專利名稱：用于肉毒毒素的局部施用和透皮遞送的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含肉毒毒素的新組合物，更確切地是這樣的組合物，該組合物能夠?qū)⑷舛径舅剡\(yùn)輸或遞送通過皮膚或上皮(也稱作“透皮遞送”)，從而可用作局部施用以給受試者提供肉毒毒素以達(dá)到此處描述的各種治療、美學(xué)和/或美容目的。
背景技術(shù)：
皮膚保護(hù)身體的器官免受外界環(huán)境的威脅并充當(dāng)恒溫器以維持身體的溫度。其由幾個(gè)不同的層構(gòu)成，各層具有特化的功能。主要的層包括表皮、真皮和皮下組織。表皮是覆在真皮上面的上皮細(xì)胞的層化層，真皮由結(jié)締組織構(gòu)成。表皮和真皮都進(jìn)一步由皮下組織 (內(nèi)層脂肪組織)支持。表皮，皮膚的最上層，只有0. 1至1. 5毫米厚(Inlander，Skin, New York, NY People' s Medical Society，1_7 (1998))。其由角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)成并且基于其分化的狀態(tài)分為幾層。表皮可進(jìn)一步分為角質(zhì)層和由粒狀melphigian以及基底細(xì)胞組成的活表皮層。 角質(zhì)層是吸濕的并且按重量計(jì)算需要至少10%的水分以維持其彈性和柔軟性。吸濕性部分歸因于角蛋白的保持水分的能力。角質(zhì)層失去其柔軟性和彈性時(shí)，其變得粗糙易碎，導(dǎo)致干性膚質(zhì)。正好位于表皮下面的真皮為1.5至4毫米厚。其是皮膚的三層中最厚的一層。 此外，真皮也包含大多數(shù)皮膚的結(jié)構(gòu)，包括汗腺和脂腺(其通過在皮膚中稱為毛孔或粉刺的開口分泌物質(zhì))、毛囊、神經(jīng)末梢和血管及淋巴管(Inlander，Skin, New York, NY: People' s Medical Society，1-7 (1998))。然而，真皮的主要成分是膠原和彈性蛋白。皮下組織是皮膚的最深層。其充當(dāng)保持體溫的絕熱器和保護(hù)器官的減震器 (Inlander, Skin, New York, NY =People' s Medical Society，1-7 (1998))。另外，皮下組織也貯存作為能源蘊(yùn)藏的脂肪。皮膚的PH—般在5和6之間。該酸性是由于存在來自皮脂腺分泌物的兩性氨基酸、乳酸和脂肪酸造成的。術(shù)語(yǔ)“酸性保護(hù)膜”是指皮膚的大多數(shù)區(qū)域上存在可溶于水的物質(zhì)。皮膚的緩沖能力部分歸因于貯藏在皮膚角質(zhì)層中的這些分泌物。皺紋，老化體征中的一個(gè)體征，可以是由生物化學(xué)、組織學(xué)和生理學(xué)變化造成的， 所述變化是由環(huán)境破壞積累的(Benedetto, International Journal of Dermatology, 38 641-655(1999))。此外，存在可導(dǎo)致面部皺紋的特征性折痕、折皺和摺痕的其他次要因素 (Stegman 等人，The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery,第 2 IK, St. Louis,MO =Mosby Year Book :5-15 (1990))。這些次要因素包括重力的恒定拉力、對(duì)皮膚的經(jīng)常性和恒定性定位壓力(即，在睡眠期間)，和由面部肌肉的收縮產(chǎn)生的反復(fù)的面部活動(dòng)(Stegman等人，The Skin of the Aging Face Cosmetic Dermatological Surgery, 第 2 版，St. Louis，M0 :Mosby Year Book :5-15 (1990))。為了潛在地減緩一些老化的體征， 使用了不同的技術(shù)。這些技術(shù)從含有α羥酸和維生素A的面部保濕液到手術(shù)方法和神經(jīng)
毒素的注射。皮膚的一個(gè)基本功能是為潛在地對(duì)正常內(nèi)穩(wěn)態(tài)有害的水分和物質(zhì)的運(yùn)輸提供屏障。沒有堅(jiān)韌的、半透性的皮膚，身體將很快脫水。皮膚幫助防止有害物質(zhì)進(jìn)入身體。盡管大多數(shù)物質(zhì)不能滲透過屏障，但已發(fā)展了許多策略來選擇性地增加皮膚的透性并獲得不同程度的成功。肉毒毒素(Botulinum toxin)(也稱作肉毒桿菌毒素或肉毒神經(jīng)毒素)是由革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌肉毒梭菌(Clostridium botulinum)產(chǎn)生的神經(jīng)毒素。其通過阻止突觸傳遞或乙酰膽堿通過神經(jīng)肌肉接頭的釋放來使肌肉產(chǎn)生麻痹，其也被認(rèn)為以其他的方式發(fā)揮作用。其作用基本上阻斷了通常導(dǎo)致肌肉痙攣或收縮的信號(hào)，從而產(chǎn)生麻痹。肉毒毒素被分為八種血清學(xué)上相關(guān)但不同的神經(jīng)毒素。其中，七種可導(dǎo)致麻痹，即 A、B、C、D、E、F和G血清型肉毒神經(jīng)毒素。通過和類型特異性抗體的中和作用來區(qū)分這些亞型中的每一亞型。然而，對(duì)于所有這七種活性肉毒毒素，肉毒毒素蛋白分子的分子量大約為150kD。因?yàn)橥ㄟ^細(xì)菌釋放，所以肉毒毒素是包含和非毒素蛋白結(jié)合在一起的150kD肉毒毒素蛋白分子的復(fù)合物。梭菌可產(chǎn)生900kD、500kD和300kD形式的A型肉毒毒素復(fù)合物。 B型和C型肉毒毒素只有700kD或500kD表觀的復(fù)合物產(chǎn)生。D型肉毒毒素可以300kD和 500kD的復(fù)合物形式產(chǎn)生。E型和F型肉毒毒素只以大約300kD復(fù)合物的形式產(chǎn)生。據(jù)認(rèn)為復(fù)合物(即，分子量大于大約150kD)含有非毒素血凝素蛋白以及非毒素和非毒性非血凝素蛋白。這兩種非毒素蛋白(其和肉毒毒素分子一起包含相關(guān)的神經(jīng)毒素復(fù)合物)可用于為肉毒毒素分子提供抗變性的穩(wěn)定性，以及當(dāng)毒素被攝入時(shí)提供抗消化酸的保護(hù)作用。此外，更大的(大于大約150kD分子量)的肉毒毒素復(fù)合物可能導(dǎo)致肉毒毒素從肉毒毒素復(fù)合物的肌內(nèi)注射位點(diǎn)擴(kuò)散的速度變慢。肉毒毒素的不同血清型在其作用的動(dòng)物種類和在其引起的麻痹嚴(yán)重度和持續(xù)時(shí)間上是不同的。例如，如以在大鼠中產(chǎn)生的麻痹率估量，已確定A型肉毒毒素比B型肉毒毒素強(qiáng)500倍。此外，已確定B型肉毒毒素在480U/kg的劑量(大約是靈長(zhǎng)類動(dòng)物對(duì)于A型的LD50的12倍)下在靈長(zhǎng)類動(dòng)物中是無(wú)毒的。由于肉毒毒素的分子大小和分子結(jié)構(gòu)的原因，其不能穿過角質(zhì)層和多層底層皮膚結(jié)構(gòu)。肉毒中毒，由于系統(tǒng)性肉毒毒素暴露而產(chǎn)生的特征綜合癥狀，自古以來就在歐洲存在。在1895年，Emile P. van Ermengem第一次從腌生豬肉中分離出厭氧性產(chǎn)孢子桿菌，該腌生豬肉獲自在比利時(shí)死于肉毒中毒的死豬的死后的組織。Van Ermengem發(fā)現(xiàn)所述疾病是由他稱為肉毒芽孢桿菌(Bacillus botulinus)產(chǎn)生的細(xì)胞外毒素引起的(Van Ermengem, Z Hyyg Infektionskr,26 1-56 ；Rev Infect (1897))。1922 年該名稱改為肉毒梭菌。名稱梭菌用于反映該微生物的無(wú)氧特性，也反映其形態(tài)學(xué)特征(Carruthers和Carruthers， Can J Ophthalmol, 31 :389-400 (1996))。在1920年代，在其他食物中毒暴發(fā)后分離了 A型肉毒桿菌毒素的粗提物形式。University of California, San Francisco 的 Dr. Herman Sommer進(jìn)行了第一次純化神經(jīng)毒素的嘗試(Borodic等，Ophthalmic Plast Recostr Surg, 7 :54-60(1991))。1946年，Dr. Edward J. Schantz和其同事分離了以晶體形式存在的神經(jīng)毒素(Schantz 等人，In Jankovi J, Hallet M(Eds)Therapy with Botulinum Toxin, New York, NY =Marcel Dekker，41-49 (1994))。到了 1949 年，Burgen 和其同事能夠證明肉毒毒素阻斷通過神經(jīng)肌肉接點(diǎn)的沖動(dòng)(Burgen等人，J Physiol, 109 :10-24(1949)) 0 Allan B. Scott在1973第一次在猴子中使用肉毒毒素A(BTX-A)。Scott證實(shí)持續(xù)3個(gè)月的可逆的眼肌麻痹(Lamanna Jcience，130 :763-772 (1959))。此后很快地，報(bào)導(dǎo)了 BTX-A成功地在人中治療了斜視、眼瞼痙攣、和痙攣性斜頸(Baron等人，In =Baron EJ,Peterson LRjFinegold SM(Eds) , Bailey & Scotts Diagnostic Microbiology, St.Louis, MO :Mosby Year Book,504-523 (1994) ；Carruthers 禾口 Carruthers，Adv Dermatol，12 :325-348 (1997)； Markowitz, In :Strickland GT(Eds)Hunters Tropical Medicine,第 7 版，Philadelphia : W. B. Saunders, 441-444 (1991))。在 1986 年，Jean 和 Alastair Carruthers,由眼外科醫(yī)生和皮膚科醫(yī)生組成的夫妻團(tuán)隊(duì)，開始發(fā)展肉毒毒素-A(BTX-A)的化妝品用途，用于眉間區(qū)域中和運(yùn)動(dòng)相關(guān)的皺紋的治療(Schantz 和 kott，In Lewis GE(Ed)Biomedical Aspects of Botulinum, New York =Academic Press，143—150 (1981)) 。 