專利名稱：一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于預(yù)防和治療小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
小鵝瘟是由鵝細(xì)小病毒引起的一種主要侵害雛鵝和雛番鴨的烈性傳染病，發(fā)病率和死亡率都很高，發(fā)病雛鵝或雛番鴨的死亡率最高可達(dá)90% -100%。小鵝瘟的發(fā)病率和死亡率與雛鵝(雛番鴨)日齡大小有非常密切的關(guān)系，在自然條件下，本病僅發(fā)生于3-30日齡的雛鵝(雛番鴨)。長期以來，小鵝瘟疫病的防控是采用種鵝(種番鴨)在開產(chǎn)前接種小鵝瘟疫苗，通過母源抗體給雛鵝(雛番鴨)提供被動免疫。但由于現(xiàn)行疫苗免疫保護(hù)期限較短(僅2個月左右)，如果在種鵝產(chǎn)蛋期間加強免疫又會引起各種嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)(減食、減蛋，生長受抑等)，造成目前養(yǎng)殖者在種鵝產(chǎn)蛋期間普遍不愿加強免疫，上述原因?qū)е麻_產(chǎn)后期所孵出的雛鵝(雛番鴨)感染小鵝瘟的幾率大增。由于小鵝瘟通常發(fā)生于30日齡以內(nèi)的雛鵝(雛番鴨)，因此，養(yǎng)殖者更傾向于在易感日齡內(nèi)使用卵黃抗體進(jìn)行預(yù)防與治療，以此彌補疫苗使用的缺陷。雖然小鵝瘟卵黃抗體在養(yǎng)殖中發(fā)揮了重要的作用，但目前使用的小鵝瘟卵黃抗體仍存在以下不足之處⑴目前使用的小鵝瘟卵黃抗體均為注射制劑，不但使用費時費力， 而且無法避免因注射引起的疫病傳播與各種嚴(yán)重應(yīng)激反應(yīng)(食欲廢絕，肌肉壞死，生長受抑等)；⑵制作過程較為復(fù)雜，通常需使用大量的有機溶劑或鹽類進(jìn)行抗體的提純，不僅增加了制造成本，也對抗體效價也有較大影響；⑶目前使用的小鵝瘟卵黃抗體注射劑不具有緩釋功能，導(dǎo)致其半衰期較短，在疫病高發(fā)、頻發(fā)時需多次使用才可達(dá)到效果；⑷目前使用的小鵝瘟卵黃抗體均為液體制劑，抗體效價受溫度、光照等因素影響較大，導(dǎo)致臨床使用中療效降低；ω小鵝瘟卵黃抗體不同批次間的抗體效價差異較大，如效價低于要求，則需進(jìn)行濃縮處理，導(dǎo)致工藝復(fù)雜，生產(chǎn)費用增加；(6)禽蛋中有許多營養(yǎng)成分(如蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等)，通過純化方法制備卵黃抗體，會破壞上述營養(yǎng)物質(zhì)，造成較大的資源浪費。因此，養(yǎng)殖者需要一種使用方便，應(yīng)激反應(yīng)小，具有一定的促生長作用，通過飲水或采食途徑使用的小鵝瘟卵黃抗體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有小鵝瘟卵黃抗體注射劑所存在的缺陷，提供一種能經(jīng)口服途徑使用的防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，本發(fā)明的原理是利用多孔淀粉對卵黃抗體進(jìn)行高效吸附，再使用腸溶性高分子材料進(jìn)行包埋，最后通過噴霧干燥設(shè)備脫水。本發(fā)明通過使用包被技術(shù)，解決現(xiàn)有小鵝瘟卵黃抗體注射劑存在的使用不便，副作用大，工藝復(fù)雜，半衰期短，保存不便等不足之處。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的，一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，包括如下步驟
(1)先后使用小鵝瘟活疫苗和小鵝瘟滅活疫苗免疫健康蛋禽，當(dāng)血清抗體瓊擴效價達(dá) 1:16后開始收集其所產(chǎn)卵，無菌分離卵黃；
(2)將步驟(1)分離的卵黃與等體積的質(zhì)量濃度為5%氯化鈉溶液混合均勻，加入體積為卵黃與氯化鈉溶液總體積20%-40%的多孔淀粉，30°C -40°C控溫攪拌30-60分鐘；
(3)將步驟(2)制得的液體與等體積的質(zhì)量濃度為2%-5%的海藻酸鈉溶液混合，充分混勻后經(jīng)噴霧干燥設(shè)備脫水，制得防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑(干粉)。本發(fā)明制得的防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑，該制劑的粒徑范圍5Mffl-20Mffl，每克制劑中所含的瓊擴抗體效價在1:16以上，該制劑可以通過口服途徑使用，該制劑的免疫保護(hù)期12-15天，免疫保護(hù)期長于普通的小鵝瘟卵黃抗體注射劑，該制劑可有效防治小鵝瘟疫病。本發(fā)明方法科學(xué)，工藝簡單，制備條件溫和，對卵黃抗體效價幾乎沒有影響。本發(fā)明通過使用多孔淀粉作為核心材料，制成的緩釋制劑粒徑均勻，易干燥脫水，分散性較好。防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑，不僅具有緩釋性能好、毒副作用低、成本低廉， 使用方便、保存期長等優(yōu)點，還可以通過飲水或采食途徑使用，極大地降低了因注射使用造成的疫病傳播以及各種嚴(yán)重應(yīng)激反應(yīng)。防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑每克所含的瓊擴抗體效價在1 16以上，產(chǎn)品不添加任何防腐劑，在2-8°C密封的條件下保存2年以上效價仍不降低。


