20(S)-人參皂苷Rh2在制備增強(qiáng)喹諾酮類藥物抗菌作用的藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及20(S)-人參皂苷Rh2在制備增強(qiáng)喹諾酮類藥物抗菌作用的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明公開了20(S)-人參皂苷Rh2能提高環(huán)丙沙星對小鼠腹腔感染模型的治療作用，并且能夠降低環(huán)丙沙星在金黃色葡萄球菌ATCC?29213、4株金黃色葡萄球菌臨床菌株以及銅綠假單胞菌ATCC?27853上的最小抑菌濃度(MIC)的濃度。在金葡菌侵襲的THP-1巨噬細(xì)胞模型上，20(S)-人參皂苷Rh2具有增強(qiáng)左氧氟沙星在細(xì)胞內(nèi)抗菌活性的作用。因此，20(S)-人參皂苷Rh2有望用于制備喹諾酮類抗生素的增效劑，并且開發(fā)成為抗感染治療的輔助藥物。
【專利說明】20 (S)-人參皂苷Rh2在制備增強(qiáng)喹諾酮類藥物抗菌作用的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，具體涉及20 (S)-人參皂苷Rh2在制備增強(qiáng)喹諾酮類藥物抗菌作用的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]喹諾酮類(4-quinolones),又稱吡酮酸類或吡唳酮酸類,是一類較新的合成抗菌藥。喹諾酮類藥物作用的靶酶為細(xì)菌的DNA回旋酶(gyrase)及拓?fù)洚悩?gòu)酶IV。對大多數(shù)革蘭陰性細(xì)菌，DNA回旋酶是喹諾酮類藥物的主要靶酶，而對于大多數(shù)革蘭陽性細(xì)菌，喹諾酮類藥物主要抑制細(xì)菌的拓?fù)洚悩?gòu)酶IV，拓?fù)洚悩?gòu)酶IV為解鏈酶，可在DNA復(fù)制時將纏繞的子代染色體釋放。喹諾酮類藥物抗菌譜廣，尤其對需氧的革蘭陰性桿菌包括銅綠假單胞菌在內(nèi)有強(qiáng)大的殺菌作用，對金葡菌及產(chǎn)酶金葡菌也有良好抗菌作用，某些品種對結(jié)核桿菌、支原體、衣原體及厭氧菌也有作用。此類藥物不良反應(yīng)少，耐受良好。然而，隨著喹諾酮類藥物應(yīng)用規(guī)模的擴(kuò)大，細(xì)菌對其產(chǎn)生的耐藥性問題日趨嚴(yán)重，逐漸成為世界性的問題。喹諾酮類抗生素耐藥的主要機(jī)制分為①細(xì)菌自身發(fā)生改變產(chǎn)生耐藥，即細(xì)菌壁膜表面的外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的高表達(dá)，從而導(dǎo)致抗生素的主動外排增加，阻礙藥物與細(xì)菌內(nèi)的靶點(diǎn)結(jié)合，或者藥物靶酶突變細(xì)菌進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)，使得機(jī)體免疫系統(tǒng)無法識別并殺滅細(xì)菌或者藥物不能與細(xì)菌直接接觸產(chǎn)生藥效 。耐藥現(xiàn)象的出現(xiàn)極大的限制了抗生素的臨床使用，因此在新藥研發(fā)成本高、難度大的情況下，尋找無毒并能協(xié)同增加抗生素藥效的藥物成為克服細(xì)菌耐藥的另一條途徑。
[0003]20(幻-人參皂苷_他2(他2)是從人參中分離得到的原人參二醇型低糖鏈皂苷單體，具有抗腫瘤，抗疲勞等藥理活性。Kikuchi等人發(fā)現(xiàn)20 (S)-人參皂苷Rh2在無毒劑量下能增強(qiáng)順鉬對于腫瘤細(xì)胞的抑制作用(Anticancer Drugs 1991 ；2:63-67);而本實(shí)驗(yàn)室的前期研究發(fā)現(xiàn)，這種協(xié)同作用的機(jī)制是20 (S)-人參皂苷Rh2對于外排轉(zhuǎn)運(yùn)體P-糖蛋白的非競爭性抑制(Drug Metab Dispos 2010 ；38(12) =2179-87) ?鑒于細(xì)菌表面的外排轉(zhuǎn)運(yùn)體與P-糖蛋白有一定的相似性，本研究團(tuán)隊推測20 (S)-人參皂苷Rh2可能通過抑制細(xì)菌上的外排轉(zhuǎn)運(yùn)體發(fā)揮對抗生素的增效作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供20(S)_人參皂苷-Rh2的一種新的醫(yī)藥用途，即可以用于增加喹諾酮類藥物的抗菌作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Rh2(25,50,100mg/kg)灌胃一天及七天均能提高CIP對小鼠腹腔感染金黃色葡萄球菌29213模型的治療作用，同時，Rh2(100mg/kg)灌胃七天對小鼠腹腔感染金黃色葡萄球菌29213模型也有治療作用。