Carruthers 貞用 BTX—A 治療皺紋在1992年導(dǎo)致其的關(guān)于該方法的開創(chuàng)性出版物問世(Schantz和kott，In Lewis GE(Ed)Biomedical Aspects of Botulinum, New York :Academic Press,143-150(1981))。 到了 1994年，相同的組報(bào)導(dǎo)了關(guān)于治療臉上的其他運(yùn)動(dòng)相關(guān)的皺紋的經(jīng)驗(yàn)(kott， Ophthalmol, 87 1044-1049 (1980))。這反過來導(dǎo)致化妝用的BTX-A治療法的問世。A型肉毒毒素?fù)?jù)認(rèn)為是人們已知的致死性最強(qiáng)的天然的生物學(xué)試劑。在土壤中可發(fā)現(xiàn)肉毒梭菌的孢子，其可在未恰當(dāng)滅菌的和封閉的食物容器中生長(zhǎng)。細(xì)菌的攝入可導(dǎo)致肉毒中毒，其可以是致命的。但同時(shí)，肉毒毒素的肌肉麻痹性作用已被用于治療作用。肉毒毒素的受控施用已用于提供肌肉麻痹來治療病癥，例如，特征在于過度興奮的骨骼肌的神經(jīng)肌肉病癥。已用肉毒毒素治療的病癥包括偏側(cè)面肌痙攣、成人發(fā)生的痙攣性斜頸(adult onset spasmodic torticollis)、肛裂、眼瞼痙攣、大腦性癱瘓、cervical dystonia、偏頭痛、斜視、temperomandibular joint disorder和各種類型的肌肉痙攣和抽搐。最近以來，肉毒毒素的肌肉麻痹性作用已被用于治療性應(yīng)用和化妝品面部應(yīng)用，例如皺紋、眉間紋 (frown lines)和面部肌肉痙攣或抽搐造成的其他結(jié)果的治療。因?yàn)槭┯玫臒o(wú)痛性質(zhì)、更大的可覆蓋的治療表面積、配制具有更高比活性的純毒素的能力、減少的對(duì)應(yīng)用肉毒毒素治療劑的培訓(xùn)、更少的產(chǎn)生想要的效應(yīng)所必需的劑量和不需要大量的毒素來達(dá)到治療性臨床結(jié)果的原因，肉毒毒素的局部遞送提供了更安全和更想要的可選擇的治療法。因此，不需要注射并用于肉毒毒素的透皮遞送的有效方法以及用于施用肉毒毒素以治療或預(yù)防許多病癥的有效方法是非常想要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及包含肉毒毒素的新組合物，更確切地是這樣的組合物，該組合物能夠?qū)⑷舛径舅剡\(yùn)輸或遞送通過皮膚或上皮(也稱作“透皮遞送”)，從而可用作局部施用以給受試者提供肉毒毒素以達(dá)到此處描述的各種治療、美學(xué)和/或美容目的。本發(fā)明的一個(gè)方面是提供包含肉毒毒素和載體的組合物。所述載體具有聚合物主鏈，所述主鏈具有附著的帶正電荷的分支基團(tuán)。所述載體和所述肉毒毒素之間的結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合。
本發(fā)明的另一方面提供了用于給受試者施用肉毒毒素的試劑盒。所述試劑盒包含了以對(duì)其透皮遞送有效的量存在的肉毒毒素和載體，所述載體具有聚合物主鏈，該主鏈具有附著的帶正電荷的分支基團(tuán)。所述載體和肉毒毒素之間的結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合。本發(fā)明的另一方面提供用于給受試者施用肉毒毒素的試劑盒。該試劑盒包含用于將肉毒毒素遞送給皮膚的裝置和組合物，所述組合物包含具有聚合物主鏈的載體，所述主鏈具有附著的選自-(gly)nl_(arg)n2、HIV-TAT和其片段、以及觸角足PTD的帶正電荷的分支基團(tuán)，其中下標(biāo)nl是從0至大約20的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約25的奇整數(shù)。本發(fā)明提供了給受試者施用肉毒毒素的方法，該方法包括將肉毒毒素和有效量的載體一起給受試者的皮膚或上皮局部施用。所述載體具有聚合物主鏈，所述主鏈具有附著的帶正電荷的分支基團(tuán)，并和所述肉毒毒素非共價(jià)地結(jié)合。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及這樣的組合物，該組合物包含肉毒毒素(如此所定義的) 和這樣的載體，所述載體包含帶正電荷的“主鏈”，所述主鏈具有此處描述的帶正電荷的分枝或“效能”基團(tuán)。最優(yōu)選地所述帶正電荷的載體是長(zhǎng)鏈帶正電荷的多肽或帶正電荷的非肽基聚合物，例如聚烯化亞胺。本發(fā)明還涉及用于產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)的方法，例如肌肉麻痹、 減少分泌過多或出汗、治療神經(jīng)疼痛或偏頭痛、減少肌肉痙攣、預(yù)防或減少痤瘡、或減少或增強(qiáng)免疫應(yīng)答，通過局部使用(優(yōu)選地對(duì)需要該治療的受試者或患者的皮膚使用)有效量的此類組合物來進(jìn)行所述方法。本發(fā)明也涉及用于產(chǎn)生美學(xué)和/或美容效果的方法，例如通過給臉部局部使用肉毒毒素而不是通過注射入臉部肌肉產(chǎn)生所述效果。本發(fā)明也提供了用于制備或配制包含載體和肉毒毒素的組合物以及其它額外的產(chǎn)品或預(yù)混劑的試劑盒，所述產(chǎn)品是生產(chǎn)可用的制劑所需的產(chǎn)品，所述預(yù)混劑可用于生產(chǎn)這樣的制劑。可選擇地所述試劑盒包含用于分開地但將肉毒毒素和載體給受試者組合施用的手段。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了通過局部施用合適的制劑進(jìn)行的肉毒毒素的遞送，特別是透皮遞送的組合物和方法。根據(jù)本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)此處所描述的具有效能基團(tuán)的帶正電荷的載體分子適合作為肉毒毒素的運(yùn)輸系統(tǒng)，其使該毒素能夠被透皮施用至肌肉和/或其他和皮膚相關(guān)的結(jié)構(gòu)。 所述轉(zhuǎn)運(yùn)可在無(wú)需肉毒毒素的共價(jià)修飾的情況下發(fā)生?！皫д姾傻摹笔侵篙d體在至少一些溶液相條件下，更優(yōu)選地在至少一些生理相容的條件下具有正電荷。更確切地，此處所用的“帶正電荷的”是指所述基團(tuán)含有在所有PH條件都帶電荷的官能團(tuán)，例如季胺，或含有可在某些溶液相條件下例如PH發(fā)生變化的條件下獲得正電荷的官能團(tuán)，在該情況下是伯胺。更優(yōu)選地，此處所用的“帶正電荷的”是指具有在生理相容條件下和陰離子結(jié)合的形為的基團(tuán)。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言很明顯的是，具有多個(gè)帶正電荷的部分的聚合物不必是同聚物。帶正電荷的部分的其他示例在現(xiàn)有技術(shù)中是熟知的并且可容易地使用，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言也是很顯然的。—般地，所述帶正電荷的載體(也稱作“帶正電荷的主鏈”)一般是線性的原子鏈， 其在鏈上具有在生理PH下攜帶正電荷的基團(tuán)，或具有附著至從主鏈延伸出來的側(cè)鏈的攜帶正電荷的基團(tuán)。優(yōu)選地，帶正電荷的主鏈自身不具有明確的酶促或生物學(xué)活性。線性主鏈?zhǔn)翘細(xì)渲麈?，在一些?shí)施方案中，其被選自氮、氧、硫、硅和磷的雜原子間插。大部分主鏈原子通常是碳。此外，所述主鏈通常是重復(fù)單位(例如，氨基酸、聚(氧乙烯)、聚(丙烯亞胺)、聚烯化亞胺等)的聚合物，但可以是異聚合物。在一組實(shí)施方案中，帶正電荷的主鏈?zhǔn)蔷郾﹣啺?，其中許多胺的氮原子以攜帶正電荷的銨基(四取代的)形式存在。在另一個(gè)實(shí)施方案中，帶正電荷的主鏈?zhǔn)欠请幕酆衔?，其可以是異聚合物或同聚合物，例如聚烯化亞胺，例如聚乙烯亞胺或聚丙烯亞胺，具有從大約10，000至大約2，500, 000、優(yōu)選地從大約100，000至大約1，800，000，和最優(yōu)選地從大約500，000至大約1，400，000的分子量。在另一組實(shí)施方案中，所述主鏈已附著多個(gè)含有帶正電荷基團(tuán)(例如，銨基、吡啶基、基、锍基、胍基或amidinium基)的側(cè)鏈部分。該組實(shí)施方案中的側(cè)鏈部分可以以一致的或可變的間距沿主鏈放置。此外，側(cè)鏈的長(zhǎng)度可以相似或不同。例如，在一組實(shí)施方案中，側(cè)鏈可以是具有從1至20個(gè)碳原子并在遠(yuǎn)端(遠(yuǎn)離主鏈)以上面提到的帶正電荷的基團(tuán)中的一個(gè)結(jié)束的線性的或分枝的烴鏈。在本發(fā)明的所有方面，載體和具有生物學(xué)活性的試劑之間的結(jié)合是通過非共價(jià)相互作用結(jié)合的，所述相互作用的非限定性例子包括，例如，離子相互作用、氫鍵、范德瓦爾斯力或其組合。在一組實(shí)施方案中，帶正電荷的主鏈?zhǔn)蔷哂卸鄠€(gè)帶正電荷的側(cè)鏈基團(tuán)(例如，賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、高精氨酸等)的多肽。優(yōu)選地，所述多肽具有從大約10，000至大約 1，500, 000,更優(yōu)選地從大約25，000至大約1，200, 000,最優(yōu)選地從大約100，000至大約 1，000, 000的分子量。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到，當(dāng)氨基酸用于本發(fā)明的該部分時(shí)，所述側(cè)鏈在附著的中心可具有D型或L型(R或S構(gòu)型)?？蛇x擇地，所述主鏈可以是多肽的類似物，例如類肽(peptoid)。參見，例如，Kessler, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 32 :543(1993)； Zuckermann 等人 Chemtracts-Macromo 1. Chem. 4 :80 (1992)；禾口 Simon 等人 Proc. Nat ‘ 1. Acad. Sci. USA 89:9367(1992))。簡(jiǎn)而言之，類肽是多聚甘氨酸，其中側(cè)鏈附著至主鏈的氮原子而不是附著至α碳原子。如上所述，側(cè)鏈的一部分通常以帶正電荷的基團(tuán)結(jié)尾以提供帶正電荷的主鏈組分。