專利名稱：一種高標記率的碘標記明膠微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
放射性藥物。
背景技術(shù)：
肝癌是發(fā)病率最高的癌癥之一，嚴重威脅人類健康和生命，原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌的致死率大約占所有癌癥的25%。對于肝癌的治療主要有手術(shù)治療，化學(xué)治療和放射性內(nèi)照射治療，但是能夠采用手術(shù)治療的肝癌只占很小部分，化學(xué)治療 對人體的副作用比較大。肝癌的放射性內(nèi)照射治療由于對轉(zhuǎn)移性肝癌和不可手術(shù)切除的原發(fā)性肝癌有較好的治療效果，對正常組織的影響小等優(yōu)點，逐漸引起人們的關(guān)注[I]。放射性內(nèi)照射治療即通過載體將放射性核素(采用的核素有90Y，32P，1251，1311，188Re等)帶入病變組織從而利用放射性核素發(fā)出的射線對癌細胞進行殺傷。目前用于肝癌內(nèi)照射介入治療的放射性藥物主要有90Y玻璃微球，32P玻璃微球，188Re白蛋白微球。90Y玻璃微球和32P玻璃微球在人體內(nèi)不降解，沉積在肺部，并且生物相容性不好。188Re白蛋白微球具有良好的生物相容性和體內(nèi)穩(wěn)定性，并且體內(nèi)可降解,但是相對價格較高[2-8]。因此尋找生物性能好，在體內(nèi)能夠分解的載體就成為具有廣泛應(yīng)用前景的材料，而明膠以其價格低廉，性能優(yōu)越而成為放射性標記的首選材料。本研究小組在未改性的明膠微球上放射性碘標記，標記率低，僅為20%，因而導(dǎo)致成本高，難以實現(xiàn)工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明所采用的放射性碘標記明膠微球的制備是一種新的制備方法通過對明膠微球進行改性，在明膠微球上引入含能夠增加碘的結(jié)合位點的結(jié)構(gòu)，從而提高標記率。將標記率從20%提高到了 64%，同時具有良好的生物相容性和可降解性。參考文獻
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[4]國外醫(yī)學(xué).放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊，1996，20(5) =205-207.Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry, 2007, 272 (3):669-671.
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[8]Applied Radiation and Isotopes,2011，55:513-516。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種基于對明膠微球進行改性并對改性后的明膠微球進行放射性碘標記，所得到的碘標記明膠微球具有標記率高，生物相容性好，并在體內(nèi)可降解的特點。本發(fā)明采用125I作為治療核素，發(fā)射Y射線，能量適中，半衰期較長能長效持久的治療腫瘤。本發(fā)明采用的載體是明膠，其具有較好的生物相容性和可降解性，使得放射性碘標記明膠微球?qū)τ诟伟┯泻芎玫闹委熐熬?。本發(fā)明所采用的放射性碘標記明膠微球的制備方法是一種新的方法通過對明膠微球進行改性，在明膠微球上引入含增加碘的結(jié)合位點的結(jié)構(gòu)，從而提高標記率。與未改性的明膠微球上的放射性碘標記相比，其標記率從15 25%提高到了 6(T75%，同樣具有良好的生物相容性和可降解性。本發(fā)明所述的一種改性明膠微球其結(jié)構(gòu)式如附圖I.本發(fā)明通過明膠微球的胺化反應(yīng)來提供-NH2基團，再米用I- (3-二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亞胺(EDC)/ N-輕基玻
珀酰亞胺(NHS)來促進羧基和氨基之間形成酰胺鍵，再將放射性碘標記在改性的明膠微球上，其制備路線如附圖2，附圖3.