圖1是防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的掃描電鏡圖片。
具體實施例方式實施例1
選擇90日齡的健康蛋雞，使用小鵝瘟活疫苗進(jìn)行初次免疫(肌肉注射Iml);間隔7天， 使用小鵝瘟油乳劑滅活疫苗進(jìn)行第二次免疫(肌肉注射anl)；間隔14天，使用小鵝瘟油乳劑滅活疫苗進(jìn)行第三次免疫(肌肉注射:3ml)；間隔21天，使用小鵝瘟油乳劑滅活疫苗進(jìn)行第四次免疫(肌肉注射:3ml)。第四次免疫后采用瓊脂擴散試驗檢測血清抗體效價達(dá)1:32 時，收集其所產(chǎn)卵，無菌分離卵黃。將卵黃與等體積的質(zhì)量濃度為5%氯化鈉溶液混合均勻， 加入體積為卵黃與氯化鈉溶液總體積20%的多孔淀粉，40°C控溫攪拌60分鐘。再將上述液體與等體積質(zhì)量濃度為2、的海藻酸鈉溶液混合，充分混勻后經(jīng)噴霧干燥設(shè)備脫水得到干粉，即防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋劑，每克防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋劑的瓊擴效價達(dá) 1:64。取3日齡無小鵝瘟抗體的健康易感雛鵝40只，均分為四組，不同組別的試驗雛鵝隔離飼養(yǎng)。四組試驗雛鵝全部肌肉注射致死量的小鵝瘟強毒，于第二日，將第一組試驗雛鵝灌服防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑稀釋液(Iml/只，所含瓊擴效價為1 16)，第二組試驗雛鵝灌服常規(guī)卵黃抗體液(Iml/只，所含瓊擴效價1 16)，第三組試驗雛鵝肌肉注射常規(guī)卵黃抗體液(lml/只，所含瓊擴效價1:16)，第四組為對照組，四組試驗雛鵝均持續(xù)飼養(yǎng)8天， 記錄發(fā)病死亡情況。結(jié)果第一組試驗雛鵝的存活率為80% (8/10)，第二組試驗雛鵝的存活率為20% (2/10)，第三組試驗雛鵝的存活率為80% (8/10)，第四組試驗雛鵝的存活率10% (1/10)。上述結(jié)果表明口服途徑使用防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑，注射途徑使用常規(guī)卵黃抗體均具有良好的治療效果，而口服途徑使用常規(guī)卵黃抗體的治療效果較差。實施例2
選擇90日齡的健康蛋雞，使用小鵝瘟活疫苗進(jìn)行初次免疫(肌肉注射Iml);間隔10天， 使用小鵝瘟油乳劑滅活疫苗進(jìn)行第二次免疫(肌肉注射:3ml)；間隔21天，使用小鵝瘟油乳劑滅活疫苗進(jìn)行第三次免疫(肌肉注射:3ml)。第三次免疫后采用瓊脂擴散試驗檢測血清抗體效價達(dá)1 16時，收集其所產(chǎn)卵，無菌分離卵黃。將卵黃與等體積質(zhì)量濃度為5%氯化鈉溶液混合均勻，加入體積為卵黃與氯化鈉溶液總體積30%的多孔淀粉，30°C控溫攪拌50分鐘。 再將上述液體與等體積的質(zhì)量濃度為3%的海藻酸鈉溶液混合，充分混勻后經(jīng)噴霧干燥設(shè)備脫水得到干粉，即防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑，每克防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的瓊擴效價達(dá)1:32。取3日齡無小鵝瘟抗體的健康易感雛鵝40只，均分為四組，不同組別的試驗雛鵝隔離飼養(yǎng)。第一組試驗雛鵝灌服防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑稀釋液(lml/只，所含瓊擴效價為1:16)，第二組試驗雛鵝灌服常規(guī)卵黃抗體液(lml/只，所含瓊擴效價1:16)，第三組試驗雛鵝肌肉注射常規(guī)卵黃抗體液(lml/只，所含瓊擴效價1:16)，第四組為對照組。 于第二日將四組試驗雛鵝全部肌肉注射致死量的小鵝瘟強毒，持續(xù)飼養(yǎng)8天，記錄發(fā)病死亡情況。結(jié)果第一組試驗雛鵝的存活率為100% (10/10)，第二組試驗雛鵝的存活率為30% (3/10)，第三組試驗雛鵝的存活率為90%(9/10)，第四組試驗雛鵝的存活率為0(0/10)。上述結(jié)果表明口服途徑使用防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑，注射途徑使用常規(guī)卵黃抗體均具有良好的預(yù)防效果，而口服途徑使用常規(guī)卵黃抗體的預(yù)防效果較差。實施例3
