專利名稱：一種羅望子殼提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明具體涉及一種羅望子殼提取物及其制備方法和應用。
背景技術：
近年來，肥胖及患糖尿病的人數(shù)呈增加的趨勢。這是由于食物中淀粉等糖類在胃 腸道中經(jīng)α-淀粉酶及其他α-葡萄糖苷酶(如蔗糖酶和麥芽糖酶)作用而消化，變成葡萄 糖后被體內(nèi)消化，使血糖上升并刺激胰臟分泌胰島素。在正常情況下，血中的葡萄糖很快 被代謝變成熱量釋放，但當營養(yǎng)過剩(攝取的能量過多)和活動量少(消耗的能量過少)的時 候，在胰島素的作用下，促使脂肪細胞攝取血中的葡萄糖，并將其轉化為脂肪，引起脂肪細 胞的肥大及全身脂肪的異常蓄積，從而發(fā)生肥胖。如果體內(nèi)胰島素分泌不足，或胰島素的作 用被鈍化，則出現(xiàn)持續(xù)高血糖，在飲食不加控制的情況下，食后血糖更加異常升高，超過一 定的閾值后便從尿中排泄出糖，形成所謂糖尿病。糖尿病的高血糖還將引起糖尿病性動脈 硬化、腎病變、微血管病變、視網(wǎng)膜病變等，誘發(fā)一系列并發(fā)癥。因此，控制血糖對于預防和 治療肥胖病、糖尿病都是一項首要任務。目前，控制血糖的首選方法是節(jié)制飲食，特別是糖類食物的攝入，但這一方法需抑 制食欲及忍受饑餓，難于長期堅持下去，甚至由于過分節(jié)食造成營養(yǎng)不良，誘發(fā)其他疾病。α -淀粉酶抑制劑的發(fā)明和應用提供了一種理想的控制血糖的方法，它只阻滯淀 粉類食物在胃腸道中的消化、吸收，而不影響其他營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝，故能選擇性地減 少能量的攝取，降低食后血糖，避免或減少糖類向脂肪的轉化，起到減肥和預防肥胖的作 用，并在改善糖尿病患者飲食生活的同時使高血糖得以減輕，防止并發(fā)癥的發(fā)生。迄今已發(fā)現(xiàn)的天然α -淀粉酶抑制劑，包括來自白腰豆且已商品化的產(chǎn)品“Phase II”(中國專利號:200810018158.6)；來自番石榴葉的提取物(中國專利號=01806328.4)； 來自大豆的多糖(日本專利號1991 - 290187)；來自黑米的提取物(日本專利號2004 — 91462) Laqerstroemia speciosa )白勺 11 . [ Hosoyama H, Sugimoto A, Suzuki Y等]；來自栗子的提取物(中國專利號200580030733.9)；來自小麥麩皮的提 取物(中國專利號20091006擬85.3)等。但α —淀粉酶抑制劑來自羅望子殼至今未有文 獻報道。羅望子(Tamarindus indica Linn)，俗名酸角或酸豆，是一種生產(chǎn)于熱帶及亞熱 帶的高大常綠喬木。我國廣東、廣西、福建、云南、四川等地均有種植，尤以海南島更為普遍。 羅望子殼(Tamarindus pericap)是羅望子果實加工利用后的副產(chǎn)物，至今未見有被利用報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的在于提供一種羅望子殼提取物，該提取物含有α -淀粉酶抑 制劑，其活性成分黃酮及黃酮甙類化合物具有降血糖的作用，能有效預防和治療糖尿病。本發(fā)明的第二個目的在于提供上述羅望子殼提取物的制備方法，該制備方法工藝簡單、成本低。本發(fā)明的最后一個目的在于提供上述羅望子殼提取物的應用。