I、本發(fā)明所述改性明膠微球的制備方法如下
第一步明膠微球的制備。原料包括明膠A型美國Sigma公司；液體石蠟都金山化學(xué)試劑有限公司；SpanSO:重慶申渝化學(xué)試劑廠；戊二醛(25%):天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；丙酮(分析純)天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。將100-200g/L的明膠溶液緩慢的滴加到含有0. l-2%Span80的石蠟中，其中水油比為1:5-10.在40-80°C下攪拌20-40min得到乳狀液。將乳狀液轉(zhuǎn)移至冰浴中，快速冷卻到5°C以下，5-10min后加入15-30%戊二醛固化15_30min，最后用丙酮對微球進行脫水脫油，抽濾后干燥得到微球。第二步，明膠微球的胺化反應(yīng)。原料包括明膠微球自制；生理鹽水自制；NaOH:氫氧化鈉成都科龍試劑公司；氯胺-T :天津市博迪化工有限公司；偏重亞硫酸鈉武漢市江北化學(xué)試劑廠；EDC :1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺阿拉丁試劑。將明膠微球分散在MES和NaOH溶液中，調(diào)節(jié)溶液pH=3 7.在室溫攪拌下加入EDC反應(yīng)l(T60min，再加入ED在pH=3 7室溫條件下攪拌反應(yīng)2 5 h。反應(yīng)結(jié)束后抽濾，洗滌，脫水得到胺化的明膠微球。第三步，胺化的明膠微球與DHBA的反應(yīng)。原料包括制得的氨基磺酸氨(AMS) ；NHS N-羥基硫代琥珀酰亞胺阿拉丁試劑；DHBS 2,3- 二羥基苯甲酸阿拉丁試劑；ED :乙二胺成都科龍試劑公司MES :2_瑪啉乙磺酸阿拉丁試劑；TNBS:三硝基苯璜酸阿拉丁試劑。將DHBA和NaOH按照一定的比例配制分散相，并調(diào)節(jié)分散相的pH=3 7。將EDC和NHS按照I :0飛的比例加入到分散液中，室溫攪拌l(T60min。加入胺化的明膠微球于分散液中室溫攪拌3 8h，用NaOH和HCl調(diào)節(jié)整個反應(yīng)體系的pH=3 7。最后抽濾水洗得到改性明膠微球。2、對改性明膠微球的改性度進行測定
原料包括自制的改性明膠微球(DHB-MS)；碳酸氫鈉(NaHCO3)上海有機化工試劑研究
所
;TNBS:三硝基苯璜酸阿拉丁試劑；乙醚成都科龍試劑公司；去離子水；鹽酸成都科龍試劑公司。
取改性明膠微球，放入1(T90°C條件下由NaHCO3溶液和TNBS溶液配制的混合液中反應(yīng)廣4h.再加入remL—定濃度的鹽酸溶液，在2(T70°C下使得明膠微球水解l 5h。水解后的溶液冷卻后加入去離子水，再用乙醚萃取廣4次。取水相于2(T70°C下加熱5 30min以除去水相中的乙醚，加入去離子水將水相稀釋后用分光光度計測量在X =345 nm時的吸光度。測得最終的氨基改性度為4(T55%，氨基改性度直接反映了明膠微球上接枝的DBHA的量。3、放射性碘標記改性明膠微球。原料包括自制改性明膠微球(DHB-MS);磷酸緩沖溶液自配；碘化鉀(KI):成都科龍試劑公司；氯胺-T :天津市博迪化工有限公司，偏重亞硫酸鈉武漢市江北化學(xué)試劑廠；生理鹽水自配；去離子水。將改性明膠微球加入磷酸緩沖溶液和KI混合溶液中溶脹5 30min，然后加A I 5 ii L的Na125〗。在室溫下加入IOlOOiiL氯胺-T溶液，在攪拌下反應(yīng)I 5h后，用10^200 U L偏重亞硫酸鈉溶液終止反應(yīng)。最后將反應(yīng)液離心后,洗漆沉淀數(shù)次得到125I標記 的明膠微球。通過用Y計數(shù)器來測得洗滌后125I標記的明膠微球的放射性計數(shù)來計算得到放射性標記率，得標記率為60-75%。


