專利名稱：具有腫瘤靶向、體內(nèi)示蹤和治療作用的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種新的具有腫瘤靶向、體內(nèi)示蹤和腫瘤治療作用的細胞。所述細胞是一種由H9人胚胎干細胞體外分化而來的內(nèi)皮細胞，能夠在靜脈注射后特異性富集于腫瘤病灶，同時還具有分子成像功能，能夠在活體狀態(tài)下實時監(jiān)測其在體內(nèi)的分布。具體說是將海腎熒光素酶-紅色熒光蛋白-自殺基因胸苷激酶三融合基因轉染入這種內(nèi)皮細胞，借助活體成像系統(tǒng)監(jiān)測熒光素酶信號來監(jiān)測細胞靶向N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型的特異性；對注射了轉染三融合基因的內(nèi)皮細胞的小鼠給予胸苷激酶的底物更西洛韋，通過旁觀者效應誘導內(nèi)皮細胞周圍腫瘤細胞的死亡。
背景技術：
目前，乳腺癌已經(jīng)成為全世界女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，嚴重地威脅著女性的身心健康。在當今技術條件下，其原發(fā)腫瘤病灶可以通過手術進行根治，而乳腺癌所發(fā)生的轉移成為了患者的重要死因。其中，乳腺癌肺轉移是最為常見的轉移類型之一，多見雙肺多發(fā)轉移病灶，這為手術切除造成了很大困難。目前多應用化療進行治療，大多數(shù)化療藥物并不能夠特異性地作用于腫瘤細胞，在對腫瘤細胞進行殺傷的同時也會對正常細胞產(chǎn)生一定殺傷作用，從而產(chǎn)生毒副作用，往往并不能獲得長期生存，且花費巨大。找到一種能夠靶向多發(fā)的腫瘤病灶部位的載體，將抗癌藥物或基因特異性運輸?shù)侥[瘤病灶，而不對周圍的正常組織造成影響將顯著提高治療效果，減低副作用。近年來有研究應用骨髓、胚胎或臍帶血中分離得到的內(nèi)皮細胞前體細胞進行試驗性地腫瘤靶向治療，雖然被證實具有一定的有效性，但這類內(nèi)皮前體細胞來源有限且不易獲得，難以應用于臨床。人胚胎干細胞具有自我更新和分化的能力，其分化得到的內(nèi)皮細胞在體外能夠進行大規(guī)模擴增，如果能夠被證實具有腫瘤靶向性，將對應用于臨床治療具有重要意義。同時，為了觀測腫瘤的生長情況， 并監(jiān)測載體細胞在體內(nèi)的分布、增殖和機體排斥的過程，可以應用體內(nèi)分子成像技術，其具有微創(chuàng)、直觀、動態(tài)觀察的特點，并能夠?qū)ν恢粍游镌诓煌瑫r間點進行監(jiān)測，能夠很好地評估靶向治療的療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決目前應用于試驗性腫瘤靶向治療的內(nèi)皮前體細胞來源有限、不易獲得的問題，提供了一種具有腫瘤靶向性、能夠進行體內(nèi)示蹤并具有治療作用的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞。本發(fā)明所涉及的細胞的制備和腫瘤靶向治療、體內(nèi)示蹤的方法通過以下步驟實現(xiàn)1.具有腫瘤靶向、體內(nèi)示蹤和治療作用的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞的制備(1)構建含海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合基因的具有 Bsd抗性的慢病毒表達質(zhì)粒；
(2)用細胞鋪六孔板，密度為1.5Χ106細胞/孔，用于轉染；(3)用lipo-2000將步驟(1)中構建的三融合基因慢病毒表達質(zhì)粒和慢病毒包裝質(zhì)粒轉染入步驟O)中前一天鋪板的細胞；(4)轉染16小時后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基，換液后M小時收集病毒上清，儲于_80°C冰箱備用；(5)用人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞鋪六孔板，密度為1 X IO5細胞/孔，用于病毒感染；(6)待病毒上清常溫化凍后，混合2毫升不含抗生素的全培養(yǎng)基和1毫升病毒上清加入步驟(5)中的內(nèi)皮細胞孔內(nèi)，并加入polybrene 24 μ g/孔，1600rpm，37°C離心1小時；(7)離心結束后換新鮮全培養(yǎng)基2毫升/孔，繼續(xù)置于37°C培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)；(8)48小時后向經(jīng)步驟(6)中病毒感染后的內(nèi)皮細胞加入Bsd進行藥篩共計3天， 以得到穩(wěn)定表達海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞。2.體內(nèi)腫瘤靶向治療(1)用胰酶消化生長良好的野生型或標記螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231細胞，用PBS洗一遍并用DMEM基本培養(yǎng)基重懸至1 X IO7細胞/毫升；(2)對6-8周齡雌性N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠經(jīng)尾靜脈注射150微升上述步驟 (1)中腫瘤細胞懸液，待2周后，雙肺形成散在腫瘤灶，建成N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型；(3)用胰酶消化攜帶海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞，用PBS洗一遍并用EBM-2基本培養(yǎng)基重懸至1 X IO7細