在例如美國(guó)專利號(hào)5，877，278中描述了類肽的合成，其以其全文在此引用作為參考。當(dāng)所述術(shù)語(yǔ)在此使用時(shí)，具有類肽主鏈結(jié)構(gòu)的帶正電荷的主鏈被認(rèn)為是 “非肽”，因?yàn)槠洳皇怯稍讦撂荚游恢蒙暇哂刑烊话l(fā)生的側(cè)鏈的氨基酸構(gòu)成的?？蓱?yīng)用例如多肽的空間或電子模擬物來使用多種其他主鏈，其中肽的酰胺鍵由取代物替代，所述取代物是例如酯鍵、硫代酰胺鍵(-CSNH-)、反向硫代酰胺鍵(-NHCS-)、氨基亞甲基鍵(-NHCH2-)或反向亞甲基氨基鍵(-CH2NH-)、酮亞甲基鍵(-COCH2-)、次膦酸基 (-PO2RCH2-)、磷酸酰胺和磷酸酰胺酯鍵(-PO2RNH-)、反向肽鍵(-NHC0-)、反式烯烴鍵(-CR =CH-)、氟代烯烴鍵(-CF = CH-)、二亞甲基鍵(-CH2CH2-)、硫醚鍵(-CH2S-)、羥亞乙基鍵 (-CH (OH) CH2-)、亞甲氧基鍵(-CH2O-)、四唑(CN4)、亞磺酰胺基(-SO2NH-)、亞甲亞磺酰胺基 (-CHRSO2NH-)、反向亞磺酰胺基(-NHSO2-)，以及具有丙二酸和/或gem- 二氨基-烷基亞基的主鏈，例如，由Fletcher等人((1998)Chem. Rev. 98 :763)綜述的，和由其中引用的參考資料所詳細(xì)描述的。許多前述的取代物產(chǎn)生近似的(和由α氨基酸形成的主鏈相比)電子等排聚合物主鏈。在上面提供的各主鏈中，可附著攜帶正電荷的基團(tuán)的側(cè)鏈基團(tuán)。例如，亞磺酰胺連接的主鏈(-SO2NH-和-NHSO2-)可具有附著至氮原子上的側(cè)鏈基團(tuán)。類似地，羥乙烯基 (-CH(OH)CH2-)連接鏈可攜帶附著至羥基取代基的側(cè)鏈基團(tuán)。通過使用標(biāo)準(zhǔn)的合成方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地改造其他鍵合化學(xué)物質(zhì)以使其提供帶正電荷的側(cè)鏈基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，帶正電荷的主鏈?zhǔn)蔷哂蟹种Щ鶊F(tuán)(也稱作效能基團(tuán))的多肽。 如此處所用的，效能基團(tuán)或分支基團(tuán)是具有促進(jìn)帶正電荷的主鏈轉(zhuǎn)運(yùn)通過組織或細(xì)胞膜的作用的任何試劑。分支基團(tuán)或效能基團(tuán)的非限定性示例包括-(glyL-brdfHIV-TAT或其片段、或觸角足(Antermapedia)的蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域、或其片段，其中下標(biāo)nl是從0至20的整數(shù)，更優(yōu)選地是0至8的整數(shù)，更優(yōu)選地是2至5的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約 25、更優(yōu)選地大約7至大約17、最優(yōu)選地大約7至大約13的奇整數(shù)。其他優(yōu)選的實(shí)施方案是這樣的實(shí)施方案，在所述實(shí)施方案中，HIV-TAT片段具有式(gly^-RGRDDRRQRRR-fely),、 (gly) p-YGRKKRRQRRR- (gly) q 或(gly) p-RKKRRQRRR- (gly),，其中下標(biāo) ρ 和 q 各獨(dú)立地是從 0 至20的整數(shù)，所述片段通過該片段的C端或N端附著至主鏈。優(yōu)選的HIV-TAT片段是其中下標(biāo)P和q各自獨(dú)立地是0至8、更優(yōu)選地2至5的整數(shù)的片段。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，帶正電荷的側(cè)鏈或分支基團(tuán)是觸角足(Antp)的蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域(PTD)、或保持活性的其片段。優(yōu)選地帶正電荷的載體以至少大約0.05% (載體總重量的百分比)、優(yōu)選地從大約 0. 05至大約45%的重量，最優(yōu)選地從大約0. 1至大約30%的重量的量包含帶正電荷的側(cè)鏈分支基團(tuán)。對(duì)于具有式_(gly)nl_(arg)n2的帶正電荷的分支基團(tuán)，最優(yōu)選的量是從大約0. 1 至大約25%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述主鏈部分是多聚賴氨酸，帶正電荷的分支基團(tuán)附著至所述賴氨酸側(cè)鏈氨基。所述多聚賴氨酸具有從大約10，000至大約1，500, 000、優(yōu)選地從大約25，000至大約1，200，000，和最優(yōu)選的大約100，000至大約1，000，000的分子量。其可以是可商購(gòu)獲得(Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, USA)的多聚賴氨酸中的任一種，例如，具有MW > 70,000的多聚賴氨酸、具有70，000至150，000的MW的多聚賴氨酸、具有MW 150，000至300，000的多聚賴氨酸和具有MW > 300,000的多聚賴氨酸。多聚賴氨酸的恰當(dāng)選擇依賴于組合物的其余組分，要足以為組合物提供總的凈正電荷和提供這樣的長(zhǎng)度，該長(zhǎng)度優(yōu)選地是帶負(fù)電荷的組分的組合長(zhǎng)度的1至4倍。優(yōu)選的帶正電荷的分支基團(tuán)或效能基團(tuán)包括，例如，_gly_gly_gly_arg_arg_arg_arg_arg_arg_arg (-Gly3Arg7) 或HIV-TAT。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，帶正電荷的主鏈?zhǔn)情L(zhǎng)鏈聚烯化亞胺例如聚乙烯亞胺，例如，分子量為大約1，000，000的聚乙烯亞胺。帶正電荷的主鏈或載體分子是新的化合物并形成本發(fā)明的方面，所述主鏈或載體包含具有上述分支基團(tuán)的多肽或聚烯化亞胺。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，只有具有帶正電荷的分支基團(tuán)的帶正電荷的載體是肉毒毒素的透皮遞送所必需的。在某些實(shí)施方案中，所述帶正電荷的載體是具有多個(gè)上述的帶正電荷的側(cè)鏈基團(tuán)的多肽(例如，賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、高精氨酸等)。優(yōu)選地，所述多肽具有至少大約10，000的分子量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，帶正電荷的載體是非肽基聚合物例如具有至少大約100，000分子量的具有多個(gè)帶正電荷的側(cè)鏈基團(tuán)的聚烯化亞胺。這些聚烯化亞胺包括聚乙烯亞胺和聚丙烯亞胺。在任一示例中，為了用作透皮遞送所唯一必需的試劑，所述帶正電荷的載體分子包含帶正電荷的分枝或效能基團(tuán)，包括-(gly)nl-(arg) mHIV-TAT或其片段、觸角足PTD或其片段，其中下標(biāo)nl是從0至20，更優(yōu)選地從0至8，更優(yōu)選地2至5的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約25，更優(yōu)選地從大約7至大約17和最優(yōu)選地從大約7至大約13的奇整數(shù)。優(yōu)選地所述側(cè)鏈或分支基團(tuán)具有上述通式- (gly)nl-(arg)n2。其他優(yōu)選的實(shí)施方案是這樣的方案，在所述方案中，分支基團(tuán)或效能基團(tuán)是具有式(gly^-RGRDDRRQRRR-fely),、(gly^-YGRKKRRQRRR-fely),或(gly^-RKKRRQRRR-fely), 的HIV-TAT片段，其中下標(biāo)P和q各自獨(dú)立地是從0至20的整數(shù)，所述片段通過該片段的C 端或N端附著至載體分子。所述側(cè)鏈分支基團(tuán)可在附著的中心具有D型或L型(R或S構(gòu)型)。優(yōu)選的HIV-TAT片段是這樣的片段，在所述片段中，下標(biāo)P和q各自獨(dú)立地是從0至 8、優(yōu)選地2至5的整數(shù)。其他優(yōu)選的實(shí)施方案是這樣的實(shí)施方案，在所述實(shí)施方案中，分支基團(tuán)是觸角足PTD基團(tuán)或其保持基團(tuán)活性的片段。這些在本領(lǐng)域中是已知的，例如根據(jù) Console等人，J. Biol. Chem. 278 :35109 (2003)。優(yōu)選地帶正電荷的載體以至少大約0. 05% (作為載體總重量的百分比)、優(yōu)選地從大約0. 05至大約45%的重量，和最優(yōu)選地從大約 0. 1至大約30%的重量的量包含側(cè)鏈帶正電荷的分支基團(tuán)。對(duì)于具有式-(gly)nl-(arg)n2 的帶正電荷的分支基團(tuán)，最優(yōu)選的量是從大約0. 1至大約25%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體是具有附著至賴氨酸側(cè)鏈氨基的帶正電荷的分支基團(tuán)的多聚賴氨酸。用于該特定實(shí)施方案的多聚賴氨酸可以是可商購(gòu)獲得(例如，Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, USA)的多聚賴氨酸中的任一種，例如，具有 MW > 70, 000的多聚賴氨酸、具有70,000至150,000的MW的多聚賴氨酸、具有MW 150,000至 300, 000的多聚賴氨酸和具有MW > 300，000的多聚賴氨酸。然而，優(yōu)選的多聚賴氨酸具有至少大約10，000的MW。優(yōu)選的帶正電荷的分支基團(tuán)或效能基團(tuán)包括，例如，-gly-gly-gly -arg-arg-arg-arg-arg-arg-arg(-Gly3Arg7)、HIV-TAT 或其片段、和觸角足 PTD 或其片段。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述載體是相對(duì)較短的多聚賴氨酸或聚乙烯亞胺(PEI)主鏈(其可以是線性或分枝的)，并且其具有帶正電荷的分支基團(tuán)。