專利名稱：尖尾芋及其提取物在制備宮頸癌藥物中的運(yùn)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說(shuō)它是抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
尖尾芋eucullatta (Dour) Schott)為天南星科植物假海芋的根莖，生于山澗陰濕處，或樹旁溝邊、河邊。分布于廣東、廣西、四川等地。該植物能清熱、解毒、活血、消腫，治疔瘡、癰腫、丹毒，跌打損傷，慢性氣管炎、鉤端螺旋體病等疾病。迄今為止，對(duì)尖尾芋的研究很少，多見于一般藥效學(xué)報(bào)道。有關(guān)尖尾芋的抗癌藥理活性很少報(bào)道，僅見侯學(xué)文從中分離得到ー個(gè)凝集素，其對(duì)肺腺癌細(xì)胞株P(guān)18僅有很少殺傷能力。癌癥是當(dāng)今社會(huì)發(fā)病率高、死亡率高的ー種頑痰，目前尚無(wú)治愈率較高的藥物的報(bào)道。本發(fā)明人在尋找中草藥抗癌活性成分過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)尖尾芋提取物具有很好的抗腫瘤活性，并且從中獲得多個(gè)具有抗癌活性的ニ苯こ烯、ニ苯こ烯苷、腦苷類化合物等多種骨架類型的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其エ藝簡(jiǎn)單實(shí)用，為尖尾芋的應(yīng)用提供了廣泛的途徑。本發(fā)明的目的是通過(guò)如下方案實(shí)現(xiàn)的以尖尾芋{A locasia eucul latta (Dour) Schott)為原料,采用溶劑提取法、溶劑萃取法等エ藝中的ー種或者多種エ藝，并結(jié)舍濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋總提取物，將制成的尖尾芋總提取物作為抗癌活性成分用于治療多種癌癥。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是尖尾芋及其提取物エ藝簡(jiǎn)單實(shí)用，抗癌療效好，并且無(wú)毒副作用，為尖尾芋應(yīng)用提供了廣泛的途徑。
具體實(shí)施例方式I.溶劑提取法/溶劑萃取法全用提取制備尖尾芋提取物
I.2kg用50%こ醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130gこ醇提取物。2.溶劑提取法/樹脂吸附法合用提取制備尖尾芋提取物
尖尾芋I. Okg用80%こ醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130gこ醇提取物。こ醇提取物上D-IOl型吸附樹脂柱，先用水、5%こ醇/水洗脫以除去色素和雜質(zhì)，而后用60%こ醇/水洗脫。其中60%こ醇/水洗脫部分減壓濃縮除こ醇，再經(jīng)冷凍干燥可得到尖尾芋提取物，收率為1.0%。3.尖尾芋提取物的體外抑瘤實(shí)驗(yàn)
3.I細(xì)胞株、試劑及儀器
人宮頸癌Hela細(xì)胞株購(gòu)自中科院細(xì)胞庫(kù)；DMEM培養(yǎng)液，Gibco產(chǎn)品；胎牛血清，Gibco產(chǎn)品；胰蛋白酶，Gibco產(chǎn)品；DMS0溶液，sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco 3000培養(yǎng)箱，Thermo 公司；Multishkan MK3 酶標(biāo)儀，Thermo 公司。3. 2腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法人宮頸癌Hela細(xì)胞株用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37°C，5% CO2濃度及飽和濕度。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，用25%胰酶消化細(xì)胞，洗滌吹散細(xì)胞稀釋至106/ml，每孔100 μ L接種于96孔板，以備MTT實(shí)驗(yàn)。3.3細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT法)
尖尾芋提取物溶于DMSO溶液，取含1%。DMSO的尖尾芋提取物溶液，用含10%胎牛血清的DMEM溶液配成濃度分別為100、50、20、2 μ g/mL的尖尾芋提取物溶液，每孔100 μ L接種于96孔板，混勻，使尖尾芋提取物每孔終濃度分別達(dá)到50、25、10、I μ g/mL,放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)16、32、48h。每孔加入5mg/mLMTT溶液5μ L，繼續(xù)培養(yǎng)5h，測(cè)定各孔吸光度。以不加任何處理的培養(yǎng)細(xì)胞為空白対照，以單用培養(yǎng)細(xì)胞作為陰性對(duì)照。每個(gè)濃度梯度均設(shè)置12個(gè)平行組，分別計(jì)算細(xì)胞抑制率。按照以下公式計(jì)算抑制率
抑制率=I-(實(shí)驗(yàn)組吸光度平均值/對(duì)照組吸光度平均值)X 100%
結(jié)果見表I 表I尖尾芋提取物對(duì)Hela細(xì)胞體外增殖的抑制作用
權(quán)利要求
1.尖尾芋及其提取物在制備宮頸癌藥物中的運(yùn)用。
2.尖尾芋及其提取物在制備肝癌藥物中的運(yùn)用。
3.一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于以植物尖尾芋Uhca1Siaeucullatta (Dour) Schott)為原料,采用溶劑提取法、溶劑萃取法,等工藝中的一種或者多種工藝，并結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥常用千燥方法制備成尖尾芋提取物，將制成的尖尾芋提取物作為抗癌活性成分，使之在癌癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。
4.一種如權(quán)利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于植物原料尖尾芋(XirOca1Sia eucul latta (Dour) Schott)可以是根莖，也可以是枝葉、果實(shí)等全草的任一部位，原料可以是新鮮采集的，也可以是經(jīng)過(guò)炮制的。
5.—種如權(quán)利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于作為抗癌活性成分的尖尾芋提取物包括其中所含的各種類型的有機(jī)酸、二苯乙烯、二苯乙烯苷、甾體皂甙類化合物以及其它骨架類型的化合物。
6.一種如權(quán)利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的粉碎目數(shù)，可以是粗粉，也可以是80目粉，也可以是100目粉，可以是120目細(xì)粉。
7.—種如權(quán)利要求I所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其它低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒，在室溫下浸潤(rùn)提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤(rùn)提取或回流提取，提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
8.—種如權(quán)利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑萃取法中，可將經(jīng)水或者低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經(jīng)所獲得的提取物混懸于水中，用正丁醇或含水正丁醇直接進(jìn)行萃取，或者經(jīng)低極性溶媒(如石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷等中的一種或多種)脫脂后，再用正丁醇或含水正丁醇進(jìn)行萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
9.一種如權(quán)利要求3所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-IOl型吸附樹脂，XAD-2型吸附樹脂或者CHP-20P型吸附樹脂以及其它類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明公開一種植物尖尾芋(Alocasia eucullatta(Dour)Schott)和其提取物在制備宮頸癌藥物中的運(yùn)用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102805789SQ201110148300
公開日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2011年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月3日
發(fā)明者鄭向煒, 王源, 王碩, 馮怡, 阮克鋒 申請(qǐng)人:上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)工程研究中心