胞/毫升；(4)經(jīng)尾靜脈向步驟(2)中乳腺癌肺部轉移模型N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠注射 100微升上述步驟(3)中內(nèi)皮細胞懸液；(5)經(jīng)腹腔注射更西洛韋0. 5mg，每日2次，兩次給藥中間間隔12小時，連續(xù)4天；(6)重復上述步驟(4) - (5) 3次。3.體內(nèi)化學發(fā)光成像(1)監(jiān)測腫瘤病灶生長情況向乳腺癌肺部轉移模型N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠腹腔注射螢火蟲熒光素酶底物D-Luciferin (150mg/kg)，待5分鐘后利用Xenogen IVIS Lumina II活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間根據(jù)情況為5_30秒；(2)監(jiān)測攜帶海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞在體內(nèi)的分布向N0D/SCID小鼠經(jīng)尾靜脈注射海腎熒光素酶底物 coelenterazine(500yg/kg)，立即利用 Xenogen IVIS Lumina II 活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間為5分鐘。


圖1攜帶海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合報告基因的質(zhì)粒示意圖2攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞表達紅色熒光蛋白的情況；圖3攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞生物發(fā)光強度與細胞數(shù)呈正比關系；圖4在不同濃度更西洛韋條件下培養(yǎng)攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞5天的存活率；圖5在200 μ M更西洛韋條件下培養(yǎng)攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞不同天數(shù)的存活率；圖6攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞經(jīng)尾靜脈注射后在乳腺癌肺部轉移模型N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠的體內(nèi)示蹤；圖7攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞經(jīng)尾靜脈注射，并給予更西洛韋后在乳腺癌肺部轉移模型N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠的體內(nèi)示蹤；圖8攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞與人乳腺癌MDA-MB-231細胞以不同比例混合后在200 μ M更西洛韋條件下培養(yǎng)5天后腫瘤細胞的存活率；圖9攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞與人乳腺癌MDA-MB-231細胞以11比例混合后在不同濃度更西洛韋條件下培養(yǎng)5天后腫瘤細胞的存活率；圖10經(jīng)尾靜脈注射人乳腺癌MDA-MB-231細胞建立N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型后腫瘤的生長情況；圖11經(jīng)尾靜脈注射人乳腺癌MDA-MB-231細胞建立N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型后給予攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞加更西洛韋治療后腫瘤的生長情況。本發(fā)明結合附圖和具體實施方式
做進一步詳細說明。
