一種提純動(dòng)物藥材中纖溶酶并制備成中藥組合物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用膜分離技術(shù)分離提純動(dòng)物藥材中纖溶酶成分，以及利用該成分制備中藥組合物的制備方法，其方法步驟：（1）稱取螞蟻或土鱉蟲(chóng)適量，粉碎至形成粗粉；（2）加6倍量水浸泡，攪拌至勻漿，取勻漿液置恒溫水浴、攪拌；（3）離心，棄去沉淀；（4）取離心液經(jīng)孔徑膜過(guò)濾；（5）濾液經(jīng)超濾器（截留分子段3000-20000），超濾濃縮約呈1∶1（即藥材與藥液體積比），濃縮液冷凍干燥成粉，備用；（6）取凍干粉可單獨(dú)使用或與其他成分配合成組合物再使用。本發(fā)明提供了一種新的方法分離提純動(dòng)物藥材中纖溶酶成分，提取工藝簡(jiǎn)易，效果顯著。
【專利說(shuō)明】一種提純動(dòng)物藥材中纖溶酶并制備成中藥組合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及利用膜分離技術(shù)分離提純動(dòng)物藥材中纖溶酶成分，以及利用該成分制備中藥組合物的制備方法。
技術(shù)背景
[0002]纖溶系統(tǒng)是指纖溶酶原經(jīng)特異性激活物作用轉(zhuǎn)化為纖溶酶，導(dǎo)致體內(nèi)纖維蛋白不斷溶解的反應(yīng)體系，主要包括纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原激活物及纖溶酶原激活物抑制劑。
[0003]肝纖維化是肝臟對(duì)各種因素所致的慢性損傷的一種修復(fù)反應(yīng)，其特征是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在肝內(nèi)過(guò)度沉積，而ECM的降解受多種因素的調(diào)控，近年有研究顯示纖溶酶原激活系統(tǒng)可通過(guò)調(diào)芐基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的活性參與ECM的降解過(guò)程。
[0004]纖溶酶可以直接降解纖維蛋白原和纖維蛋白，還可以降解多種ECM成分，包括纖維連接蛋白、層連蛋白等。此外，纖溶酶又是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)活化所必需的，MMPs是最重要的一類降解ECM的蛋白酶類。
[0005]肝纖維化屬中醫(yī)“癥結(jié)痞塊”范疇，中醫(yī)認(rèn)為肝血瘀阻是基本病機(jī)，用藥以活血化瘀為主的治療原則；現(xiàn)代研究顯示纖溶酶原激活系統(tǒng)與肝纖維化有直接關(guān)系，活血化瘀中藥能明顯影響機(jī)體纖溶系統(tǒng)，有抗凝血和促進(jìn)纖維蛋白溶解的功效。因此我們選擇中藥中動(dòng)物藥材提取純化具有纖溶活性的成分，研究其在抗肝纖維化的藥物領(lǐng)域的開(kāi)發(fā)。長(zhǎng)期以來(lái)土鱉蟲(chóng)、螞蟻制劑產(chǎn)品，傳統(tǒng)和常規(guī)的制備方法是以水煎煮或醇回流提取、濃縮、烘干的制法，而且缺少可靠合理的工藝評(píng)估的考察指標(biāo)，同時(shí)由于高溫等因素對(duì)有效成分影響較大，我們選擇采用勻漿常溫提取、超濾截留濃縮的制備方法，可以極大的保留藥材中動(dòng)物蛋白有效成分。`

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種利用膜分離技術(shù)分離提純動(dòng)物藥材中纖溶酶成分，以及利用該成分制備中藥組合物的制備方法，其方法步驟:
1、稱取螞蟻或土鱉蟲(chóng)適量，粉碎至形成粗粉；
2、加6倍量水浸泡，攪拌至勻漿，取勻漿液置恒溫水浴、攪拌；
3、離心，棄去沉淀；
4、取離心液經(jīng)孔徑膜過(guò)濾；
5、濾液經(jīng)超濾器(截留分子段3000-20000)，超濾濃縮約呈1:1(即藥材與藥液體積比)，濃縮液冷凍干燥成粉，備用。
[0007]6、取凍干粉可單獨(dú)使用或與其他成分配合成組合物再使用。
[0008]本發(fā)明有益效果:提供了一種新的方法分離提純動(dòng)物藥材中纖溶酶成分，提取工藝簡(jiǎn)易，效果顯著。【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1為溶斑標(biāo)記對(duì)照?qǐng)D。采用以尿激酶為對(duì)照，于纖維蛋白標(biāo)準(zhǔn)板上，采用本專利公開(kāi)方法分離、純化得到的纖溶酶樣品溶圈面積顯著。標(biāo)記為5、6、7分別以尿激酶對(duì)照的溶斑面積的2.4,4.6,6.3倍。其中:溶斑標(biāo)記1、2、3為藥材提純前的樣品(用量比例為1:2:3);標(biāo)記4為尿激酶對(duì)照；標(biāo)記5、6、7為提純藥材中纖溶酶的樣品(用量同標(biāo)記1、2、3，比例% 1:2:3);標(biāo)記8、9為陰性對(duì)照。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1:
取螞蟻100g，粉碎成粗粉，加6倍量水浸泡，攪拌至勻漿，取勻漿液置恒溫水浴(37°C )、攪拌(100轉(zhuǎn)/分)10小時(shí)，離心，棄去沉淀，取離心液先經(jīng)I μ m孔徑膜預(yù)濾，濾液經(jīng)0.2 μ m孔徑膜濾過(guò)除菌，除菌濾液再經(jīng)超濾器(截留分子段3000-20000)，超濾濃縮約呈1:1 (即藥材與藥液體積比)，濃縮液冷凍干燥成粉，備用。取凍干粉配制成每Iml相當(dāng)螞蟻0.1g溶液，以尿激酶溶液為對(duì)照液，用纖維蛋白平板法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0011]表1螞蟻纖溶活性測(cè)定結(jié)果 _
【權(quán)利要求】
1.一種提純動(dòng)物藥材中纖溶酶并制備成中藥組合物的方法，其特征在于: 利用膜分離技術(shù)分離提純動(dòng)物藥材中纖溶酶成分，以及利用該成分制備中藥組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)動(dòng)物藥材中纖溶活性成分定量的方法，其特征在于: 其方法步驟: (一)稱取螞蟻或土鱉蟲(chóng)適量，粉碎至形成粗粉； (二)加6倍量水浸泡，攪拌至勻漿，取勻漿液置恒溫水浴、攪拌； (三)離心，棄去沉淀； (四)取離心液經(jīng)孔徑膜過(guò)濾； (五)濾液經(jīng)超濾器，超濾濃縮約呈1:1(即藥材與藥液體積比)，濃縮液冷凍干燥成粉，備用; (六)取凍干粉可單獨(dú)使用或與其他成分配合成組合物再使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提純動(dòng)物藥材中纖溶酶并制備成中藥組合物的方法，其特征在于:所述超濾器的截留分子段3000-20000。
【文檔編號(hào)】A61K9/19GK103656630SQ201210032462
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年9月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月11日
【發(fā)明者】樂(lè)智勇, 夏培元, 劉任, 劉麗玲, 辛小娜, 張兵兵 申請(qǐng)人:江蘇仁壽藥業(yè)有限公司