專利名稱：廣東紫珠揮發(fā)油提取物、其制備方法、含有其的藥物組合物及用途的制作方法
廣東紫珠揮發(fā)油提取物、其制備方法、含有其的藥物組合物及用途技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥或天然藥物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種廣東紫珠揮發(fā)油提取物、其制備方法、含有所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物的組合物及其用于抑制宮頸炎致病菌的用途。
背景技術(shù)：
世界衛(wèi)生組織對中國婦女的調(diào)查表明:我國育齡女性人口數(shù)字約為1.5-2億，其中約41%的女性患有不同程度的婦科炎性疾病，已婚女性發(fā)病率更高達(dá)70%。據(jù)統(tǒng)計，宮頸炎約占婦產(chǎn)科門診總數(shù)的40-50%，居婦科疾病之首，其中慢性宮頸炎占門診病人的10% -25%。正常情況下，子宮頸腺體可以分泌粘稠的分泌物，形成粘液可抵抗陰道內(nèi)病原體侵入子宮腔。但當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時，或者子宮頸受某種因素影響，使分泌物增加，宮頸外部長期浸在分泌物內(nèi)，就極易受病原體的襲擊，這種情況導(dǎo)致子宮頸“失守”而感染，從而形成宮頸炎。宮頸炎致病菌主要有金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、大腸桿菌等。
廣東紫珠為馬鞭草科植物廣東紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)的干燥莖枝及葉，又名止血柴，紫珠草、金刀 菜等，廣泛分布于我國廣東、江西、湖南、湖北等省，廣東紫珠具有收斂止血，清熱解毒之功效，是“抗宮炎片”和“抗宮炎膠囊”等中成藥的主要原料藥材，在婦科炎癥制劑中被廣泛應(yīng)用，常用于治療宮頸糜爛出血、陰道炎、宮頸炎等婦科疾病，在江西、湖南等省列入地方藥材標(biāo)準(zhǔn)，2010年新收錄于中國藥典。國內(nèi)外對紫珠屬植物的研究主要集中在黃酮類化合物、萜類化合物上，已有文獻(xiàn)資料報道紫珠屬植物的化學(xué)成分及生理活性，現(xiàn)代研究也證實(shí)多種紫珠屬植物揮發(fā)性成分具有多種生物活性，但對廣東紫珠揮發(fā)油化學(xué)成分的深入研究未見報道。
與本發(fā)明相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)主要有以下3個文獻(xiàn):1、陳端端，陳惠芳.保婦康栓和裸花紫珠栓治療念珠菌性陰道炎的療效對比觀察.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床.2006，6 (2):28-29.該文主要是關(guān)于兩種中藥栓劑治療念珠菌性陰道炎的臨床觀察，該文沒有關(guān)于廣東紫珠揮發(fā)油成分的制備及其體外抗菌活性的描述。2、粟學(xué)俐，朱書奎.紫珠幾種主要揮發(fā)性化學(xué)組分的分析.荊門職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報.2008，23 (3):7-10.該文做了廣東紫珠同屬植物裸花紫珠的揮發(fā)性成分的GC-MS分析，沒有關(guān)于廣東紫珠揮發(fā)油成分的制備及其體外抗菌活性的描述。3、洪燕龍.婦炎康泡騰片的制劑工藝，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和廣東紫珠化學(xué)成分的研究.北京:北京中醫(yī)藥大學(xué)，2004.該文利用體內(nèi)試驗(yàn)驗(yàn)證了廣東紫珠總黃酮具有抗炎活性，研究了廣東紫珠黃酮類化學(xué)成分，從中分得兩個化合物，并考察了婦炎康泡騰片的制劑工藝，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，沒有針對廣東紫珠揮發(fā)油成分的制備及其體外抗菌活性的描述。發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其可通過水蒸氣蒸餾法提取得到，并對其進(jìn)行GC-MS分析分離，采用金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌等宮頸炎常見致病菌分別評價廣東紫珠揮發(fā)油提取物的體外抗菌活性。
本發(fā)明的第一個目的是提供一種廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其特征在于其含有1.50-2.75%的脂肪酸類化合物和47.21-54.14%的萜類化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實(shí)施方式，所述廣東紫珠揮發(fā)油提取物含有2.49%的脂肪酸類化合物和50.87%的萜類化合物。根據(jù)本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選的實(shí)施方式，所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物含有1.50%的脂肪酸類化合物和47.21%的萜類化合物。根據(jù)本發(fā)明的又一個特別優(yōu)選的實(shí)施方式，所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物含有2.75%的脂肪酸類化合物和54.14%的萜類化合物。
