專利名稱：復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種南板藍(lán)根浸膏的應(yīng)用，具體涉及復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
甲型流感病毒根據(jù)H和N抗原不同，又分為許多亞型，H可分為15個(gè)亞型(Hl H15)，N有9個(gè)亞型(附 N9)。其中僅H1N1、H2N2、H3N2主要感染人類，其它許多亞型的自然宿主是多種禽類和動(dòng)物。目前對(duì)于亞洲人群影響較為廣泛的是甲型Hmi病毒，以甲型 HlNl流感病毒為病原體的甲型Hmi流感在人群中傳播，早期被稱為豬流感，與以往或目前的季節(jié)性流感病毒不同，該病毒毒株包含有豬流感、禽流感和人流感三種流感病毒的基因片段。人群對(duì)甲型Hmi流感病毒普遍易感，并可以人傳染人，人感染甲流后的早期癥狀與普通流感相似，包括發(fā)熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發(fā)冷和疲勞等，有些還會(huì)出現(xiàn)腹瀉或嘔吐、肌肉痛或疲倦、眼睛發(fā)紅等。最明顯癥狀是，體溫突然超過(guò)39度，肌肉酸痛感明顯增強(qiáng)，伴隨有眩暈、頭疼、腹瀉、嘔吐等癥狀或其中部分癥狀。如果個(gè)體身體素質(zhì)不是很好，加上自身免疫力低的情況，甲型Hmi流感病毒正好是一個(gè)重量級(jí)的導(dǎo)火線，患者一旦感染， 會(huì)直接引發(fā)很多并發(fā)癥，甚至于危及生命。2009年開始，甲型Hmi流感在全球范圍內(nèi)大規(guī)模流行。雖然在2010年8月，世衛(wèi)組織宣布甲型Hmi流感大流行期已經(jīng)結(jié)束。但是對(duì)于怎樣預(yù)防和和抵抗這一病毒的研究仍在繼續(xù)，而且到目前為止，對(duì)于甲型流感的治療，均是采用奧司他韋(oseltamivir)，即達(dá)菲；研究表明達(dá)菲是一種神經(jīng)氨酸酶抑制劑，對(duì)A(HlNl) 病毒可能有抑制作用，劑量75mg/d，療程5天，兒童慎用。由于禽流感在世界范圍的擴(kuò)散， 全球掀起一股搶購(gòu)達(dá)菲的風(fēng)潮，羅氏也因?yàn)椴豢祥_放奧司他韋的專利權(quán)、限制達(dá)菲銷售，使得奧司他韋的價(jià)格居高不下，另外奧司他韋存在諸多的不良反應(yīng)如消化道的不適，包括惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛等，其次是呼吸系統(tǒng)的不良反應(yīng)，包括支氣管炎、咳嗽等，此外還有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不良反應(yīng)，如眩暈、頭痛、失眠、疲勞等。因此對(duì)于抗甲型Hmi流感病毒的研究具有非常重要的意義。板藍(lán)根分為北板藍(lán)根和南板藍(lán)根，北板藍(lán)根來(lái)源為十字花科植物菘藍(lán)(Isatis tinctoria L.)和草大青(I. indigotica Fort.)的根；南板藍(lán)根為爵床科植物馬藍(lán) (Baphicacanthus cusia (Nees) Brem.)的根莖及根。板藍(lán)根具有清熱解毒、涼血消腫、利咽之功效，已經(jīng)被廣泛的制作成沖劑等中成藥，在民間用于治療感冒，病毒性感染以及傳染病流行期間的預(yù)防，是一種常用而廉價(jià)的非處方藥，已有充分的證據(jù)表明南板藍(lán)根及其復(fù)方藥物可以預(yù)防和治療由病毒引起的呼吸道感染。而南板藍(lán)根是否具有抗甲型流感病毒的作用，至今還沒(méi)有相關(guān)的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于涉及復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏的新作用，主要是復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用?！N復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用。本發(fā)明復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用，包括南板藍(lán)根浸膏在甲3型(H3N2)流感病毒感染MDCK (狗腎傳代細(xì)胞)模型中的抗病毒實(shí)驗(yàn)。所述抗病毒實(shí)驗(yàn)中采用磷酸奧司他韋為陽(yáng)性對(duì)照。所述的MDCK細(xì)胞，從中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心購(gòu)入。本發(fā)明所述的復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏及磷酸奧司他韋由廣東奇星藥業(yè)有限公司提供。其中本復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏由南板藍(lán)根、紫花地丁、蒲公英三味草藥組成，三味藥各300克，加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，濃縮至200ml 稠膏狀物，得到復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏；如再在濃縮液中加入適量蔗糖、糊精輔料，即可制成1000板南根顆粒。本發(fā)明復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的應(yīng)用，還包括復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株FMl (H1N1的鼠肺適應(yīng)株)感染小鼠模型中的病毒干預(yù)試驗(yàn)。所述甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1，由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供，測(cè)定LD5tl (半數(shù)致死量)后，分裝，-80°C保存。本發(fā)明所述的復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏由廣東奇星藥業(yè)有限公司提供，所述的磷酸奧司他韋膠囊由瑞士巴塞爾豪夫邁 羅氏有限公司生產(chǎn)，批號(hào)B1162。