圖I為改性明膠微球(DHB-MS)的結(jié)構(gòu)式 圖2為明膠微球的胺化反應(yīng)方程式 圖3為在胺化明膠微球上面引入DHBA的反應(yīng)方程式 實施例I :
未改性明膠微球的放射性碘標記
實驗儀器FJ-2021 y放射免疫計數(shù)器上海融坤檢測設(shè)備有限公司；漩渦混合器XW-80A :上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；離心機德國艾本德股份有限公司
實驗試劑明膠A型美國Sigma公司；液體石蠟都金山化學(xué)試劑有限公司；Span80:重慶申渝化學(xué)試劑廠；戊二醛(25%):天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；丙酮(分析純)天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水自制；NaOH:氫氧化鈉成都科龍試劑公司；氯胺-T :天津市博迪化工有限公司；偏重亞硫酸鈉武漢市江北化學(xué)試劑廠；
實驗步驟
明膠微球的制備
將150g/L的明膠溶液緩慢的滴加到含有0. 8%Span80的石蠟中，其中水油比為1:5.在40-80°C下攪拌30min得到乳狀液。將乳狀液轉(zhuǎn)移至冰浴中，快速冷卻到5°C以下，8min后加入15%戊二醛固化30min，最后用丙酮對微球進行脫水脫油，抽濾后干燥得到微球。明膠微球的標記
將明膠微球50mg加入190 ii L的PBS (pH=7. 0)和10 y L的KI (2g/L)混合溶液中溶B IOmin,然后加入2.5 ii L的Na125〗。在室溫下向試管中加入200 y L氯胺-T溶液(20g/L)，在攪拌下反應(yīng)Ih后,用200ii L偏重亞硫酸鈉溶液(15g/L)終止反應(yīng)。最后將反應(yīng)液離心后，洗滌沉淀數(shù)次得到125I標記的明膠微球。用Y計數(shù)器測得未標記之前的計數(shù)，再通過每次離心后取出上清液后測量微球的放射性強度就可以得到微球的標記率。
標記率=(離心后微球放射性計數(shù)/標記之前放射性計數(shù))X 100%
未改性微球標記率為20%，說明對明膠微球的改性研究是必要的。實施例2
改性明膠微球的放射性碘標記
實驗儀器FJ-2021 y放射免疫計數(shù)器上海融坤檢測設(shè)備有限公司；漩渦混合器XW-80A :上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；離心機德國艾本德股份有限公司
實驗試劑明膠A型美國Sigma公司；液體石蠟都金山化學(xué)試劑有限公司；Span80:重慶申渝化學(xué)試劑廠；戊二醛(25%):天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；丙酮(分析純)天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水自制；NaOH:氫氧化鈉成都科龍試劑公司；氯胺-T :天津市博迪化工有限公司；偏重亞硫酸鈉武漢市江北化學(xué)試劑廠；EDC 1- (3-二 甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺阿拉丁試劑；NHS :N-羥基硫代琥珀酰亞胺阿拉丁試劑；DHBS :2，3_ 二羥基苯甲酸阿拉丁試劑；ED :乙二胺成都科龍試劑公司MES :2_瑪啉乙磺酸阿拉丁試劑；TNBS:三硝基苯璜酸阿拉丁試劑；NaHC03:碳酸氫鈉上海有機化工試劑研究所。實驗步驟
明膠微球的制備
將150g/L的明膠溶液緩慢的滴加到含有0. 8%Span80的石蠟中，其中水油比為1:5.在40-80°C下攪拌30min得到乳狀液。將乳狀液轉(zhuǎn)移至冰浴中，快速冷卻到5°C以下，8min后加入15%戊二醛固化30min，最后用丙酮對微球進行脫水脫油，抽濾后干燥得到微球。胺化明膠微球的制備
