專利名稱：一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
北五味子對(duì)人體具有益氣、滋腎、斂肺、澀精、生津、止渴、益智、安神等功效，對(duì)人體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)有興奮作用，對(duì)心臟、肝臟、血壓有調(diào)節(jié)作用，對(duì)人的視力、聽(tīng)力有強(qiáng)化功能；促進(jìn)膽汁分泌，提高抗菌能力，是傳統(tǒng)的中藥材。木脂素是北五味子的主要生理活性物質(zhì)，具有多方面的生理功能，北五味子中木脂素有很多種，主要為五味子醇甲、 五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素等。東北三省是北五味子的主產(chǎn)區(qū)，目前北五味子主要來(lái)源于野生資源，但由于森林面積的減少，加之人們對(duì)其進(jìn)行掠奪性采收，野生植株稀缺，現(xiàn)為瀕危藥用植物，致使五味子產(chǎn)量逐年減少，原料短缺。且北五味子中的有效成分(五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素等)含量較低，難以滿足藥用需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是要解決目前北五味子原料短缺，且有效成分含量較低的問(wèn)題，提供一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法。本發(fā)明提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北五味子用粉碎機(jī)粉碎，然后過(guò)40目篩，得到北五味子粉末；二、向北五味子粉末中加入無(wú)菌水， 密封后于121°C滅菌30min，得到底物，底物濃度為0. 1 0. 8g/mL ；三、對(duì)釀酒酵母進(jìn)行活化，向已活化的釀酒酵母中加入無(wú)菌水，制成濃度為IX IO7CfuAiL的釀酒酵母菌懸液；四、 將1 8mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中，然后放入搖床，于128r/min、 20 36°C條件下培養(yǎng)11 17天，取出進(jìn)行冷凍干燥，即得到發(fā)酵后的北五味子。本發(fā)明采用釀酒酵母發(fā)酵北五味子，使微生物中豐富的酶系與北五味子中復(fù)雜的化學(xué)成分反應(yīng)，提高了北五味子中有效成分的含量。將本發(fā)明得到的發(fā)酵后的北五味子與北五味子生藥中的有效成分含量作比較，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量有顯著提高，其中五味子醇甲的增長(zhǎng)率可達(dá)31. 75 %，五味子酯甲的增長(zhǎng)率可達(dá) 21. ；34%，五味子甲素的增長(zhǎng)率可達(dá)沈.23%，五味子乙素的增長(zhǎng)率可達(dá)10. 52%。因此在以獲得五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素為目的的原料生產(chǎn)中可以使用本發(fā)明的方法以提高得率，從而彌補(bǔ)北五味子原料短缺，且有效成分含量較低的缺點(diǎn)。


圖1為五味子中四種木脂素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的HPLC色譜圖；圖2為北五味子生藥的 HPLC色譜圖；圖3為具體實(shí)施方式
十三發(fā)酵后的北五味子的HPLC色譜圖。
具體實(shí)施例方式
3
本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北五味子用粉碎機(jī)粉碎，然后過(guò)40目篩，得到北五味子粉末；二、向北五味子粉末中加入無(wú)菌水，密封后于121°C滅菌30min，得到底物，底物濃度為0. 1 0. 8g/mL ； 三、對(duì)釀酒酵母進(jìn)行活化，向已活化的釀酒酵母中加入無(wú)菌水，制成濃度為1 X IO7CfuAiL的釀酒酵母菌懸液；四、將1 8mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中，然后放入搖床，于128r/min、20 36°C條件下培養(yǎng)11 17天，取出進(jìn)行冷凍干燥，即得到發(fā)酵后的北五味子。本實(shí)施方式步驟三中的釀酒酵母為購(gòu)買得到。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中底物濃度為 0.3 0.6g/mL。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中底物濃度為 0.4 0.5g/mL。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟二中底物濃度為 0.37g/mL。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟三中對(duì)釀酒酵母進(jìn)行活化的具體步驟為將冷凍保存的釀酒酵母放入恒溫培養(yǎng)箱中于37°C活化1天，然后用接種環(huán)挑取釀酒酵母在酵母蛋白胨葡萄糖固體培養(yǎng)基(YEPD培養(yǎng)基)上劃線，然后放入 37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，即得到活化的釀酒酵母。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟四中將 2 7mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟四中將 3 6mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟四中將 5. 32mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至八之一不同的是步驟四中于 25 30°C條件下培養(yǎng)。其它與具體實(shí)施方式