這些載體在使組合物中的主鏈和肉毒毒素的不受控制的凝聚減少至最低上非常有用，所述凝聚使運(yùn)輸效率急劇降低。當(dāng)所述載體是相對(duì)短的線性多聚賴氨酸或PEI主鏈時(shí)，所述主鏈具有低于 75, 000,更優(yōu)選地低于30，000,和最優(yōu)選地低于25，000的分子量。然而，當(dāng)載體是相對(duì)短的分枝多聚賴氨酸或PEI主鏈時(shí)，主鏈將具有低于60，000，更優(yōu)選地低于55，000和最優(yōu)選地低于50，000的分子量。然而，如果組合物包含此處描述的隔離試劑(partitioning agents)，那么分枝的多聚賴氨酸和PEI主鏈的分子量可高達(dá)75，000，而線性多聚賴氨酸和 PEI主鏈的分子量可高達(dá)150，000。此處所用的術(shù)語(yǔ)“肉毒毒素”是指無(wú)論是通過細(xì)菌產(chǎn)生的還是通過重組技術(shù)產(chǎn)生的任何已知類型的肉毒毒素，以及以后可被發(fā)現(xiàn)的任何這樣的類型，包括通過基因工程產(chǎn)生的變體或融合蛋白。如上面所提到的，目前，已表征了七種免疫學(xué)上不同的肉毒神經(jīng)毒素，即A、B、C、D、E、F和G血清型肉毒神經(jīng)毒素，其各自通過用類型特異性抗體進(jìn)行中和來區(qū)另II。肉毒毒素血清型可從 Sigma-Aldrich 禾口從 Metabiologics, Inc. (Madison, Wisconsin) 以及從其他來源商購(gòu)獲得。肉毒毒素的不同血清型在其作用的動(dòng)物種類和在其引起的麻痹的嚴(yán)重度和持續(xù)時(shí)間上是不同的。至少兩種類型的肉毒毒素，A型和B型，可以以制劑形式商購(gòu)獲得用于治療某些病癥。例如，在商標(biāo)為BOTOXO 的Allergan的制劑中和商標(biāo)為DYSPORT 的Ipsen的制劑中含有A型，而在商標(biāo)為MYOBLOC 的Elan的制劑中含有B型。用于本發(fā)明組合物的肉毒毒素可選擇地可以是肉毒毒素的衍生物，即其是這樣的化合物，所述化合物具有肉毒毒素活性，但相對(duì)于天然發(fā)生的或重組的天然的肉毒毒素，在其任何部分或任何鏈上包含一種或多種化學(xué)或功能性改變。例如，肉毒毒素可以是經(jīng)修飾的神經(jīng)毒素(例如，這樣的神經(jīng)毒素，當(dāng)和天然地或重組地產(chǎn)生的神經(jīng)毒素或其衍生物或其片段相比，其氨基酸的至少一個(gè)被刪除、被修飾或被替代)。例如，所述肉毒毒素可以是以這樣的方式修飾的肉毒毒素，所述方式是例如增強(qiáng)其特性或減少不想要的副作用，但仍保持想要的肉毒毒素活性的方式。如上所述，肉毒毒素可以是由細(xì)菌產(chǎn)生的肉毒毒素復(fù)合物中的任一種。可選擇地，肉毒毒素可以是使用重組或化學(xué)合成技術(shù)制備的毒素(例如，重組肽、融合蛋白或雜合的神經(jīng)毒素，如從不同的肉毒毒素的亞基或結(jié)構(gòu)域制備而來的(參見美國(guó)專利6，444，209))。肉毒毒素也可以是完整的分子的部分，該部分經(jīng)顯示具有必需的肉毒毒素活性，在該情況下其自身可被使用或用作組合分子或綴合分子例如融合蛋白的部分。此外，肉毒毒素可以肉毒毒素前體(該前體自身可以是無(wú)毒的)的形式存在，例如，在蛋白水解斷裂后變得有毒的無(wú)毒性鋅蛋白酶。本發(fā)明也涉及肉毒毒素的組合物和混合物的一般用途，不過由于其不同的性質(zhì)和特性，目前在衛(wèi)生保健或美容業(yè)中一般不施用肉毒毒素血清型的混合物。本發(fā)明的組合物優(yōu)選地以這樣的產(chǎn)品形式存在，即該產(chǎn)品被用于受試者或患者即需要特定治療的人或其他哺乳動(dòng)物的皮膚或上皮。術(shù)語(yǔ)“需要”是指包括藥物和保健相關(guān) (例如治療涉及不想要的面部肌肉痙攣的癥狀)的需要，以及美容和主觀(例如改變或改善面部組織的外觀)上的需要。一般地，通過將肉毒毒素和載體以及通常地一種或多種額外的藥物可接受的載體或賦形劑混合來制備組合物。在其最簡(jiǎn)單的形式中，其可包含簡(jiǎn)單的水性藥物可接受的載體或稀釋劑，例如緩沖鹽水。然而，組合物可包含一般存在于局部藥物組合物或藥妝(cosmeceutical)組合物中的其他成分，包括皮膚或藥物可接受的載體、賦形劑或介質(zhì)(即和其施用的組織相容的載體、賦形劑或介質(zhì))。此處使用的術(shù)語(yǔ)“皮膚或藥物可接受的”是指此處描述的組合物或其組分適合用于和這些組織接觸，或適用于患者而通常無(wú)過度的毒性、不相容性、不穩(wěn)定性、過敏反應(yīng)等。適當(dāng)?shù)兀景l(fā)明的組合物可包含常規(guī)地用于所述領(lǐng)域特別是藥妝和皮膚學(xué)領(lǐng)域中的任何組分。所述組合物也可包含一些小陰離子，優(yōu)選地多價(jià)陰離子，例如，磷酸鹽、天冬氨酸鹽或檸檬酸鹽。根據(jù)其形式，本發(fā)明的組合物可包括溶液、乳液(包括微乳液)、懸浮液、乳膏劑、 洗劑、凝膠、粉劑或其他類型的固體或液體組合物，所述其他類型的組合物用于可使用所述組合物的皮膚或其他組織。除了肉毒毒素和載體分子外，這些組合物可包含一般用于該產(chǎn)品的其他成分，例如抗微生物劑、增濕劑和水合劑、滲透劑、防腐劑、乳化劑、天然的或合成的油、溶劑、表面活性劑、去垢劑、潤(rùn)滑藥劑、抗氧化劑、芳香劑、充填劑、增稠劑、石蠟、氣味吸收劑(odor absorbers)、染料、著色劑、粉劑，和任選地包含麻醉劑、止癢添加劑、植物萃取物、調(diào)節(jié)劑、暗化劑(darkening agent)或亮化劑(lightening agent)、吉洛特、濕潤(rùn)劑、云母、礦物質(zhì)、多酚、硅氧烷或其衍生物、防曬劑(sunblocks)、維生素和植物藥 (phytomedicinals)0在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物包含膠凝劑和/或粘性調(diào)節(jié)劑。一般加入這些試劑以增加組合物的粘度，從而使組合物的施用更容易和更精確。此外，這些試劑幫助防止水性肉毒毒素/載體溶液變干，變干將導(dǎo)致肉毒毒素的活性降低。特別優(yōu)選的試劑是不帶電荷和不干擾肉毒毒素活性或不干擾毒素-載體復(fù)合物通過皮膚的效率的試劑。所述膠凝劑可以是某些基于纖維素的膠凝劑，例如羥丙基纖維素(HPC)。在一些實(shí)施方案中，將肉毒毒素/載體復(fù)合物配制在具有2-4%的HPC的組合物中?？蛇x擇地，可通過加入聚乙二醇(PEG)改變含有肉毒毒素/載體復(fù)合物的溶液的粘度。在其他實(shí)施方案中，將肉毒毒素 /載體溶液和預(yù)先混合的粘性試劑例如Cetaphil 增濕劑混合。本發(fā)明的組合物任選地可包含隔離試劑。如此處所用的，“隔離試劑”是這樣的任何物質(zhì)或添加劑，即其具有防止或最小化本發(fā)明的肉毒毒素和載體的不想要的或不受控制的凝聚的性質(zhì)。隔離試劑可在例如當(dāng)由于體積的限制必須使用濃縮的肉毒毒素溶液的時(shí)候使用。在這些情況下，所述隔離試劑使肉毒毒素保持分散狀態(tài)，從而防止在沒有隔離試劑時(shí)會(huì)發(fā)生的毒素凝聚。一般地，隔離試劑是(1)無(wú)刺激性的，(2)不破壞肉毒毒素，(3)不增加任何滲透性，(4)提供可靠的和穩(wěn)定的顆粒大小，(5)不帶電荷，和(6)不干擾毒素和透皮載體的復(fù)合。合適的隔離試劑的例子是KOH(EtOH)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，EtOH少于組合物的20 %，和最優(yōu)選地少于組合物的5 %。例如，如果體積限制要求在0. 5ml溶液中，而不是2. 5ml溶液中重構(gòu)100U的肉毒毒素，那么人們一般觀察到肉毒毒素將表現(xiàn)不想要的凝聚，從而降低了活性。然而，通過加入1 %的KOH作為分散試劑，在該濃度下，在M小時(shí)后仍然保持完全的活性。例如在另一個(gè)示例中，在1.0ml 0.9%的NaCl重構(gòu)溶液中的Botox 具有完全的活性，而在0.5ml 1% 和5% Et0H+0. 9% NaCl中的重構(gòu)產(chǎn)生具有完全活性的溶液。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，向肉毒毒素組合物中加入寡聚或多聚陰離子橋以提高毒素與帶正電荷的主鏈載體的復(fù)合作用。如在本領(lǐng)域中所熟知的，肉毒毒素實(shí)際上是不同蛋白的復(fù)合物，其中一些是帶正電荷的，其中一些是帶負(fù)電荷的。因?yàn)槎舅氐慕M分的確切分布視毒素的來源變化而變化，來自某些來源的肉毒毒素可以具有更低的和此處描述的帶正電荷的主鏈形成復(fù)合物的趨勢(shì)。然而，本發(fā)明的一個(gè)方面是發(fā)現(xiàn)通過向這些肉毒毒素加入寡聚或多聚陰離子橋，可非常顯著地增加局部給藥的效率和功效。這些寡聚/多聚陰離子橋的合適的示例包括磷酸鈉(5% )、PBS或5%的多聚L-天冬氨酸(例如，具有3000的分子量)。本發(fā)明的組合物可以控釋組合物或緩釋組合物的形式存在，其中將要遞送的肉毒毒素和載體包囊化或裝入材料中，以使其在一段時(shí)間內(nèi)以受控的方式釋放至皮膚上。可將肉毒毒素和載體裝入基質(zhì)、脂質(zhì)體、囊泡、微囊、微球體等，或裝入固體顆粒材料，所有這些材料都是被選擇和/或構(gòu)建來在一段時(shí)間內(nèi)釋放肉毒毒素的?？蓪⑷舛径舅睾洼d體一起包囊化(例如，在相同的膠囊中)或分開包囊化(在分開的膠囊中)。通過使用此處的描述的組合物，可將肉毒素以這樣的有效量遞送至皮膚下面的肌肉中，或遞送至皮膚內(nèi)的腺體結(jié)構(gòu)中，所述有效量可產(chǎn)生麻痹、產(chǎn)生松弛、減緩抽搐、預(yù)防或減輕痙攣、減少腺體分泌或提供其他想要的效果。和可注射的或可移植的材料相比，以這種方式局部遞送肉毒毒素可減少劑量、降低毒性和使得可為想要的效果提供更精確的劑量最優(yōu)化。施用本發(fā)明的組合物，以使得能夠施用有效量的肉毒毒素。此處所用的術(shù)語(yǔ)“有效量”是指如上面定義的這樣的量的肉毒毒素，該量的肉毒毒素足以產(chǎn)生想要的肌肉麻痹或其他生物學(xué)或美學(xué)效應(yīng)，但該量絕對(duì)是安全的量，即低至足以避免嚴(yán)重的副作用的量。想要的效果包括使某些肌肉松弛，其目的在于例如減少細(xì)紋和/或皺紋(特別是在臉部的) 的出現(xiàn)、或以其他方式例如加寬眼睛、抬高嘴角、或使從上唇散開的細(xì)紋平滑來調(diào)整面貌，或總體緩解肌肉緊張。