本發(fā)明的第一個目的是通過如下技術方案來實現(xiàn)的一種羅望子殼提取物，所述 的羅望子殼提取物含有α —淀粉酶抑制劑，該羅望子殼提取物通過乙醇提取制備獲得。上述技術方案中的羅望子殼提取物通過如下方法制備獲得以羅望子殼為原料， 加入體積濃度為5-95%的乙醇水溶液，調(diào)節(jié)溫度為30-50°C提取后，將提取液離心分離，再 將上清液在旋轉蒸發(fā)器上濃縮至干，得到羅望子殼提取物。作為本發(fā)明的進一步改進本發(fā)明所述的羅望子殼提取物進行提純處理，具體過 程是在羅望子殼的提取物中，加入去離子水和正丁醇，震蕩處理后，靜置分層，取正丁醇 相，濃縮后，將濃縮液用大孔吸附樹脂分離，并用體積濃度為25-45%的乙醇洗滌后，合并洗 滌液，濃縮即得。經(jīng)正丁醇萃取后的羅望子殼提取物中，總黃酮的重量百分含量占羅望子殼提取物 總重量的15%以上，經(jīng)大孔吸附樹脂進一步提純后的羅望子殼提取物中，總黃酮的重量百 分含量占羅望子殼提取物總重量的40%以上。本發(fā)明的第二個目的是通過如下技術方案來實現(xiàn)的上述羅望子殼提取物的制備 方法，以羅望子殼為原料，加入體積濃度為5-95%的乙醇水溶液，調(diào)節(jié)溫度為30-50°C提取 后，將提取液離心分離后，將上清液在旋轉蒸發(fā)器上濃縮至干，得到羅望子殼提取物。其中所述的乙醇水溶液的體積濃度為50-80%。所述的羅望子殼和乙醇水溶液的重量體積比為1: 5-100。為了得到更高純度及含有更高活性成分的α —淀粉酶抑制劑，作為本發(fā)明的一 種改進上述羅望子殼提取物的制備方法還包括以下提純步驟在羅望子殼的提取物中， 加入去離子水和正丁醇，震蕩處理后，靜置分層，取正丁醇相，濃縮后，將濃縮液用大孔吸附 樹脂分離，并用體積濃度為25-45%的乙醇洗滌后，合并洗滌液，濃縮至干即可。其中所述的羅望子殼提取物與去離子水的重量體積比為1: 0. 1-10，所述的羅望 子殼提取物與正丁醇的重量體積比為1: 1-100。通過以下方法測試羅望子殼各個活性部位的α —淀粉酶抑制劑活性，具體包括 以下步驟
(1)測試樣的配制
①準確量取0.5 mol/L pH為6. 9的Tris-HCl (CaCl2)緩沖液3ml于子彈頭中；
②準確稱取8毫克藍淀粉，并將其懸浮在Tris-HCl(CaCl2)緩沖液中制得藍淀粉懸浮
液；
③將藍淀粉懸浮液于沸水恒溫5分鐘，然后在37°C恒溫槽中恒溫5分鐘；
④將已經(jīng)干燥的粗提物或純樣品溶解在50%(體積濃度)的DMSO水溶液中配成1. 5 mg/mL的待測物溶液(樣品3 mg加入2 mL 50%的DMSO水溶液)。將0. 2 mL待測物溶液和 0. 2mL PPA(豬胰液α —淀粉酶)溶液(酶活力單位為2. 189 U/mL)加入到藍淀粉溶液中；
⑤完全混合。(2)空白樣的配制
①準確量取0.5 mol/L PH為6. 9的1Tris-HCl ( CaCl2 )緩沖液3 mL于子彈頭中；
②準確稱取8毫克藍淀粉，并將其懸浮在Tris-HCl緩沖液中制得藍淀粉懸浮液；③將藍淀粉懸浮液于沸水恒溫5分鐘，然后在37°C恒溫槽中恒溫5分鐘；
④將0.1 mL Tris-HCl溶液和0. 2 mL PPA溶液(酶活力單位為2. 189 U/mL)加入到 藍淀粉溶液中；
⑤完全混合。(3)將測試樣和空白樣于37°C下恒溫10分鐘，開機預熱15分鐘；
(4)將0.1 ml的乙酸溶液(50%)加入測試樣和空白樣終止反應；
(5)將反應混合物離心(3000R，4°C)5分鐘；
