專利名稱：一種治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種獸用中草藥制劑，特別涉及一種治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑，屬于獸藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
雞球蟲(chóng)病是養(yǎng)雞生產(chǎn)中較為常發(fā)的一種條件性疾病，其致病原主要為柔嫩艾美爾球蟲(chóng)、毒害艾美爾球蟲(chóng)卵感染，多發(fā)生在高溫高濕季節(jié)和圈舍潮濕、場(chǎng)地污染較重的雞場(chǎng)。 根據(jù)其寄生的部位不同，臨床上可分為小腸球蟲(chóng)(毒害艾美爾球蟲(chóng))和盲腸球蟲(chóng)(柔嫩艾美爾球蟲(chóng))感染，在發(fā)病過(guò)程中，往往與大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等腸道致病菌繼發(fā)感染相并存，雞群在不同的日齡段，不同生產(chǎn)環(huán)境條件下其發(fā)生的頻率、時(shí)間以及臨床病癥表現(xiàn)均存在較大差異。盲腸球蟲(chóng)發(fā)生時(shí)，主要表現(xiàn)為雞盲腸急性大量出血，拉鮮紅色或醬紅色稀便， 當(dāng)繼發(fā)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌混合感染時(shí)，拉紅黃或紅白相間的稀便，如處理不及時(shí)，易造成雞群急性大面積死亡；小腸球蟲(chóng)發(fā)生時(shí)，主要表現(xiàn)為雞十二指腸、小腸發(fā)生急性、壞死性炎癥，雞群生長(zhǎng)遲緩，出現(xiàn)漸進(jìn)性消瘦和散發(fā)性死亡。長(zhǎng)期以來(lái)，磺胺類、氨丙啉、馬杜拉霉素等抗生素及化藥是防治該病的常用藥品，具有較強(qiáng)的耐藥性和抗生素殘留，給食品安全生產(chǎn)帶來(lái)潛在的危害。近年來(lái)，我們運(yùn)用中草藥篩選方法對(duì)雞球蟲(chóng)感染的防治進(jìn)行了相應(yīng)的防治研究，擬尋求毒副作用小、殘毒低、不易產(chǎn)生耐藥、具有較好療效的獸用中草藥制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)雞大腸桿菌CVCC-245致病菌株有明顯的抑制作用；雞球蟲(chóng)卵人工感染防治實(shí)驗(yàn)有效率為94. 17 99. 17%，田間應(yīng)用推廣試驗(yàn)有效率為 95. 1%，其應(yīng)用具有顯著的防治效果及使用安全性的治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑的配方組成青蒿40_80g、常山 30-70g、勾藤10-40g、使君子25-65g、仙鶴草30_70g、焦地榆30_70g、蒼術(shù)15_35g、黃連 15-35g、黃柏20-40g、焦桅子20-40g、穿心連20_40g、紫花地丁 15_35g、陳皮20_40g、甘草 10_30g。優(yōu)選的，優(yōu)選后的治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑的配方組成青蒿60g、常山50g、 勾藤30g、使君子45g、仙鶴草50g、焦地榆50g、蒼術(shù)25g、黃連25g、黃柏30g、焦桅子30g、穿心連30g、紫花地丁 25g、陳皮30g、甘草20g。將以上原料藥粉粹、80目過(guò)篩、混合均勻，封裝密閉。用法及用量用法拌料自由采飼；治療量500g拌料250kg ;預(yù)防量減半使用。本發(fā)明制劑主要用于雞球蟲(chóng)卵感染引起以雞盲腸急性大量出血，
拉鮮紅色、醬紅色或紅黃相間的血色稀便，以及以小腸充氣、腸壁變薄、拉西紅柿樣或食糜樣稀便為主要臨床病理特征的雞球蟲(chóng)病。對(duì)同時(shí)繼發(fā)的大腸桿菌腸道混合感染也有較好的防治作用。本實(shí)驗(yàn)研究經(jīng)過(guò)雞柔嫩艾美爾球蟲(chóng)卵感染發(fā)病治療、體外抑菌，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物藥物急性及慢性毒理、理化測(cè)定、田間應(yīng)用推廣防治試驗(yàn)等一系列實(shí)驗(yàn)研究表明對(duì)雞大腸桿菌CVCC-245菌株有明顯的抑制作用；雞球蟲(chóng)卵人工感染防治實(shí)驗(yàn)有效率為94. 17 99. 17%，田間應(yīng)用推廣試驗(yàn)有效率為95. 1%。其組方藥物篩選嚴(yán)格遵循中獸醫(yī)醫(yī)學(xué)“標(biāo)本兼治”的防治理論，充分兼顧了養(yǎng)雞生產(chǎn)中雞球蟲(chóng)病的臨床病理特性，其應(yīng)用具有顯著的防治效果及使用安全性。具有殺蟲(chóng)、止血、化濕健脾、澀腸止瀉之功效。、試驗(yàn)材料