具體實施例方式實施例1攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源內(nèi)皮細胞的制備(1)構建含海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合基因的具有 Bsd抗性的慢病毒表達質(zhì)粒將亞克隆的含海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合基因的片斷插入到商業(yè)化載體pLV-EFl α -MCS-IRES-Bsd的多克隆位點當中， 得到pLV-EFl α -TF-Bsd質(zhì)粒，如圖1所示；(2)用細胞鋪六孔板，密度為1.5Χ106細胞/孔，用于轉染；(3)用1 ipo-2000將pLV_EFl α -TF-Bsd慢病毒表達質(zhì)粒和慢病毒包裝質(zhì)粒轉染入步驟O)中前一天鋪板的細胞；(4)轉染16小時后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基，換液后M小時收集病毒上清，儲于_80°C冰箱備用；(5)用人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞鋪六孔板，密度為IXlO5細胞/孔，用于病毒感染；(6)待病毒上清常溫化凍后，混合2毫升不含抗生素的全培養(yǎng)基和1毫升病毒上清加入步驟(5)中的內(nèi)皮細胞孔內(nèi)，并加入polybrene 24 μ g/孔，1600rpm，37°C離心1小時；
(7)離心結束后換新鮮全培養(yǎng)基2毫升/孔，繼續(xù)置于37°C培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)；(8)48小時后向經(jīng)步驟(6)中病毒感染后的內(nèi)皮細胞加入Bsd進行藥篩共計3天， 以得到穩(wěn)定表達海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞。在熒光顯微鏡下觀察攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞紅色熒光蛋白的表達情況，結果如圖2所示，可見A圖中鏡下全部細胞在B圖中表達紅色熒光蛋白； 應用活體成像系統(tǒng)觀察該細胞海腎熒光素酶的表達情況，結果如圖3所示，加入稀釋后的海腎熒光素酶底物coelenterazine后，可見A圖中隨著細胞數(shù)量的增加生物發(fā)光強度增力口，B圖中生物生物發(fā)光強度與細胞數(shù)呈正比線性關系。在人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基中加入不同濃度的HSV-ttk底物更西洛韋(0-1000 μ M)，培養(yǎng)5天后，用WST-I法檢測細胞存活率，結果如圖4所示，在200-1000 μ M 更西洛韋培養(yǎng)條件下細胞存活率小于10%。在200 μ M更西洛韋培養(yǎng)條件下，絕大多數(shù)細胞在2天內(nèi)發(fā)生凋亡，如圖5所示。實施例2攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源內(nèi)皮細胞經(jīng)尾靜脈注射后在乳腺癌肺部轉移模型N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠的體內(nèi)示蹤(1)向6-8周雌性N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠經(jīng)尾靜脈注射攜帶螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231細胞1. 5 X IO6/只；(2) 10天后，向小鼠腹腔注射螢火蟲熒光素酶底物D-Luciferin(150mg/kg)，待5 分鐘后利用fenogen IVIS Lumina II活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間為30秒， 可見雙肺散在信號，確定N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型建立成功；(3)用胰酶消化實施例1中得到的攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源內(nèi)皮細胞，用基本培養(yǎng)基重懸至1 X IO7細胞/毫升，對N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型經(jīng)尾靜脈注射100微升每只；(4)分別在注射內(nèi)皮細胞后立刻及注射后M小時及48小時向N0D/SCID小鼠經(jīng)尾靜脈注射海腎熒光素酶底物(30616壯6^2丨1^(50(^8/1^)，立即利用乂611(^611 IVIS Lumina II活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間為5分鐘，監(jiān)測內(nèi)皮細胞在體內(nèi)的分布。在向N0D/SCID小鼠乳腺癌肺部轉移模型經(jīng)尾靜脈注射三融合蛋白的人胚胎干細胞來源內(nèi)皮細胞后，如圖6所示，注射后立即能夠在小鼠肺部監(jiān)測到海腎熒光素信號，注射后M小時大部分細胞信號仍集中于肺部，小部分出現(xiàn)在腹部，注射后48小時肺部信號消失，腹部仍有部分信號。實施例3攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源內(nèi)皮細胞經(jīng)尾靜脈注射后并給予更西洛韋腹腔注射后在乳腺癌肺部轉移模型N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠的體內(nèi)示蹤(1)向6-8周雌性N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠經(jīng)尾靜脈注射攜帶螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231細胞1. 5 X IO6/只；(2) 10天后，向小鼠腹腔注射螢火蟲熒光素酶底物D-Luciferin (150mg/kg)，待5 分鐘后利用fenogen IVIS Lumina II活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間為30秒， 可見雙肺散在信號，確定N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型建立成功；