(6)在595納米下測定測試樣和空白樣的吸光度；
(7)計算抑制率
α-淀粉酶抑制率(%) = ( ODcontrol - OD testsample )/ ODcontrol X 100 通過上述方法測定羅望子殼各個活性部位的α -淀粉酶抑制劑活性，發(fā)現(xiàn)經(jīng)羅望子 殼的乙醇提取物再經(jīng)正丁醇萃取后獲得的提取物的活性比較高。接著對正丁醇萃取后的 提取物的化學成分進行分離鑒定，采用大孔吸附樹脂，正相硅膠柱層析，反相硅膠柱層析 (RP-18)，以及葡聚糖凝膠(LH-20)等分離手段分離鑒定出其主要化學成分，包括槲皮素、 山奈酚、桑黃素、芹菜素、柚皮素、木犀草素和楊梅酮。再通過測定分離出來的單個化合物的 α -淀粉酶抑制劑活性，表明羅望子殼α -淀粉酶抑制劑活性主要來自黃酮及黃酮甙類化 合物。經(jīng)上述測定結果可知，上述羅望子殼中含有α -淀粉酶抑制劑，該α -淀粉酶抑制 劑中含有黃酮及黃酮甙類化合物，所以可以將上述羅望子殼提取物用于預防和治療糖尿病 的食品、飲料或藥物中。本發(fā)明的最后一個目的是通過如下技術方案來實現(xiàn)的上述羅望子殼提取物在制 備具有預防和治療糖尿病功能的食品中的應用。同時上述羅望子殼提取物還可以在制備具 有預防和和治療糖尿病功能的飲料中的應用。并且上述羅望子殼提取物還可以在制備具有 預防和治療糖尿病作用的藥物中的應用。本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明制備獲得的羅望子殼提取物含有α —淀粉酶抑制劑，其含有活性成分黃酮及 黃酮甙類化合物，可用于保健食品、飲品和藥品等，具有食用安全性高，成本低，控制血糖作 用明顯等優(yōu)點。同時還為羅望子殼的深加工指明了方向，可極大的提高羅望子的附加值。
具體實施例方式實施例1
本實施例提供的羅望子殼提取物，其含有α —淀粉酶抑制劑，其具體通過如下方法制
得
取粉碎后的羅望子殼100g，加入IOOOml體積濃度為20%的乙醇水溶液，在40°C下攪拌 8小時，得羅望子殼的乙醇提取液，將羅望子殼的乙醇提取液進行離心分離，取上清液，放入 旋轉蒸發(fā)儀上進行濃縮蒸干，得到9. 3g羅望子殼的乙醇提取物。實施例2
本實施例提供的羅望子殼提取物，其含有α —淀粉酶抑制劑，其具體通過如下方法制
得取粉碎后的羅望子殼100g，加入2000ml體積濃度為50%的乙醇水溶液，在40°C下攪拌 6小時，得羅望子殼的乙醇提取液，將羅望子殼的乙醇提取液進行離心分離，取上清液，放入 旋轉蒸發(fā)儀上進行濃縮至蒸干，得到8. 2g羅望子殼的乙醇提取物。實施例3
本實施例提供的羅望子殼提取物，其含有α —淀粉酶抑制劑，其具體通過如下方法制
得
取粉碎后的羅望子殼100g，加入3000ml體積濃度為75%的乙醇水溶液，在30°C下攪拌 8小時，得羅望子殼的乙醇提取液，將羅望子殼的乙醇提取液進行離心分離，取上清液，放入 旋轉蒸發(fā)儀上進行濃縮至蒸干，得到7. 3g羅望子殼的乙醇提取物。實施例4
本實施例提供的羅望子殼提取物，其含有α —淀粉酶抑制劑，其具體通過如下方法制 備獲得
按實施例1中的方法制備獲得的羅望子殼的乙醇提取物，取10g，加入5 mL去離子水 后，再加入50mL正丁醇，劇烈振搖，靜置分層后，將正丁醇相濃縮干，按常規(guī)方法，測得總黃 酮含量為18. 5%。該正丁醇提取物用大孔吸附樹脂分離，用體積濃度為30%乙醇水溶液沖 柱，合并沖出液，將沖出液濃縮至干后，測得其總黃酮含量為46. 9%。實施例5