將明膠微球0. 3g分散在0. ImoI/LMES和Imol/LNaOH的30ml溶液中，調(diào)節(jié)溶液pH=5. 0.在室溫攪拌下加入2. 9gEDC反應(yīng)30min，再加入0. 66mLED。用6mol/L的HCl調(diào)節(jié)pH=5. 0，于室溫條件下攪拌反應(yīng)3h。整個過程中用lmol/L的HCl和lmol/L的NaOH將pH控制在5. O。反應(yīng)結(jié)束后抽濾，洗滌，脫水得到胺化的明膠微球。改性明膠微球的制備
配制分散相DHBA0. 125g，0. lmol/L的AMS、lmol/L的NaOH，并調(diào)節(jié)分散相的pH=5.加A EDC和NHS各12. 5mmol到分散液中，室溫攪拌30min。分散液中加入胺化的明膠微球0. 25g，室溫攪拌3h，用Imol/LNaOH和HCl調(diào)節(jié)整個反應(yīng)體系的pH=5. O。最后抽濾水洗得到改性明膠微球。 改性明膠微球改性度的測定
取改性明膠微球，放入40°C條件下由ImL (4%)的NaHCO3溶液和ImL (0. 5%) TNBS溶液的混合液中反應(yīng)Ih.再加入3mL(6mol/L)的鹽酸溶液,在60°C下使得明膠微球水解2h。水解后的溶液冷卻到室溫后加入去離子水，再用乙醚萃取2次。取水相5mL于40°C下加熱15min以除去水相中的乙醚，加入15mL去離子水將水相稀釋后用分光光度計測量在X=345nm時的吸光度。氨基的量=[2X吸光度 X0. 021 ]/[ (I. 46 X 104L/mol. cm) X (b) X (x)]
其中，b是吸收池光程長，X是樣品的質(zhì)量。測得最終的氨基改性度為49. 6%，氨基改性度反映了明膠微球上接枝的DBHA的量。改性明膠微球的標記
將改性明膠微球50mg加入190 μ L的PBS (ρΗ=7. O)和10 μ L的KI (2g/L)混合溶液中溶脹IOmin,然后加入2. 5μ L的Na125I。在室溫下向試管中加入200 μ L氯胺-T溶液(20g/L)，在攪拌下反應(yīng)Ih后,用200 μ L偏重亞硫酸鈉溶液(15g/L)終止反應(yīng)。最后將反應(yīng)液離心后，洗滌沉淀數(shù)次得到1251標記的明膠微球。用Y計數(shù)器測得未標記之前的計數(shù)，再通過每次離心后取出上清液后測量微球的放射性強度就可以得到微球的標記率。標記率=(離心后微球放射性計數(shù)/標記之前放射性計數(shù))X 100%
改性后的明膠微球標記率要比未改性明膠微球高出很多，未改性微球標記率為20%，改性微球的標記率為64%，說明改性后的明膠微球增加了碘的負載量。
實施例3
改性明膠微球的放射性碘標記
實驗儀器FJ-2021 Y放射免疫計數(shù)器上海融坤檢測設(shè)備有限公司；漩渦混合器XW-80A :上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；離心機德國艾本德股份有限公司。實驗試劑明膠:A型美國Sigma公司；液體石蠟都金山化學(xué)試劑有限公司；SpanSO:重慶申渝化學(xué)試劑廠；戊二醛(25%):天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；丙酮(分析純)天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水自制；NaOH:氫氧化鈉成都科龍試劑公司；氯胺-T :天津市博迪化工有限公司；偏重亞硫酸鈉武漢市江北化學(xué)試劑廠；EDC
1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺阿拉丁試劑；NHS :N-羥基硫代琥珀酰亞胺阿拉丁試劑；DHBS :2，3-二羥基苯甲酸阿拉丁試劑；ED :乙二胺成都科龍試劑公司MES