本發(fā)明制劑商品名稱“球蟲(chóng)血痢散”。I. I實(shí)驗(yàn)藥物及組方
“球蟲(chóng)血痢散”組方主要藥物成分青蒿、常山、使君子、仙鶴草、焦地榆、蒼術(shù)、黃連、黃柏、焦桅子、穿心連、紫花地丁、陳皮、甘草等。I. 2實(shí)驗(yàn)菌株雞大腸桿菌CVCC-245菌株購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；柔嫩艾美爾球蟲(chóng)卵為貴州省畜牧獸醫(yī)研究所原寄生蟲(chóng)研究室保存。I. 4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物35日齡雜交肉雞480只，體重400g±25g
1.5急性、亞急性毒性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小白鼠40只(公、母各20只)，SD大鼠32只(公、 母各16只)，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供。I. 6實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基及試劑肉湯、伊紅美藍(lán)、麥康凱、飽和鹽水、2. 5%重鉻酸鉀液。、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及方法
2.I細(xì)菌培養(yǎng)用伊紅美藍(lán)、麥康凱選擇性培養(yǎng)基經(jīng)37°C 24h將CVCC245菌株進(jìn)行培養(yǎng)復(fù)壯，再接種于肉湯培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)。2. 2體外抑菌實(shí)驗(yàn)將制劑煎熬濃縮成Ig生藥/ml的藥物濃度制劑作環(huán)形抑菌紙片(直徑3mm)，在普通平板上進(jìn)行抑菌培養(yǎng)24h，觀察CVCC-245菌株的生長(zhǎng)情況，如抑菌圈直徑大于5 6mm判為有效。2. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組設(shè)實(shí)驗(yàn)組4個(gè)，即方劑預(yù)防組I個(gè)、方劑治療組I個(gè)、化藥治療組I個(gè)、觀察對(duì)照組I個(gè)；每組實(shí)驗(yàn)雞只數(shù)量為120只。2. 4感染發(fā)病實(shí)驗(yàn)
2.4. I卵囊孵育取柔嫩艾美爾球蟲(chóng)卵用2. 5%重鉻酸鉀液，28°C恒溫培養(yǎng)，每日攪拌 3 5次，當(dāng)有80 85%以上的卵囊發(fā)育為孢子化卵囊時(shí)，收集卵囊保存?zhèn)溆谩?. 4. 2溫濕度調(diào)控將實(shí)驗(yàn)雞群舍內(nèi)溫度控制保持在25-28. 5°C ;墊料人工噴濕， 將實(shí)驗(yàn)雞群舍內(nèi)濕度控制保持在75-80%。2. 4. 3感染發(fā)病判斷標(biāo)準(zhǔn)將孵育后的孢子化卵囊液500ml按I :30加入到各實(shí)驗(yàn)組雞群飲水中2 3小時(shí)一次性飲用，經(jīng)飼養(yǎng)觀察，待雞群出現(xiàn)拉鮮紅色或紅白色稀便，臨床發(fā)病率達(dá)12-15%時(shí)為實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。2. 4. 4雞糞便球蟲(chóng)卵檢測(cè)計(jì)數(shù)運(yùn)用群體采樣法分別從各實(shí)驗(yàn)組采集50-60只雞糞，將每組雞糞分別混合，置冰箱4°C保存?zhèn)溆?。各組取15g雞糞，分別加入80 ml水?dāng)嚢杈鶆蚝?0目銅篩過(guò)濾，移入IOml離心管，3000r/min離心沉淀；在沉淀物中加滿飽和鹽水， 在離心管口覆蓋蓋玻片，靜置漂浮20min后，取下蓋玻片放在載玻片上，置顯微鏡下100倍觀察蟲(chóng)卵并計(jì)數(shù)。隨機(jī)計(jì)數(shù)各組糞樣的6個(gè)視野，取卵囊總數(shù)的平均值作為感染強(qiáng)度，無(wú)卵囊者為“ 一，，，I 3個(gè)卵囊者為“ +，，，4 6個(gè)卵囊者為“ + + ”，8 12個(gè)以上卵囊者為 “ + + + ”，13個(gè)以上卵囊者為“ + + + + ”。各實(shí)驗(yàn)組分別在感染發(fā)病前、防治前、防治后檢測(cè)計(jì)數(shù)一次。
2. 5防治實(shí)驗(yàn)