選擇150日齡的健康種鴨，使用小鵝瘟活疫苗進(jìn)行初次免疫(肌肉注射lml)；間隔10 天，使用小鵝瘟活疫苗進(jìn)行第二次免疫(肌肉注射anl);間隔14天，使用小鵝瘟油乳劑滅活疫苗進(jìn)行第三次免疫(肌肉注射:3ml)。第三次免疫后采用瓊脂擴散試驗檢測血清抗體效價達(dá)1:64時，收集其所產(chǎn)卵，無菌分離卵黃。將卵黃與等體積的質(zhì)量濃度為5%氯化鈉溶液混合均勻，加入體積為卵黃與氯化鈉溶液總體積40%的多孔淀粉，30°C控溫攪拌30分鐘。再將上述液體與等體積的質(zhì)量濃度為4%的海藻酸鈉溶液混合，充分混勻后經(jīng)噴霧干燥設(shè)備脫水得到干粉，即防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑，每克防治小鵝瘟卵黃抗體緩釋制劑的瓊擴效價達(dá)1:64。取3日齡無小鵝瘟抗體的健康易感雛鵝60只，均分為三組，不同組別的試驗雛鵝隔離飼養(yǎng)。第一組試驗雛鵝經(jīng)飲水途徑使用防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑(lml/只，所含瓊擴效價為1:16)，第二組試驗雛鵝肌肉注射常規(guī)卵黃抗體液(lml/只，所含瓊擴效價 1:16)，第三組為對照組。分別于第5、10、15、20日，從每組中隨機抽取5只試驗雛鵝，肌肉注射致死量的小鵝瘟強毒，單獨飼養(yǎng)8天，記錄發(fā)病死亡情況。結(jié)果見表1，由表可見第一組 (口服組)的試驗雛鵝在免疫5、10、15、20日攻毒后的存活率分別為100%、80%、60%和20%，第二組(注射組)的存活率分別為100%、60%、40%和20%。上述結(jié)果表明防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑一次免疫的保護(hù)期不足15天，常規(guī)卵黃抗體注射劑一次免疫的保護(hù)期不足10 天。與常規(guī)卵黃抗體注射劑相比，本發(fā)明的防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑具有延長免疫
5保護(hù)期的效果。 表1不同試驗組的雛鵝攻毒保護(hù)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)先后使用小鵝瘟活疫苗和小鵝瘟滅活疫苗免疫健康蛋禽，當(dāng)血清抗體瓊擴效價達(dá) 1:16后開始收集其所產(chǎn)卵，無菌分離卵黃；(2)將步驟(1)分離的卵黃與等體積的質(zhì)量濃度為5%氯化鈉溶液混合均勻，加入體積為卵黃與氯化鈉溶液總體積20%-40%的多孔淀粉，30°C -40°C控溫攪拌30-60分鐘；(3)將步驟(2)制得的液體與等體積的質(zhì)量濃度為2%-5%的海藻酸鈉溶液混合，充分混勻后經(jīng)噴霧干燥設(shè)備脫水，制得防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，其特征在于，所述制得的防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的粒徑大小為5Mffl-20Mffl。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，其特征在于，所述制得的防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑每克所含的瓊擴抗體效價為1:16以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，其特征在于，所述制得的防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑通過口服途徑使用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，其特征在于，所述制得的防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑免疫保護(hù)期為12-15天。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑的制備方法，屬于生物制品技術(shù)領(lǐng)域。先后使用小鵝瘟活疫苗和小鵝瘟滅活疫苗免疫健康蛋禽，收集其所產(chǎn)卵，無菌分離卵黃；將卵黃與氯化鈉溶液混合均勻后，加入適量多孔淀粉充分吸附；再將上述液體與海藻酸鈉溶液混合均勻后，經(jīng)噴霧干燥設(shè)備脫水，制得防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑。本發(fā)明方法科學(xué)、工藝簡單、成本低廉、損耗極小，制劑具有療效顯著、保存方便、緩釋性好、易吸收、無毒、無殘留等特點。與傳統(tǒng)的卵黃抗體注射劑相比，防治小鵝瘟的卵黃抗體緩釋制劑不僅延長了保護(hù)期，還可以通過口服途徑使用，無應(yīng)激反應(yīng)，同時還具有一定的促生長作用。
文檔編號A61K9/14GK102205123SQ201110128908
公開日2011年10月5日 申請日期2011年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者倪同艷, 劉學(xué)賢, 呂曉娟, 李志兵, 李新華, 苗晉鋒, 龔建森 申請人:江蘇省家禽科學(xué)研究所