專利名稱：一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及制備方法，屬于動(dòng)物用病毒活疫苗制造領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在疫苗制品的領(lǐng)域中，凍干保護(hù)劑及其制備エ藝是活疫苗生產(chǎn)中的一項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)，對(duì)疫苗的保存、運(yùn)輸和使用有很大影響。目前，在我國(guó)獸用疫苗中，活的凍干疫苗占相當(dāng)大的比例，國(guó)內(nèi)常用的保護(hù)劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡(jiǎn)單，保護(hù)功能差。如果在2°C_8°C條件下，保存期只有4-6個(gè)月，多需要在-15°C以下保存。加上國(guó)內(nèi)傳統(tǒng)的獸用生物制品保護(hù)劑的研制相對(duì)滯后，使成品疫苗的長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸受限。所以，耐熱凍干保護(hù)劑的研究是非常急需的，在20世紀(jì)80年代，發(fā)達(dá)國(guó)家就已開(kāi)始進(jìn)行耐熱凍干保護(hù)劑的研究。我國(guó)在耐熱凍干保護(hù)劑方面的研究起步較晚，但現(xiàn)在在這方面的研究取得了一定的成果，傅德霞等(1997)將明膠蔗糖保護(hù)劑用于雞新城疫弱毒凍干苗和雞傳染性支氣管炎弱毒凍干苗，其免疫效果與牛奶蔗糖保護(hù)劑基本相同。王仁耕等(1989)對(duì)雞新城疫I系凍干苗的耐熱保護(hù)劑的研究表明，2-8 V保存24個(gè)月能夠達(dá)到《規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)，主要為牛奶、蔗糖、谷氨酸鈉、甘露醇等。沈銘強(qiáng)等(1990)對(duì)狂犬病凍干苗耐熱保護(hù)劑進(jìn)行了研究，以蔗糖、牛奶、EDTA、甘露醇等材料為主，經(jīng)2-8で保存有效期為一年。李道義等(1996)進(jìn)行了豬瘟凍干苗保護(hù)劑的研究，主要成分為CH0、谷氨酸鈉、牛血清、脫脂牛奶等，4-8°C保存15-24個(gè)月，250C 100天，37°C 7天，經(jīng)檢驗(yàn)，物理性狀、真空度、水分、安全效カ等測(cè)定達(dá)部頒標(biāo)準(zhǔn)。王棟等(2002)已經(jīng)研制出ー種耐熱凍干保護(hù)劑，用此保護(hù)劑凍干的疫苗在2°C _8°C條件下，保存24個(gè)月以后，病毒滴度無(wú)明顯下降。由于凍干保護(hù)劑可影響生物制品的質(zhì)量、效價(jià)和穩(wěn)定性，改變生物制品的生產(chǎn)エ藝，提高產(chǎn)品預(yù)測(cè)能力并增大產(chǎn)品批次間的穩(wěn)定性，并且耐熱凍干保護(hù)劑有免疫活性但無(wú)藥理活性，可在凍干和保存時(shí)維持疫苗的穩(wěn)定性，初次干燥時(shí)在適宜的溫度下疫苗不倒塌，企業(yè)低成本即可獲取。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種新型水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑及其制備方法，降低保護(hù)條件，延長(zhǎng)使用期并降低使用成本。一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，以注射用水為溶劑配制溶液，各組分質(zhì)量百分比濃度為明膠3%、聚こ烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2% ;均為干物質(zhì)組份。上述水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，(I)對(duì)可高壓滅菌的明膠、聚こ烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121°C滅菌15分鐘；(2)將不耐高溫的物質(zhì)組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔徑
0.22 的濾膜過(guò)濾除菌；然后將(I)、(2)混合，即為耐熱凍干保護(hù)劑，凍干保護(hù)劑中各組分質(zhì)量百分比濃度為明膠3%、聚こ烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2%。使用時(shí)按I: I體積比加入病毒抗原液中，分裝后進(jìn)行冷凍干燥。本發(fā)明的活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，降低保存條件，延長(zhǎng)保存期，降低使用成本及其提高疫苗的免疫效力，使活疫苗的儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用都更方便、經(jīng)濟(jì)。本發(fā)明的制劑在2_8°C條件下可保存24個(gè)月以上，能達(dá)到《中華人民共和國(guó)獸醫(yī)生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。ー種新型水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，配比為明膠3g、聚こ烯吡咯烷酮5g、脫水果糖I g、海藻糖3 g、甘氨酸3 g、山梨醇3 g、谷氨酸鈉2 g，注射用水80g，可得到IOOg水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑。水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，(I)對(duì)可高壓滅菌的明膠、聚こ烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121°C滅菌15分鐘；(2)將不耐高溫的物質(zhì)組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔徑
0.22 的濾膜過(guò)濾除菌；分別完成除菌后將(I)、(2)兩種成分混合，即為耐熱凍干保護(hù)齊U，使用時(shí)按1:1體積比例加入病毒抗原液中，分裝后進(jìn)行冷凍干燥。技術(shù)參數(shù)及檢測(cè)方法