本實施例提供的羅望子殼提取物，其含有α —淀粉酶抑制劑，其具體通過如下方法制
得
按實施例2中的方法制備獲得的羅望子殼的乙醇提取物，取10g，加入12 mL去離子水 后，再加入200 mL正丁醇，劇烈振搖，靜置分層后，將正丁醇相濃縮干，按常規(guī)方法，測得總 黃酮含量為21. 2%。該正丁醇提取物用大孔吸附樹脂分離，用體積濃度為35%乙醇水溶液沖 柱，合并沖出液，將沖出液濃縮至干后，測得其總黃酮含量為50. 5 %。實施例6
本實施例提供的羅望子殼提取物，其含有α —淀粉酶抑制劑，其具體通過如下方法制
得
按實施例3中的方法制備獲得的羅望子殼的乙醇提取物，取10g，加入50 mL去離子水 后，再加入300 mL正丁醇，劇烈振搖，靜置分層后，將正丁醇相濃縮干，按常規(guī)方法，測得總 黃酮含量為23. 5%。該正丁醇提取物用大孔吸附樹脂分離，用體積濃度為40%乙醇水溶液沖 柱，合并沖出液，將沖出液濃縮至干后，測得其總黃酮含量為57. 9%。將上述獲得的總黃酮含量57. 9%的羅望子殼提取物，經(jīng)硅膠柱層析，用乙酸乙酯 /乙醇梯度洗脫，黃酮部分用反相硅膠分離，用水/甲醇梯度洗脫，洗脫物濃干后用葡聚糖 凝膠LH-20，用甲醇洗脫，分離鑒定出七個化合物，與標準品對照，發(fā)現(xiàn)其化學成分為槲皮 素、山奈酚、桑黃素、芹菜素、柚皮素、木犀草素和楊梅酮。上述七個化合物除芹菜素外，其 α -淀粉酶的50%抑制濃度，均在4. 0-8. 5Pg/mL之間，表明羅望子殼提取物中α -淀粉酶抑 制活性主要來自黃酮類化合物。對比例1
取粉碎后的番石榴葉100g，加入1000ml體積濃度為75%的乙醇水溶液，在40°C下攪 拌8小時，得番石榴葉的乙醇提取液，將番石榴葉的乙醇提取液進行離心分離，取上清液，放入旋轉蒸發(fā)儀上進行濃縮至蒸干，得到13. Ig番石榴葉的乙醇提取物。α -淀粉酶抑制劑活性的測定方法包括以下步驟 (1)測試樣的配制
①準確量取0.5 mol/L pH為6. 9的Tris-HCl (CaCl2)緩沖液3ml于子彈頭中；
②準確稱取8毫克藍淀粉，并將其懸浮在Tris-HCl(CaCl2)緩沖液中制得藍淀粉懸浮
液；
③將藍淀粉懸浮液于沸水恒溫5分鐘，然后在37°C恒溫槽中恒溫5分鐘；
④將已經(jīng)干燥的粗提物或純樣品溶解在50%(體積濃度)的DMSO水溶液中配成1. 5 mg/mL的待測物溶液(樣品3 mg加入2 mL 50%的DMSO水溶液)。將0. 2 mL待測物溶液和 0. 2mL PPA (豬胰液α —淀粉酶)溶液(酶活力單位為2. 189 U/mL)加入到藍淀粉溶液中；
⑤完全混合。(2)空白樣的配制
①準確量取0.5 mol/L PH為6. 9的1Tris-HCl ( CaCl2 )緩沖液3 mL于子彈頭中；
②準確稱取8毫克藍淀粉，并將其懸浮在Tris-HCl緩沖液中制得藍淀粉懸浮液；
③將藍淀粉懸浮液于沸水恒溫5分鐘，然后在37°C恒溫槽中恒溫5分鐘；
④將0.1mL Tris-HCl溶液和0. 2 mL PPA溶液(酶活力單位為2. 189 U/mL)加入到 藍淀粉溶液中；
⑤完全混合。(3)將測試樣和空白樣于37°C下恒溫10分鐘，開機預熱15分鐘；
(4)將0.1 ml的乙酸溶液(50%)加入測試樣和空白樣終止反應；
(5)將反應混合物離心(3000R，4°C)5分鐘；
(6)在595納米下測定測試樣和空白樣的吸光度；
(7)計算抑制率