本發(fā)明所述廣東紫珠揮發(fā)油提取物還可以含有1-乙?；?4，7-二甲基甘菊環(huán)、6，10，14-三甲基-十五烷-2-酮、4- (3-甲基丁基)-鄰苯二甲酸-1-壬酯、1-苯基-萘等其他類化合物的一種或多種。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，重要的脂肪酸類化合物包括辛酸、壬酸或癸酸。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，重要的萜類化合物包括石竹烯、Y-蓽澄茄烯、氧化石竹烯、α -愈創(chuàng)木烯、雪松烯、α -金合歡烯、α -松油烯、吉瑪烯D、異匙葉桉油醇、柏木腦、δ-愈創(chuàng)木烯和Y-欖香烯等。
本發(fā)明的第二個目的是提供所述廣東紫珠揮發(fā)油提取物的制備方法，所述方法包括以下步驟:
I)通過水蒸氣蒸餾法提 取廣東紫珠，得到廣東紫珠揮發(fā)油粗品；
2)用溶劑萃取廣東紫珠揮發(fā)油粗品，脫水，得到廣東紫珠揮發(fā)油提取物。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，所述步驟I)中的廣東紫珠為馬鞭草科植物廣東紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)的干燥莖枝及葉。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，所述步驟I)中的水蒸氣蒸餾法包括用冷凝裝置冷凝含有水和廣東紫珠的容器的步驟。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，水和廣東紫珠的重量比為1: 6-1: 3，優(yōu)選I: 4。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，所述步驟I)中的提取時間為3-7小時，優(yōu)選6小時。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，所述溶劑可以為乙醚、正己烷或環(huán)己烷，優(yōu)選乙醚。
本發(fā)明的第三個目的是提供一種藥物組合物，其含有有效量的所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物和藥學(xué)可接受的賦形劑。
本發(fā)明的第四個目的是提供所述廣東紫珠揮發(fā)油提取物在制備抑制宮頸炎致病菌的藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方式，所述宮頸炎致病菌選自金黃色葡萄球菌、大腸桿菌或白色念珠菌。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的廣東紫珠揮發(fā)油提取物具有較強(qiáng)的抗金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌等宮頸炎致病菌活性，可用于治療宮頸炎。


圖1為實(shí)施例1所得的廣東紫珠揮發(fā)油提取物的GC-MS總離子流圖，其中橫坐標(biāo)為保留時間(min)，縱坐標(biāo)為峰面積；
圖2為實(shí)施例2所得的廣東紫珠揮發(fā)油提取物的GC-MS總離子流圖，其中橫坐標(biāo)為保留時間(min)，縱坐標(biāo)為峰面積；
圖3為實(shí)施例3所得的廣東紫珠揮發(fā)油提取物的GC-MS總離子流圖，其中橫坐標(biāo)為保留時間(min)，縱坐標(biāo)為峰面積；
圖4為實(shí)施例1-3所得的廣東紫珠揮發(fā)油提取物抑制各細(xì)菌的照片。
具體實(shí)施方式
以下通過具體實(shí)施例說明本發(fā)明，但這些實(shí)施例不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。除非特別說明，說明書中的單位以質(zhì)量計。
儀器和材料
Agilent 6890-5973N氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國安捷倫)，HP_5mS石英毛細(xì)管柱(3OmX 0.25mmX 0.25 μ m,涂層)。
LRH-150型生化培養(yǎng)箱(上海索普儀器有限公司);YXQ-LA_50S II立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。
無水乙醚、無水硫酸鈉及甲醇等試劑均為分析純(國藥集團(tuán)上海試劑公司)。
菌種:金黃色葡萄球菌 (staphylococcusaureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)和白色念珠菌(Candida albicans)購自上海醫(yī)藥工業(yè)研究院生物部。
牛肉膏(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司);
培養(yǎng)基I (牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)/g.Γ1:蛋白胨10，牛肉浸膏3，NaC15，瓊脂2 ;pH 7.0 7.2，121°C滅菌30min。培養(yǎng)基II (YH)培養(yǎng)基)/g噸―1:葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏5，瓊脂20 ；pH自然，121°C滅菌30min。
廣東紫珠為江西萍鄉(xiāng)栽培，為馬鞭草科植物廣東紫珠(Callicarpakwangtungensis Chun.)的干燥地上部分。
實(shí)施例1:廣東紫珠揮發(fā)油提取物的制備
取藥材廣東紫珠，粉碎，過24目篩。稱取200g，置于2000ml燒瓶中，加水800ml與玻璃珠數(shù)粒，連接揮發(fā)油測定器及冷凝裝置，提取6h。所得揮發(fā)油為淺黃色透明澄清油狀物，具有香氣，無水乙醚萃取，適量無水硫酸鈉脫水得揮發(fā)油。本實(shí)施例提取的揮發(fā)油得率為 0.615%。
實(shí)施例2:
取藥材廣東紫珠，粉碎，過24目篩。稱取200g，置于2000ml燒瓶中，加水600ml與玻璃珠數(shù)粒，連接揮發(fā)油測定器及冷凝裝置，提取3h。所得揮發(fā)油為淺黃色透明澄清油狀物，具有香氣，正己烷萃取，適量無水硫酸鈉脫水得揮發(fā)油。本實(shí)施例提取的揮發(fā)油得率為0.420%。