最后提到的效果，即肌肉緊張的總體緩解，可在臉部或其他部位實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的組合物可包含用作單劑治療的合適的有效量的肉毒毒素，或可以是更濃縮的， 以在施用的部位進(jìn)行稀釋或以多次施用的方式進(jìn)行使用。通過使用本發(fā)明的帶正電荷的載體，可將肉毒毒素給受試者透皮施用以治療病癥，所述病癥是例如不想要的面部肌肉或其他肌肉痙攣、多汗癥、痤瘡或身體中其他部位的想要減輕肌肉疼痛或痙攣的病癥。局部施用肉毒毒素以透皮遞送至肌肉或與皮膚相關(guān)的其他結(jié)構(gòu)?？山o例如腿、肩、背(包括下背部(lower back))、腋窩、手掌、足、頸、腹股溝、手或足的背部、肘、上臂、膝蓋、大腿、臀部、軀干、骨盆或想要施用肉毒毒素的身體的任何其他部分。也可施用肉毒毒素以治療其他病癥，包括治療神經(jīng)痛、預(yù)防或減輕偏頭痛或其他頭痛、預(yù)防或減輕痤瘡、預(yù)防或減輕肌張力障礙(dystonia)或張力障礙收縮(dystonic contractions)(無(wú)論是主觀性的還是臨床性的)、預(yù)防或減輕和主觀的或臨床的多汗癥相關(guān)的癥狀、減少分泌過多或出汗、降低或加強(qiáng)免疫應(yīng)答、或治療其他疾病，所述其他疾病是被建議通過注射施用肉毒毒素或已經(jīng)進(jìn)行注射施用肉毒毒素來治療的病癥)。為了免疫相關(guān)的目的，也可施用此處描述的肉毒毒素或其他治療性蛋白。令人驚奇的是，也可施用此處描述的肉毒毒素以降低免疫應(yīng)答。更確切地，本發(fā)明允許通過其它的施藥途徑遞送肉毒毒素，從而改變所述試劑的復(fù)合抗原呈遞。通過該方式，本發(fā)明可用于減少對(duì)針對(duì)肉毒毒素的抗原的免疫應(yīng)答，和用于幫助反復(fù)施用而沒有和免疫相關(guān)的活性降低?？蛇x擇地，可制備和局部施用所述復(fù)合物以增強(qiáng)免疫應(yīng)答，例如提供有關(guān)各種蛋白的免疫例如兒童免疫而無(wú)需注射。對(duì)于和免疫相關(guān)的活性的用途，“有效量”是指這樣的量的肉毒毒素，即該量足以使受試者在施用或系列施用肉毒毒素后產(chǎn)生對(duì)其的免疫應(yīng)答。最優(yōu)選地，在醫(yī)生的指導(dǎo)下或在其他專業(yè)護(hù)理人員的指導(dǎo)下施用所述組合物，或由他們來施用所述組合物。可以單劑治療的方式或以一段時(shí)間內(nèi)系列周期性治療的方式施用其。對(duì)于為了上述目的的肉毒毒素的透皮遞送，給想要得到效果的部位上的皮膚局部施用上述組合物。在將水性肉毒毒素/載體溶液直接給皮膚施用的實(shí)施方案中，為了防止溶液變干(其可導(dǎo)致毒素活性的降低)，優(yōu)選地覆蓋經(jīng)處理的區(qū)域(例如，用Cetaphil 增濕劑)或用屏障(例如，Telfa)封閉經(jīng)處理的區(qū)域。因?yàn)槠湫再|(zhì)，最優(yōu)選地，應(yīng)當(dāng)非常小心地，以可產(chǎn)生想要的結(jié)果但不產(chǎn)生任何不利的或不想要的結(jié)果的施用比率和施用頻率施用所用的肉毒毒素的量。因此，例如，應(yīng)當(dāng)以每cm2的皮膚面積從大約IU至大約20，000U、優(yōu)選地大約IU至大約10，000U的肉毒毒素的比率施用本發(fā)明的局部組合物。例如，優(yōu)選地可將這些范圍內(nèi)的較高劑量和例如控釋材料一起使用，或使得能夠在除去之前在皮膚上停留更短的時(shí)間。為了保持溶液的功效，在施用肉毒毒素/載體組合物之前皮膚表面的恰當(dāng)處理是非常重要的。例如，為了在施用之前清潔皮膚上的表面油脂而在皮膚的表面引入表面活性劑令人吃驚地會(huì)起反作用，因?yàn)楸砻婊钚詣┧坪跗茐牧巳舛径舅氐幕钚?。即使隨后在施用肉毒毒素/載體溶液之前用水洗滌數(shù)次，該現(xiàn)象仍會(huì)發(fā)生。甚至極溫和的表面活性劑，例如嬰兒抹擦的表面活性劑，似乎都會(huì)導(dǎo)致該現(xiàn)象。因此，在優(yōu)選的施用本發(fā)明的組合物的方法中，單獨(dú)地用水預(yù)先清潔皮膚。只用水清洗也似乎適度地提高了肉毒毒素的透皮運(yùn)輸。此外，在施用肉毒毒素/載體復(fù)合物之前，可剝離皮膚以減少角質(zhì)層。原則上，剝離皮膚的方法應(yīng)當(dāng)導(dǎo)致增強(qiáng)的肉毒毒素的透皮運(yùn)輸效率。然而，用于剝離皮膚的方法是重要的。例如，丙酮介導(dǎo)的人或動(dòng)物中的角質(zhì)層的減少似乎減少了隨后施用的肉毒毒素的活性。相反地，膠帶剝離(即，用膠帶貼在皮膚的表面上，然后取下膠帶)似乎在小鼠模型和人中使得肉毒毒素滲透得更深并且減少了劑量。據(jù)推測(cè)，皮膚表面的磨損(例如，通過使用拋光墊(abrasive pad))可產(chǎn)生和膠帶剝離相似的效果。本發(fā)明也包括用于進(jìn)行包含肉毒毒素和載體的組合物的透皮遞送的裝置，所述載體具有帶正電荷的主鏈，所述主鏈具有附著的此處定義的分支基團(tuán)。這些裝置在結(jié)構(gòu)上可以如皮膚貼劑一樣簡(jiǎn)單，或可以是更復(fù)雜的裝置，包括用于分配和監(jiān)控組合物的分配的工具和任選地用于監(jiān)控受試者的狀況(例如監(jiān)控受試者和正被分配的物質(zhì)的反應(yīng))的工具。應(yīng)當(dāng)指出，用于建造裝置的材料的選擇是非常重要的。用于建造遞送裝置的優(yōu)選的材料是不會(huì)導(dǎo)致肉毒毒素/載體溶液的活性喪失(通過肉毒毒素的降解或在裝置表面上的不想要的吸附導(dǎo)致的活性喪失)的材料。已觀察到該不想要的形為，例如當(dāng)水溶液中的肉毒毒素/載體接觸聚丙烯表面時(shí)觀察到該行為，但當(dāng)肉毒毒素/載體溶液接觸聚氯乙烯 (PVC)表面時(shí)則沒有觀察到該行為。一般地，可在裝置中預(yù)先配制和/或預(yù)先安裝組合物或隨后制備組合物，例如通過使用這樣的試劑盒隨后制備組合物，所述試劑盒分開地包含兩種組分(肉毒毒素和載體)，但提供了用于在施用時(shí)或施用之前將其混合的工具。載體分子的量或其對(duì)肉毒毒素的比例依賴于所述組合物中選擇使用的載體?？扇菀椎卮_定，例如通過進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)實(shí)驗(yàn) (例如下面描述的實(shí)驗(yàn))確定在給定的情況下的載體分子的合適的量或比例?！愕兀景l(fā)明也包括將肉毒毒素施用給需要其的受試者或患者的方法。所述方法包括，將有效量的肉毒毒素和具有帶正電荷的主鏈的載體一起施用，所述主鏈具有附著
的此處描述的帶正電荷的分支基團(tuán)?！昂?.....一起”是指以組合的方法將兩種組分(肉
毒毒素和載體)一起施用，該方法可包括將其組合在組合物中，然后再將組合物給受試者施用，或?qū)⑵浞珠_施用，但以這樣的方式分開施用其，所述方式可使其一起作用，從而提供有效量的治療性蛋白的必需遞送。例如，可首先將含有載體的組合物用于受試者的皮膚，然后使用含有肉毒毒素的皮膚貼劑或其他裝置?？蓪⑷舛径舅匾詿o(wú)水的形式整合入皮膚貼劑或其他分配裝置中，可在使用皮膚貼劑之前給皮膚的表面施用帶正電荷的載體，這樣可使所述兩類物質(zhì)共同作用，產(chǎn)生想要的透皮遞送。因此，所述兩種物質(zhì)(載體和肉毒毒素)，以組合的方式起作用，或可能相互作用以在原位形成組合物或組合。因此，本發(fā)明也包含這樣的試劑盒，所述試劑盒包含通過皮膚分配肉毒毒素的裝置和含有載體或主鏈并且適合于給受試者的皮膚或上皮施用的液體、凝膠、乳膏劑等。用于在專業(yè)護(hù)理人員指導(dǎo)下施用或由患者或受試者施用本發(fā)明的組合物的試劑盒也可包含適合于該目的的定制的施藥器(custom applicator)。本發(fā)明的組合物、試劑盒和方法使得可以遞送更純的具有更高比活性、潛在地提高的藥物動(dòng)力學(xué)的肉毒毒素。此外，所述載體可充當(dāng)穩(wěn)定劑，減少對(duì)外源輔助蛋白(例如， 在400-600mg范圍內(nèi)的人血清白蛋白或在250-500mg范圍內(nèi)的重組血清白蛋白)和/或多糖穩(wěn)定劑的需要并且可有益地降低對(duì)肉毒毒素的免疫應(yīng)答。此外，所述組合物適合用于PH 在4. 5至6. 3范圍內(nèi)變化的生理環(huán)境，因此其可具有這樣的pH。本發(fā)明的組合物可在室溫下或在冷凍的條件下貯存。


圖1顯示這樣的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，該實(shí)驗(yàn)顯示了使用本發(fā)明的包含肽主鏈的組合物進(jìn)行的肉毒毒素的透皮遞送的效率。圖2是描述小鼠的后肢的狀態(tài)的照片，在所述小鼠中，用本發(fā)明的組合物處理一只肢體的區(qū)域，用另一種含有肉毒毒素但不包含本發(fā)明的載體的組合物處理另一只肢體的區(qū)域。圖3是描述在用“hsentia Botox洗劑”進(jìn)行局部處理前和處理后的受試者的前額上的縐紋的照片。圖4顯示在㈧用“Essentia Botox洗劑”局部處理皺紋后，和⑶處理前的前額的Mikrosil鑄型(Mikrosil cast)。這些Mikrosil鑄型清楚地顯示未經(jīng)處理的一側(cè)具有更深的皺紋，所述Mikrosil鑄型，因?yàn)槠淇勺畲笙薅鹊厥褂捎谂臄z實(shí)際的受試者而導(dǎo)致的假象降到最小，從而非常有用。圖5顯示描述在受試者的前額上進(jìn)行的Minor’ s淀粉/碘檢測(cè)的照片，所述檢測(cè)在施用“hsentia Botox洗劑”(A)和對(duì)照(B)后5天進(jìn)行。對(duì)照洗劑包含了具有大約 21，000的分子量的和具有TAT分支基團(tuán)的帶正電荷的多聚賴氨酸主鏈。在施用后2分鐘拍攝這些照片。圖6和圖5相同，除了其是在4分鐘后拍攝的外。圖7顯示用于腋下多汗癥(axillary hyperhidrosis)研究的給藥區(qū)域。注意，給藥區(qū)域超出由腋毛覆蓋的區(qū)域1厘米。圖8a表示這樣的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，所述實(shí)驗(yàn)顯示了通過對(duì)人受試者使用短肽基載體， 將肉毒毒素作為局部試劑治療性地遞送通過完整皮膚的效率，用于治療腋下多汗癥。照片顯示，在用Botox和短肽基載體一起或單獨(dú)的載體處理后4周，按重量測(cè)量，出汗量(每5 分鐘的mg數(shù))顯著降低。結(jié)果是作為和相同組的基線值的比的4周的值，通過Wilcoxon 分析確定顯著性，P <0.05。N= 10個(gè)患者。圖8b表示這樣的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，該實(shí)驗(yàn)顯示了通過對(duì)人受試者使用短肽基載體，將肉毒毒素作為局部試劑治療性的遞送通過完整的皮膚的效率，用于治療腋下多汗癥。照片顯示，在用Botox和短肽基載體一起或單獨(dú)的載體處理后4周，按重量測(cè)量，出汗量(每5分鐘的mg數(shù))顯著降低。結(jié)果是兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的作為和對(duì)照值的比的處理值，通過Wilcoxon分析確定顯著性，ρ < 0. 05。N= 10個(gè)患者。圖9顯示描述在用用于腋下多汗癥治療的“hsentia Botox洗劑”治療前和治療后的Minor’ s淀粉/碘檢測(cè)的照片。顯示了基線和2周的淀粉/碘檢測(cè)值，其中對(duì)于受試者#12，用“Essentia Botox洗劑”(a和c)處理右腋，和給左腋施用對(duì)照(b和d)。這些照片說明在用淀粉碘中的載體+botxo處理后觀察到的一般益處。盡管在對(duì)照側(cè)觀察到一些交叉(和按重量計(jì)算的數(shù)據(jù)25%的減少一致)，但使用處理物提供了顯著的減少(和在接受處理的側(cè)按重量計(jì)算的數(shù)據(jù)65%的減少一致)。
