīng)由100目的不銹鋼篩網(wǎng)過濾后，呈溶解狀態(tài)的膠原蛋 白則于5%氯化鈉溶液形成沉淀；膠原蛋白沉淀物可再度溶解于前述的酸性溶液中而形成膠原蛋白溶液，并且經(jīng)由100目的不銹鋼篩網(wǎng)過濾以去除其中的不溶物。而后將該膠原蛋白溶液于蒸餾水中進行透析以去除其中的酸類。誘明質(zhì)酸該用語“透明質(zhì)酸(hyaluronan) ”是指存在于自然界中、具有陰離子且未經(jīng)硫酸化的葡萄糖胺聚糖(glycosaminoglycan),其包含N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine)、D-葡萄糖醒酸(D-glucuronic acid)及其衍生物的雙醣分子重復(fù)單元。自然存在的透明質(zhì)酸(也可稱之為玻尿酸)可以利用現(xiàn)有的技術(shù)自天然的物質(zhì)來源中分離出，例如B型鏈球菌的膠囊、雞冠、軟骨、關(guān)節(jié)液、臍帶、皮膚組織以及眼球的玻璃質(zhì)，可參考如GuillermoLago et al. Carbohydrate Polymers 62(4):321-326, 2005 以及 Ichika Amagai etal. Fisheries Science 75 (3) : 805-810，2009等文獻。除此之外,透明質(zhì)酸亦可經(jīng)由商業(yè)渠道購得，例如 Genzyme Corporation^ Lifecore Biomedical, LLC 以及 Hyaluron ContractManufacturing。天然透明質(zhì)酸的衍生物包括,但不限于透明質(zhì)酸酯(hyaluronan esters)、經(jīng)己二酸二酸餅修飾的透明質(zhì)酸(adipic dihydrazide-modified hyaluronan)、透明質(zhì)酸胺產(chǎn)物(hyaluronan amide products)、交聯(lián)透明質(zhì)酸(cross-linked hyaluronic acid)、琥拍酸半酯(hemiesters of succinic acid)及其重金屬鹽類、部分或整體的透明質(zhì)酸酯、硫化透明質(zhì)酸(sulphated hyaluronic acid)、N-硫化透明質(zhì)酸(N-sulphatedhyaluronic acid)、以及經(jīng)胺基或二胺基修飾的透明質(zhì)酸(amine or diamine-modifiedhyaluronic acid)?？赏ㄟ^對一個或多個以上的官能基(例如羧基、氫氧基、還原端基團、N-乙酰基)進行化學(xué)修飾以獲得上述物質(zhì)。其中對羧基進行修飾的方式可通過酯化反應(yīng)或經(jīng)過碳二亞胺(carbodiimide)及雙酰肼(bishydrazide)等中間物的反應(yīng)達成；氫氧基的修飾包括，但不限于硫酸化反應(yīng)、酯化反應(yīng)、異脲偶合(isourea coupling)反應(yīng)、溴化氰活化(cyanogen bromide)反應(yīng)、過碘酸鹽氧化(periodate oxidation)反應(yīng)；對還原端基團進行修飾可通過還原胺化反應(yīng)(reductive amination)達成,亦可連結(jié)一磷月旨(phospholipid)、一染料(例如熒光基團或發(fā)色基團)或一適用于制備親和性基質(zhì)的試劑。天然透明質(zhì)酸的衍生物可通過使用交聯(lián)劑進行交聯(lián)反應(yīng)，該交聯(lián)劑例如雙環(huán)氧化物(bisepoxide)、二乙烯基諷(divinylsulfone)、碳二亞胺(biscarbodiimide)、小型同質(zhì)雙功能鏈接劑(small homobifunctional linker)、甲醒、環(huán)己基異氰化物(cyclohexylisocyanide)以及離胺酸醚酯、金屬陽離子、酰肼交聯(lián)反應(yīng)或其混合物；或者可通過內(nèi)酯化(internal esterification)、光交聯(lián)反應(yīng)(photocross-linking)或表面電衆(zhòng)處理(surface plasma treatment)。