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，20 (S)-人參皂苷-Rh2在無毒濃度下，對環(huán)丙沙星在金黃色葡萄球菌ATCC29213、4株金黃色葡萄球菌臨床菌株(AS1-6、AS1-24、AS1-17、AS1-10)及銅綠假單胞菌ATCC27853上的抗菌作用具有協(xié)同效果，即可以降低環(huán)丙沙星對這幾株細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)。在金黃色葡萄球菌侵襲的THP-1巨噬細(xì)胞上，Rh2在5，10 μ M均能不同程度的增強(qiáng)左氧氟沙星的胞內(nèi)抗菌作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0005]圖1:單次灌胃給予Rh2 (25，50，100mg/kg)聯(lián)用環(huán)丙沙星(2.5mg/ml)對于小鼠腹腔感染模型的治療作用。
[0006]圖2:連續(xù)7天灌胃給予Rh2 (25，50，100mg/kg)聯(lián)用環(huán)丙沙星(2.5mg/ml)對于小鼠腹腔感染模型的治療作用。
[0007]圖3:單次灌胃給予Rh2 (25，50，100mg/kg)聯(lián)用環(huán)丙沙星(2.5mg/ml)對小鼠腹腔感染模型中血液中菌落數(shù)的影響。
[0008]圖4:連續(xù)7天灌胃給予Rh2 (25，50，100mg/kg)聯(lián)用環(huán)丙沙星(2.5mg/ml)對小鼠腹腔感染模型中血液中菌落數(shù)的影響。
[0009]圖5:Rh2(l，5，10yM)聯(lián)用左氧氟沙星(4 μ g/mL)在 0.5，1，3，6 小時對入 THP-1巨噬細(xì)胞中的金黃色葡萄球菌的殺滅作用。
[0010]圖6:Rh2(l，5，10yM)聯(lián)用左氧氟沙星(4，8，16 μ g/mL)在6小時對侵入THP-1巨噬細(xì)胞中的金黃色葡萄球菌的殺滅作用。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1:Rh2與環(huán)丙沙星聯(lián)用對小鼠腹腔感染模型的治療作用
[0012]實(shí)驗(yàn)材料:清潔級ICR小鼠(揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供)，金黃色葡萄球菌ATCC29213由中國藥科大學(xué)微生 物學(xué)教研室保存，Rh2 (純度> 98% )購自吉林大學(xué)藥學(xué)院有機(jī)化學(xué)教研室，環(huán)丙沙星注射液(廣州南新制藥有限公司)。MH肉湯培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基均購自北京三藥科技開發(fā)公司。
[0013]實(shí)驗(yàn)方法:
[0014]1.菌液制備:取新鮮MRSA菌株斜面，接種到新鮮無菌的MH營養(yǎng)肉湯中，35°C恒溫?fù)u床定及分析系統(tǒng)VITEK確定到種。20(S)_人參皂苷-Rh2(純度> 98% )購自吉林大學(xué)藥學(xué)院有機(jī)化學(xué)教研室，環(huán)丙沙星注射液(廣州南新制藥有限公司)。MH肉湯培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基均購自北京三藥科技開發(fā)公司。
[0015]實(shí)驗(yàn)方法:
[0016]1.挑取待測菌于2mlMH肉湯培養(yǎng)基，置37°C溫箱過夜靜置培養(yǎng)12小時左右，利用紫外分光光度計測定其OD值，用MH肉湯調(diào)整菌液濃度使其0D600約為0.7，再用無菌MH肉湯培養(yǎng)基稀釋100倍，此時的菌液即為上樣菌懸液。
[0017]2.環(huán)丙沙星注射液用無菌生理鹽水進(jìn)行倍比稀釋，分別配置成1280，640，320，160，80，40，20，10，5，2.5，1.25，0.625,0.3125 μ g/ml 的環(huán)丙沙星上樣溶液。
[0018]3.20⑶-人參皂苷_Rh2用DMSO溶解，配置成10 μ M的母液，再以MH肉湯稀釋至濃度為11.77 μ Mo
[0019]4.按照下表加入上述上樣菌懸液及藥物溶液(η = 3)。
【權(quán)利要求】
1.化合物20(S)-人參皂苷-Rh2在制備增強(qiáng)喹諾酮類藥物抗菌作用的藥物中的應(yīng)用。
2.化合物20(S)-人參皂苷-Rh2用于制備增強(qiáng)喹諾酮類藥物細(xì)胞內(nèi)抗菌活性的藥物中的應(yīng)用。
3.化合 物20(S)-人參皂苷-Rh2在制備喹諾酮類藥物復(fù)方制劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/04GK103463116SQ201210183926
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2012年6月6日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月6日
【發(fā)明者】王廣基, 孫淵, 周芳, 王瑤瑤, 張經(jīng)緯, 查偉斌, 汪輝, 郝剛, 羅丹 申請人:中國藥科大學(xué)