2-瑪啉乙磺酸阿拉丁試劑；TNBS:三硝基苯璜酸阿拉丁試劑；NaHC03:碳酸氫鈉上海有機化工試劑研究所。實驗步驟
明膠微球的制備
將150g/L的明膠溶液緩慢的滴加到含有O. 5%Span80的石蠟中，其中水油比為1:10.在40-80°C下攪拌30min得到乳狀液。將乳狀液轉(zhuǎn)移至冰浴中，快速冷卻到5°C以下，8min后加入25%戊二醛固化30min，最后用丙酮對微球進行脫水脫油，抽濾后干燥得到微球。胺化明膠微球的制備
將明膠微球O. 2g分散在O. ImoI/LMES和Imol/LNaOH的30ml溶液中，調(diào)節(jié)溶液pH=5. O.在室溫攪拌下加入3gEDC反應(yīng)30min，再加入O. 7mLED。用6mol/L的HCl調(diào)節(jié)ρΗ=5· O,于室溫條件下攪拌反應(yīng)3h。整個過程中用lmol/L的HCl和lmol/L的NaOH將pH控制在5. O。反應(yīng)結(jié)束后抽濾，洗滌，脫水得到胺化的明膠微球。改性明膠微球的制備
配制分散相DHBA0. 15g，0. lmol/L的AMS、lmol/L的NaOH，并調(diào)節(jié)分散相的pH=5.加入EDC和NHS各12mmol到分散液中，室溫攪拌30min。分散液中加入胺化的明膠微球0. 2g，室溫攪拌3h，用Imol/LNaOH和HCl調(diào)節(jié)整個反應(yīng)體系的pH=5. O。最后抽濾水洗得到改性明膠微球。 改性明膠微球改性度的測定
取改性明膠微球，放入40°C條件下由ImL (4%)的NaHCO3溶液和ImL (0. 5%) TNBS溶液的混合液中反應(yīng)Ih.再加入3mL(6mol/L)的鹽酸溶液,在60°C下使得明膠微球水解2h。水解后的溶液冷卻到室溫后加入去離子水，再用乙醚萃取2次。取水相5mL于40°C下加熱15min以除去水相中的乙醚，加入15mL去離子水將水相稀釋后用分光光度計測量在λ=345ηπι時的吸光度。氨基的量=[2Χ吸光度 Χ0. 021 ]/[ (I. 46 X 104L/mol. cm) X (b) X (x)]
其中，b是吸收池光程長，X是樣品的質(zhì)量。測得最終的氨基改性度為55%，氨基改性度反映了明膠微球上接枝的DBHA的量。
改性明膠微球的標記
將改性明膠微球60mg加入190 μ L的PBS (ρΗ=7· O)和10 μ L的KI (2g/L)混合溶液中溶脹lOmin，然后加入3μ L的Na125I。在室溫下向試管中加入200 μ L氯胺-T溶液(20g/L)，在攪拌下反應(yīng)Ih后,用200 μ L偏重亞硫酸鈉溶液(15g/L)終止反應(yīng)。最后將反應(yīng)液離心后，洗滌沉淀數(shù)次得到125I標記的明膠微球。用Y計數(shù)器測得未標記之前的計數(shù)，再通過每次離心后取出上清液后測量微球的放射性強度就可以得到微球的標記率。標記率=(離心后微球放射性計數(shù)/標記之前放射性計數(shù))X 100%
改性后的明膠微球標記率要比未改性明膠微球高出很多，未改性微球標記率為20%，改性微球的標記率為75%，說明改性后的明膠微球增加了碘的負載量。實施例4
改性明膠微球的放射性碘標記
實驗儀器FJ-2021 Y放射免疫計數(shù)器上海融坤檢測設(shè)備有限公司；漩渦混合器XW-80A :上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠；離心機德國艾本德股份有限公司