具體實(shí)施例方式下面是本發(fā)明的代表性實(shí)施例。其展示了功能性肉毒神經(jīng)毒素復(fù)合物通過皮膚的遞送而無(wú)需共價(jià)修飾要遞送的神經(jīng)毒素。實(shí)施例1
通過使用肽基載體在體內(nèi)進(jìn)行的肉毒毒素的轉(zhuǎn)運(yùn)本實(shí)驗(yàn)顯示在一次施用后，和對(duì)照相比，肽基載體將含有完整的標(biāo)記蛋白肉毒毒素的大復(fù)合物運(yùn)輸通過完整皮膚的用途。主鏈的詵擇通過將-Gly3Ai^7共價(jià)地附著至多聚賴氨酸(MW 112，000)來裝配帶正電荷的主鏈，通過以18%的飽和度(即每100個(gè)賴氨酸殘基中有18個(gè)賴氨酸殘基共價(jià)地綴合至-Gly3Arg7)將末端甘氨酸的羧基連接至賴氨酸側(cè)鏈的游離胺基來進(jìn)行該附著。所述經(jīng)修飾的主鏈被命名為“KNR”。對(duì)照聚陽(yáng)離子是相同大小的和來自相同批次的未經(jīng)修飾的多聚賴氨酸(稱為 “K”，Sigma Chemical Co.，St. Louis, MO)。治療劑選擇B0Xt0X 商標(biāo)的肉毒毒素A(Allergan)進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)。其具有大約150，000 的分子量。樣品的制備根據(jù)廠商說明書對(duì)肉毒毒素進(jìn)行重構(gòu)。用經(jīng)計(jì)算超過12倍摩爾量的硫代NHS-LC 生物素(Pierce Chemical)對(duì)蛋白的等分進(jìn)行生物素化。被標(biāo)記的產(chǎn)物稱作“Btox-b”。在各情況下，如同遞送高度負(fù)電的大核苷酸復(fù)合物一樣，使用過量的聚陽(yáng)離子裝配具有過量正電荷的終復(fù)合物。凈中性或凈正電荷防止了來自高度負(fù)電的細(xì)胞表面蛋白聚糖和細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)蛋白復(fù)合物的排斥。對(duì)所有組的Btox-b劑量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，也對(duì)要局部施用的組合物的總體積和終PH進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。如下制備樣品標(biāo)記為“ JMW-7”的組將每等分(即總共20U) 2. OU的Btox_b和肽基載體KNR以經(jīng)計(jì)算為4 1的MW比率混合均勻并用磷酸緩沖鹽溶液稀釋至200微升。將所得的組合物用1.8ml Cetaphil 洗劑混合均勻并以200微升進(jìn)行等分。標(biāo)記為“ JMW-8”的組將每等分(即總共20U) 2. OU的Btox-b和K以4 1的MW 比混合均勻并用磷酸緩沖鹽溶液稀釋至200微升。將所得的組合物和1.8ml Cetaphil混合均勻并以200微升進(jìn)行等分。在用肽基載體和經(jīng)標(biāo)記的Btox進(jìn)行一次處理后確定透皮遞送效率的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在處理期間通過吸入異氟烷麻痹動(dòng)物。在被麻痹后，C57 black 6小鼠(每組η =4)接受局部敷藥，將200微升劑量的適當(dāng)處理物施用于背部皮膚的顱部分(之所以選擇該部分是因?yàn)樾∈蟛荒苡米旎蛩闹_(dá)到該區(qū)域)。動(dòng)物不進(jìn)行脫毛。在最初的處理之后30 分鐘，通過吸入CO2對(duì)小鼠實(shí)行安樂死，由盲測(cè)者(blinded observer)收獲完整厚度的經(jīng)處理的皮膚部分。將經(jīng)處理的部分分成三等分，在10%的中性緩沖的福爾馬林中固定顱部分12-16小時(shí)，然后貯存在70%的KOH中直至石蠟包埋。如下面所概述的，由盲測(cè)者將中心部分進(jìn)行快速冷凍并將其直接用于生物素顯示。為進(jìn)行溶解研究，快速冷凍經(jīng)處理的尾部節(jié)段。如下進(jìn)行生物素顯示。簡(jiǎn)而言之，將各切片浸沒在NeutrAvidin 緩沖液中ι 小時(shí)。為觀察堿性磷酸酶的活性，在鹽水中洗滌橫切面4次，然后浸沒在NBT/BCIP (Pierce Scientific)中1小時(shí)。然后在鹽水中漂洗切片，在具有平場(chǎng)復(fù)消色差透鏡的Nikon E600 顯微鏡上對(duì)整個(gè)切片照相。數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
由盲測(cè)者使用 Image Pro Plus 軟件(Media Cybernetics, Silver Spring,MD)通過分批圖象分析確定總的陽(yáng)性染色，并將其標(biāo)準(zhǔn)化為總的橫切面面積以確定各組的陽(yáng)性染色百分比。然后，在單向ANOVA重復(fù)測(cè)量中使用Matview軟件(Abacus，Berkeley, CA)在 95%的置信度下進(jìn)行顯著性分析來確定各組的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)果在將Btox-b與KNR(“EB-Btox”)或K(“nl”)一起進(jìn)行一次局部施用后，用總面積的百分比來表示對(duì)于生物素化的肉毒毒素呈陽(yáng)性的平均橫切面面積。將所述結(jié)果列于下列的表1中并在圖1中進(jìn)行說明。在圖1中，在用“EB-Btox”和對(duì)照“nl”進(jìn)行每天一次的處理三天后，將對(duì)于標(biāo)記是陽(yáng)性的面積測(cè)定為總面積的百分比，其中“EB-Btox”包含Btox-b 和肽基載體KNR，“nl”包含Btoxb和聚陽(yáng)離子K。描述各組的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。表4.在將Btox-b與KNR(.TMW_7)或K(.TMW_8) —起講行一次局部施用30分鐘后，
權(quán)利要求
1.包含肉毒毒素和載體的組合物，所述載體包含聚合物主鏈，所述聚合物主鏈具有附著的帶正電荷的分支基團(tuán)，其中所述載體和所述肉毒毒素之間的結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述肉毒毒素是肉毒毒素衍生物。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述肉毒毒素包含重組肉毒毒素。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述肉毒毒素包含經(jīng)修飾的肉毒毒素。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G血清型肉毒毒素。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肉毒毒素是A型肉毒毒素。
7.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肉毒毒素是B型肉毒毒素。
8.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肉毒毒素是C1型肉毒毒素。
9.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肉毒毒素是D型肉毒毒素。
10.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肉毒毒素是E型肉毒毒素。
11.權(quán)利要求1的組合物，其中所述載體包含多肽，所述多肽具有附著的選自_(gly) nl-(arg)n2、HIV-TAT、觸角足PTDJP HIV-TAT的片段或觸角足PTD的片段的帶正電荷的分支基團(tuán)，其中下標(biāo)nl是從0至大約20的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約25的奇整數(shù)。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述載體包含多肽，所述多肽具有帶正電荷的選自-(gly)nl_ (arg)η2的分支基團(tuán)，其中下標(biāo)nl是從約0至大約20的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約25的奇整數(shù)。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中下標(biāo)nl是從0至大約8的整數(shù)。
14.權(quán)利要求12的組合物，其中下標(biāo)nl是從大約2至大約5的整數(shù)。
15.權(quán)利要求12的組合物，其中下標(biāo)π2是從大約7至大約17的奇整數(shù)。
16.權(quán)利要求12的組合物，其中下標(biāo)π2是從大約7至大約13的奇整數(shù)。
17.權(quán)利要求11的組合物，其中所述載體包含多肽，所述多肽具有附著的選自HIV-TAT 和其片段的帶正電荷的分支基團(tuán)。