用于細胞生長的營養(yǎng)素該用語“營養(yǎng)素(nutrient) ”是指細胞生長的必要營養(yǎng)來源，其可以是氨基酸、維生素、礦物質(zhì)、碳源(如葡萄糖)、脂肪酸或其混合物。于一實例中，在本發(fā)明的細胞組織膠體中所使用的營養(yǎng)素為細胞培養(yǎng)基，該細胞培養(yǎng)基例如=MEM培養(yǎng)基(Minimum EssentialMedium)、BME 培養(yǎng)基(Basal Medium Eagle)、DMEM培養(yǎng)基(Dulbecco’s Modified Eagle’smedium)，Ham’s F-10 培養(yǎng)基(Ham，s Nutrient Mixtures F_10)、Ham’s F-12 培養(yǎng)基(Ham，s Nutrient Mixtures F-12)、M199 培養(yǎng)基(Medium 199)、RPMI 培養(yǎng)基(RPMI medium) > Ames培養(yǎng)基(Ames’ Media)、BGJb 培養(yǎng)基[BGJb Medium(Fitton-Jackson Modification)]、Click 培養(yǎng)基(Click，s medium)、CMRL-1066 培養(yǎng)基(CMRL-1066 Medium)、Fischer 培養(yǎng)基(Fischer，s Medium)、GMEM 培養(yǎng)基(Glasgow Minimum Essential Medium)、IMDM 培養(yǎng)基(Iscove，s Modified Dulbecco，s Medium)、L-15 培養(yǎng)基(L_15Medium)、McCoy，s 5A培養(yǎng)基(McCoy，s 5A Modified Medium)、NCTC 培養(yǎng)基(NCTC Medium)、Swim，s S-77 培養(yǎng)基(Swim’s S_77Medium)、Waymouth 培養(yǎng)基(Waymouh Medium)或 William’s Medium E 培養(yǎng)基(William，s Medium E)。牛物活件劑任何增進細胞存活力、促進細胞增生或誘導(dǎo)細胞分化的試劑(例如勝肽、多勝肽、寡糖、多糖或小分子)均可用于制備本發(fā)明的細胞組織膠體。于一實例中，該生物活性劑為生長因子，諸如上皮生長因子、纖維母細胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、結(jié)締組織生長因子、血小板衍生性生長因子、類胰島素生長因子、神經(jīng)生長因子、肝細胞生長因子、細胞聚落刺激因子、干細胞因子、血清素(serotonin)、溫韋伯式因子(vonWillebrand factor)、轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor)、角質(zhì)細胞生長因子、顆粒球細胞聚落刺激因子、顆粒球/巨曬細胞聚落刺激因子(granulocyte/macrophagecolony-stimulating factor)、膠質(zhì)衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、內(nèi)皮單核細胞活化多勝肽、上皮中性粒細胞活化勝肽、紅血球生成素、骨形成蛋白、大腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子；在另一實例中，該生物活性劑可為細胞激素(cytokine)或趨化激素(chemokine),其包含但不限于介白素-2(interleukin-2，IL-2)、胸表達趨化素(例如BRAK)、腎表達趨化素(例如CXCL14);該生物活性劑亦可為細胞分化因子,諸如甲氟烯素(dexamethasone)、丙酮酸鈉(sodium pyruvate)、維生素 C 憐酸鹽(ascorbic acid-2-phosphate)、維生素 A 酸(retinoic acid)、脯氨酸(proline)、膜島素、運鐵蛋白(transferrin)、亞硒酸(selenousacid)、亞麻油酸(linoleic acid)、小牛血清蛋白(bovine serum albumin)以及轉(zhuǎn)化生長因子-3 3(TGF-3 3)。于一較佳的實施例中，該細胞分化因子為一化合物。