實驗試劑明膠A型美國Sigma公司；液體石蠟都金山化學(xué)試劑有限公司；Span80:重慶申渝化學(xué)試劑廠；戊二醛(25%):天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；丙酮(分析純)天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水自制；NaOH:氫氧化鈉成都科龍試劑公司；氯胺-T :天津市博迪化工有限公司；偏重亞硫酸鈉武漢市江北化學(xué)試劑廠；EDC 1- (3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺阿拉丁試劑；NHS :N-羥基硫代琥珀酰亞胺阿拉丁試劑；DHBS :2，3_ 二羥基苯甲酸阿拉丁試劑；ED :乙二胺成都科龍試劑公司MES :2_瑪啉乙磺酸阿拉丁試劑；TNBS:三硝基苯璜酸阿拉丁試劑；NaHC03:碳酸氫鈉上海有機化工試劑研究所。實驗步驟
明膠微球的制備。將150g/L的明膠溶液緩慢的滴加到含有l(wèi)%Span80的石蠟中，其中水油比為1:7.在40-80°C下攪拌30min得到乳狀液。將乳狀液轉(zhuǎn)移至冰浴中，快速冷卻到5°C以下，8min后加入20%戊二醛固化30min，最后用丙酮對微球進行脫水脫油，抽濾后干燥得到微球。胺化明膠微球的制備
將明膠微球O. 2g分散在O. ImoI/LMES和Imol/LNaOH的30ml溶液中，調(diào)節(jié)溶液pH=5. O.在室溫攪拌下加入2. 5gEDC反應(yīng)30min,再加入O. 6mLED。用6mol/L的HCl調(diào)節(jié)ρΗ=5· O,于室溫條件下攪拌反應(yīng)3h。整個過程中用lmol/L的HCl和lmol/L的NaOH將pH 控制在5. O。反應(yīng)結(jié)束后抽濾，洗滌，脫水得到胺化的明膠微球。
改性 明膠微球的制備
配制分散相DHBA0. Ig, O. lmol/L的AMS、lmol/L的NaOH，并調(diào)節(jié)分散相的ρΗ=5·加入EDC和NHS各12mmol到分散液中，室溫攪拌30min。分散液中加入胺化的明膠微球O. 2g，室溫攪拌3h，用Imol/LNaOH和HCl調(diào)節(jié)整個反應(yīng)體系的pH=5. O。最后抽濾水洗得到改性明膠微球。 改性明膠微球改性度的測定
取改性明膠微球，放入40°C條件下由ImL (4%)的NaHCO3溶液和ImL (0. 5%) TNBS溶液的混合液中反應(yīng)Ih.再加入3mL(6mol/L)的鹽酸溶液,在60°C下使得明膠微球水解2h。水解后的溶液冷卻到室溫后加入去離子水，再用乙醚萃取2次。取水相5mL于40°C下加熱15min以除去水相中的乙醚，加入15mL去離子水將水相稀釋后用分光光度計測量在λ=345ηπι時的吸光度。氨基的量=[2Χ吸光度 Χ0. 021 ]/[ (I. 46 X 104L/mol. cm) X (b) X (x)]
其中，b是吸收池光程長，X是樣品的質(zhì)量。測得最終的氨基改性度為40%，氨基改性度反映了明膠微球上接枝的DBHA的量。
改性明膠微球的標記
將改性明膠微球60mg加入190 μ L的PBS (ρΗ=7· 0)和10 μ L的KI (2g/L)混合溶液中溶脹lOmin，然后加入2μ L的Na125I。在室溫下向試管中加入200 μ L氯胺-T溶液(20g/L)，在攪拌下反應(yīng)Ih后,用200 μ L偏重亞硫酸鈉溶液(15g/L)終止反應(yīng)。最后將反應(yīng)液離心后，洗滌沉淀數(shù)次得到125I標記的明膠微球。用Y計數(shù)器測得未標記之前的計數(shù)，再通過每次離心后取出上清液后測量微球的放射性強度就可以得到微球的標記率。標記率=(離心后微球放射性計數(shù)/標記之前放射性計數(shù))X 100%
改性后的明膠微球標記率要比未改性明膠微球高出很多，未改性微球標記率為20%，改性微球的標記率為60%，說明改性后的明膠微球增加了碘的負載量。
權(quán)利要求
1.一種特殊微球，這種特殊微球的特征在于它是由放射性碘標記在改性明膠微球上得到的。