18.權(quán)利要求17的組合物，其中所述分支基團(tuán)是具有式(gly^RGRDDRRQRRlHgly),、 (gly^-YGRKKRRQRRR-fely),或(gly^-RKKRRQRRR-fely),的帶正電荷的 HIV-TAT 片段，其中下標(biāo)P和q各自獨(dú)立地是從0至20的整數(shù)。
19.權(quán)利要求1的組合物，其中所述帶正電荷的分支基團(tuán)按重量計(jì)算占至少大約 0. 05%的載體總重量。
20.權(quán)利要求1的組合物，其中所述帶正電荷的分支基團(tuán)按重量計(jì)算占大約0.5%至大約45%的載體總重量。
21.權(quán)利要求1的組合物，其中所述帶正電荷的分支基團(tuán)按重量計(jì)算占大約0.至大約30%的載體總重量。
22.權(quán)利要求1的組合物，其中所述主鏈包含帶正電荷的多肽。
23.權(quán)利要求22的組合物，其中所述主鏈包含帶正電荷的多聚賴氨酸。
24.權(quán)利要求23的組合物，其中所述多聚賴氨酸具有從大約10，000至大約1，500，000 的分子量。
25.權(quán)利要求23的組合物，其中所述多聚賴氨酸具有從大約25，000至大約1，200，000的分子量。
26.權(quán)利要求23的組合物，其中所述多聚賴氨酸具有從大約100,000至大約·1, 000, 000的分子量。
27.權(quán)利要求1的組合物，其中所述主鏈包含帶正電荷的非肽基載體。
28.權(quán)利要求27的組合物，其中所述主鏈包含帶正電荷的聚烯化亞胺。
29.權(quán)利要求觀的組合物，其中所述聚烯化亞胺是聚乙烯亞胺。
30.權(quán)利要求四的組合物，其中所述聚乙烯亞胺具有從大約10，000至大約2，500,000 的分子量。
31.權(quán)利要求四的組合物，其中所述聚乙烯亞胺具有從大約100，000至大約 1，800，000的分子量。
32.權(quán)利要求四的組合物，其中所述聚乙烯亞胺具有從大約500，000至大約 1，400，000的分子量。
33.權(quán)利要求1的組合物，其具有從大約4.5至大約6. 3的pH。
34.權(quán)利要求1的組合物，當(dāng)在室溫下或在冷凍條件下貯存時(shí)其是穩(wěn)定的。
35.權(quán)利要求1的控釋組合物。
36.權(quán)利要求1的液體組合物。
37.權(quán)利要求1的凝膠組合物。
38.權(quán)利要求1的組合物，其是乳膏劑、洗劑或軟膏劑。
39.權(quán)利要求1的組合物，其還包含鹽水。
40.權(quán)利要求1的組合物，其還包含鹽水和pH緩沖系統(tǒng)。
41.用于給受試者施用肉毒毒素的試劑盒，其包含肉毒毒素和對(duì)其透皮遞送有效的量的載體，所述載體包含聚合物主鏈，所述主鏈具有附著的帶正電荷的分支基團(tuán)，其中所述載體和所述肉毒毒素之間的結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合。
42.權(quán)利要求41的試劑盒，其還包含定制的施藥器。
43.權(quán)利要求42的試劑盒，其中所述定制的施藥器經(jīng)設(shè)計(jì)供專業(yè)護(hù)理人員使用。
44.權(quán)利要求42的試劑盒，其中所述定制的施藥器經(jīng)設(shè)計(jì)供受試者自己使用。
45.權(quán)利要求41的試劑盒，其包含預(yù)先配制的包含所述肉毒毒素和所述載體的組合物。
46.權(quán)利要求41的試劑盒，其中分開地配制所述肉毒毒素和所述載體以在施用之前進(jìn)行組合。
47.權(quán)利要求41的試劑盒，其中在用于通過皮膚給受試者施用所述肉毒毒素的裝置中含有所述肉毒毒素。
48.權(quán)利要求47的試劑盒，其中所述裝置是皮膚貼劑。
49.用于給受試者施用肉毒毒素的試劑盒，其包含用于將肉毒毒素遞送給皮膚的裝置和組合物，所述組合物包含含有聚合物主鏈的載體，所述主鏈具有附著的選自_(gly) nl-(arg)n2、HIV-TAT和其片段、以及觸角足PTD的帶正電荷的分支基團(tuán)，其中下標(biāo)nl是從0 至大約20的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約25的奇整數(shù)。
50.權(quán)利要求49的試劑盒，其中所述裝置是皮膚貼劑。
51.給受試者施用肉毒毒素的方法，該方法包括將所述肉毒毒素和有效量的載體一起給受試者的皮膚或上皮局部施用，所述載體包含具有附著的帶正電荷的分支基團(tuán)的聚合物主鏈，其中所述載體和所述肉毒毒素之間的結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合。
52.權(quán)利要求51的方法，其包括給受試者的皮膚或上皮局部施用有效量的權(quán)利要求1 的組合物。
53.權(quán)利要求51的方法，其包括給受試者的皮膚或上皮分開地施用所述肉毒毒素和所述載體。
54.權(quán)利要求51的方法，其中施用所述肉毒毒素以獲得想要的生物學(xué)效果。
55.權(quán)利要求M的方法，其中施用所述肉毒毒素以獲得美學(xué)或美容上的益處。
56.權(quán)利要求M的方法，其中施用所述肉毒毒素以減少或預(yù)防免疫應(yīng)答。
57.權(quán)利要求56的方法，其中減少或預(yù)防的免疫應(yīng)答改善了之后所述組合物再施用時(shí)的治療反應(yīng)。
58.權(quán)利要求M的方法，其中施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和主觀或臨床多汗癥相關(guān)的癥狀。
59.權(quán)利要求M的方法，其中局部施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕主觀或臨床上的張力障礙收縮或肌張力障礙。
60.權(quán)利要求M的方法，其中局部施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和肌肉痙攣相關(guān)的癥狀。
61.權(quán)利要求60的方法，其中給受試者的下背部局部施用所述肉毒毒素。
62.權(quán)利要求60的方法，其中給受試者的頸部局部施用所述肉毒毒素。
63.權(quán)利要求60的方法，其中給受試者的至少一條腿局部施用所述肉毒毒素。
64.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的臉部或其一部分局部施用所述肉毒毒素。
65.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的腋窩或其部分局部施用所述肉毒毒素。
66.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的手掌或足或其部分局部施用所述肉毒毒素。
67.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的背部或頸部或其部分局部施用所述肉毒毒ο
68.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的腹股溝或其部分局部施用所述肉毒毒素。
69.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的手或足或其部分局部施用所述組合物。
70.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的肘、上臂、膝蓋或大腿，或其部分局部施用所述肉毒毒素。
71.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的臀部或其部分局部施用所述肉毒毒素。
72.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的軀干或其部分局部施用所述肉毒毒素。
73.權(quán)利要求51的方法，其中給受試者的骨盆或其部分局部施用所述肉毒毒素。
74.權(quán)利要求51的方法，其中施用所述肉毒毒素以產(chǎn)生或增強(qiáng)免疫應(yīng)答。
75.權(quán)利要求51的方法，其中局部施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和偏頭痛相關(guān)的癥狀。
76.權(quán)利要求51的方法，其中局部施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕痤瘡。
77.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是肉毒毒素衍生物。
78.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含重組肉毒毒素。
79.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含經(jīng)修飾的肉毒毒素。
80.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G血清型肉毒毒素。
81.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是A型肉毒毒素。
82.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是B型肉毒毒素。
83.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是C型肉毒毒素。
84.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是D型肉毒毒素。
85.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是E型肉毒毒素。
86.權(quán)利要求51的方法，其中所述載體包含聚合物主鏈，所述主鏈具有附著的選自-(glyL-brgL、HIV-TAT、觸角足PTDJP HIV-TAT或觸角足PTD的片段的帶正電荷的分支基團(tuán)，其中下標(biāo)nl是從0至大約20的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約25的奇整數(shù)。
87.權(quán)利要求86的方法，其中所述載體包含多肽，所述多肽具有附著的選自_(gly) nl_(arg)n2的帶正電荷的分支基團(tuán)，其中下標(biāo)nl是從約0至大約20的整數(shù)，下標(biāo)n2獨(dú)立地是從大約5至大約25的奇整數(shù)。