其中，可參見US專利第5，908, 784號專利，該化合物可促進間葉干細胞(mesenchymal stem cell)的軟骨生成作用(chondrogenesis);而該化合物若為甲氟烯索(dexamethasone)、維生素 C(ascorbic acid)及 β -甘油憐酸酯(β-glycerol phosphate)時，則可促進骨生成作用(osteogenesis);該化合物若為胰島素、異丁基-甲基黃嘌呤(isobutyl-methyl xanthine)、甲氟烯索及美灑辛(indomethacin)時，則可促進脂肪生成作用(adipogenesis);該化合物若為活化素A(activin-A)及骨形成蛋白-4 (bone morphogenetic protein-4, BMP-4)時，則可促進心肌分化作用(cardiomyogenic differentiation);該化合物若為內(nèi)皮細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(endothelial basal medium-2, EBM-2)、甲氟烯素及血管內(nèi)皮生長因子時，則可促進內(nèi)皮細胞分化作用(endothelial cell differentiation);該化合物若為血小板衍生性生長因子-BB(PDGF-BB)時，則可促進平滑肌細胞分化作用(smooth muscle celldifferentiation);該化合物若為堿性纖維母細胞生長因子(bFGF)、上皮細胞生長因子(epithelial growth factor, EGF)、B27 營養(yǎng)補給物(B27supplement)、二甲基亞諷(dimethyl sulfoxide, DMS0)、丁基輕苯甲醚(butylated hydroxyanisole)、氟斯柯林(forskolin)、丙戍酸(valproic acid)、氯化鉀(KCl)、K252a蛋白及N2營養(yǎng)補給物(N2supplement),則可促進神經(jīng)誘導(dǎo)機制(neural induction);該化合物若為甲氟烯
素、肝細胞生長因子、纖維母細胞生長因子-4(FGF-4)時，則可促進內(nèi)胚層品系分化作用(endodermal lineage differentiation)。該生物活性劑亦可以是一種中草藥或是中草藥內(nèi)部的活性成分。基質(zhì)要素一種基質(zhì)要素可為一種輔助將細胞維持在植入位置的化合物，其可以是一種于細胞外基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的胞外因子(extracellular factor)。該基質(zhì)要素例如,但不限于明膠、纖維連接蛋白彈性蛋白、細胞黏合素(tenacin)、層黏蛋白、玻璃連接蛋白、多勝肽、硫酸肝素、軟骨素、硫酸軟骨素、角質(zhì)素、硫酸角質(zhì)素、硫酸皮膚素、鹿角菜膠、肝素、幾丁質(zhì)、幾丁聚糖、褐藻膠、瓊脂糖、瓊脂、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、肝醣及其衍生物。此外，該基質(zhì)要素可以是纖維蛋白(brin)、纖維蛋白原(fibrinogen)、凝血酶(thrombin)、多聚谷氨酸(polyglutamic acid)、合成巨分子或交聯(lián)劑；其中該合成巨分子系可為丙烯酸酯(acrylate)、聚乳酸(polylactic acid)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)或聚乳酸-乙醇酸[poly (lactic-co-glycolic acid)],而該交聯(lián)劑系可為京尼平(genipin)、戍二醒(glutaraldehyde)、甲醒(formaldehyde)、環(huán)氧化合物(epoxide)。較佳的，用于此處所描述的組織膠體中的該基質(zhì)要素具有較高的分子量，借此使得膠體的黏度增加。內(nèi)嵌細胞的組織膠體的制備此處所述的該組織膠體可通過將前述各成分以一理想的重量比例混合，并且將混合物置于適當(dāng)?shù)沫h(huán)境中以形成膠體。為了制備一內(nèi)部嵌埋有細胞的膠體，可將細胞與該等膠體成分混合，其中細胞可為自哺乳類動物(例如牛、豬、老鼠、馬、狗、貓、綿羊、猴子及人類)體內(nèi)獲得的干細胞。