2.這種特殊微球的制備方法，其特征在于包括改性明膠微球的制備，改性明膠微球改性度的測定及改性明膠微球放射性碘的標記。
3.權(quán)利要求I中所述的改性明膠微球，其特征在于其結(jié)構(gòu)式為
4.(I)其中明膠微球的胺化反應(yīng)方程式為
5.權(quán)利要求4中2，3_二羥基苯甲酸(DHBA)與胺化明膠微球反應(yīng)得到改性明膠微球，其特征在于方法用2，3- 二羥基苯甲酸(DHBA)，AMS按照(I :0. Γ Ο)的比例配制分散相，用堿性試劑調(diào)節(jié)分散相的PH=IUf 1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS) (I :0. 1飛)加入到分散液中，室溫攪拌5飛Omin，加入胺化的明膠微球于分散液中室溫攪拌I飛h，用堿性試劑和酸性試劑調(diào)節(jié)整個反應(yīng)體系的pH=f 7，最后抽濾水洗得到權(quán)利要求2中所述改性明膠微球。
6.權(quán)利要求2中的改性明膠微球的改性度測定，其特征在于分別將胺化明膠微球和改性明膠微球水解后測定吸光度，得到反應(yīng)產(chǎn)物中氨基的改性度，反映出接枝2，3- 二羥基苯甲酸(DBHA)的量。
7.對權(quán)利要求2中所述改性明膠微球改性度的測定，其特征為測定方法是將改性明膠微球，放入1(T60°C條件下由l 10mL(l 10%)的弱堿溶液和flOmL(O. Ol 5%)三硝基苯磺酸(TNBS)溶液的混合液中反應(yīng)l(Tl20min后再加入I IOmL (I 10mol/L)的鹽酸(HCl)溶液，在I (Tl OO °C下使得明膠微球水解l(Tl20min ,然后將水解后的溶液冷卻到室溫后加入去離子水，再用乙醚萃取I飛次，最后取水相flOmL于1(Γ100 下加熱l(Tl20min以除去水相中的乙醚，加入f20mL去離子水將水相稀釋后用分光光度計測量在λ=20(Γ500的吸光度。
8.權(quán)利要求2所述改性明膠微球胺化度的測定，其特征為測得的胺化度為4(Γ55%。
9.權(quán)利要求2中所述放射性碘標記改性明膠微球，其特征在于制備方法將改性明膠微球加入磷酸緩沖溶液和碘化鉀(KI)混合溶液中溶脹5 30min，然后加入I飛μ L的125I-碘化鈉(Na125I )，然后1(T50°C下加入10 200 μ L氯胺-T溶液，在攪拌下反應(yīng)I 5h后，用1(Γ200 μ L偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)溶液終止反應(yīng)，最后將反應(yīng)液離心后，洗滌沉淀f 10次得到125I標記的明膠微球。
10.權(quán)利要求9中放射性碘標記改性明膠微球，其特征在于放射性碘標記明膠微球得到的標記率經(jīng)測定60-75%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高標記率的碘標記明膠微球的制備方法，通過這種方法得到了一種新的碘標記的明膠微球。該碘標記的明膠微球就是將2，3-二羥基苯甲酸(DHBA)引入明膠微球，然后對新結(jié)構(gòu)明膠微球進行放射性碘標記，得到碘標記改性明膠微球，標記率達到64%(未改性的明膠微球其放射性碘的標記率僅為20%)。該方法不僅大大提高了放射性碘標記明膠微球的標記率，同時該高標記的碘標記明膠微球具有良好的生物相容性和可降解性，該放射性標記的微球可用于治療癌癥。改性后的明膠微球結(jié)構(gòu)式如說明書附圖。
文檔編號A61K51/12GK102727913SQ201210223919
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月2日
發(fā)明者夏傳琴, 姜多 申請人:四川大學(xué)