(3)用胰酶消化實施例1中得到的攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源內(nèi)皮細胞，用基本培養(yǎng)基重懸至1 X IO7細胞/毫升，對N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型經(jīng)尾靜脈注射100微升每只；(4)注射內(nèi)皮細胞半小時后經(jīng)腹腔注射更西洛韋0. 5mg，之后每12小時1次；(5)分別在注射內(nèi)皮細胞后立刻及注射后M小時及48小時向N0D/SCID小鼠經(jīng)尾靜脈注射海腎熒光素酶底物(30616壯6^2丨1^(50(^8/1^)，立即利用乂611(^611 IVIS Lumina II活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間為5分鐘，監(jiān)測內(nèi)皮細胞在體內(nèi)的分布。在向N0D/SCID小鼠乳腺癌肺部轉移模型經(jīng)尾靜脈注射三融合蛋白的人胚胎干細胞來源內(nèi)皮細胞后，如圖7所示，注射后立即能夠在小鼠肺部監(jiān)測到海腎熒光素信號，注射后M小時肺部信號消失，小部分出現(xiàn)在腹部，注射后48小時幾乎不能監(jiān)測海腎熒光素信號。實施例4攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞在體外對人乳腺癌MDA-MB-231 細胞的殺傷作用(1)用商業(yè)化的pLV-EFl α -MCS-IRES-GFP-Bsd慢病毒表達質(zhì)粒和慢病毒包裝質(zhì)粒轉染細胞；(2)轉染16小時后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基，換液后M小時收集病毒上清，儲于_80°C冰箱備用；(3)用人乳腺癌細胞MDA-MB-231鋪六孔板，密度為1 X IO5細胞/孔，用于病毒感染；(4)待病毒上清常溫化凍后，混合2毫升不含抗生素的全培養(yǎng)基和1毫升病毒上清加入步驟(3)中孔內(nèi)，并加入polybrene 24 μ g/孔，1600rpm，37°C離心1小時；(5)離心結束后換新鮮全培養(yǎng)基2毫升/孔，繼續(xù)置于37°C培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)；(6)48小時后向細胞培養(yǎng)基中加入Bsd進行藥篩共計3天，以得到穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白的MDA-MB-231-GFP細胞；(7)將MDA-MB-231-GFP細胞和實施例1中制備得到的攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞混合，并在培養(yǎng)基中加入更西洛韋，培養(yǎng)5天后裂解細胞，應用多功能檢測儀測定細胞裂解液的GFP強度，以GFP的相對強度代表MDA-MB-231-GFP的存活情況。結果如圖8-9所示，在圖8中將兩種細胞按照不同比例進行混合后在200 μ M更西洛韋條件下培養(yǎng)5天后在25% -90%混合組中MDA-MB-231細胞死亡率大于50%;圖9中將兩種細胞1 1混合后在不同濃度更西洛韋條件下培養(yǎng)5天，在全部的給藥組MDA-MB-231 的死亡率均大于50%。實施例5N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型腫瘤的體內(nèi)示蹤(1)向6-8周雌性N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠經(jīng)尾靜脈注射攜帶螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231細胞1. 5 X IO6/只；(2) 10天后，向小鼠腹腔注射螢火蟲熒光素酶底物D-Luciferin (150mg/kg)，待5 分鐘后利用fenogen IVIS Lumina II活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間為30秒， 可見雙肺散在信號，確定N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型建立成功；