該干細胞例如，但不限于胎盤干細胞(placenta-derived stemcells)、骨髓干細胞(bone marrow-derived stem cells)、基質(zhì)細胞(stromal cells)、間葉干細胞、組織先驅(qū)細胞(tissue progenitor cells)、胚細胞(blast cells)或纖維母細胞；其中該基質(zhì)細胞可為脂肪衍生基質(zhì)細胞(adipose-derived stromal cells)。藉此，該組織膠體則可制備完成且其內(nèi)部嵌埋有細胞，該組織膠體可植入一理想的位置以實現(xiàn)組織修復(fù)及其他醫(yī)療上的用途。相信在本領(lǐng)域技術(shù)人員基于前述的描述，都可將本發(fā)明充分的利用而不需進一步的詳細描述。因此，下文所舉實施例僅僅只是作為范例，并非用以在任何方面限制本發(fā)明。在此引用的所有文獻作為參照并入本案。實施例I :含有膠原蛋白及透明質(zhì)酸的組織膠體中的干細胞存活度絨毛膜絨毛(chorionic villi)可從人類的足月胎盤獲得，經(jīng)由機械方式將其切碎后并以膠原蛋白酶處理，而獲得含有胎盤間葉干細胞的材料。該含有胎盤間葉干細胞的材料系分別依序由孔徑為300 μ mUOO μ m、37 μ m的篩網(wǎng)過篩，然后以percoll密度梯度離心法(percoll density gradient centrifugation)收集干細胞。將該干細胞以 IO5-IO7細胞數(shù)/ml的濃度懸浮于內(nèi)含有2x低量葡萄糖且添加有20%胎牛血清以及200U/ml紫菌素(gentamycin)的DMEM培養(yǎng)基(購自Gibco BRL, Life Technologies),并且混合于不同份量的透明質(zhì)酸以形成一懸浮液。將自豬皮中取得的膠原蛋白溶解于0. OlN氫氯酸溶液中以形
成一具有PH 4至7的膠原蛋白溶液。該膠原蛋白溶液與干細胞懸浮液以相等體積混合以形成混合溶液，該混合溶液可含有6mg/ml的膠原蛋白以及0. 05mg/ml、0. 2mg/ml或0. 5mg/ml的透明質(zhì)酸，或者含有9mg/ml膠原蛋白以及0. 2mg/ml透明質(zhì)酸。實驗過程中并使用具有等量干細胞數(shù)目且分別含有6mg/ml以及9mg/ml膠原蛋白的混合溶液作為對照組。上述任何混合溶液均置于37° C的培養(yǎng)箱中30分鐘，以使得其內(nèi)部的膠原蛋白開始進行固化，以形成一內(nèi)嵌干細胞的組織膠體。該組織膠體于37° C下且流通有5% 二氧化碳的環(huán)境中進行培養(yǎng)，所需天數(shù)最多14天。在不同時間點(如培養(yǎng)第I天、培養(yǎng)第7天及培養(yǎng)第14天)的細胞存活度通過錐藍染色法(trypan blue staining)測定,細胞存活度試驗的測試結(jié)果如表I所示。表I在含有膠原蛋白及透明質(zhì)酸的組織膠體中，干細胞存活度的結(jié)果比較表
權(quán)利要求
1.一種細胞組織膠體，其包含有膠原蛋白與透明質(zhì)酸，且是以整體重量為基礎(chǔ)，該膠原蛋白與該透明質(zhì)酸的比例介于O. Ol比I與100比I之間。
2.如權(quán)利要求I所述的細胞組織膠體，其中該透明質(zhì)酸的濃度為O.001mg/ml至100mg/ml。
3.如權(quán)利要求2所述的細胞組織膠體,其中該透明質(zhì)酸的濃度為O.01mg/ml至40mg/ml ο
4.如權(quán)利要求I所述的細胞組織膠體，其中該膠原蛋白的濃度為O.001mg/ml至100mg/ml。
5.如權(quán)利要求I所述的細胞組織膠體，其中該膠原蛋白的濃度為O.lmg/ml至IOOmg/ml以及該透明質(zhì)酸的濃度為0. O lmg/ml至35mg/ml。
6.如權(quán)利要求5所述的細胞組織膠體,其中該膠原蛋白的濃度為3mg/ml至40mg/ml以及該透明質(zhì)酸的濃度為O. 2mg/ml至20mg/ml。
7.如權(quán)利要求I所述的細胞組織膠體，其進一步包含有營養(yǎng)素以及生物活性劑。
8.如權(quán)利要求7所述的細胞組織膠體，其中該營養(yǎng)素為細胞培養(yǎng)基。