一至八之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至八之一不同的是步驟四中于條件下培養(yǎng)。其它與具體實(shí)施方式
一至八之一相同。
具體實(shí)施方式
十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十之一不同的是步驟四中培養(yǎng)12 16天。其它與具體實(shí)施方式
一至十之一相同。
具體實(shí)施方式
十二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十之一不同的是步驟四中培養(yǎng)14天。其它與具體實(shí)施方式
一至十之一相同。
具體實(shí)施方式
十三本實(shí)施方式提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北五味子用粉碎機(jī)粉碎，然后過(guò)40目篩，得到北五味子粉末；二、向北五
4味子粉末中加入無(wú)菌水，密封后于121°C滅菌30min，得到底物，底物濃度為0. 37g/mL ；三、 對(duì)釀酒酵母進(jìn)行活化，向已活化的釀酒酵母中加入無(wú)菌水，制成濃度為IX IO7CfuAiL的釀酒酵母菌懸液；四、將5. 32mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中，然后放入搖床，于128r/min、28°C條件下培養(yǎng)14天，取出進(jìn)行冷凍干燥，即得到發(fā)酵后的北五味子。用高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)本實(shí)施方式制得的發(fā)酵后的北五味子和北五味子生藥的有效成分含量，圖1為五味子中四種木脂素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的HPLC色譜圖，圖2為北五味子生藥的HPLC色譜圖，圖3為本實(shí)施方式發(fā)酵后的北五味子的HPLC色譜圖，其中1為五味子醇甲，2為五味子酯甲，3為五味子甲素，4為五味子乙素。將測(cè)得的結(jié)果與北五味子生藥樣品的有效成分含量進(jìn)行比較，結(jié)果數(shù)據(jù)如表1所示。表1發(fā)酵后的北五味子和北五味子生藥的有效成分含量測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，按以下步驟進(jìn)行一、將北五味子用粉碎機(jī)粉碎，然后過(guò)40目篩，得到北五味子粉末；二、向北五味子粉末中加入無(wú)菌水，密封后于121°C滅菌30min，得到底物， 底物濃度為0. 1 0. 8g/mL ；三、對(duì)釀酒酵母進(jìn)行活化，向已活化的釀酒酵母中加入無(wú)菌水， 制成濃度為IX 107Cfu/mL的釀酒酵母菌懸液；四、將1 SmL釀酒酵母菌懸液加入到75mL 步驟二得到的底物中，然后放入搖床，于128r/min、20 36°C條件下培養(yǎng)11 17天，取出進(jìn)行冷凍干燥，即得到發(fā)酵后的北五味子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟二中底物濃度為0. 3 0. 6g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟二中底物濃度為0. 37g/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟四中將3 6mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟四中將5. 32mL釀酒酵母菌懸液加入到75mL步驟二得到的底物中。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟四中于25 30°C條件下培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟四中于條件下培養(yǎng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟四中培養(yǎng)12 16天。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，其特征在于步驟四中培養(yǎng)14天。
全文摘要
一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法，涉及一種提高北五味子有效成分的微生物發(fā)酵方法。本發(fā)明是要解決目前北五味子原料短缺，且有效成分含量較低的問(wèn)題。方法一、將北五味子粉碎，過(guò)篩，得到北五味子粉末；二、向北五味子粉末中加入無(wú)菌水，密封后滅菌，得到底物；三、對(duì)釀酒酵母進(jìn)行活化，向已活化的釀酒酵母中加入無(wú)菌水，制成懸液；四、將懸液加入到底物中，然后放入搖床，培養(yǎng)，取出進(jìn)行冷凍干燥，即得到發(fā)酵后的北五味子。本發(fā)明采用釀酒酵母發(fā)酵北五味子，使微生物中豐富的酶系與北五味子中復(fù)雜的化學(xué)成分反應(yīng)，提高了北五味子中有效成分的含量。應(yīng)用于微生物發(fā)酵中草藥領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A61K36/57GK102188485SQ20111008115
公開(kāi)日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2011年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月31日
發(fā)明者劉玉潔, 吳桐, 孫雅北, 楊鶴巖, 石震華, 鄭春英 申請(qǐng)人:黑龍江大學(xué)