2.5. I治療用藥劑量及方法待實(shí)驗(yàn)雞群發(fā)病后，對(duì)第一、第二實(shí)驗(yàn)組用制備的“球蟲(chóng)血痢散”中草藥粉劑(80目過(guò)篩)按每日每公斤體重2g拌料自由采飼，連續(xù)使用6d;對(duì)第三實(shí)驗(yàn)組用10%磺胺喹噁啉鈉(河南安邦藥業(yè)有限公司生產(chǎn))按每日IOOg兌水125 kg自由飲用，連用6d ;第四實(shí)驗(yàn)組不用藥，為觀察對(duì)照組。2. 4急性、亞急性毒性藥理試驗(yàn)根據(jù)國(guó)家《中藥天然藥物長(zhǎng)期毒性研究指導(dǎo)原則》，用II級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小白鼠、大鼠(SD品系)制定急性毒性試驗(yàn)(MTD)和反復(fù)給藥毒性試驗(yàn)，以最大程度暴露其藥物毒性，對(duì)其凝血系統(tǒng)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)以及各主要器臟病理組織學(xué)變化等檢查。2. 5理化測(cè)定實(shí)驗(yàn)將“球蟲(chóng)血痢散”中草藥制劑委托貴州師范大學(xué)分析測(cè)試中心依據(jù)5337-2008\JY/T023-1996進(jìn)行鉛、鎘、汞、砷、銅等主要重金屬元素的測(cè)定。2. 6田間應(yīng)用推廣試驗(yàn)在貴州省貴陽(yáng)、遵義、黔南、黔東南、安順、六盤(pán)水等地區(qū)的部分養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行雞大球蟲(chóng)病的生產(chǎn)預(yù)防和臨床治療應(yīng)用推廣試驗(yàn)。、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.I抑菌實(shí)驗(yàn)抑菌圈直徑均在4. 8 6. 6mm之間。3. 2藥物防治實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表I。附表I :
鑛號(hào)觀 mmm CR)_蟲(chóng)參憑&^漏計(jì)數(shù)[ Ji ...............................................................................................IL/ I mS ■S床麵羣 C )死 m- IR}亡率m 逾寒 CsJ5 mmm Iiflm. f，/d) I第方 P 11量2 O 'I" * * I ο- % I丨m4 SICl. 839 9. It* 二鍾r 3_ wm 2 O爭(zhēng) * + I O I 3 . Kη m12-I5 839 4- I 第三麵 藥》 ff麵 2 O 備 * B 責(zé)*丨11 I isI κ I水12. 15&5 QQ9 5. W* H麵懸顆_O■I··+ + / 4, 番Ir12- 72 5/
注方劑預(yù)防組為先用實(shí)驗(yàn)方劑預(yù)防處理7d后進(jìn)行人工感染實(shí)驗(yàn)。3. 3急性、亞急性毒性藥理試驗(yàn)
3. 4理化測(cè)定分析見(jiàn)表2。附表2
權(quán)利要求
1.一種治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑，其特征在于它是由以下原料藥組成的青蒿 40-80g、常山30-70g、勾藤10-40g、使君子25-65g、仙鶴草30-70g、焦地榆30-70g、蒼術(shù) 15-35g、黃連15-35g、黃柏20_40g、焦桅子20_40g、穿心連20_40g、紫花地丁 15_35g、陳皮 20-40g、甘草 10-30g。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑，其特征在于它是由以下原料藥組成的青蒿60g、常山50g、勾藤30g、使君子45g、仙鶴草50g、焦地榆50g、蒼術(shù)25g、 黃連25g、黃柏30g、焦桅子30g、穿心連30g、紫花地丁 25g、陳皮30g、甘草20g。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療雞球蟲(chóng)病中草藥制劑，它是由青蒿、常山、勾藤、使君子、仙鶴草、焦地榆、蒼術(shù)、黃連、黃柏、焦梔子、穿心連、紫花地丁、陳皮、甘草配制而得，本發(fā)明制劑對(duì)雞大腸桿菌CVCC-245菌株有明顯的抑制作用；雞球蟲(chóng)卵人工感染防治實(shí)驗(yàn)有效率為94.17～99.17%，田間應(yīng)用推廣試驗(yàn)有效率為95.1%，其應(yīng)用具有顯著的防治效果及使用安全性。具有殺蟲(chóng)、止血、化濕健脾、澀腸止瀉之功效。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102579697SQ20121008298
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月27日
發(fā)明者任榮清, 文正常, 楊粵黔, 潘淑惠, 高明琴 申請(qǐng)人:貴州省畜牧獸醫(yī)研究所