9.如權(quán)利要求7所述的細胞組織膠體，其中該生物活性劑選自于下列生長因子上皮生長因子、纖維母細胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、結(jié)締組織生長因子、血小板衍生性生長因子、類胰島素生長因子、神經(jīng)生長因子、肝細胞生長因子、細胞聚落刺激因子、干細胞因子、角質(zhì)細胞生長因子、顆粒球細胞聚落刺激因子、顆粒球巨噬細胞聚落刺激因子、膠質(zhì)衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、內(nèi)皮單核細胞活化多勝肽、上皮中性粒細胞活化勝肽、紅血球生成素、骨形成蛋白、大腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子、BRAK、轉(zhuǎn)化生長因子、腫瘤壞死因子及其混合物所構(gòu)成的群組。
10.如權(quán)利要求7所述的細胞組織膠體，其進一步包含有干細胞。
11.如權(quán)利要求I所述的細胞組織膠體，其進一步包含有一種或多種選自于下列的基質(zhì)要素所構(gòu)成的群組明膠、纖維連接蛋白、彈性蛋白、細胞黏合素(tenacin)、層黏蛋白、玻璃連接蛋白、多勝肽、硫酸肝素、軟骨素、硫酸軟骨素、角質(zhì)素、硫酸角質(zhì)素、硫酸皮膚素、鹿角菜膠、肝素、幾丁質(zhì)、幾丁聚糖、褐藻膠、瓊脂糖、瓊脂、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素以及肝醣。
12.如權(quán)利要求6所述的細胞組織膠體，其進一步包含有營養(yǎng)素以及生物活性劑。
13.如權(quán)利要求12所述的細胞組織膠體，其中該營養(yǎng)素為細胞培養(yǎng)基。
14.如權(quán)利要求12所述的細胞組織膠體，其中該生物活性劑選自于下列生長因子上皮生長因子、纖維母細胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、結(jié)締組織生長因子、血小板衍生性生長因子、類胰島素生長因子、神經(jīng)生長因子、肝細胞生長因子、細胞聚落刺激因子、干細胞因子、角質(zhì)細胞生長因子、顆粒球細胞聚落刺激因子、顆粒球巨噬細胞聚落刺激因子、膠質(zhì)衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、內(nèi)皮單核細胞活化多勝肽、上皮中性粒細胞活化勝肽、紅血球生成素、骨形成蛋白、大腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子、BRAK、轉(zhuǎn)化生長因子、腫瘤壞死因子及其混合物所構(gòu)成的群組。
15.如權(quán)利要求12所述的細胞組織膠體，其進一步包含有干細胞。
16.如權(quán)利要求6所述的細胞組織膠體，其進一步包含有一種或多種選自于下列基質(zhì)要素明膠、纖維連接蛋白、彈性蛋白、細胞黏合素(tenacin)、層黏蛋白、玻璃連接蛋白、多勝肽、硫酸肝素、軟骨素、硫酸軟骨素、角質(zhì)素、硫酸角質(zhì)素、硫酸皮膚素、鹿角菜膠、肝素、幾丁質(zhì)、幾丁聚糖、褐藻膠、瓊脂糖、瓊脂、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素以及肝醣所構(gòu)成的群組。
17.如權(quán)利要求16所述的細胞組織膠體,其中明膠的濃度為O.O lmg/ml至10mg/ml,膠原蛋白的濃度為6mg/ml至40mg/ml,以及透明質(zhì)酸的濃度O. 2mg/ml至20mg/ml。
18.如權(quán)利要求17所述的細胞組織膠體，其中該明膠的濃度為lmg/ml。
19.一種輸送干細胞于受體的方法，其包含 提供一細胞植入體，其包含如權(quán)利要求I所述的細胞組織膠體，且干細胞系生長于該細胞組織膠體中；以及 將該細胞植入體置于受體內(nèi)的某一位置。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于一種含膠原蛋白與透明質(zhì)酸的細胞組織膠體，其中膠原蛋白與透明質(zhì)酸的重量比介于0.01比1與100比1之間。
文檔編號A61K47/48GK102791254SQ201080058889
公開日2012年11月21日 申請日期2010年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月22日
發(fā)明者黃玲惠 申請人:卓醫(yī)生技公司, 成功大學(xué)