88.權(quán)利要求87的方法，其中下標(biāo)nl是從0至大約8的整數(shù)。
89.權(quán)利要求87的方法，其中下標(biāo)nl是從大約2至大約5的整數(shù)。
90.權(quán)利要求87的方法，其中下標(biāo)π2是從大約7至大約17的奇整數(shù)。
91.權(quán)利要求87的方法，其中下標(biāo)π2是從大約7至大約13的奇整數(shù)。
92.權(quán)利要求86的方法，其中所述載體包含多肽，所述多肽具有附著的選自HIV-TAT和其片段的帶正電荷的分支基團(tuán)。
93.權(quán)利要求92的方法，其中所述分支基團(tuán)是具有式(gly^-RGRDDRRQRRR-fely),、 (gly^-YGRKKRRQRRR-fely),或(gly^-RKKRRQRRR-fely),的帶正電荷的 HIV-TAT 片段，其中下標(biāo)P和q各自獨(dú)立地是從0至20的整數(shù)。
94.權(quán)利要求51的方法，其中所述帶正電荷的分支基團(tuán)按重量計(jì)算占至少大約0.05% 的載體總重量。
95.權(quán)利要求51的方法，其中所述帶正電荷的分支基團(tuán)按重量計(jì)算占大約0.5%至大約45%的載體總重量。
96.權(quán)利要求51的方法，其中所述帶正電荷的分支基團(tuán)按重量計(jì)算占大約0.至大約30%的載體總重量。
97.權(quán)利要求51的方法，其中所述主鏈包含帶正電荷的多肽。
98.權(quán)利要求97的方法，其中所述主鏈包含帶正電荷的多聚賴氨酸。
99.權(quán)利要求98的方法，其中所述多聚賴氨酸具有從大約10，000至大約1，500，000的分子量。
100.權(quán)利要求98的方法，其中所述多聚賴氨酸具有從大約25，000至大約1，200，000的分子量。
101.權(quán)利要求98的方法，其中所述多聚賴氨酸具有從大約100，000至大約1，000，000的分子量。
102.權(quán)利要求51的方法，其中所述主鏈包含帶正電荷的非肽基載體。
103.權(quán)利要求102的方法，其中所述帶正電荷的非肽基聚合物是聚烯化亞胺。
104.權(quán)利要求102的方法，其中所述聚烯化亞胺是聚乙烯亞胺。
105.權(quán)利要求104的方法，其中所述聚乙烯亞胺具有從大約10，000至大約2，500,000的分子量。
106.權(quán)利要求104的方法，其中所述聚乙烯亞胺具有從大約100，000至大約 1，800，000的分子量。
107.權(quán)利要求104的方法，其中所述聚乙烯亞胺具有從大約500，000至大約 1，400，000的分子量。
108.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含重組肉毒毒素。
109.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素以具有從大約4.5至大約6. 3的pH的組合物形式施用。
110.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素以控釋組合物的形式施用。
111.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含在液體組合物中。
112.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含在凝膠組合物中。
113.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含在乳膏劑、洗劑或軟膏劑形式的組合物中。
114.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含在還含有鹽水的組合物中。
115.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含在還含有鹽水和pH緩沖系統(tǒng)的組合物中。
116.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含在用于分配肉毒毒素的裝置中，該裝置局部地用于受試者的皮膚或上皮。
117.權(quán)利要求116的方法，其中所述裝置是皮膚貼劑。
118.權(quán)利要求117的方法，其中所述裝置是小室膠囊化(cell-encapsulating)裝置。
119.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和粘膜分泌相關(guān)的癥狀。
120.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕肥胖或其癥狀。
121.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕炎癥或其癥狀。
122.權(quán)利要求121的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和銀屑病相關(guān)的癥狀。
123.權(quán)利要求122的方法，其中將所述組合物和其他治療形式一起施用。
124.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕打鼾。
125.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和糖尿病相關(guān)的皮膚癥狀。
126.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以促進(jìn)傷口愈合。
127.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和自主神經(jīng)功能障礙有關(guān)的癥狀。
128.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和大腦性癱瘓相關(guān)的癥狀。
129.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和橋本甲狀腺炎相關(guān)的癥狀。
130.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和乳腺疾病相關(guān)的癥狀。
131.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以改變毛發(fā)生長(zhǎng)。
132.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和甲狀旁腺疾病相關(guān)的癥狀。
133.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和運(yùn)動(dòng)障礙相關(guān)的癥狀。
134.權(quán)利要求133的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和帕金森氏疾病相關(guān)的癥狀。
135.權(quán)利要求133的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和震顫相關(guān)的癥狀。
136.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和癲癇相關(guān)的癥狀。
137.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和內(nèi)耳疾病相關(guān)的癥狀。
138.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和泌尿疾病相關(guān)的癥狀。
139.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕其他膽堿能控制的分泌。
140.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和神經(jīng)精神紊亂相關(guān)的癥狀。
141.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和受傷的肌肉相關(guān)的癥狀。
142.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和耳疾病相關(guān)的癥狀。
143.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和癌癥相關(guān)的癥狀。
144.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和神經(jīng)陷夾病癥(nerve entrapment disorders)相關(guān)的癥狀。
145.權(quán)利要求M的方法，其中局部地施用所述肉毒毒素以預(yù)防或減輕和高鈣血癥相關(guān)的癥狀。
146.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素包含融合蛋白。
147.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肉毒毒素是F型肉毒毒素。
148.權(quán)利要求5的組合物，其中所述肉毒毒素是G型肉毒毒素。
149.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是F型肉毒毒素。
150.權(quán)利要求51的方法，其中所述肉毒毒素是G型肉毒毒素。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于肉毒毒素的局部施用和透皮遞送的組合物和方法，尤其涉及用于肉毒毒素(包括肉毒毒素的衍生物)的局部遞送的組合物，其包含肉毒毒素和載體，所述載體包含聚合物主鏈，所述主鏈包含具有附著的帶正電荷的分枝或“效能”基團(tuán)的長(zhǎng)鏈多肽或非肽基聚合物。本發(fā)明也涉及這樣的方法，該方法通過將有效量的肉毒毒素和載體一起給受試者的皮膚或上皮局部施用，減少肌肉麻痹和可用肉毒毒素治療的病癥，特別是皮下肌肉的麻痹，和最特別地是臉部肌肉的麻痹。也描述了用于施用的試劑盒。
文檔編號(hào)A61K39/08GK102357062SQ20111030268
公開日2012年2月22日 申請(qǐng)日期2005年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月3日
發(fā)明者J·M·沃, M·D·戴克 申請(qǐng)人:雷文斯治療公司