本發(fā)明的復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的作用，通過(guò)復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在甲3型流感病毒感染MDCK細(xì)胞模型中的抗病毒試驗(yàn)，結(jié)果表明復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏對(duì)甲3型流感病毒有抑制作用，半數(shù)有效濃度(EC5tl)為3. 8mg/ml，治療指數(shù)(TI) 為3.3。通過(guò)復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株FMKHmi的鼠肺適應(yīng)株) 感染小鼠模型中的病毒干預(yù)試驗(yàn)，結(jié)果顯示復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏對(duì)甲型流感病毒感染小鼠肺指數(shù)具有降低作用(P <0.01)；同時(shí)，具有延長(zhǎng)甲型流感小鼠的存活時(shí)間的作用。治療方法復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏每1毫升中添加輔劑制成5g的板藍(lán)根顆粒成藥，其中所用的輔劑為蔗糖和糊精，按每袋IOg包裝，服用時(shí)按正常的劑量開水沖服，一次半袋 1袋(含蔗糖)，一日3 4次。下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在甲3型流感病毒感染MDCK細(xì)胞模型中的抗病毒實(shí)驗(yàn)包括以下步驟
(a)選擇實(shí)驗(yàn)材料
細(xì)胞:MDCK細(xì)胞，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心購(gòu)入，本室傳代； 病毒甲3型流感病毒，由中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所提供，本室傳代凍存；
4藥物復(fù)方南板蘭根顆粒浸膏，由廣東奇星藥業(yè)有限公司提供；磷酸奧司他韋，瑞士巴塞爾豪夫邁·羅氏有限公司生產(chǎn)，批號(hào)B1162 ；
試劑DMEM(美國(guó)GiBCO公司)細(xì)胞培養(yǎng)液，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Costar)；
(b)體外實(shí)驗(yàn)
藥物對(duì)細(xì)胞半數(shù)毒性濃度(CC5tl)測(cè)定在進(jìn)行上述抗病毒實(shí)驗(yàn)之前，測(cè)定藥物對(duì)試驗(yàn)用細(xì)胞的毒性濃度界限，采用Reed-Muench法，求出藥樣對(duì)細(xì)胞的50%細(xì)胞毒性濃度(CC5tl)， 以無(wú)毒濃度用于抗病毒試驗(yàn)；
藥物抗甲3型流感病毒半數(shù)有效濃度(EC5tl)測(cè)定向96孔細(xì)胞板加入100 μ 1生長(zhǎng)旺盛的MDCK細(xì)胞懸液，使每孔中含有IO4個(gè)細(xì)胞，置細(xì)胞板于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 待長(zhǎng)成單層后，將100個(gè)TCID5tl的病毒液ΙΟΟμΙ加入除正常細(xì)胞對(duì)照外的各孔中，置試驗(yàn)細(xì)胞板于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)2小時(shí)后，將病毒液棄去，再向細(xì)胞板各孔中加入不同稀釋度的藥物溶液(除正常細(xì)胞對(duì)照和病毒感染對(duì)照)，并設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照、病毒感染細(xì)胞對(duì)照及磷酸奧司他韋陽(yáng)性藥對(duì)照，置細(xì)胞板于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)72小時(shí)，觀察細(xì)胞病變(CPE)；
(c)細(xì)胞病變(CPE)的判定
在光學(xué)顯微鏡下觀察，無(wú)CPE，記作“_”;25%以下的細(xì)胞出現(xiàn)CPE，記作“ + ”;25% 50%的細(xì)胞出現(xiàn)CPE,記作“++” ;50% 75%的細(xì)胞出現(xiàn)CPE,記作“+++” ;75% 100%的細(xì)胞出現(xiàn)CPE，記作“++++”；
(d)結(jié)果計(jì)算
根據(jù)下述公式進(jìn)行結(jié)果計(jì)算
Reed-Muench法計(jì)算CC5tl的公式
權(quán)利要求
1. 一種復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型Hmi流感病毒中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明具體涉及復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在抗甲型流感病毒中的作用。本發(fā)明復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏作用于甲3型流感病毒感染MDCK細(xì)胞模型以及甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1感染小鼠模型，復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在甲3型流感病毒感染MDCK細(xì)胞模型中的病毒干預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏對(duì)甲3型流感病毒有抑制作用，半數(shù)有效濃度為3.8mg/ml，治療指數(shù)為3.3。通過(guò)復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏在甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1感染小鼠模型中的病毒干預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示復(fù)方南板藍(lán)根顆粒浸膏對(duì)甲型流感病毒感染小鼠肺指數(shù)具有降低作用(P＜0.01)；同時(shí)，具有延長(zhǎng)甲型流感小鼠的存活時(shí)間的作用。
文檔編號(hào)A61K36/86GK102258636SQ20111015502
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2011年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月10日
發(fā)明者丘鸰原, 劉軍, 李光亮, 胡燕, 鄭朝暉 申請(qǐng)人:廣州奇星藥業(yè)有限公司