α-淀粉酶抑制率(%) = ( ODcontrol - OD testsample )/ ODcontrol X 100 對上述實施例和番石榴葉的乙醇提取物進行α-淀粉酶抑制劑活性測試，具體結果見 下表1，
表1 α -淀粉酶抑制劑的50%抑制濃度(IC50值)
權利要求
1.一種羅望子殼提取物，其特征是所述的羅望子殼提取物含有α-淀粉酶抑制劑，該 羅望子殼提取物通過乙醇提取制備獲得。
2.根據(jù)權利要求1所述的羅望子殼提取物，其特征是所述的羅望子殼提取物通過如 下方法制備獲得以羅望子殼為原料，加入體積濃度為5-95%的乙醇水溶液，調(diào)節(jié)溫度為 30-50°C提取后，將提取液離心分離，再將上清液在旋轉蒸發(fā)器上濃縮至干，得到羅望子殼 提取物。
3.根據(jù)權利要求2所述的羅望子殼提取物，其特征是所述的羅望子殼提取物進行提 純處理，具體過程是在羅望子殼的提取物中，加入去離子水和正丁醇，震蕩處理后，靜置分 層，取正丁醇相，濃縮后，將濃縮液用大孔吸附樹脂分離，并用體積濃度為25-45%的乙醇洗 滌后，合并洗滌液，濃縮即得。
4.根據(jù)權利要求3所述的羅望子殼提取物，其特征是經(jīng)正丁醇萃取后的羅望子殼提 取物中，總黃酮的重量百分含量占羅望子殼提取物總重量的15%以上，經(jīng)大孔吸附樹脂進 一步提純后的羅望子殼提取物中，總黃酮的重量百分含量占羅望子殼提取物總重量的40% 以上。
5.權利要求1或2所述的羅望子殼提取物的制備方法，其特征是以羅望子殼為原料， 加入體積濃度為5-95%的乙醇水溶液，調(diào)節(jié)溫度為30-50°C提取后，將提取液離心分離后， 將上清液在旋轉蒸發(fā)器上濃縮至干，得到羅望子殼提取物。
6.根據(jù)權利要求5所述的羅望子殼提取物的制備方法，其特征是所述的乙醇水溶液 的體積濃度為50-80%。
7.根據(jù)權利要求5所述的羅望子殼提取物的制備方法，其特征是所述的羅望子殼和 乙醇水溶液的重量體積比為1: 5-100。
8.根據(jù)權利要求5所述的羅望子殼提取物的制備方法，其特征是還包括以下提純步 驟在羅望子殼的提取物中，加入去離子水和正丁醇，震蕩處理后，靜置分層，取正丁醇相， 濃縮后，將濃縮液用大孔吸附樹脂分離，并用體積濃度為25-45%的乙醇洗滌后，合并洗滌 液，濃縮至干即可。
9.根據(jù)權利要求8所述的羅望子殼提取物的制備方法，其特征是所述的羅望子殼提 取物與去離子水的重量體積比為1: 0.1-10，所述的羅望子殼提取物與正丁醇的重量體積 比為 1: 1-100。
10.權利要求1-4任一項所述的羅望子殼提取物在制備具有預防和治療糖尿病功能的 食品、飲料和藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種羅望子殼提取物，所述的羅望子殼提取物含有α－淀粉酶抑制劑，該羅望子殼提取物通過乙醇提取制備獲得。還可以經(jīng)正丁醇進一步提純獲得。該羅望子殼的提取物含有活性成分黃酮及黃酮甙類化合物，該活性成分具有降血糖的作用，能有效預防和治療糖尿病。本發(fā)明還公開了上述羅望子殼提取物的制備方法及其在制備具有預防和治療糖尿病功效的食品、飲料和藥物中的應用。
文檔編號A61K36/48GK102138962SQ20111007675
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月29日 優(yōu)先權日2011年3月29日
發(fā)明者莊俊鈺, 王三永 申請人:廣東省食品工業(yè)研究所