1.產(chǎn)品的物理性狀、無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)、剩余水分測(cè)定和真空度測(cè)定按《中華人民共和國(guó)獸醫(yī)生物制品規(guī)程》的方法及標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。2.凍于周期不超過(guò)48h。3.病毒含量測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)
選擇發(fā)育良好的9 10日齡SPF雞胚制備雞胚成纖維細(xì)胞懸液，用細(xì)胞生長(zhǎng)液制備雞胚成纖維細(xì)胞懸液(濃度5X IO6個(gè)左右)，接種96孔板上33°C培養(yǎng)。按瓶簽注明頭份，用生理鹽水將每頭份疫苗按實(shí)含抗原量稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，用滅菌生理鹽水做10倍系列稀釋，選取適宜稀釋度5個(gè)，接種長(zhǎng)成雞胚成纖維細(xì)胞單層的96孔板上，每個(gè)稀釋度接種6孔，每孔100 Ul，吸附I小時(shí)后加維持液100 yl，在33°C培養(yǎng)7 8日，計(jì)算TCID5tl,每Iml病毒含量IO4TCID5tl以上為合格。4、試制3批由本耐熱凍干保護(hù)劑凍干的產(chǎn)品，并設(shè)常規(guī)5%蔗糖脫脂乳保護(hù)劑對(duì)照組，置于37°C、2-8°C條件下保存，不同時(shí)間取樣，測(cè)定病毒含量及其物理性狀等。結(jié)果見(jiàn)表;
表I本發(fā)明的水貂犬瘟熱活疫苗凍干后物理性狀等參數(shù)測(cè)定從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出，在不同環(huán)境溫度下，本發(fā)明的耐熱凍干保護(hù)劑對(duì)水貂犬瘟熱活疫苗的保護(hù)效果優(yōu)于常規(guī)5%蔗糖脫脂乳保護(hù)劑，凍干后疫苗達(dá)IO5 TCID5tl合格，產(chǎn)品在370C保存IOd，產(chǎn)品的效カ達(dá)IO4 TCID5。合格。產(chǎn)品在2-8 0C保存24個(gè)月，產(chǎn)品的效力均在IO4 TCID50以上。本發(fā)明耐熱保護(hù)劑對(duì)水貂犬瘟熱活疫苗具有良好的保護(hù)效果。對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以根據(jù)上述說(shuō)明加以改進(jìn)或變換，而所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，其特征在于，以注射用水為溶劑配制溶液，各組分質(zhì)量百分比濃度為明膠3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2% ;均為干物質(zhì)組份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法，包括如下步驟 (1)對(duì)可高壓滅菌的明膠、聚乙烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121°C滅菌15分鐘； (2)將不耐高溫的物質(zhì)組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖，均按各自比例溶于注射用水中過(guò)濾除菌； (3 )將步驟(I)和(2 )的溶液混合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中的過(guò)濾除菌采用微孔濾膜的方式。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述的微孔濾膜為孔徑O.22 μ m的濾膜。
5.權(quán)利要求I所述的水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑在保護(hù)水貂犬瘟熱活疫苗中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于權(quán)利要求I所述的水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，使用時(shí)按1:1體積比例加入病毒抗原液中，分裝后進(jìn)行冷凍干燥。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的應(yīng)用，其特征在于疫苗在2-8°C條件下可保存24個(gè)月以上。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種水貂犬瘟熱活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，以注射用水為溶劑配制溶液，各組分質(zhì)量百分比濃度為明膠3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脫水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸鈉2%；均為干物質(zhì)組份，對(duì)可高壓滅菌的明膠、聚乙烯吡咯烷酮(K90)，按各自比例溶于注射用水，121℃滅菌15分鐘；(2)將不耐高溫的物質(zhì)組份山梨醇、谷氨酸鈉、脫水果糖、甘氨酸、海藻糖、蔗糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔徑0.22μm的濾膜過(guò)濾除菌；然后將(1)、(2)混合，即為耐熱凍干保護(hù)劑。本發(fā)明是一種低成本、長(zhǎng)效制品及制備方法。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102626520SQ20121011993
公開(kāi)日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月23日
發(fā)明者單虎, 張傳美, 張洪亮, 楊瑞梅, 秦曉冰, 黃娟 申請(qǐng)人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)