(3)分別于第20天、第25天、第30天、第35天重復上一步驟，監(jiān)測肺部腫瘤生長情況。結果如圖10所示，可見小鼠肺部腫瘤轉移灶自接種腫瘤細胞后第10天至第35天生長迅速。實施例6N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型給予攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞加更西洛韋治療后腫瘤的體內(nèi)示蹤(1)向6-8周雌性N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠經(jīng)尾靜脈注射攜帶螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白的人乳腺癌MDA-MB-231細胞1. 5 X IO6/只；(2) 10天后，向小鼠腹腔注射螢火蟲熒光素酶底物D-Luciferin (150mg/kg)，待5 分鐘后利用fenogen IVIS Lumina II活體成像系統(tǒng)檢測化學發(fā)光信號，曝光時間為30秒， 可見雙肺散在信號，確定N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型建立成功；(3)分別在第11天、第16天、第21天和第沈天消化攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞，用基本培養(yǎng)基重懸至IX IO7細胞/毫升，對N0D/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型經(jīng)尾靜脈注射100微升每只；(4)連續(xù)4天經(jīng)腹腔注射更西洛韋0. 5mg，每日2次，兩次給藥中間間隔12小時；(5)分別于每輪治療后，即第20天、第25天、第30天和第35天重復第2步驟，監(jiān)測肺部腫瘤生長情況。結果如圖11所示，可見經(jīng)攜帶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞加更西洛韋治療后小鼠肺部腫瘤轉移灶生長緩慢，明顯慢于圖10中未經(jīng)治療小鼠。
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權利要求
1.一種具有腫瘤靶向、體內(nèi)示蹤和治療作用的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞，其特征在于其攜帶有海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和胸苷激酶的三融合蛋白，能夠進行體內(nèi)示蹤， 并在給予胸苷激酶底物更西洛韋后誘導內(nèi)皮細胞的凋亡。
2.一種腫瘤靶向、體內(nèi)示蹤并具有治療作用的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞的制備方法，其具體步驟為(1)構建含海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合基因的具有Bsd 抗性的慢病毒表達質(zhì)粒；(2)用四31~細胞鋪六孔板，密度為1.5X106細胞/孔，用于轉染；(3)用lipo-2000將步驟(1)中構建的三融合基因慢病毒表達質(zhì)粒和慢病毒包裝質(zhì)粒轉染入步驟O)中前一天鋪板的細胞；(4)轉染16小時后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基，換液后M小時收集病毒上清，儲于-80°C冰箱備用；(5)用人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞鋪六孔板，密度為IXIO5細胞/孔，用于病毒感染；(6)待病毒上清常溫化凍后，混合2毫升不含抗生素的全培養(yǎng)基和1毫升病毒上清加入步驟(5)中的內(nèi)皮細胞孔內(nèi)，并加入polybrene 24 μ g/孔，1600rpm，37°C離心1小時；(7)離心結束后換新鮮全培養(yǎng)基2毫升/孔，繼續(xù)置于37°C培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)；(8)48小時后向經(jīng)步驟(6)中病毒感染后的內(nèi)皮細胞加入Bsd進行藥篩共計3天，以得到穩(wěn)定表達海腎熒光素酶、紅色熒光蛋白和自殺基因胸苷激酶三融合蛋白的人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的具有體內(nèi)示蹤和腫瘤治療作用的細胞。所述細胞是一種由人胚胎干細胞體外分化而來的內(nèi)皮細胞，能夠在靜脈注射后特異性富集于腫瘤病灶，同時還具有分子成像功能，能夠在活體狀態(tài)下實時監(jiān)測其在體內(nèi)的分布。具體說是將海腎熒光素酶-紅色熒光蛋白-自殺基因胸苷激酶三融合基因轉染入人胚胎干細胞來源的內(nèi)皮細胞，借助活體成像系統(tǒng)監(jiān)測熒光素酶信號來監(jiān)測細胞靶向NOD/SCID聯(lián)合免疫缺陷小鼠乳腺癌肺部轉移模型的特異性；對注射了轉染三融合基因的內(nèi)皮細胞的小鼠給予胸苷激酶的底物更西洛韋，通過旁觀者效應誘導內(nèi)皮細胞周圍腫瘤細胞的死亡。
文檔編號A61K48/00GK102533661SQ20111045496
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月30日 優(yōu)先權日2011年12月30日
發(fā)明者劉艷華, 向榮, 呂丹, 李宗金, 蘇位君 申請人:南開大學