實(shí)施例3:
取藥材廣東紫珠，粉碎，過24目篩。稱取200g，置于2000ml燒瓶中，加水1200ml與玻璃珠數(shù)粒，連接揮發(fā)油測定器及冷凝裝置，提取7h。所得揮發(fā)油為淺黃色透明澄清油狀物，具有香氣，無水乙醚萃取，適量無水硫酸鈉脫水得揮發(fā)油。本實(shí)施例提取的揮發(fā)油得率為 0.741% O
實(shí)施例4:實(shí)施例1所得的廣東紫珠揮發(fā)油提取物的化學(xué)成分的GC-MS分析
I) GC-MS 色譜條件
高純氮?dú)鉃檩d氣，進(jìn)樣口溫度為300°C，進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為30: 1，進(jìn)樣量為I μ I，載氣流速為1.0mL/min ;程序升溫:起始溫度200°C，保持3min后以4°C /min升至250°C，250°C保持5min后以20°C /min升至300°C保持3min。質(zhì)譜接口溫度為310°C，EI源溫度200°C，電子轟擊能量60eV，掃描范圍m/z 25_550amu，全離子掃描，采集延時3.5min,面積歸一化法計算相對含量。
GC-MS總離子流圖見附圖1。用氣相色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，以峰面積歸一法測得其中各組分的相對百分含量，對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，經(jīng)過NIST05質(zhì)譜庫計算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)對照，以及檢索上海研發(fā)公共服務(wù)平臺化學(xué)綜合數(shù)據(jù)庫，并查閱相關(guān)文獻(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照分析，確認(rèn)各化合物。結(jié)果見表I。
表1、實(shí)施例1廣東紫珠揮發(fā)油成分及相對含量
權(quán)利要求
1.廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其特征在于其含有1.2-2.9%的脂肪酸類化合物和.45.0-55.0 %的萜類化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其特征在于其含有1.50-2.75%的脂肪酸類化合物和47.21-54.14%的萜類化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其特征在于所述脂肪酸類化合物選自辛酸、壬酸或癸酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其特征在于所述萜類化合物選自石竹烯、Y -蓽澄爺烯、氧化石竹烯、α -愈創(chuàng)木烯、雪松烯、α -金合歡烯、α _松油烯、吉瑪烯D、異匙葉桉油醇、柏木腦、δ-愈創(chuàng)木烯或Y-欖香烯等。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其特征在于其還含有選自1-乙酰基-4，7- 二甲基甘菊環(huán)、6，10，14-三甲基-十五烷-2-酮、4-(3-甲基丁基)-鄰苯二甲酸-1-壬酯、1-苯基-萘的一種或多種的其他類化合物。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物的制備方法，所述方法包括以下步驟: 1)通過水蒸氣蒸餾法提取廣東紫珠，得到廣東紫珠揮發(fā)油粗品； 2)用溶劑萃取廣東紫珠揮發(fā)油粗品，脫水，得到廣東紫珠揮發(fā)油提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的廣東紫珠為馬鞭草科植物廣東紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)的干燥莖枝及葉。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的水蒸氣蒸餾法包括用冷凝裝置冷凝含有水和廣東紫珠的容器的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于水和廣東紫珠的重量比為.1:6-1: 3，優(yōu)選 1: 4-1: 5。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的提取時間為3-7小時。
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，所述溶劑為乙醚、正己烷或環(huán)己烷，優(yōu)選乙醚。
12.藥物組合物，其含有有效量的權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物和藥學(xué)可接受的賦形劑。
13.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的廣東紫珠揮發(fā)油提取物在制備抑制宮頸炎致病菌的藥物中的用途。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其特征在于所述宮頸炎致病菌選自金黃色葡萄球菌、大腸桿菌或白色念珠菌。
全文摘要
本發(fā)明提供一種廣東紫珠揮發(fā)油提取物，其特征在于其含有1.2-2.9％的脂肪酸類化合物和45.0-55.0％的萜類化合物。本發(fā)明也提供該廣東紫珠揮發(fā)油提取物的制備方法、含有其的藥物組合物和用途。
文檔編號A61K36/85GK103215133SQ20121001989
公開日2013年7月24日 申請日期2012年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月21日
發(fā)明者楊義芳, 賈安 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院